碱性成纤维细胞生长因子促体外培养人晶状体上皮细胞株增殖及细胞周期的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）与体外培养的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLECs）株增殖之间的关系及其对细胞周期的影响.方法 对人晶状体上皮细胞株（SRA01/04）进行无血清培养液培养,取对数生长期细胞进行实验,分别加入不同终浓度的bFGF （0.01、0.10、1.00、10.00及100.00μg/ L） ）共同培养24、48、72 h后MTT法测定细胞增殖情况,以流式细胞仪分析bFGF对细胞增殖周期的影响.结果 bFGF浓度为0.1μg/L、1.00μg/ L、10.0μg/ L、100.00μg/ L时,对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）;100.00μg/ L作用24h増殖率最大112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性; bFGF促进HLEC细胞周期发生变化,S期和G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞减少,说明bFGF通过促进HLEC细胞越过G1期限止点进入增殖状态.结论 bFGF可促进HLEC的增殖,改变细胞周期,是HLECs强有力的促增殖因子.     

胰岛素样生长因子-1对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人晶状体上皮细胞增殖的影响。方法对永生化人晶状体上皮细胞系B-3(HLEB-3)进行培养及传代,应用不同浓度的IGF-1(5、10、20、30、40、50、60μg.L-1)作用于HLEB-3细胞,在不同时间点采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测IGF-1对HLEB-3细胞增殖的影响。采用蛋白质印迹(West-ern blotting)方法检测晶状体上皮α-肌动蛋白(α-actin)的表达。结果 IGF-1在5μg.L-1时就对HLEB-3细胞有明显的促增殖作用(P<0.05),且随着IGF-1浓度的升高,促增殖作用增加,即促增殖效应具有浓度依赖性;同时也可上调α-actin蛋白的表达,与对照组比较,各浓度组IGF-1均可显著促进α-actin蛋白表达上调(P<0.01),且随着IGF-1浓度的增加,α-actin蛋白含量逐渐升高。结论 IGF-1具有促进人晶状体上皮细胞增殖的作用,其作用强度呈浓度依赖性。     

ICG联合光照对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的 观察兔晶状体囊外摘除术(ECCE)中使用吲哚青绿(ICG)水分离联合光照对残留晶状体上皮细胞(LECs)增殖的抑制作用.方法 4JD只兔随机分成ICG+光照组、ICG组、光照组和空白对照组,每组各10只兔(20眼).各组均行ECCE术.ICG+光照组用0.5%ICG做水分离联合卤素灯光源照射;ICG组用0.5%ICG水分离;光照组用BSS水分离联合卤素灯光源照射;空白对照组用BSS做水分离.术后第1、7天时每组随机处死5只兔(10眼).免疫组织化学方法 检测各组LECs的增殖细胞核抗原(PCNA)表达,计算增殖指数(PI).结果 术后第1天时,ICG+光照组LECs呈单层排列,其他各组LECs呈单层或复层排列;术后第7天时,ICG+光照组LECs少或无,其他3组LECs呈多层束状或成簇排列.ICG+光照组术后第1天时,PI值(7.5±3.7)%,低于其他3组,差异均有显著性(P＜0.05);术后第7天时ICG+光照组,LECs极少,ICG组、光照组及空白对照组PI值组间差异无显著性(P＞0.05).结论 兔ECCE术中采用0.5%ICG水分离联合光照,可早期抑制LECs的增殖.     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖及胞浆内游离Ca2+浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Tri)对牛晶状体上皮细胞(1ens epithelial cell,LECs)增殖的影响及可能的机制.方法:取体外培养的第4代牛LECs,分5组培养.空白对照组:以DMEM培养;增殖对照组:以DMEM 50μg/L rhEGF培养;Tri高、中、低剂量组分别以含50μg/L rhEGF和40μg//L、20μg/L、10μg/L Tri的DMEM培养.分组培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用MTT比色法及流式细胞仪检测细胞增殖抑制率和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达率;用荧光指示剂Fura-2/AM测定空白对照组、增殖对照组、Tri中剂量组分组培养48 h后胞内游离Ca2 浓度.结果:随着作用时间的延长和浓度的增加,Tri对rhEGF诱导的LECs增殖的抑制率逐渐增大;Tri各剂量组PCNA阳性表达率低于增殖对照组;Tri中剂量组胞内Ca2 浓度高于增殖对照组和空白对照组.结论:Tri对LECs的增殖有明显的抑制作用,该作用可能通过影响胞内Ca2 浓度来完成.     

