神经移植的种子细胞:大鼠骨髓基质细胞部分生物学特性

目的:分离培养SD大鼠骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcebls,BM-SCs),观察BMSCs部分生物学特性。方法:实验于2004-03/08在珠江医院广东省神经医学研究所实验室进行。采用密度梯度离心法分离BMSCs,MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞生长周期、鉴定细胞表面标志,免疫荧光染色观察细胞的神经分化功能及端粒酶反转录酶(TERP)表达。PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果:①采用密度梯度离心法可以得到高纯度的BMSCs,表达CD29,CD44等表面标志,而不表达CD31,CD34,CD45。②BMSCs主要由Ⅰ,Ⅱ型两种形态的细胞组成,其中Ⅱ型细胞表达端粒酶活性并可以诱导分化为Nestin阳性细胞。③骨髓基质细胞原代培养时增殖能力较低。结论:BMSCs主要有两种形态和功能不完全相同的细胞类型组成,其中Ⅱ型细胞具有端粒酶活性,并在一定的诱导条件下可以分化为Nestin阳性细胞,可以考虑作为神经移植的种子细胞来源。     

兔骨髓基质细胞的生物学特性及植人心肌后的存活状况

目的：观察兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，MSCs)的部分生物学特性及植人心肌后的存活状况。方法：密度梯度离心与贴壁粘附得到高纯度的兔下肢骨MSCs，建立体外培养体系，光镜、电镜、细胞周期等观察其生物学特性，4^ ，6-二脒基-2-苯吲哚(4^ ，6-dia midino-2-phenylindone，DAPI)标记培养的MSCs，植人心肌后检测植入细胞在6周内不同时相点的存活状况。结果：体外培养的MSCs显示良好的贴壁扩增生长能力，88％的培养细胞为静止期细胞，96.4％细胞为活细胞，电镜证明培养细胞显示幼稚细胞的结构。标记的MSCs植人心肌后至少生存6周并且植入细胞扩散融合于植入区宿主心肌中。结论：体外培养的MSCs显示幼稚细胞形态，标记的培养MSCs植人心肌后可以长期存活并扩散融合于宿主心肌。     

兔骨髓基质细胞的生物学特性及植入心肌后的存活状况

目的:观察兔骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,MSCs)的部分生物学特性及植入心肌后的存活状况。方法:密度梯度离心与贴壁粘附得到高纯度的兔下肢骨MSCs,建立体外培养体系,光镜、电镜、细胞周期等观察其生物学特性,4',6-二脒基-2-苯吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindone,DAPI)标记培养的MSCs,植入心肌后检测植入细胞在6周内不同时相点的存活状况。结果:体外培养的MSCs显示良好的贴壁扩增生长能力,88%的培养细胞为静止期细胞,96.4%细胞为活细胞,电镜证明培养细胞显示幼稚细胞的结构。标记的MSCs植入心肌后至少生存6周并且植入细胞扩散融合于植入区宿主心肌中。结论:体外培养的MSCs显示幼稚细胞形态,标记的培养MSCs植入心肌后可以长期存活并扩散融合于宿主心肌。     

骨髓基质细胞生物学特性及其在脊髓损伤修复中的应用

目的：近来发现骨髓基质细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在特定诱导条件下可分化为神经细胞，提示骨髓基质细胞移植为修复脊髓损伤带来了希望。为此就骨髓基质细胞生物学特性及其在脊髓损伤修复中的应用予以综述。 资料来源：应用计算机检索PUBMED2000-01／2004-12期间的相关文章。检索词为“MSCs，SCI”，并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库2000-01／2004—12期间的相关文章，检索词为“骨髓基质细胞，脊髓损伤”，并限定文章语言种类为中文。 资料选择：对资料进行初审，并查看每篇文献后的引文。纳入标准：文章所述内容应涉及骨髓基质细胞的生物学特征、定向分化、鉴定以及骨髓基质细胞治疗脊髓损伤的研究现状或作用机制等内容。排除标准：重复研究或Meta分析类文章。 资料提炼：共收集到38篇相关文献，26篇文献符合纳入标准，排除的12篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的26篇文献中，13篇涉及骨髓基质细胞的生物学特征，3篇涉及骨髓基质细胞定向分化为神经细胞的诱导，1篇涉及骨髓基质细胞的鉴定，3篇涉及骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状，6篇涉及骨髓基质细胞移植修复脊髓损伤的作用机制。 资料综合：骨髓基质细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能，用于细胞移植和基因治疗有许多优势，被视为多种组织细胞移植的替代来源和基因治疗的有效运载工具。骨髓基质细胞在特定的诱导条件下，可以分化为神经细胞。研究提示，取材方便、易于扩增、易于诱导分化的骨髓基质细胞可作为脊髓损伤细胞治疗的一个备选来源，为修复脊髓损伤带来了希望。 结论：具有自我更新能力及多向分化潜能的骨髓基质细胞，随着转基因治疗和联合细胞移植的深入研究，将为脊髓?     

