糖尿病肾病系膜细胞增殖功能、[Ca~(2 )]i和分泌纤维连接蛋白的研究

目的 :探讨糖尿病肾病系膜细胞功能改变及意义。方法 :采用STZ复制糖尿病模型 ,取肾进行系膜细胞培养 ,3 H -TdR法测定细胞增殖 ,用fluro - 3探针经共聚焦显微镜检测 [Ca2 ]i 变化 ,ELISA法测定纤维连接蛋白 (FN)分泌量。结果 :糖尿病大鼠系膜细胞3 H -TdR掺入率和FN分泌量较正常大鼠增加 ,基础 [Ca2 ]i 两组无差异 ,但糖尿病系膜细胞 [Ca2 ]i 对血管紧张素II反应明显减弱。结论 :糖尿病系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚 ,其 [Ca2 ]i对AngII反应减弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过     

糖尿病肾病系膜细胞增殖功能、[Ca2+]I和分泌纤维连接蛋白的研究

目的：探讨糖尿病肾病系膜细胞功能改变及意义。方法：采用STZ复制糖尿病模型，取肾进行系膜细胞培养，^3H－TdR法测定细胞增殖，用fluro-3探针经共聚集显微镜检测[Ca^2 ]i变化，ELISA法测定纤维连接蛋白（FN）分泌量。结果：糖尿病大鼠系膜细胞^3H-TdR掺入率和FN分泌量较正常大鼠增加，基础[Ca^2 ]i两组无差异，但糖尿病系膜细胞[Ca^2 ]i对血管紧张素Ⅱ反应明显减弱。结论：糖尿病系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚，其[Ca^2 ]i对Ang Ⅱ反应弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过。     

高糖对肾小球系膜细胞c-fos表达与纤维结合蛋白分泌的影响

目的 :研究高糖对人肾小球系膜细胞纤维结合蛋白 (FN)分泌以及c fos表达的影响 ,探讨高糖对人肾小球系膜细胞的作用。方法 :采用人肾小球系膜细胞进行体外培养 ,高糖作为刺激因素 ,ELISA法测定培养上清中FN含量 ,免疫细胞化学方法检测c fos表达情况。结果 :细胞培养上清中FN含量 ,在对照组每孔中为 (88.9± 19.1)ng ,高糖组 (15 6.0± 40 .9)ng ,甘露醇组(15 6.0± 2 1.9)ng ,后两组显著高于对照组 (均P <0 .0 5 ) ;c fos的光密值 ,在对照组中为 0 .14± 0 .0 2 ,高糖组 0 .2 8± 0 .0 3 ,甘露醇组 0 .2 8± 0 .0 4,后两组显著高于对照组 (均P <0 .0 1)。结论 :高糖可增加人肾小球系膜细胞c fos的表达 ,促进FN的分泌。     

多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用

目的探讨多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖(25 mM)致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用。方法①体外培养大鼠肾脏系膜细胞株(MCs 1097),使用高糖(25 mM)处理大鼠肾脏系膜细胞,部分实验组中应用PARP-1抑制剂PJ34(3×10-6M)进行干预处理。②RT-PCR和Western blot检测PARP-1、纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅳ(COLⅣ)的mRNA及蛋白表达。③高通量比色测定法检测PARP-1的活性。结果①高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1 mRNA和蛋白的表达,分别较低糖对照组增加72.3%和68.4%(P<0.05),PJ34可明显抑制高糖诱导的PARP-1 mRNA和蛋白的过度表达,mRNA和蛋白分别为高糖组的31.8%和55.5%(P<0.05)。同时,高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1激活,高糖组为低糖对照组活性的1.77倍(P<0.05),PJ34可显著抑制高糖诱导的PARP激活,活性降低为高糖组的67.8%(P<0.05)。②高糖显著增加COLⅣ和FN表达,PJ34显著抑制高糖诱导的COLⅣ和FN mRNA过度表达(分别为高糖组的68.2%和54.7%(P<0.05);COLⅣ和FN蛋白水平的变化与RNA水平变化相一致,PJ34可显著抑制高糖诱导的COLⅣ和FN蛋白表达(分别为高糖组的54.0%及66.6%(P<0.05)。结论高糖可以诱导培养的大鼠肾脏系膜细胞内PARP激活,PARP-1表达增加,PJ-34预处理可以明显降低高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞内PARP的激活以及下游FN及COLⅣ的高表达,提示PARP1参与了肾脏系膜细胞细胞外基质沉积的发生发展过程。     

