实时荧光定量聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌

目的建立一种快速、准确、特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法. 方法 以金黄色葡萄球菌FemB基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,对金黄色葡萄球菌进行荧光定量检测. 结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子为2.5mmol/L时本底最低,荧光信号最强;该法的灵敏度为1.0×103拷贝,能特异区分金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌. 结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应能够对金黄色葡萄球菌准确快速定量检测.     

实时荧光定量聚合酶链反应检测唾液HBV-DNA含量

目的:采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法准确地定量检测血清、唾液中乙型肝炎病毒(HBV)的数量和免疫指标,进而全面评估唾液乙肝DNA在乙型肝炎的预防、诊断及治疗方面的意义。方法:采用FQ-PCR法检测200例乙型肝炎患者血清、唾液中HBVDNA的含量。结果:(1)经FQ-PCR检测,200份标本中血清HBVDNA含量>103copies/ml的有180例(90%),相应的唾液中HBVDNA含量>103copies/ml的有145例(72.5%),同时病毒含量>105copies/ml标本中血清168例(84.0%),唾液98例(49.0%),血清HBVDNA与唾液HBVDNA水平之间存在显著相关(r=0.79,P<0.001)。(2)在不同的血清免疫指标组合中乙肝病毒含量也不相同,在HBeAg( )组与HBeAg(-)组中,血清与唾液的病毒含量与阳性率均存在HBeAg( )组明显高于HBeAg(-)组,在HBeAg( )组中血清、唾液HBVDNA平均水平分别为7.13、5.01 logcopies/ml。血清、唾液病毒含量在两组不同免疫组合中差别均有统计学意义(P<0.01)。结论:(1)乙型肝炎患者除了血清外,唾液中也存在具有感染性的高病毒载量HBVDNA,可能成为传染源之一。(2)唾液中定量检测HBVDNA与血液中HBVDNA含量存在明显相关性,在一定程度上也能反映HBVDNA在体内复制情况。     

抗酸染色和荧光定量聚合酶链反应检测对结核病的诊断价值

目的 比较抗酸染色和荧光定量聚合酶链反应(PCR)对结核病的诊断价值.方法 选择2019年11月至2020年11月在医院开展检查的100例疑似肺结核患者的痰液样本作为研究样本,对所有痰液样本均分别实施抗酸染色与荧光定量PCR检测,并以结核分枝杆菌培养结果为判断肺结核阳性的主要标准,统计全部患者的结核分枝杆菌培养结果,分...     

荧光定量聚合酶链反应检测HCV-RNA的临床价值

目的 评价荧光定量聚合酶链反应（FQ—PcR）检测丙型肝炎病毒在临床中的应用价值。方法 用FQ—PCR检测456例肝炎病人标本，并同时采用ELISA检测抗-HCV，了解样本中HCV—RNA含量与HCV的相关性。结果 456份标本中有81份HCV—RNA含量高于1000拷贝／ml，85份抗-HCV阳性。经统计分析，两者有明显的相关性。结论 FQ-PCR技术检测HCV-RNA特异性强，灵敏度高，具有良好的应用价值。     

荧光定量聚合酶链反应技术在结核病诊断中的应用价值探讨

铅是一种肾毒性物质,体内的铅主要由肾脏排出,近端肾小管上皮细胞是铅毒性损害的主要靶点,早期为近曲肾小管重吸收功能障碍,中期则可出现肾小管萎缩,晚期可出现慢性肾功能衰竭[1-2]。     

荧光定量聚合酶链反应检测单纯疱疹病毒

目的　验证单纯疱疹病毒 (HSV )临床简单、实用、可靠的检测方法 ,以利早期诊断、早期治疗。方法　荧光定量聚合酶反应检测单纯疱疹病毒并对阳性病例进行抗病毒治疗。结果　 10 0例可疑标本检出 HSV 阳性 4 6份 ;阳性基因拷贝数范围在 (45 0～ 5 )× 10 6。结论　荧光定量聚合酶链反应检测单纯疱疹病毒 ,能较好的解决假阳性污染 ,并实现准确定量 ;对单纯疱疹病毒感染的早期诊断、治疗方案选择 ,提高疗效有较大指导意义     

荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA观察

乙型肝炎病毒（HBV）感染的实验诊断主要依据血清学标志（HBV—M）和HBV—DNA的检测。以往运用的普通PCR检测只能定性,其后处理过程易导致假阳性污染,且所用的染色剂溴乙锭是强致癌物。因此,普通PCR的应用和推广受到一定限制。我们采用实时荧光定量聚合酶链反应（Fluorescence quantitative,FQ—PCR）克服了常规PCR的不足。直接检测146份血清标本乙型肝炎病毒核酸的拷贝数,并同时与酶联免疫吸附试验（ELISA）进行对照,现将结果报道如下。     

立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立

目的采用TaqMan-MGB探针建立立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测方法.方法依据立氏立克次体外膜蛋白B基因序列设计引物和探针,以克隆的ompB基因片段为DNA模板,在ABI 7900型荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量PCR检测方法.结果建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数呈线性关系（R2=0.996）,最低检测浓度为5拷贝/μl;用荧光定量PCR方法检测其他相关立克次体和常见非立克次体病原菌,检出结果均为阴性.用该方法检测立氏立克次体感染的豚鼠血液标本、小鼠脾脏标本及细胞培养标本,检测的结果与立氏立克次体感染相关.结论研究建立的检测立氏立克次体实时荧光定量PCR方法具有高特异性和高敏感性,适用于快速检测各种样本中的立氏立克次体和立氏立克次体感染早期的实验室诊断.     

多重荧光定量聚合酶链反应对呼吸道感染患儿支原体和衣原体感染的诊断价值

目的 探讨多重荧光定量PCR技术(TaqMan探针法)在检测呼吸道感染住院患儿中肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)和沙眼衣原体(CT)的应用价值.方法 构建质粒标准品,梯度稀释后进行扩增建立标准曲线检测多重荧光定量PCR方法的扩增效率,并验证其敏感性、特异性和重复性;收集151例疑似呼吸道感染住院患儿的咽拭子样本,采用多重荧光定量PCR技术检测MP、CP和CT基因片段,其中128例样本同时进行MP-IgM和CP-IgM的血清学检测,评价该方法在临床检测中的应用价值.结果 本实验中MP、CP和CT三种病原体的引物和探针的扩增效率分别达到109.20％、116.90％和112.80％,三种病原体的最低检出浓度分别为50、25和25 pg/μL,与其他已知病原体不存在交叉反应;不同批次间三种病原体的扩增Ct值的变异系数均小于3％.151份样本中,多重PCR检测出MP、CP和CT阳性率分别为23.84％(36份)、17.88％(27份)和2.65％(4份),128份样本中MP-IgM阳性检出率为22.65％;CP-IgM阳性检出率为14.06％.结论 多重荧光定量PCR方法可以为临床幼儿呼吸道感染病原体的早期检测提供快速可靠的辅助诊断依据.     

实时定量聚合酶链反应与巢式聚合酶链反应针刺治疗牙痛68例

目的观察针刺治疗牙痛的疗效。方法采用单纯针刺治疗牙痛。结果针刺对各种不同程度的牙痛均有良好的止痛效果,特别是龋病、急性根尖周围炎、冠周炎止痛效果较好。结论针刺应急治疗牙痛效果确切。     

肉制品中沙门菌实时荧光定量聚合酶链反应标准质粒的构建

目的制备用于检测肉制品中沙门菌实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准质粒。方法设计针对沙门菌inv A基因的引物,扩增特异片段,转入质粒载体中构建重组质粒。将构建的重组质粒作为标准品,进行优化后的实时荧光定量PCR,建立标准曲线,并考察该标准品灵敏性及稳定性。结果成功构建含有沙门菌inv A基因的质粒标准品,用其建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板的拷贝数呈良好线性关系(r2=0.9979),最低可以检出10拷贝/反应。该标准质粒经验证具有良好的稳定性。用该质粒标准品检测肉制品中的沙门菌,经2 h增菌后,可在7 h内完成对样品的检测。结论所构建的质粒标准品可用于荧光定量PCR检测肉制品中的沙门菌,为考量实验质量提供参考依据。     

荧光定量聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒

乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV)是引起常见性传播疾病－－尖锐湿疣和人类肿瘤较为重要的一种现毒,可 的皮肤和粘膜上皮细胞,诱发细胞增生产生乳头瘤样病变^[1],近几年来由HPV引起的生殖道感染的发病率逐渐增高,为了角门诊可疑尖锐湿疣患者中HPV的感染率,我们用荧光定量聚合酶链反应技术（FQ－PCR）检测711例临床可疑PV感染患者,现将结果报告如下。     