白黎芦醇对人皮肤成纤维细胞及兔耳增生性瘢痕的影响

目的了解白黎芦醇对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及兔耳增生性瘢痕的影响。方法用FCM法检测及建立兔耳增生性瘢痕动物模型，用不同浓度的白黎芦醇作用不同时间后，成纤维细胞的增殖指数及兔耳瘢痕增生指数进行了研究。结果①随着白黎芦醇浓度增大和作用时间延长而人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖指数呈下降趋势。②白黎芦醇在150μmol/L、300μmol/L、400μmol/L时能明显降低瘢痕增生指数，分别为对照组的78．8％、61．2％、47．0％。结论①白黎芦醇降低成纤维细胞增殖指数是其抑制瘢痕增生的途径之一，且呈剂量时间依赖性。②随着白黎芦醇浓度增大，兔耳瘢痕增生指数下降，与瘢痕的体外实验相吻合。     

PCNA与EGF在人胎儿晶状体上皮表达的研究

目的：观察增殖细胞核抗原（PCNA）及表皮生长因子（EGF）在人胎儿晶关於 本上皮细胞的表达。方法：用SP免疫细胞化学法对48例人胎狼不同胎龄晶状体上皮细胞进行PCNA，EGF免疫细胞化学染色。结果：PCNA，EGF在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达；免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色；EGF阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的斑块状；经相关分析；EGF与PCNA呈正相关。结论：PCNA，EGF在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达。且EGF促进晶状体上皮细胞的增殖。     

维甲酸修饰人工晶状体植入对残留晶状体上皮细胞增殖的影响

①目的　观察维甲酸修饰人工晶状体 (IOL)植入对残留晶状体上皮细胞 (RLECs)增殖的抑制作用 ,探讨其防治后囊混浊的作用机制。②方法　 4 8只新西兰白兔随机分为 3组 ,对照组植入未经修饰的PMMAIOL ,实验组植入经 5 ,10 μg维甲酸修饰的IOL ,术后第 2 ,7,14 ,30天采用高效液相色谱法动态检测房水中的药物浓度变化 ,SABC免疫组织化学法检测RLECs中增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达情况。③结果　实验组于植入术后 7～14d内保持稳定的房水药物浓度 ,RLECs中PCNA表达的阳性率显著低于对照组 (F =4 4 .4 1～ 10 6 .88,q =16 .96～ 18.80 ,P均 <0 .0 1)。④结论　维甲酸修饰人工晶状体于植入术后能在房水中持续释放维甲酸 ,长期维持较高的房水药物浓度 ,显著抑制RLECs增殖 ,有可能成为防治后囊混浊的有效方法。     

白藜芦醇抑制人晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制

目的 探讨白藜芦醇(Res)对重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导的人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的抑制作用,并从信号转导方面研究其抑制HLEC增殖的作用机制,为寻求防治后发性白内障的有效药物提供实验依据. 方法 采用rhbFGF诱导体外培养的HLEC增殖,流式细胞术(FCM)检测一定浓度的Res对增殖状态的HLEC增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的抑制作用:FCM检测不同的细胞内信号转导阻断剂(钙调素抑制剂W7、蛋白激酶C抑制剂H7)对其抑制作用的影响. 结果 Res对HLEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用(P<0.01);W7、H7均明显上调了HLEC内PcNA蛋白表达(P<0.01). 结论 Res有抑制HLEC增殖的作用,其机制可能是通过CaM、PKC等来介导的.     

