冻融液的温度对人未成熟卵母细胞玻璃化冻融效果的影响

目的探讨冻融液的操作温度对未成熟人卵母细胞（GV、MI）玻璃化冻融效果的影响。方法收集卵胞浆内单精子注射（ICSI）患者的GV、MI卵母细胞,根据冻融液操作温度的不同分为A、B、C组。冻融后存活及未冷冻对照组（D组）卵母细胞体外成熟（IVM）培养,成熟的M11卵母细胞固定后进行免疫荧光染色,然后用NikonCISI激光扫描共聚焦显微镜观察纺锤体、染色体形态。结果实验组GA、GB、GC卵母细胞冻融后的存活率和体外成熟率分别为100％、81．3％、68．8％和33．3％、83．3％、72．7％,仅GC组的存活率与对照比较存在显著性的差异（P〈70．05）;实验组中只有GB组获得了纺锤体（20％）和染色体（10％）形态正常卵母细胞。实验组MA、MB、MC卵母细胞冻融后的存活率分别为71．4％、100％、83．3％,各实验组与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;MA组体外成熟率与对照组比较存在极显著性的差异（0％比57．1％,P〈0．01）,MB、MC与对照组的体外成熟率比较无显著性的差异（66．7％、80％比57．1％,P〉0．05）;仅MC获得1个正常纺锤体和染色体形态卵子。结论冻融液的合适操作温度可以提高未成熟卵子的冻融效果。     

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响

目的比较不同冷冻方法对不同成熟阶段小鼠卵母细胞复苏、胚胎发育及细胞骨架的影响,寻求最佳的卵母细胞冷冻方法。方法分别以SOPS玻璃化及慢速法冷冻小鼠中期(MII)和生发泡期(GV)卵母细胞。解冻复苏后,分别作体外培养成熟(IVM)、体外受精(IVF)或固定作免疫荧光标记,统计复苏率、成熟率、受精率、囊胚率及纺锤体等细胞骨架指标。结果玻璃化冷冻组MII卵和GV卵母细胞的复苏率及囊胚率均显著高于慢速冷冻组(P<0.05)。慢速冷冻组中MII卵复苏率显著低于GV卵(40.4%vs 57.1%,P<0.01)。但同一种冷冻方法保存的MII卵和GV卵的受精率及囊胚率相比,均无显著性差异(P>0.05)。两组的GV卵成熟率无显著差异。玻璃化冷冻组GV卵的纺锤体、染色体及纺锤体和染色体正常率均高于慢速冷冻组GV卵但无显著差异。结论玻璃化冷冻能有效改善冻融卵母细胞的复苏及胚胎发育;与MII卵比较,冷冻GV卵对细胞骨架损伤较小;两种冷冻方法均不影响GV卵冻融后成熟。     

两种不同玻璃化冷冻方案对小鼠卵母细胞纺锤体的影响

目的:探讨两种不同的玻璃化冷冻方案对小鼠第二次减数分裂中期卵母细胞纺锤体的影响。方法:实验分3组:方案A组、方案B组和对照组(新鲜卵母细胞)。均以冷冻环为载体,方案A组用乙二醇(EG)作为冷冻保护剂,方案B组用乙二醇联合二甲亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂,用直接投液氮高速制冷冷冻小鼠卵母细胞;解冻后3h小鼠卵母细胞经固定并用间接免疫荧光法染色微管及染色体,观察纺锤体及染色体的形态。结果:两种玻璃化冷冻方案中,卵母细胞解冻后的存活率差异无显著性(80.3%vs87.5%,P>0.05);经玻璃化冷冻方案A冷冻的卵母细胞解冻后具有完整纺锤体结构的卵母细胞数显著低于对照组和方案B组(15.2%vs78.7%,15.2%vs77.5%,P<0.05),后两者差异无显著性(78.7%vs77.5%,P>0.05);方案A组解冻后具有正常染色体的卵母细胞数显著低于对照组和方案B组(17.4%vs76.6%,17.4%vs72.5%,P<0.05),后两者差异无显著性(76.6%vs72.5%,P>0.05);方案A组异常染色体数显著高于对照组和方案B组(82.6%vs19.1%,82.6%vs27.5%,P<0.05),后两者差异无显著性(19.1%vs27.5%,P>0.05)。结论:改变玻璃化冷冻方案有利于保持解冻后小鼠卵母细胞纺锤体结构完整性。     

