人源性单克隆抗体制备技术的新进展

本文就近年来人源性单克隆抗体技术中人Ｂ细胞免疫方法、人单抗制备技术等所取得的新进展、新思路和新动向作了较系统的回顾，并评述了其优缺点及前景，对人源性单克隆抗体技术的现状和发展方向进行了分析和探讨．     

抗精氨酸支原体单克隆抗体的制备

本室制备了4株(A11、E5、F5、D1)抗精氨酸支原体的单克隆抗体(McAb )。用APAAP桥联酶标技术测定该抗体腹水效价为1:640～1:40 960,A11抗体的Ig类型是IgM,而E5、F5及D1均为IgG1。建立的4株能稳定分泌抗精氨酸支原体的McAb,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。该McAb用于检测细胞培养中的支原体污染,可特异性地检出精氨酸支原体,达到快速、准确的要求。     

4种抗支原体单克隆抗体免疫学特性的研究

为了有效地控制细胞质量、我们从1987年开始、相继建立了抗口腔支原体(M.orale),精氨酸支原体(M.arginini),猪鼻支原体(M.hyorhinis).和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)的杂交瘤细胞系共20株。并用IFA法、BA法或APAAP法对单克隆抗体进行了检测和鉴定。单克隆抗体(McAb)亚类鉴定结果:8株为IgG1,2株为IgG2b,其余10株为IgM。抗体效价测定大多数在4000～8 000之间。利用支原体纯培养的菌落进行了IFA染色试验,封闭试验,生长抑制试验和免疫电镜检查,均证实了它们的特异性,并获得2株对同属支原体有抗原交叉的McAb(3D1和3A11)。利用上述McAb检测实验室常用细胞的支原体污染,较常规法和DNA荧光染色法简便,快速,特异性较高。     

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,在PEG1000作用下,与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个月稳定传代,冻存于液氮中,复苏后其分泌抗体的水平未见下降。     

宫颈癌抗独特型单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备宫颈癌抗独特型单克隆抗体并鉴定其抗原模拟特性。 方法和结果： 以识别小鼠和人宫颈癌相关抗原分子共同表位的单克隆抗体AU14-1（Ab1）为免疫原在含免疫反应剂的无血清培养液中致敏小鼠脾细胞，并将其与SP2/0融合，经筛选和克隆化，建成一株能分泌抗独特型单克隆抗体（Ab2）的杂交瘤细胞系。Ab2的抗原模拟特性经ELISA、结合和竞争抑制试验以及免疫组化染色，表明为Ab2β，具有宫颈癌细胞膜表面抗原的“内影像”。 结论： 获得一株具有宫颈癌抗原内影像的抗独特型单克隆抗体。     

甲病毒属系列单克隆抗体的研制及特性鉴定

本文报道应用电融合法和PEG法建立了11种甲病毒(SIN,SF,CHIK_1,CHIK_2,EEE,WEE,MAY,GET,RR,SAG,M-1)单克隆抗体杂交瘤细胞系。分别对各种McAb进行了多项鉴定。特异性试验结果表明,有亚组特异性的和种特异性的McAb。对于今后该类疾病的流行病学调查和临床诊断,以及有关毒株的鉴定具有一定实用价值。     

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备

作者用提纯的解脲脲原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得3株稳定分泌抗解脲脲原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株进行了鉴定。用ELISA法测定该抗体腹水效价为1:64000～1:2048000,1F9、2B2抗体的Ig类型为IgG1,5H1为IgG2b。建立的3株能稳定分泌抗解脲脲原体的McAb杂交瘤细胞林,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。     

