rhEPO对局灶性脑缺血再灌注脑损伤保护机制的研究

目的 观察rhEPO对缺血性卒中脑海马区不同时间点S100B蛋白表达的动态变化,研究rhEPO对局灶性脑缺血再灌注损伤影响的可能机制.方法 取66只SD大鼠建立局灶性脑缺血再灌注(I/R)模型,随机分成假手术对照组(n=6)、脑I/R组(n=30)、rhEPO治疗组(n=30),按再灌注时间分为5个亚组,每个亚组6只(6 h组、12 h组、1 d组、3 d组、7 d组),缺血2 h后开始再灌注.免疫组化法检测缺血不同时间各组脑海马缺血中心和周围区S100B蛋白,原位末端标记技术检测各组脑海马缺血中心和周围区神经细胞凋亡.结果 脑I/R损伤组与假手术对照组比较细胞凋亡数明显增多(P＜0.05),rhEPO治疗组与脑I/R组相比,凋亡细胞数明显减少(P<0.05);免疫组化检测结果显示,I/R组与假手术对照组相比,S100B蛋白表达明显增加(P<0.05),rhEPO治疗组与脑I/R组相比,S100B蛋白表达明显减少(P<0.05). 结论 rhEPO可能通过减少S100B蛋白表达、抗凋亡对局灶性脑缺血I/R产生保护作用.     

胰岛素样生长因子1对局灶性脑缺血大鼠的神经功能及神经细胞凋亡的影响

目的观察胰岛素样生长因子-1对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响。方法采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞模型,动物随机分成胰岛素样生长因子-1组(IGF-1组)和对照组(control组)。对两组大鼠进行神经功能缺损评分,采用TUNEL染色计数脑缺血周边区神经细胞凋亡数,免疫组织化学方法观察BCL-2、Bax的蛋白表达。结果 IGF-1组神经功能缺损评分明显低于control组,缺血周边区的凋亡细胞明显少于control组;但BCL-2蛋白免疫阳性细胞明显多于control组,Bax蛋白免疫阳性细胞明显少于control组。结论 IGF-1可增加脑缺血之后缺血周边区BCL-2蛋白的表达,减少Bax蛋白表达,拮抗神经细胞凋亡,改善神经功能。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-9蛋白的表达

目的 研究Caspase-9蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中表达水平的动态变化.方法 建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用HE染色和免疫组织化学方法观察神经细胞死亡情况,再灌注6 h、12 h、24 h后缺血皮层Caspase-9蛋白表达.结果 与假手术组比较Caspase-9蛋白表达在各手术组明显升高,并随着缺血再灌注时间的延长Caspase-9表达逐渐升高,于再灌注24 h到达最高(P<0.01).结论 Caspase-9蛋白参与了脑缺血再灌注损伤过程.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后转化生长因子β1表达的研究

目的　观察大鼠大脑中动脉阻塞再灌注 (MCAO R)后转化生长因子β1(TGF β1)表达的变化及其意义。方法　采用免疫组织化学方法检测TGF β1在缺血再灌注脑组织损伤中的变化情况。 结果　再灌注后 6h ,缺血再灌注组脑组织TGF β1阳性细胞数较相应的假手术组和正常对照组显著增加(P<0 .0 1) ;正常组、假手术组仅在少数血管中有微弱的TGF β1阳性表达 ,而缺血再灌注组脑梗死区神经元、胶质细胞和血管内皮细胞和平滑肌细胞中TGF β1均有显著增强的阳性表达 ,另外 ,在软脑膜血管内皮细胞和平滑肌细胞中也可见TGF β1阳性细胞表达。 结论　脑缺血再灌注损伤可诱导TGF β1表达持续增高     

胰岛素样生长因子与脑缺血

胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor,IGFs）包括IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及des-Ⅰ GF-Ⅰ,是一类多肽类生长因子,存在于多种组织中,也存在于脑组织,是一类重要的调节神经生长及修复的生物活性物质,近年实验研究发现IGFs及其受体及IGFs结合蛋白参与脑缺血损伤的病理过程,脑缺血后IGFs及其受体在脑皮层及纹状体系统表达增加,参与脑缺血后内源性的神经保护机制,是潜在的脑缺血缺氧的神经保护剂.     

激动GHB受体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制探讨

目的 观察激动γ-羟基丁酸(GHB)受体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其机制.方法 成年清洁级雄性SD大鼠,体质量(250±20)g,随机分为5组,假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)及NCS-356(GHB受体选择性激动剂)160、320、640 μg/kg剂量组,采用改良的Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别进行损伤大鼠神经功能评分(5分制评分法),Western blot法检测Gi蛋白.结果 与模型组比较,640 μg/kg NCS-356组能降低神经功能评分(P＜0.05),同时320、640 μg/kg NCS-356剂量组能升高大鼠脑缺血皮层神经元细胞内Gi蛋白(P＜0.05)水平.结论 激动GHB受体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能与升高Gi蛋白水平有关.     