骨髓基质细胞移植治疗外伤性脑损伤的效应

目的:综述骨髓基质细胞移植治疗外伤性脑损伤的效应。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1996-10/2006-10期间的相关文章,检索词为“bone marrow stromal cells(BMSCs),traumatic brain in jury(TBI),cell transplantation”,并限定文章语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与骨髓基质细胞移植治疗外伤性脑损伤研究相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到138篇相关文献,31篇文献符合纳入标准,排除的107篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的31篇文献中,分别涉及骨髓基质细胞的生物学特性、体外诱导分化、移植途径、对外伤性脑损伤的修复以及修复中枢神经系统损伤的机制。资料综合:骨髓间充质干细胞是一群存在于骨髓中的非造血干细胞,具有较强的自我更新能力和多向分化潜能,在体外不同的诱导条件下可分化为骨细胞、软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、神经细胞、平滑肌细胞等多种细胞。通过脑实质内直接注射、脑脊液内注射或血管内注射移植后,骨髓基质细胞可透过血脑屏障集中于损伤区并在中枢神经系统内长时间存活。通过替代受损细胞和激活内源性修复机制,骨髓基质细胞可改善损伤的神经功能、促进外伤后神经重塑。随着对骨髓基质细胞研究的深入,以下几个方面还需进一步研究:骨髓基质细胞特异性标志的确定及快速分离纯化、归巢及体内分化的相关机制、促进损伤后神经组织重塑的分子机制。结论:骨髓基质细胞于脑实质内直接注射、脑脊液内注射或血管内注射移植后均能促进外伤性脑损伤修复,作用机制主要为替代受损细胞和激活内源性修复。目前尚存在一些未解决的问题,但骨髓基质细胞治疗外伤性脑损伤仍是一种很有前途的治疗方法。     

不同途径移植骨髓单个核细胞治疗大鼠后肢缺血

目的：探讨局部肌肉注射和动脉腔内注射两种途径进行骨髓单个核细胞移植治疗大鼠后肢缺血的效果。方法：实验于2004—02／06在首都医科大学宣武医院动物室完成。通过切除股浅动脉及其分支血管制作Lewis大鼠单侧后肢缺血模型，7d后进行骨髓单个核细胞移植。骨髓单个核细胞取自同系健康大鼠的四肢长骨，用密度梯度离心法获得。26只kwis大鼠随机分成局部肌肉注射细胞移植组(实验组Ⅰ，n=8)和局部肌肉注射无血清IMDM培养基组(对照组Ⅰ，n=5)；动脉腔内注射细胞移植组(实验组Ⅱ，n=8)和腔内注射无血清IMDM培养基组(对照组Ⅱ，n=5)。实验组每只大鼠移植5&;#215;106骨髓单个核细胞。在移植后4周测定双侧后肢皮肤温度差、激光多普勒血流仪测定皮肤灌注量，免疫组化染色计数毛细血管数量，数字减影血管造影(digital subtraction angiography，DSA)观察血管新生情况作为评价指标，研究两种移植途径对下肢缺血的不同治疗作用。结果：所有大鼠未出现后肢坏疽。移植后4周双侧后肢皮肤温度差实验组Ⅰ为0．90&;#177;0．17，对照组Ⅰ为2．54&;#177;0．14；实验组Ⅱ为1．01&;#177;0．22．对照组Ⅱ为2．84&;#177;0．25，实验组较对照组明显低(P&;lt;0．05)。激光多普勒血流测定显示双侧后肢皮肤灌注量之差实验组Ⅰ为18．0&;#177;5．6，对照组Ⅰ为32．1&;#177;9．4；实验组Ⅱ为21．8&;#177;7．1，对照组Ⅱ为28．6&;#177;4．5．实验组较对照组明显低(P&;lt;0．05)。免疫组化检查显示毛细血管数量实验组Ⅰ为18．7&;#177;3．6，对照组Ⅰ为12．3&;#177;4．2；实验组Ⅱ为20．6&;#177;4．6，对照组Ⅱ为14．1&;#177;2．5，实验组较对照组明显增加(P&;lt;0．05)。DSA可以观察到治疗组的新生血管数量较对照组明显多。但肌肉注射和腔内注射两种移植途径之间各指标的比较均无明显差异(实验组Ⅰ对实验组Ⅱ：P&;gt;0．05)。结论：骨髓单个核细胞移植能有效改善大鼠后肢缺血。局部肌肉注射和动脉腔内注射两种移植途径同样有效。     