冷冻环冷冻促排周期未成熟卵母细胞效果的研究

目的:本文通过对冷冻环冷冻促排周期未成熟卵母细胞后成活率和体外成熟(IVM)能力的比较,及卵母细胞免疫荧光染色后纺锤体和染色体形态的分析,探索未成熟卵母细胞冷冻的方法。方法:获得的GV期卵母细胞随机分为3组:①对照组:GV期卵母细胞体外成熟为MⅡ期(n=68);②GV期冷冻组:卵母细胞在GV期冷冻后体外成熟(n=111);③MⅡ期冷冻组:卵母细胞IVM为MⅡ期予以冷冻(n=69)。获得的MⅡ期卵母细胞予以免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察纺锤体和染色体的形态。结果:GV期冷冻组卵母细胞存活率(89.11%)显著性高于MⅡ期冷冻组(77.05%),而GV期冷冻组卵母细胞的体外成熟率(77.78%)和对照组(86.74%)没有明显的差异(P>0.05)。GV期冷冻组成熟后卵母细胞正常形态的纺锤体(14.1%)和染色体(12.5%)都显著低于对照组(29.1%,32.7%,P<0.05),MⅡ期冷冻组正常形态的纺锤体(11.4%)显著性低于对照组(P<0.05),染色体(15.9%)也低于对照组,但是无显著性差异(P>0.05)。结论:玻璃化冷冻对GV期和MⅡ期卵母细胞纺锤体和染色体都会带来一定的损伤。IVM技术和玻璃化冷冻技术还需要进一步提高。     

人体外与体内成熟卵母细胞发育潜能及妊娠结局的观察

目的观察体外成熟(IVM)与体内成熟人卵母细胞的发育潜能和妊娠结局。方法69例多囊卵巢或多囊卵巢综合征不育患者,分别行IVM治疗49个周期(IVM组)和体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗29个周期(IVF组)。结果IVM组卵母细胞成熟率为65.4%。IVM组和IVF组受精率和卵裂率分别为62.1%和77.2%,60.2%和91.2%,两组受精率无显著性差异(P>0·05),IVM组较IVF组卵裂率降低非常显著(P<0.01)。IVM组和IVF组临床妊娠率和种植率分别为26.5%和12.6%,41.4%和22.9%,IVM组临床妊娠率和种植率较低,但两组无显著性差异(P>0.05)。IVM组和IVF组卵母细胞受精后D2≥4细胞和D3≥6细胞胚胎数占受精卵数(2PN)的比例分别为24.5%和19.4%,67.0%和66.4%,IVM组较IVF组胚胎发育速度慢,两者有非常显著性差异(P<0.01)。IVM组D3优质胚胎形成率(23.7%)较IVF组(58.2%)为低,亦有非常显著性差异(P<0.01)。结论人卵母细胞IVM将成为一种选择性的辅助生殖技术。人卵IVM较体内成熟卵母细胞受精后2PN至卵裂期发育阻滞发生率高,胚胎发育速度慢和优质胚胎形成率低。     

Fertilization of in vitro matured human oocytes by intracytoplasmic sperm injection （ICSI） using ejaculated and testicular spermatozoa

AIM: To evaluate the fertilization competence of spermatozoa from ejaculates and testicle when the oocytes were matured in vitro following intracytoplasmic sperm injection (ICSI). METHODS: Fifty-six completed cycles in 46 women with polycystic ovarian syndrome were grouped according to the semen parameters of their male partners. Group 1 was 47 cycles that presented motile and normal morphology spermatozoa in ejaculates and Group 2 was the other nine cycles where male partners were diagnosed as obstructive azoospermia and spermatozoa could only be found in testicular tissue fragment. All female patients received minimal stimulation with gonadotropin. Immature oocytes were matured in vitro and inseminated by ICSI. The spermatozoa from testes were retrieved by testicular fine needle aspiration. RESULTS: A total of 449 and 78 immature oocytes were collected and cultured for 48 hours, 75.5 % (339/449) and 84.6 % (66/78) oocytes were matured in Groups 1 and 2, respectively. The percentage of oocytes achieving normal fertilization was significantly higher in Group 1 than that in Group 2 (72.9 % vs. 54.5 %, P 0.05). There were no significant differences in the rates of oocytes cleavage and clinical pregnancies in these two groups [87.4 % (216/247) vs. 88.9 % (32/36); 21.3 % (10/47) vs. 44.4 % (4/9)]. A total of 15 babies in the two groups were healthy delivered at term. CONCLUSION: It appears that IVM combined with ICSI using testicular spermatozoa can produce healthy infants, while the normal fertilization rate of in vitro matured oocytes after ICSI using testicular spermatozoa was significantly lower than using the ejaculated spermatozoa.     