血管内皮细胞生长因子在糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注模型中的表达

糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注后各时间点血管内皮细胞生长因子在缺血中心区、半暗带区神经元和微血管的表达均明显低于非糖尿病大鼠。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ正性肌力的作用及机制

绝大多数心脏疾病晚期都伴随着心脏收缩功能的下降,严重的影响了患者的生存质量,而越来越多的研究表明IGF-Ⅰ在改善心脏收缩功能方面发挥了重要作用,它可以通过促进心肌收缩蛋白质的合成、改善心肌血供、抑制心肌细胞凋亡等方式提高心脏收缩力.     

大鼠的局灶性脑缺血再灌注损伤分区及再灌注时间窗

目的　研究脑缺血早期神经元损伤、半暗带及再灌注时间窗。方法　采用线栓法制做大鼠大脑中动脉梗阻 /再灌注模型。动物分为 :正常对照组 ;假手术组 ;缺血 (不再灌注 ) 30min组 ;缺血 (不再灌注 ) 1 ,2 ,4,6 ,2 4h ;缺血 1 ,2 ,3h后再灌注 2 4h组。每组 6只。恒温冰冻切片 ,行微管相关蛋白 (MAP2 )免疫组化染色 ;嗜银Ⅲ染色法复染 ;甲苯胺蓝染色。结果　MAP2免疫染色可显示神经元形态和皮质结构 ,显示缺血 30min的神经元病变。病变可分为 :中心区———MAP2阳性消失区 ;半暗带———MAP2阳性减弱伴选择性表达增强 ;继发损伤反应区———MAP2表达增强。缺血 6h内半暗带被迅速扩大的中心区取代 ,同时半暗带的神经元病变进行性加重。再灌注的时间窗应在缺血 3h以内。嗜银神经元集中分布于中心区边缘 ,半暗带也有散在分布 ,MAP2表达增强的神经元不易被银染。结论　MAP2表达增加可能是神经元对抗缺血的保护性反应 ;MAP2免疫染色是显示半暗带的理想的组织学方法     

MMP-2在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-2在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠48只,体重200～220 g.采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、脑缺血/再灌注损伤模型组(IR组)和MMP-2抑制剂(TIMP-2)组(T组)各16只.IR组和T组采用线栓法进行大鼠脑缺血2 h再灌注制备局...     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对脑缺血再灌注损伤大鼠血清丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶的影响

研究表明,脑缺血再灌注后氧自由基增多是导致脑损伤加重的主要原因之一。内源性抗自由基系统包括抗氧化剂和抗氧化酶两大类,丙二醛（MDA）是脂质过氧化作用的最终分解产物,其含量的多少可反应组织细胞的脂质过氧化速率或强度；谷胱甘肽过氧化物酶（GPH—Px）是清除体内自由基，阻止脂质发生过氧化的重要抗氧化剂。     

牛磺酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护

目的探讨牛磺酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 SD雄性大鼠44只,分为假手术组(4只),对照组(20只)牛磺酸组(20只)。应用Bederson评分方法对大鼠脑缺血6、24 h进行神经功能评分。激光多普勒血流仪测量脑血流变化。HE染色检测神经元核周体。结果牛磺酸组较对照组神经功能评分减小,神经功能改善;牛磺酸组缺血24 h后脑血流量增加,脑组织血流供应改善;假手术组脑组织未出现神经元坏死的特征,牛磺酸组神经元核周体损伤体积明显低于对照组(P<0.01)。结论牛磺酸对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对caspase-3表达的影响

目的观察雌二醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与caspase-3表达的影响。方法雄性Wistar大鼠72只随机分为假手术组（n=8）、手术对照组和雌二醇组。后两组又根据再灌注时间的不同各分为3、6、12、24h四个小组,每小组8只。线栓法制作脑缺血-再灌注（I/R）损伤模型。缺血2h分别再灌注3、6、12、24h后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及caspase3的表达。结果假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及caspase-3阳性细胞。雌二醇组较手术对照组脑梗死体积显著缩小（P〈0.05）,凋亡细胞数减少（P〈0.05）;caspase-3表达减弱（P〈0.05）。结论雌二醇通过下调caspase-3的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用

目的研究银杏叶提取物(EGB)对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用机制。方法采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞脑缺血-再灌注模型。实验动物随机分为假手术组、模型组、EGB治疗组。观察局灶性脑缺血2 h再灌注24 h后,大鼠神经行为学评分及神经元的变化。结果再灌注24 h后,与单纯缺血-再灌注组相比,给予EGB溶液注射可以改善动物的神经行为学评分、减轻神元损伤。结论 EGB对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤具有神经保护作用。     