骨髓基质细胞移植脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的评估

目的:探讨骨髓基质细胞移植对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的作用。方法:实验于2004-03/12在中国医科大学盛京医院动物实验室完成。①选取清洁级2～4月龄Wistar大鼠95只,5只大鼠用于骨髓基质细胞的培养,剩余90只随机数字表法分为3组:正常对照组、模型对照组、细胞移植组,30只/组。②模型对照组、细胞移植组大鼠麻醉后,以T8棘突为中心取背部后正中切口长约5cm,显露T7～11棘突及椎板,咬除T9棘突及全椎板,在左侧建立脊髓半横断模型。③细胞移植组在造模后10min内将制备的骨髓基质细胞悬液多点缓慢注入到脊髓半切头侧和尾侧损伤临近区域的灰白质交界处(距脊髓表面约0.7mm),3μL/点,总细胞数6×105个。模型对照组同法注射等量磷酸盐缓冲液。正常对照组不造模,于T9脊髓左半侧相同部位注射等量磷酸盐缓冲液。④各组大鼠分别于术后1d,1,2,3,4周进行后肢运动功能评分检测,评分标准分为0～6级,分数越低表示后肢运动功能恢复越差。⑤后肢运动功能测定30min后,进行斜板实验,检测大鼠抓握、维持姿势能力。将大鼠身体轴线与斜板纵轴垂直放置,斜板每次升高5°,以大鼠能够在斜板上维持5s不滑下的最大角度为其功能值。结果:实验选用90只大鼠,正常对照组无脱落,造模后模型对照组死亡7只,细胞移植组死亡3只。①后肢运动功能检测结果:术后1d,1,2,3,4周,模型对照组后肢运动功能评分随时间的延长而逐渐升高,但各时间点仍明显低于正常对照组(t=2.921～35.556,P<0.05);与模型对照组比较,术后2,3,4周细胞移植组后肢运动功能评分均明显升高[(1.84±0.32),(3.43±0.58)分;(2.43±0.62),(4.23±0.78)分;(2.83±0.69),(4.58±0.76)分;t=2.953～4.157,P<0.05]。②斜板试验检测结果:术后1d,1,2,3,4周,模型对照组斜板倾斜度数随时间的延长而逐渐增大,但各时间点仍明显低于正常对照组(t=3.284～8.381,P<0.05);与模型对照组比较,术后1,2,3,4周细胞移植组斜板倾斜度数均明显增大(t=3.275～5.260,P<0.05)。结论:骨髓基质细胞移植可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复。     

脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血损伤后神经功能恢复的影响

目的：采用脑室系统注入体外培养的骨髓基质细胞，观察其对神经功能损伤修复的影响及其在脑内的存活、迁移、分化情况。 方法：实验于2004-03／12在中国医科大学神经内科实验室完成。①将28只Wistar大鼠随机分为假手术组（n=6），模型组（n=8），梗死半球移植组（n=7），健侧半球移植组（n=7）。②除假手术组外，其他3组大鼠采取longa法制备大脑中动脉梗死模型，梗死后次日将培养的骨髓基质细胞悬液（10μL，约1&;#215;10^5个细胞）注入梗死半球移植组和健侧半球移植组大鼠侧脑室，模型组注入等量的磷酸盐缓冲液。③通过神经功能评分观察大鼠脑神经功能恢复情况，采用免疫组织化学方法观察移植入脑的骨髓基质细胞的存活、迁移及分化情况。 结果：28只大鼠全部进入结果分析。①神经功能缺损评价：假手术组动物无神经功能缺损。移植前各组梗死后大鼠神经功能损害评分差异无显著性（P〉0．05），移植2周后梗死大鼠神经功能均有不同程度恢复，但梗死半球移植组、健侧半球移植组评分明显低于模型组（6．7l&;#177;0．49，6．86&;#177;0．38，8．63&;#177;0．52，P〈0．05）。②大鼠脑病理改变：苏木精-伊红染色显示大脑中动脉梗死大鼠的缺血区脑组织稀疏，细胞数量明显减少且间隙增大。假手术组则无此表现，表明大鼠脑梗死模型制作成功。③脑组织切片免疫组织化学染色结果：可见来源于骨髓基质细胞的细胞（5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞经免疫组织化学染色呈暗棕色）在脑组织内存活，并且聚集于缺血梗死区域。在梗死半球移植组对侧半球脑组织内未发现5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞；在健侧半球移植组仅在移植损伤道周围发现少量5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞。应用免疫双标染色随机选取10个5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞区域计数发现大鼠脑梗死后14d约1．2％的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经元标志蛋白特异性烯醇化酶，约6％的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白。 结论：经脑室移植的骨髓基质细胞对梗死后大鼠神经功能的恢复有明显促进作用。不同脑脊液途径移植的骨髓基质细胞对神经功能缺损的修复无明显差异。经脑室系统途径移植的骨髓基质细胞可在脑组织内存活，血管下间隙为骨髓基质细胞在脑组织内迁移提供途径。脑损伤是骨髓基质细胞迁移、分化的主要原因。     