液相色谱法分离纯化单克隆抗体的进展

本文介绍了近年来国内外液相色谱法(包括常压液相色谱法和高效液相色谱法)在单克隆抗体分离纯化中的应用。由于单克隆抗体分子的特殊性,其分离纯化的方法也多种多样,各种不同分离原理的液相色谱法:离子交换色谱,凝胶过滤色谱,疏水性相互作用色谱,亲和色谱,羟基磷灰石吸附色谱,以及新近发明的亲硫吸附色谱和混合态色谱都在单克隆抗体分离纯化中有着程度不同的应用。这些液相色谱方法可适用于分离纯化腹水或杂交瘤细胞培养上清液中的小鼠、大鼠和人源的不同类型及亚类的单克隆抗体。本文还就各种不同方法的应用范围,及纯化结果的纯度、活性回收率、纯化周期、每批可纯化样品量、纯化成本等方面作了比较和讨论。     

抗人红细胞M型抗原单克隆抗体的研制及初步应用

应用杂交瘤枝术,用人M型RBC免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞系NS-1融合,筛选出抗M血型抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株13H_2;经过8个多月连续传代培养增殖良好,仍能稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体。细胞培养上清效价1∶512,亲和力11s。通过将此株单抗用于血型检测、标准红细胞谱细胞的鉴定和在法医上检测血痕,均证明此株单抗识别的只是红细胞上的M血型抗原,与其它血型抗原无关。较多克隆抗M型抗原血清特异性强,效价高,亲和力好,是检测MN血型的良好诊断试剂。     

抗MS_2多聚酶单克隆抗体的制备及鉴定

应用MS_2-X蛋白(含MS_2多聚酶的98个氨基酸,乙型肝炎X抗原的145个氨基酸)免疫小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合后,经阳性克隆检测,克隆化及体外传代培养,共筛选出了2株抗MS_2多聚酶的单克隆抗体,这在国内尚未见报道。经ELISA及Western Blot实验证实,此2株单克隆抗体只能与MS_2多聚酶发生反应,而不能与乙型肝炎X抗原和正常细菌蛋白发生反应,其抗体亚类为IgG_1,腹水效价为1∶32000～1∶64000。应用抗MS_2单克隆抗体,可以建立亲和层析技术,高效快速地将基因工程表达的MS_2多聚酶—目的蛋白融合蛋白,从大量的细菌蛋白中纯化出来,这对深入研究目的蛋白的结构与功能具有十分重要的作用。     

巨细胞病毒单克隆抗体的研究进展

自Ｐｅｒｅｉｒａ等１９８２年制备出巨细胞病毒单克隆抗体以来，国内外学者先后建立了多种不同性质的巨细胞病毒单克隆抗体。本文概述了这些单克隆抗体在巨细胞病毒的预防、诊断方面的应用，以及对巨细胞病毒的生物学特性和致病机理的研究。     

抗绿脓杆菌毒素A单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

本文采用绿脓杆菌外毒素A免疫BALB/c小鼠取脾细胞与Sp2/0细胞融合,建立了6株分泌单克隆抗体的杂交瘤,分别命名为14F10,23B9,23F1,23C12,,24A6及24B5。其中,23F1及24A6在传代培养中逐渐丧失了分泌抗体的能力,其余4株可稳定地分泌抗体。它们的Ig亚类鉴定;14F10为IgM,23B9为IgC1,23C12为JgG2b,24B5为JgG1。注射入同系小鼠腹腔,可产生高滴度抗体,在夹心ELISA试验中己证实均为抗绿脓杆菌外毒素A特异性的。此外,文中还讨论了在间接ELISA初次筛选中出现的假阴性及假阳性的原因及其排除方法。     

全军单克隆抗体的研究进展

作者概述了近10年军队系统单克隆抗体(McAb)技术研究的进展。军队开展McAb的研究是同国内同步进行的。他们曾采用了各种先进方法,制备出包括抗微生物、肿瘤相关抗原及标志物、白细胞分化抗原、血小板、淋巴因子、各种蛋白、激素及酸等80余种McAb,其中多种抗病毒McAb己制成系多列产品。一些研究已从实验阶段进入军事医学和临床医学的实际应用和基础医学研究的探索,抗病毒和抗肿瘤McAb正在进行广泛的临床诊断和治疗研究,並已取得了效果。文中评述了军队开展杂交瘤枝术的组织领导、技术培训、学术交流的特点及其在全国所起的作用,也讨论了McAb技术发展中的有关问题。     