非促有丝分裂型人酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖活性的影响

目的研究观察人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)和N端缺失27个氨基酸残基的非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenetichumanacidicfibroblastgrowthfactor,nm-haFGF)对鼻咽癌细胞及血管内皮细胞增殖活性的影响。方法用不同浓度(0.01～100ng/ml)的人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)及nm-haFGF分别刺激鼻咽癌细胞及血管内皮细胞,作用48h后采用MTT法测定haFGF和nm-haFGF对两种细胞的增殖活性。结果在各浓度(>0.01ng/ml)下,nm-haFGF组对鼻咽癌细胞(除浓度为50ng/ml外)和血管内皮细胞的促增殖作用都显著低于haFGF组。结论nm-haFGF对鼻咽癌细胞及血管内皮细胞的促分裂活性下降。     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对成年牛晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和表皮生长因子 (EGF)对成年牛晶状体上皮细胞增殖的影响。　方法　按正交表 L16 (4 5)进行正交设计 ,将不同浓度 b FGF和 EGF共同作用于体外培养的成年牛晶状体上皮细胞 ,采用 MTT法测定细胞的增殖能力。　结果　单用 b FGF、EGF均可促进成年牛晶状体上皮细胞增殖。0 .75 ng/ m L 的 b FGF开始对晶状体上皮细胞有促增殖作用 ,1～ 10 0 ng/ m L 的 EGF对成年牛晶状体上皮细胞均有明显的促增殖作用 (P<0 .0 1) ,但 b FGF和 EGF无交互作用。　结论　 b FGF和 EGF是诱导成年牛晶状体上皮细胞增殖的重要因素 ,但两者无交互作用     

雷公藤甲素对人晶状体上皮细胞生长影响的实验研究

目的 研究雷公藤甲素（Triptolide,Tri）对人晶状体上皮细胞（Human Lens Epithelial Cells,HLEC）增殖抑制作用。方法 原代培养人晶状体上皮细胞,Tri不同浓度、不同作用时间后吖啶橙试剂（AO）染色,荧光显微镜下观察细胞核的形态变化;MTr法测定人晶状体上皮细胞增殖抑制率。结果 雷公藤甲素对细胞的生长有明显的抑制作用,且呈浓度时间依赖性。结论 一定剂量的Tri可抑制体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖,为预防后囊混浊提供了新途径。     

白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究白藜芦醇抑制人上皮性卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡的作用及机制。方法:将人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞随机分为5组,即正常对照组、白藜芦醇高剂量组(40 mg·L~(-1))、白藜芦醇中剂量组(20 mg·L~(-1))、白藜芦醇低剂量组(10 mg·L~(-1))和顺铂组(40 mg·L~(-1))。干预48 h后,通过光学显微镜观察各组细胞形态,MTT比色法检测各组细胞增值抑制率。通过流式细胞仪分析细胞周期的改变、流式细胞术检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,Western blot法检测细胞caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组比较,白藜芦醇高、中剂量组细胞出现变圆、脱壁、细胞间接触松散等状态,细胞抑制作用明显、增殖抑制率显著升高(P0.01);白藜芦醇各剂量组细胞周期被阻滞于G2/M期,白藜芦醇高、中剂量组细胞凋亡率显著升高(P0.01),同时可明显下调Bcl-2 mRNA而上调Bax mRNA表达,显著提高Bax/Bcl-2值(P0.05,P0.01),上调caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:白藜芦醇能够通过抑制增殖并促进凋亡对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞生长起到一定的抑制作用,其机制可能与白藜芦醇调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

Thapsigargin对人晶状体上皮细胞系SRA01／04增殖抑制的作用机制

【目的】研究thapsigargin（TG）对体外培养的人品状体上皮细胞系SRA01／04增殖的影响，并探讨其分子机制。【方法】不同浓度TG处理SRA01／04细胞72h，噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖；流式细胞仪（PI法）检测细胞周期改变；透射电镜观察细胞超微结构变化；TUNEL法检测细胞核中DNA的断裂情况；激光共焦显微镜和流式细胞仪检测Caspase3活性亚单位（17／19ku）的表达及阳性细胞表达率。【结果】MTT法测得TG为0．325～5μmol／L时，细胞增殖抑制率变化显著，IC50大约为0．8μmol／L；透射电镜显示TG处理SRA01／04细胞膜皱缩，染色体浓缩、边集、核膜裂解、凋亡小体形成；流式细胞仪（PI法）及TUNEL法检测TG浓度为0，0．1，0．5，1，10μmol／L分别处理SRA01／04细胞72h，细胞凋亡率随浓度的增加而增加，呈浓度依赖性；TG处理后细胞Caspase3阳性表达率也呈浓度依赖性增加，TG为10μmol／L时，几乎每个细胞浆内Caspase3都被激活。【结论】Thapsigargin可能通过激活Caspase3为诱导体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01／04细胞凋亡而抑制其增殖，TG为预防后发性白内障的药物研究提供了基础。     

甘草次酸对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的 研究甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)对培养的兔晶状体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells,RLECs)增殖的影响及其机理.方法 首先进行RLECs的体外培养,取第3代的RLECs分别加入不同浓度的GA和20 mg/L的MMC处理,观察细胞形态学变化、免疫细胞化学方法--脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)进一步鉴别凋亡细胞,利用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)对细胞凋亡率进行定量检测.结果 GA对体外培养的RLECs的增殖有显著的影响, RLECs的凋亡率随着GA的浓度增加和时间的延长而增加.结论 GA可以引起体外培养的RLECs凋亡,且对RLECs凋亡诱导作用呈剂量和时间依赖性.     