非诱导同种异体骨髓基质细胞心肌移植后细胞增殖分化的结局

背景：关于骨髓基质细胞心肌成形的研究。目前都集中在模拟自体细胞移植方面。而同种异体骨髓基质细胞心肌移植的研究，国内报道较少。目的：观察大鼠同种异体骨髓基质细胞移植到心肌梗死区后能否存活，并进一步增殖、分化，以及对宿主心脏的影响。设计：随机对照动物实验。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科实验室。材料：1月龄Wistar大鼠10只。雌雄不拘。体质量100-120g，用于取材培养骨髓基质细胞。3月龄雌性Wistar大鼠80只。体质量200—250g，用于制造动物模型。方法：实验于2004-06／12在华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科实验室完成。①80只大鼠结扎冠状动脉左前降支制作急性心肌梗死模型，45只大鼠制作模型成功。（2）4周后，取传两代非经诱导的体外培养的同种异体大鼠骨髓基质细胞，注射到大鼠心肌梗死区，为移植组（25只）。同时设置注射培养基的对照组（20只）。③移植4周后检测受体心脏的血流动力学指标。然后取标本，检测移植细胞存活、分化和组织的血管新生状况。主要观察指标：①两组大鼠血流动力学检测结果比较。②移植细胞的结局。③两组大鼠血管新生的改变。结果：细胞移植组13只，对照组11只大鼠进入结果分析。①移植组大鼠心脏血流动力学指标较对照组明显改善【左心室收缩压：（88．61&;#177;5．99），（76．93&;#177;4．75）mmHg，左心室舒张末压：（7．72&;#177;1．36），（12．77&;#177;2．76）mmHg，P均〈0．05；左心室收缩压最大变化速率：（2365．26&;#177;266．31），（2025．04&;#177;230．25）（mmHg／s），左心室舒张压最大变化速率：（2313．26&;#177;159．30），（2140．12&;#177;191．03）mmHg/s]。②同种异体骨髓基质细胞移植人心肌梗死区后能够度过急性炎症期而且不引起明显移植排斥反应；位于梗死区的移植细胞主要分化为成纤维细胞，部分位于心肌梗死区周围的细胞分化为血管内皮细胞，并促进了血管新生。⑧移植组心肌梗死区及其周围新生血管数目较对照组明显增加（P〈0．01）。结论：同种异体骨髓基质细胞移植后未能在梗死区形成心肌样细胞，但所形成的血管内皮细胞产生了促进心肌梗死后血管新生、改善心功能的作用。     

大鼠骨髓基质细胞移植对脊髓横断损伤的修复功能

目的：研究骨髓基质细胞修复脊髓损伤的可能性，探索治疗脊髓损伤的新方法。方法：实验于2002-04／2003—04在哈尔滨医科大学附属第一医院动物实验中心完成。取20只大鼠，制作椎体水平脊髓离断伤的大鼠动物模型，随机分为细胞移植组和单纯损伤组。前者将体外培养至第5代的大鼠骨髓基质细胞，用Brdu标记后，移植到大鼠脊髓离断处，后者仅注射等量生理盐水。饲养12周，定期观察动物体质量变化，进行功能评定，12周后处死动物，行病理，免疫组织化学和电镜检查。进行两组对比观察。结果：细胞移植组动物和单纯损伤组动物在脊髓损伤后12周后肢功能的Tarlov评分分别为(4．65&;#177;0．18)，(3．65&;#177;0．35)分，斜板试验结果分别为(74．82&;#177;7．04)&;#176;，(50．21&;#177;5．06)&;#176;，体质量变化分别为(127&;#177;15．96)．(123．9&;#177;16．5)g，差异均有显著性意义。骨髓基质细胞移植组大鼠脊髓功能恢复优于单纯损伤组，大体所见及病理，免疫组织化学，电镜检查证明该组离断脊髓有明显修复迹象。结论：体外培养的大鼠骨髓基质细胞移植在大鼠骨髓内能够至少存活12周，并在脊髓损伤处发挥一定的修复功能。     