大鼠抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性定鉴

将人血红蛋白(Hb)免疫LOU/M(IgK-1a)大鼠,取脾细胞与IR983F大鼠骨髓瘤细胞融合,制备了3株大鼠抗Hb单克隆抗体(McAb)2A10、9B5,4F12杂交瘤细胞株。3种McAb腹水效价分别为1:16×10~4、1:3.2×10~4、1:323×10~4。培养上清效价分别为1:256、1:16、1:8。亚类测定分别为IgM、IgG2_a、IgG2_4、染色体记数2A10为60±5,9B5为72±6。3种McAb的亲和常数分别为1.28×10~6M~(-1)、6.35×10~7M~(-1),3.64×10~8M~(-1)。特异性检测表明3种McAb与人Hb及人红细胞的亲和力明显高于其它种类动物的红细胞,与无关蛋白无结合活性。用这些McAb检测Hb最低可测到1υg水平,检测人红细胞可检测到4～8个RBC/ml(相当于90～190ngHb/ml)。大大高于目前临床常用的测定潜血方法。     

抗β2-mG杂交瘤细胞系的制备及其单克隆抗体应用研究

本文应用纯化的β2-mG免疫BALB/c小鼠,制备了11株抗β2-mG单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。首次应用β2-mG McAb建立了竞争性、宽范围(0.31～10μg/ml)的β2-mG放射免疫测定法(RIA),并将此法与市售商品药盒多克隆抗体(PcAb)RIA(检测范围0.005～0.08μg/ml)进行了比较,两者之间有极显著正相关(P<0.001)。实验结果表明:β2-mG McAb完全可以替代PcAb。作者又采用β2-mG McAb,将生物素-亲合素系统(BAS)引入时间分辨免疫荧光测量法(TRIFMA),成功地在国内首次建立人血清β2-mG的BAS-TR-IFMA,其可测范围达1.25-40μg/ml。     

抗鸡免疫球蛋白(IgM、IgG)单克隆抗体的制备与鉴定

本文报道将SRBC免疫鸡的血清经33％硫酸铵沉淀,再经Sephadex G-200凝胶柱两次层析,收集第Ⅰ,Ⅱ蛋白峰作为免疫原免疫BALB/c小鼠。建立了2株(3A7、1C4)分泌抗鸡IgG和4株(6AS、5E2、6C7、6B1)抗鸡IgM特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系;琼脂扩散试验表明6株细胞系分泌的单克隆抗体均为IgG1亚类。所制腹水的ELISA滴度达10~5～10~6。用免疫印迹技术(IB,Immunobllotting)对其中2株(3A7和6A5)的特异性作了进一步鉴定。     

单克隆抗体逆转肿瘤耐药的研究进展

肿瘤耐药是化疗失败的重要原因，逆转肿瘤对药物的耐受性是肿瘤治疗工作者关心的热点之一．本文对引起肿瘤耐药的Ｐ－糖蛋白抗体逆转研究作一回顾．具有逆转作用的单抗均识别Ｐ－糖蛋白膜外表位，且不同抗体能够逆转的耐受药物不同；同时抗体介导的免疫反应也参与了逆转；单抗的逆转作用取决于肿瘤是否有Ｐ－糖蛋白的表达。单克隆抗体逆转作用特异性好，但也存在许多问题。     

口腔颌面部肿瘤单克隆抗体研究的初步报告

作者用人牙龈癌细胞系Ca9-22免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,制备出2株单克隆抗体(McAbs)C-D11和C-E9。2株McAbs的类型均为IgG2b型。杂交瘤培养上清液和腹水的效价分别为1:128～256和1:10~4～10~6。C-D11与13种培养的瘤细胞中的7种反应;C-E9与其中的10种瘤细胞反应;但2株McAbs与13种正常细胞几乎不反应。C-D11和C-E9相应抗原能耐受蛋白水解酶和一些有机试剂的处理,但不耐受过碘酸的氧化作用。