荧光定量聚合酶链反应产前诊断巨细胞病毒感染的临床应用

目的:探讨FQ-PCR产前诊断巨细胞病毒感染的临床应用价值。方法:用FQ-PCR对23例疑似巨细胞病毒感染孕妇的胎儿进行产前诊断,同时对孕妇CMV-DNA拷贝数的高低与发生垂直传播的关系进行了探讨。结果:5例胎儿绒毛组织CMV-DNA阳性,阳性率为21.7%(5/23),CMV-DNA平均为(4.56×106±3.53×106)copies/ml;18例羊水标本阴性,CMV-DNA<25copies/ml,新生儿血、尿液CMV-DNA均阴性,产后临床追踪观察3年,无CMV感染迹象。孕妇感染CMV-DNA拷贝数的几何均数为6.6323±1.2793时,有可能发生垂直传播(t=42.99,P<0.01)。结论:FQ-PCR产前诊断巨细胞病毒感染结果可靠,有一定的临床应用价值。     

实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应型内鉴定脊髓灰质炎病毒方法的应用

2011年新疆发生输入性脊灰野病毒的疫情后,为了缩短检测时限,中国决定从2013年起启用WHO推荐的《脊髓灰质炎病毒分离新的检测流程》,要求省级脊灰实验室经过培训考核,使用美国CDC研制的实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应     

荧光定量聚合酶链反应法检测学龄儿童血清乙型肝炎病毒

目的 用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法定量检测学龄儿童血清中的乙型肝炎病毒(HBV),以指导临床。方法 以完全闭管式实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法,检测248份学龄儿童血清标本,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测其中HBV的免疫标志物。结果 208份患儿血清标本HBV DNA的阳性率为76.0％,其中HBsAg、HBeAg、HBcAb组88份,HBsAg、HBeAg组12份和HB-sAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb组8份的阳性率均为100％,HBV DNA的平均拷贝数分别为1.0×10~8、4.4×10~8和2.2×10~7,其余各组HBV DNA的阳性率与HBsAg、HBeAg、HBcAb组比较,结果均为P<0.01。40例健康儿童血清中的HBV DNA全部为阴性。结论 FQ-PCR可以检测学龄儿童HBV感染和复制的真实情况,对于儿童乙型肝炎的临床诊断、疗效观察和判断预后有较好的指导意义。     

TaqMan-MGB荧光定量聚合酶链反应检测水痘-带状疱疹病毒

目的利用TaqMan-MGB探针技术,建立水痘-带状疱疹病毒(VZV)的荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法,用于临床标本VZV的检测。方法从GenBank上下载几十株VZV基因组序列,在IE62基因的保守区域设计引物与TaqMan-MGB探针,并对反应条件和体系进行优化,同时评价建立检测体系的特异性、敏感性和重复性;利用已知拷贝数的质粒标准品的病毒脱氧核糖核酸(DNA),建立了VZV基因拷贝数定量分析模型。结果该方法与引起相似发病症状的肠道病毒71型,柯萨奇病毒A、B组以及腺病毒均无交叉反应,具有很高的特异性,且灵敏度达到102拷贝,优于常规PCR方法。采用该法对8份疑似水痘、带状疱疹患者疱疹液标本检测均为阳性,较病毒分离、常规PCR法更为简便、快速、敏感。结论该方法适合临床早期感染病例的确认以及水痘、带状疱疹爆发疫情的应急诊断。     

TaqMan-MGB荧光定量逆转录聚合酶链反应快速检测甲型流感病毒

目的:建立一种特异、灵敏、快速检测甲型流感病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法。方法:根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物软件在甲型流感病毒膜蛋白(MP)基因的保守区设计与筛选引物和MGB探针,对荧光定量RT-PCR反应体系与条件进行优化,验证方法的特异性和敏感性。并通过对疑似流感临床样本的检测,以评价该方法的实际应用价值。结果:该方法对甲型流感病毒的检测有高度的特异性、通用性,对乙型流感、麻疹、风疹、腮腺炎、RSV和腺病毒等其他呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.1TC ID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需2.5 h左右,且操作简便,重复性好。结论:本研究建立的MGB荧光定量RT-PCR的方法具有特异、敏感、快速的特点,适用于甲型流感疫情的应急快速检测。