食蟹猴骨髓源神经干细胞移植的实验研究

背景：目前的研究显示骨髓基质细胞(bone marrow stormal ceils，BMSCs)，可通过培养转分化为神经干细胞，但神经干细胞通过何种方法对脑皮质创伤灶进行修复以及在脑皮质创伤灶中是否具有生长、迁移能力等情况尚不清楚。目的：探讨食蟹猴自体骨髓基质细胞诱导分化成神经干细胞后移植到脑内的生长情况。设计：以实验动物为研究对象，前瞻性、对照研究。单位：一所军医大学医院的神经外科。材料：实验在解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所中心实验室进行，实验动物是由华南灵长类动物中心提供健康成年食蟹猴6只。千预：对6只食蟹猴进行了骨髓基质干细胞体外培养、诱导分化成神经干细胞，经BrdU标记后进行自体脑移植。主要观察指标：对接受实验干预的脑组织进行苏木精-伊红染色和免疫组化染色，光镜下观察。、结果：苏木精-伊红染色显示即时移植和延迟移植的创伤区细胞数量都明显多于假移植治疗对照；免疫组织化学染色显示即时移植组和延迟移植组两组动物在干细胞移植后1—6个月脑皮质创伤灶内均有BrdU阳性表达细胞，移植后半年的动物在移植区邻近的脑白质内也可观察到有BrdU阳性表达的细胞，而创伤对照动物、假移植治疗动物和正常脑组织中则未见BrdU阳性表达。结论：BMSCs体外培养得到的神经干细胞经过自体移植能在脑皮质内存活，并且能增殖、分化和迁移，可成为神经干细胞的替代细胞或来源细胞；干细胞移植到陈旧性的脑皮质损伤灶也具有成活、增殖和迁移能力。     

不同途径移植骨髓单个核细胞治疗大鼠后肢缺血

目的:探讨局部肌肉注射和动脉腔内注射两种途径进行骨髓单个核细胞移植治疗大鼠后肢缺血的效果。方法:实验于2004-02/06在首都医科大学宣武医院动物室完成。通过切除股浅动脉及其分支血管制作Lewis大鼠单侧后肢缺血模型,7d后进行骨髓单个核细胞移植。骨髓单个核细胞取自同系健康大鼠的四肢长骨,用密度梯度离心法获得。26只Lewis大鼠随机分成局部肌肉注射细胞移植组(实验组Ⅰ,n=8)和局部肌肉注射无血清IMDM培养基组(对照组Ⅰ,n=5);动脉腔内注射细胞移植组(实验组Ⅱ,n=8)和腔内注射无血清IMDM培养基组(对照组Ⅱ,n=5)。实验组每只大鼠移植5×106骨髓单个核细胞。在移植后4周测定双侧后肢皮肤温度差、激光多普勒血流仪测定皮肤灌注量,免疫组化染色计数毛细血管数量,数字减影血管造影(digitalsubtractionangiography,DSA)观察血管新生情况作为评价指标,研究两种移植途径对下肢缺血的不同治疗作用。结果:所有大鼠未出现后肢坏疽。移植后4周双侧后肢皮肤温度差实验组Ⅰ为0.90±0.17,对照组Ⅰ为2.54±0.14;实验组Ⅱ为1.01±0.22,对照组Ⅱ为2.84±0.25,实验组较对照组明显低(P<0.05)。激光多普勒血流测定显示双侧后肢皮肤灌注量之差实验组Ⅰ为18.0±5.6,对照组Ⅰ为32.1±9.4;实验组II为21.8±7.1,对照组Ⅱ为28.6     