局灶性脑缺血-再灌注大鼠β-连环蛋白表达的变化

目的观察局灶性脑缺血-再灌注大鼠β-连环蛋白(β-catenin)表达的动态变化。方法取60只SD大鼠,采用改良Zea Longa线栓法栓塞大鼠的大脑中动脉,缺血30 min后再灌注3、6、12、24 h和3、7、14、28 d,按数字法随机分为模型组和假手术组。造模后各时间点每组3只大鼠,对假手术组6只大鼠不栓塞大脑中动脉,其余操作与模型组相同。对两组大鼠进行新鲜取材及用4%多聚甲醛灌注取材,每组3只。采用免疫组化法和免疫印迹法分别检测各组大鼠脑室管膜下区(SVZ)和皮质β-catenin蛋白表达情况。结果 (1)免疫印迹检测大鼠脑梗死侧皮质β-catenin表达与假手术组(0.82±0.01)相比,β-catenin表达从缺血-再灌注后3 h开始升高,12 h时下降至最低点(0.55±0.03),随后表达上升,在24 h时达到高峰(1.28±0.07),之后7 d内维持较高水平,但14 d后下降,直至28 d时(0.88±0.02)表达仍高于假手术组。与假手术组比较差异均有统计学意义(P0.01)。(2)免疫组化检测大鼠梗死侧SVZβ-catenin的表达从局灶性脑缺血-再灌注后24 h至28 d时,β-catenin阳性细胞光密度值均高于假手术组(86 581±321),其中在7 d时达到高峰(581 578±29 016),随后下降。以上各时间点与假手术组的比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论大鼠局灶性脑缺血-再灌注后,大脑皮质和SVZ区的β-catenin表达均随时间呈动态变化。提示可能激活了β-catenin参与的调节神经发生的信号通路。而造模后12 h皮质β-catenin蛋白表达的降低,可能是由于缺血急性期多条信号通路发生了负反馈调节所致。     

地黄饮子对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

采用非开颅可逆性大脑中动脉栓塞法造成大鼠脑缺血再灌注损伤。地黄饮子10g／kg和20g／kg实验前连续灌胃给药7d。发现地黄饮子可显著减轻神经功能障碍及脑组织病理损伤,明显降低脑组织含水量。     

丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后促凋亡蛋白表达的影响

目的探讨促凋亡(Smac)蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后不同时间点的表达变化及丁苯酞对其的影响。方法180只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、丁苯酞治疗组、丁苯酞预防组、丁苯酞预防加治疗组。各实验组又分为缺血再灌注后6h、12h、24h亚组。采用改良的线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,病理学HE染色观察形态学变化,免疫组化法检测脑组织中Smac蛋白的变化,TUNEL法原位检测凋亡细胞,Western免疫印迹检测Smac蛋白水平的表达。结果脑缺血再灌注损伤6h后胞浆中Smac蛋白的免疫阳性细胞增多,24h表达最多,并且胞浆和胞核都着色。缺血再灌注组中Smac蛋白呈强阳性表达,与假手术组、治疗组、预防加治疗组比较有统计学意义,其中治疗组与预防加治疗组中Smac蛋白阳性表达较弱,两组比较有统计学意义。结论丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤导致的神经细胞坏死和凋亡具有良好的保护作用,其可能是通过抑制Smac蛋白的释放起到保护神经元的作用。     

葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。40只SD雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、小剂量葛根素治疗组（小剂量组）、大剂量葛根素治疗组（大剂量组）。应用TTC染色观察梗死体积,应用免疫组化染色及TUNEL染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达及凋亡细胞数。结果大、小剂量组梗死体积和凋亡细胞数明显少于缺血组（P〈0.01）,Bcl-2明显多于缺血组（P〈0.01）,小剂量组Bax少于缺血组（P〈0.05）,大剂量组Bax明显少于缺血组（P〈0.01）。大剂量组梗死体积和凋亡细胞数少于小剂量组（P〈0.05）,Bcl-2多于小剂量组（P〈0.05）。大、小剂量组Bax无统计学意义（P〉0.05）。结论葛根素可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,疗效与剂量有关。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的探讨补阳还五汤(BHD)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法采用公式法计算脑组织含水量,TTC染色法计算脑缺血梗死灶,原位末端标记法观察细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫组化检测凋亡相关基因bcl2、Bax蛋白表达的变化。结果与缺血再灌组相比,BHD组脑水肿和脑缺血梗死区减轻,细胞凋亡指数和Bax蛋白表达明显增加,bcl-2蛋白表达明显减少(P均<0.01)。结论BHD对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

大鼠局灶性脑缺血-再灌注后脑组织炎性细胞因子水平研究

目的探讨大鼠局灶性脑缺血-再灌注后的炎性损伤机制。方法将30只雄性成年Wistar大鼠随机分为2组（假手术组和缺血-再灌注组）。采用线栓法制成大脑中动脉闭塞模型。并于术后6h、12h、24h3个时间点测定缺血脑组织白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平。结果缺血-再灌注组各时点IL-1β和TNF-α水平与假手术组相应时点比较明显升高，差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论炎性细胞因子参与了脑缺血-再灌注损伤的病理变化过程。