比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果

目的探讨不同冷冻载体对水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存效果的影响。方法以体外成熟培养18 h的水牛卵母细胞为实验材料,分别以0.25 ml冻精塑料细管(A)、自制拣卵针尖端部分制成的极细玻璃微管(D)和两种制作核移植工具针的玻璃细管(B、C)为冷冻载体卵母细胞,解冻后统计成熟率及早期胚胎发育率等冷冻保存效果指标。结果A组卵母细胞冷冻保存效果最差(成熟率:A vs B、C、D为43.9%vs 51.7%、51.9%、55.9%,2~4细胞率:A vs B、C、D为34.1%vs 40.0%、40.7%、41.2%),D组卵母细胞冷冻效果最好,但解冻时卵母细胞的回收率显著低于其他组(D vs A、B、C为69.2%vs 87.0%、94.1%、91.9%)。B、C两组在解冻后的成熟率及早期发育率上显著高于A组,低于D组,但差异不明显,且其解冻后卵母细胞回收率显著高于D组(P<0.05)。结论综合回收率和解冻后早期胚胎发育率,B、C两种玻璃细管是一种水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体。     

植入前遗传学筛查用于几种适应症的效率初探

目的探讨植入前遗传学筛查(PGS)用于染色体异常、反复种植失败和反复自然流产患者的效率。方法回顾性研究2015年1月到2016年3月在我中心行PGS治疗,共328个取卵周期和随后进行的263个冻胚移植周期,根据其适应症分为男方染色体异常(A组)、女方染色体异常(B组)、反复种植失败(C组)和反复自然流产(D组),分析4组患者的体外受精-胚胎发育情况、胚胎单核苷酸多态性(SNP)检测分析结果和临床结局。结果 4组患者成熟卵母细胞(MII)率、受精率、卵裂率、D3有效胚胎率均无统计学差异(P0.05);获卵数在A组(12.93±5.73)、B组(13.17±6.65)显著高于C组(10.48±6.07)、D组(10.76±5.47),D组可进行PGS活检的胚胎数与D3有效胚胎数的比率(57.2%)显著高于A组(51.3%)、B组(48.4%)和C组(50.0%)(P均0.05);正常核型胚胎比率C组(71.6%)、D组(58.7%)显著高于A组(39.0%)、B组(33.5%),而无可移植正常核型胚胎的周期率D组(13.5%)显著低于A组(31.3%)、B组(33.3%)、C组(29.1%)(P均0.05);4组患者的妊娠率和流产率均无统计学差异(P0.05)。结论三种适应症的患者实施PGS均能达到满意的临床妊娠率;夫妇染色体异常的患者最终获得正常核型胚胎的几率较低,但是有效避免了高流产率的风险;反复自然流产的患者经PGS筛选后胚胎移植可将流产率控制在较低水平(3.4%)。     

自体骨髓细胞诱导肝移植大鼠长期存活的机制探讨

目的 研究自体骨髓细胞诱导肝移植大鼠长期存活的可能机制.方法 雌性受体大鼠随机分成空白对照组(A组)、D-hanks液组(B组)、全骨髓细胞组(C组)、间充质干细胞组(D组).观察大鼠的中位生存时间(median survival time,MST)、肝功能、病理变化、Sry基因原位杂交和甲胎蛋白、白蛋白免疫组化双标检测观察自体骨髓细胞的分化情况.结果 C组、D组MST均>180 d(P<0.01);血肝功能指标C组、D组降低明显,有显著差异(P<0.01);C组、D组之间比较无显著差异(P>0.05);移植术后60 d C、D组均无明显的急性排斥反应;C组、D组Sry基因原位杂交和甲胎蛋白、白蛋白免疫组化双标检测呈阳性.结论 自体骨髓细胞能减少排斥反应、诱导大鼠肝移植术后长期存活,其中间充质干细胞在移植肝内诱导分化为肝细胞发挥肝细胞功能,是其中可能的机制.     