大鼠骨髓基质细胞移植对脊髓横断损伤的修复功能

目的:研究骨髓基质细胞修复脊髓损伤的可能性,探索治疗脊髓损伤的新方法。方法:实验于2002-04/2003-04在哈尔滨医科大学附属第一医院动物实验中心完成。取20只大鼠,制作椎体水平脊髓离断伤的大鼠动物模型,随机分为细胞移植组和单纯损伤组。前者将体外培养至第5代的大鼠骨髓基质细胞,用Brdu标记后,移植到大鼠脊髓离断处,后者仅注射等量生理盐水。饲养12周,定期观察动物体质量变化,进行功能评定,12周后处死动物,行病理,免疫组织化学和电镜检查。进行两组对比观察。结果:细胞移植组动物和单纯损伤组动物在脊髓损伤后12周后肢功能的Tarlov评分分别为(4.65±0.18),(3.65±0.35)分,斜板试验结果分别为(74.82±7.04)°,(50.21±5.06)°,体质量变化分别为(127±15.96),(123.9±16.5)g,差异均有显著性意义。骨髓基质细胞移植组大鼠脊髓功能恢复优于单纯损伤组,大体所见及病理,免疫组织化学,电镜检查证明该组离断脊髓有明显修复迹象。结论:体外培养的大鼠骨髓基质细胞移植在大鼠骨髓内能够至少存活12周,并在脊髓损伤处发挥一定的修复功能。     

骨髓基质细胞移植缺血性脑梗死大鼠后神经营养因子的表达

背景：骨髓基质细胞在适宜条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,分泌可溶性分子促进神经元存活。目的：观察骨髓基质细胞移植后缺血性脑梗死大鼠脑组织神经营养因子表达情况及其对神经功能的影响。方法：改良的Longa栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,1h后再灌注,24h后治疗组尾静脉注射3×106骨髓基质细胞,盐水对照组尾静脉注射1mL生理盐水,空白对照组不进行注射。结果与结论：在梗死后第7,14天治疗组的神经损伤评分明显低于对照组（P〈0.05）;治疗组神经生长因子和脑源性神经营养因子表达在各时间点均高于对照组（P〈0.05）。结果显示静脉移植骨髓基质细胞可改善缺血性脑梗死大鼠神经功能,移植骨髓基质细胞后缺血脑组织中神经生长因子及脑源性神经营养因子表达促进了神经功能的恢复。     

骨髓基质细胞移植缺血性脑梗死大鼠后神经营养因子的表达

背景:骨髓基质细胞在适宜条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,分泌可溶性分子促进神经元存活。目的:观察骨髓基质细胞移植后缺血性脑梗死大鼠脑组织神经营养因子表达情况及其对神经功能的影响。方法:改良的Longa栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,1h后再灌注,24h后治疗组尾静脉注射3×106骨髓基质细胞,盐水对照组尾静脉注射1mL生理盐水,空白对照组不进行注射。结果与结论:在梗死后第7,14天治疗组的神经损伤评分明显低于对照组(P<0.05);治疗组神经生长因子和脑源性神经营养因子表达在各时间点均高于对照组(P<0.05)。结果显示静脉移植骨髓基质细胞可改善缺血性脑梗死大鼠神经功能,移植骨髓基质细胞后缺血脑组织中神经生长因子及脑源性神经营养因子表达促进了神经功能的恢复。     

脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血损伤后神经功能恢复的影响

目的:采用脑室系统注入体外培养的骨髓基质细胞,观察其对神经功能损伤修复的影响及其在脑内的存活、迁移、分化情况。方法:实验于2004-03/12在中国医科大学神经内科实验室完成。①将28只Wistar大鼠随机分为假手术组(n=6),模型组(n=8),梗死半球移植组(n=7),健侧半球移植组(n=7)。②除假手术组外,其他3组大鼠采取longa法制备大脑中动脉梗死模型,梗死后次日将培养的骨髓基质细胞悬液(10μL,约1×105个细胞)注入梗死半球移植组和健侧半球移植组大鼠侧脑室,模型组注入等量的磷酸盐缓冲液。③通过神经功能评分观察大鼠脑神经功能恢复情况,采用免疫组织化学方法观察移植入脑的骨髓基质细胞的存活、迁移及分化情况。结果:28只大鼠全部进入结果分析。①神经功能缺损评价:假手术组动物无神经功能缺损。移植前各组梗死后大鼠神经功能损害评分差异无显著性(P>0.05),移植2周后梗死大鼠神经功能均有不同程度恢复,但梗死半球移植组、健侧半球移植组评分明显低于模型组(6.71±0.49,6.86±0.38,8.63±0.52,P<0.05)。②大鼠脑病理改变:苏木精-伊红染色显示大脑中动脉梗死大鼠的缺血区脑组织稀疏,细胞数量明显减少且间隙增大。假手术组则无此表现,表明大鼠脑梗死模型制作成功。③脑组织切片免疫组织化学染色结果:可见来源于骨髓基质细胞的细胞(5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞经免疫组织化学染色呈暗棕色)在脑组织内存活,并且聚集于缺血梗死区域。在梗死半球移植组对侧半球脑组织内未发现5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞;在健侧半球移植组仅在移植损伤道周围发现少量5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞。应用免疫双标染色随机选取10个5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞区域计数发现大鼠脑梗死后14d约1.2%的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经元标志蛋白特异性烯醇化酶,约6%的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白。结论:经脑室移植的骨髓基质细胞对梗死后大鼠神经功能的恢复有明显促进作用。不同脑脊液途径移植的骨髓基质细胞对神经功能缺损的修复无明显差异。经脑室系统途径移植的骨髓基质细胞可在脑组织内存活,血管下间隙为骨髓基质细胞在脑组织内迁移提供途径。脑损伤是骨髓基质细胞迁移、分化的主要原因。     