川芎嗪对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：探讨川芎嗪对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及其细胞外基质含量的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组、TMP组,分别培养12h、24h、48h,CASY细胞计数仪计数细胞存活率;以CCK-8法检测细胞增殖;以ELISA法检测细胞上清液细胞外基质ColⅣ及FN的含量。结果：各TMP浓度组之间存活率无统计学差异（P〉0.05）;与对照组比较,高糖下培养24h、48hMCs增殖显著增快（P〈0.01）,分泌的ColⅣ及FN含量增多（P〈0.05）;与高糖组比较,TMP各组MCs增殖显著减慢（P〈0.01）,分泌ColⅣ及FN减少（P〈0.01或P〈0.05）。结论：川芎嗪可以有效抑制高糖的促增殖作用并能减少系膜细胞外基质的增加。     

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响

目的:观察雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响.方法:在高糖状态下培养系膜细胞,予以不同剂量雷帕霉素进行干预,采用MTT的方法观察细胞增生能力,并用流式细胞仪检测各组系膜细胞体积,以前向角散射光平均强度表示细胞大小,Western印迹法检测细胞中纤维连接蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达变化.结果:同正常糖及甘露醇组比较,高糖可使肾小球系膜细胞增生且发生肥大,同时高糖环境下系膜细胞分泌的FN及ColⅣ显著增加(P＜0.05),而雷帕霉素能显著抑制高糖的上述作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论:雷帕霉素可以抑制高糖状态下系膜细胞的增生、肥大及细胞外基质的合成,且呈剂量依赖性,有望用于糖尿病肾病的防治.     

糖尿病肾病肾小球系膜细胞增殖、分泌功能和细胞内[Ca2+]i的研究

目的：探讨糖尿病肾病肾小球系膜细胞增殖、分泌功能和细胞内[Ca^2 ]i改变及意义。方法：链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病模型，取肾进行肾小球系膜细胞培养，^3H-TdR法测定细胞增殖，ELISA法测定纤维连接蛋白（FN）分泌量，用Fluro-3探针经共聚焦显微镜检测[Ca^2 ]i变化。结果：糖尿病大鼠肾小球系膜细胞，^3H-TdR投入率和FN分泌量较正常大鼠增加，基础[Ca^2 ]i两组无差异，但糖尿病肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i对血管紧张素Ⅱ反应明显减弱。结论：糖尿病肾小球系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚，其[Ca^2 ]i对AngⅡ反应减弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过。     

己酮可可碱对高糖时人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(nonocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达的影响及己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对其干预作用.方法 将培养的人肾小球系膜细胞分为6组:正常对照组、高糖组、甘露醇组、PTX甲组、PTX乙组、PTX丙组,分别在24、48和72 h采用RT-PCR法和ELISA法检测PTX对高糖条件下系膜细胞内MCP-1mRNA及蛋白、细胞外基质纤维连接蛋白(fi-bronectin,FN)表达的影响.结果 高糖组人肾小球系膜细胞MCP-1mRNA及蛋白、FN的表达较正常对照组明显增加(P<0.01);己酮可可碱各组比高糖组有明显下降(P<0.01);不同浓度的己酮可可碱对高糖诱导的系膜细胞MCP-1的表达抑制程度不同(P<0.05).结论 己酮可可碱可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞MCP-1的表达以及FN的分泌,呈时间、剂量依赖关系,己酮可可碱可能对糖尿病肾病的防治起到有益的作用.     

姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法:以大鼠系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为7组:①正常对照组(5 mmol/L葡萄糖,NG组),②高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组),③高糖 6.25 μmol/L姜黄素组,④高糖 12.5 μmol/L姜黄素组,⑤高糖 25μmol/L姜黄素组,⑥高糖 50 μmol/L姜黄素组,⑦高糖 100μmol/L姜黄素组.分别作用24 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,用Western Blot法测定细胞内FN蛋白表达.结果:作用24 h后,高糖明显诱导MCs增殖并上调细胞内FN表达.不同浓度姜黄素均能抑制高糖诱导的细胞增生,并抑制FN蛋白表达增加.结论:姜黄素能抑制高糖诱导的MCs增殖,并下调FN蛋白表达,提示姜黄素可能通过阻抑FN表达减少细胞外基质积聚,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用.     

非诺贝特对高糖培养肾小球系膜细胞胞外基质产生及降解影响

目的：探讨非诺贝特对糖尿病肾病的保护机制。方法：大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常糖浓度（5.5 mmol.L-1,对照组）、高糖浓度（25 mmol.L-1,高糖组）及25 mmol.L-1葡萄糖＋非诺贝特100μmol.L-1（非诺贝特组）。CCK-8测定系膜细胞增殖;ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）、纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）;明胶酶谱法检测培养上清基质金属蛋白酶-2,9（MMP-2,9）的活性。结果：高糖组系膜细胞较对照组出现增殖增加,合成基质蛋白Col-Ⅳ,FN增多,MMP-2及MMP-9活性下降,TIMP-1含量增加,TGF-β1分泌增加。与高糖组比较非诺贝特干预后能完全或部分逆转上述变化。结论：非诺贝特能抑制高糖培养的系膜细胞增殖,减少胞外基质合成,增加胞外基质的降解。