白藜芦醇合阿糖胞苷对HL-60细胞的增殖抑制作用

目的：观察白藜芦醇（resveratrol，Res）体外单独及联合阿糖胞苷（Ara-c）对白血病HL-60细胞的抑制作用。方法：在体外培养条件下观察不同浓度Res、Ara-c作用48小时后分别对HL-60细胞增殖的影响。然后根据以上抑制结果，选择对HL-60细胞抑制率15％～30％的Ara-c药物浓度，再与不同浓度的Res联合用药。在联合药物处理HL-60细胞48小时后，同样用MTT法检测联合用药对细胞增殖抑制作用。结果：Res、Ara-c体外单独用药均能显著抑制HL-60细胞的生长增殖，Res联合Ara-c（2．5μg／m1）后，对HL-60细胞的增殖抑制作用显著提高，与单独用药组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：Res体外能显著抑制人HL-60细胞的增殖，Res联合Ara-c能显著提高对HL-60细胞的增殖抑制作用。     

重组人表皮生长因子促人角膜缘上皮细胞生长的研究

目的：探讨重组表皮生长因子（rhEGF)对人角膜缘上皮细胞生长的影响。方法：采用rhEGF作用于体外培养的人角膜缘上皮细胞，记录细胞生长曲线，并用四只氮盐（MTT）法测定细胞增殖状况。结果：rhEGF浓度为10ng/ml时对人角膜缘上皮铁促增殖作用最强（P＜0．05）。MTT法48h的吸光度值实验组均高于对照组（P＜0．01）。结论：rhEGF对体外培养人角膜上皮细胞有明显促增生作用。     

人源饲养层对人胚胎干细胞生长的影响

【目的】 选择最佳人源饲养层,并检测不同组织来源的人源饲养层细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的分泌情况,探讨其水平与人胚胎干细胞(hESCs)生长是否相关&#65377; 【方法】 原代培养包皮真皮&#65380;子宫内膜基质&#65380;绒毛&#65380;输卵管&#65380;胎儿真皮&#65380;胎儿肌肉及胎鼠成纤维细胞(MEFs);按组织来源分为7组(MEFs为对照),同期接种同一株hESCs,从饲养层细胞密度&#65380;丝裂霉素作用时间等,寻找不同饲养层适合hESCs生长的最佳条件;按人体组织分6组,ELISA方法检测各种人源饲养层细胞分泌的bFGF&#65377; 【结果】 根据饲养层细胞生长特性,饲养层从优到劣依次为:包皮&#65380;子宫内膜&#65380;绒毛&#65380;输卵管&#65380;胎皮&#65380;胎肌;根据hESCs生长状况,饲养层排序为:包皮&#65380;输卵管&#65380;子宫内膜&#65380;绒毛&#65380;胎肌&#65380;胎皮&#65377;输卵管&#65380;包皮&#65380;绒毛&#65380;胎肌&#65380;子宫内膜&#65380;胎皮分泌的bFGF(pg&#8226;10-5&#8226;mL-1)分别为13.23 ± 3.39,1.99 ± 0.17,1.40 ± 0.17,2.02 ± 1.59,0.38 ± 0.28,0.29 ± 0.29&#65377;输卵管与其它组织细胞分泌的bFGF差异均有统计学意义(P < 0.01);包皮&#65380;绒毛&#65380;胎肌之间差异无统计学意义(P > 0.05),与子宫内膜&#65380;胎皮差异有统计学意义(P < 0.05);子宫内膜与胎皮之间差异无统计学意义(P > 0.05)&#65377; 【结论】 包皮来源的饲养层最佳,输卵管细胞分泌的bFGF量最高,饲养层细胞自身分泌的bFGF和hESCs生长无必然相关性&#65377;