静脉注射途径移植骨髓基质细胞的特点

目的:探讨在大鼠脑缺血的情况下经尾静脉注射移植骨髓基质细胞的可行性,为骨髓基质细胞脑移植治疗提供一种简捷、安全、有效的途径。方法:实验于2005-10/2006-08在北华大学医学院实验中心完成。取1～2个月龄SD大鼠双侧股骨和胫骨,体外分离培养大鼠骨髓基质细胞。取体质量为280～320g的SD大鼠25只,采用颈内动脉线栓法制作大脑中动脉梗死模型,造模成功后在25只大鼠中随机盲抓分为2组:骨髓基质细胞移植组(n=15)、对照组(n=10)。骨髓基质细胞移植组经静脉缓慢推入含Hoeschst33342标记的骨髓基质细胞细胞悬液1mL(2.0×107个细胞),对照组用同样方法经尾静脉注入等量不含骨髓基质细胞的DMEM培养液作为对照。分别于移植后1d、7d、14d时间点对两组大鼠进行神经功能损害严重程度评分及大脑组织切片观察比较。结果:25只大鼠均进入结果分析。①各代细胞90%以上表达巢蛋白阳性。②与对照组相比,骨髓基质细胞移植组大鼠运动、神经功能恢复明显[骨髓基质细胞移植组:(6.10±2.96),(3.30±1.83),(2.10±1.20)分;对照组:(7.43±1.51),(6.14±1.35),(4.43±1.40)分,P<0.05]。③骨髓基质细胞移植组大鼠脑组织结构较清晰、完整;对照组大鼠脑组织破坏溶解,组织结构松散,细胞结构不完整,胞浆疏松,染色变浅,间质水肿。结论:通过静脉注射进行骨髓基质细胞移植,方法简便、安全,对神经损伤动物组织重建及神经功能有确切的修复效果。     

骨髓间充质干细胞移植人脑缺血大鼠侧脑室后的迁移及分化：免疫荧光标记

目的：骨髓间充质干细胞可以分化成神经细胞替代受损组织，并可分泌生长因子和营养因子来促进其体内细胞的存活和分化。实验将体外扩增和Hoechst33342标记的骨髓间充质干细胞移植入缺血性大鼠侧脑室内，观察干细胞在大鼠脑内的生存、迁移、分化情况及对神经功能恢复的影响。 方法：实验于2004—12／2007—06在南京大学医学院附属鼓楼医院科研部完成。①取体质量120～160g的SD大鼠用于制备移植细胞；另取80只体质量250～300g的SD大鼠用于制作大脑中动脉闭塞模型。实验方法符合动物伦理学要求。②应用直接贴壁法分离纯化及扩增大鼠骨髓间充质干细胞，荧光染料Hoechst33342标记。③将造模成功的75只大脑中动脉闭塞大鼠按随机数字表法分为3组：模型对照组15只；磷酸缓冲液组30只；骨髓间充质干细胞移植组30只，将骨髓间充质干细胞立体定向移植到大鼠缺血侧脑室中。④术后1，3，6，12，24d测定大鼠神经功能损害评分，荧光显微镜下观察Hoechst33342标记的骨髓间充质干细胞在脑内的生存和迁移情况，采用免疫荧光法检测胶质原纤维酸性蛋白和微管相关蛋白2的表达。 结果：①细胞移植后6d，12d骨髓间充质干细胞移植组大鼠的神经功能评分均显著低于磷酸缓冲液组（P〈0．05）。②移植的骨髓间充质干细胞可在大鼠脑组织中存活，并向缺血区域迁移。③移植第24天Hoechst33342／微管相关蛋白2、Hoechst33342／胶质原纤维酸性蛋白双阳性细胞占Hoechst33342阳性细胞的百分率为（10．45±1．35）％，（8．73±1．38）％。 结论：骨髓间充质干细胞可以在动脉闭塞局灶性脑缺血模型大鼠脑中存活，并向缺血区域附近迁移，在一定条件下可分化为神经元和星形胶质细胞，同时能促进局灶性脑缺血大鼠的神经功能恢复。     

非诱导同种异体骨髓基质细胞心肌移植后细胞增殖分化的结局

背景:关于骨髓基质细胞心肌成形的研究,目前都集中在模拟自体细胞移植方面。而同种异体骨髓基质细胞心肌移植的研究,国内报道较少。目的:观察大鼠同种异体骨髓基质细胞移植到心肌梗死区后能否存活,并进一步增殖、分化,以及对宿主心脏的影响。设计:随机对照动物实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科实验室。材料:1月龄Wistar大鼠10只,雌雄不拘,体质量100～120g,用于取材培养骨髓基质细胞。3月龄雌性Wistar大鼠80只,体质量200～250g,用于制造动物模型。方法:实验于2004-06/12在华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科实验室完成。①80只大鼠结扎冠状动脉左前降支制作急性心肌梗死模型,45只大鼠制作模型成功。②4周后,取传两代非经诱导的体外培养的同种异体大鼠骨髓基质细胞,注射到大鼠心肌梗死区,为移植组(25只)。同时设置注射培养基的对照组(20只)。③移植4周后检测受体心脏的血流动力学指标,然后取标本,检测移植细胞存活、分化和组织的血管新生状况。主要观察指标:①两组大鼠血流动力学检测结果比较。②移植细胞的结局。③两组大鼠血管新生的改变。结果:细胞移植组13只,对照组11只大鼠进入结果分析。①移植组大鼠心脏血流动力学指标较对照组明显改善犤左心室收缩压:(88.61±5.99),(76.93±4.75)mmHg,左心室舒张末压:(7.72±1.36),(12.77±2.76)mmHg,P均<0.05;左心室收缩压最大变化速率:(2365.26±266.31),(2025.04±230.25)(mmHg/s),左心室舒张压最大变化速率:(2313.26±159.30),(2140.12±191.03)mmHg/s犦。②同种异体骨髓基质细胞移植入心肌梗死区后能够度过急性炎症期而且不引起明显移植排斥反应;位于梗死区的移植细胞主要分化为成纤维细胞,部分位于心肌梗死区周围的细胞分化为血管内皮细胞,并促进了血管新生。③移植组心肌梗死区及其周围新生血管数目较对照组明显增加(P<0.01)。结论:同种异体骨髓基质细胞移植后未能在梗死区形成心肌样细胞,但所形成的血管内皮细胞产生了促进心肌梗死后血管新生、改善心功能的作用。     

猫骨髓基质细胞诱导为神经干细胞的实验研究

背景：骨髓基质细胞是贴壁黏附的非造血多潜能干细胞，其在一定条件体外培养、扩增可被诱导分化为神经元和胶质细胞。目的：观察家猫骨髓基质细胞体外培养及诱导分化成神经干细胞的生长情况。设计：随机取样。单位：南方医科大学附属珠江医院神经外科。材料：实验于2002-01／12在解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所中心实验室进行，实验动物是由第一军医大学动物中心提供健康家猫20只，年龄1．0～2．0岁，体质量2．5～4．0kg，雌雄各半。干预：随机抽取家猫左右下肢的骨髓，从中分离得到骨髓基质细胞，提取的骨髓基质细胞悬液在体外给予神经干细胞培养基培养，增殖后用维甲酸为分化诱导因子进行诱导骨髓基质细胞向神经干细胞转化。CK2型倒置相差光学显微镜(OLYMPAS，JAPAN)追踪观察活细胞培养生长情况，同时观察4，12，24，48h去除非贴壁细胞及不去除贴壁细胞骨髓基质细胞生长情况。采用免疫组织化学染色改良法对干细胞阶段的骨髓基质细胞进行免疫细胞化学检测，OLYMPAS光学显微镜观察。主要观察指标：对接受实验干预的骨髓基质细胞分别进行倒置相差显微镜下观察活细胞生长情况及光镜下观察免疫细胞化学染色情况。结果：20只家猫全部进入结果分析。猫骨髓基质细胞在体外培养中胞体增大，倒置相差显微镜下可见丰富的胞浆颗粒，继之出芽，贴壁生长，可形成克隆团，同时可传代培养。免疫组化染色分析结果显示能表达神经干细胞特异性抗原Nestin，而且能分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞。结论：家猫骨髓基质细胞具有干细胞特征，在合适条件下可扩增、形成克隆并诱导分化出神经胶质细胞和神经元特征细胞。