不同浓度他克莫司对新生大鼠背根神经元生长的影响

目的 观察并寻找适宜新生大鼠背根神经元生长的最佳他克莫司(FK506)浓度.方法 取8只新生24 h SD大鼠的背根神经节,剥除神经外膜,剪成约0.1 mm~3大小的碎块,消化后进行纯化培养,建立体外新生大鼠脊髓背根神经元培养体系.培养96 h后,将背根神经元分为:空白对照组(A组)、1×10~(-10) mol/L FK506组(B组)、1×10~(-9)mol/L FK506组(C组)和1×10~(-8)mol/L FK506组(D组).继续培养48 h后,应用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞活力及逆转录酶-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA的表达情况.比较4组神经元活力和GAP-43 mRNA的表达情况.结果 A、B、C、D组的OD值分别为0.472±0.030、0.481±0.013、0.573±0.016、0.342±0.004,4组之间比较差异有统计学意义(F=26.753,P<0.01),C、D两组之间比较及C、D组分别与A、B组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).A、B、C、D组的GAP-43 mRNA的表达值分别为0.375±0.016、0.388±0.009、0.490±0.003、0.283±0.009,4组之间比较差异有统计学意义(F=72.374,P<0.01),C、D两组之间比较及C、D组分别与A、B组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 1×10~(-9)mol/L浓度的FKS06对大鼠脊髓背根神经元生长的促进和保护作用最好,1×10~(-10)mol/L浓度的FK506对大鼠脊髓背根神经元生长具有促进和保护作用,1×10~(-8)mol/L浓度的FK506对神经元的生长具有抑制作用.     

GnRH激动剂方案适宜获卵数的探讨:9188例新鲜周期胚胎移植回顾性分析

目的探讨IVF-ET治疗中GnRH激动剂方案促排卵的适宜获卵数。方法回顾性分析2014年1月至2015年12月于西北妇女儿童医院生殖中心行IVF/ICSI新鲜周期胚胎移植的患者(共9 188例)的临床资料,以获卵数不同将患者分为5组,分别为获卵1~3枚组、4~7枚组、8~13枚组、14~19枚组、≥20枚组,比较各组患者的基本情况及胚胎发育情况,以及继续妊娠率、周期取消率等临床结局。结果各组患者随着年龄减少,获卵数、双原核(2PN)胚胎数、可用胚胎数及优质胚胎数显著增加(P0.05)。获卵8~13枚组的继续妊娠率显著高于1~3枚组、4~7枚组(P0.05),且其周期取消率显著低于1~3枚组、14~19枚组及≥20枚组(P0.05);其OHSS率亦显著低于14~19枚组及≥20枚组,无可用胚胎率显著低于1~3枚组、4~7枚组(P均0.05)。结论在GnRH激动剂促排卵方案中,获卵数8~13枚时继续妊娠率较高,且周期取消率及OHSS发生率较低,是新鲜周期胚胎移植较适宜的获卵数。     

不同方法冻融山羊卵巢组织的研究

目的探讨山羊卵巢组织不同玻璃化冷冻方法对其卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育的影响。方法采用三种不同的冷冻保护液(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)保存的卵巢组织吸入0.25ml麦管中直接投入液氮中冷冻保存。采用慢速解冻法解冻后对卵巢组织进行形态学观察;收集卵母细胞进行体外培养。结果三种不同冷冻方法冷冻卵巢组织解冻后收集的卵母细胞存活率分别为55.2%、48.9%和46.7%,组间比较无显著性差异(P>0.05);成熟率分别为58.5%(I组)、28.9%(II组)、33.3%(III组),I组显著高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.01);三组的受精率、卵裂率、8细胞胚胎的形成率均无显著性差异(P>0.05);卵巢组织解冻后形态学分析表明,I组效果好于Ⅱ、Ⅲ组。结论采用玻璃化方法冷冻卵巢组织,在冷冻保护液中加入卵黄可提高冷冻保护效果。     

小鼠卵巢组织冷冻保存方法对组织内分泌功能的影响

目的比较不同的冷冻方法对小鼠卵巢组织的保存效果及对组织内分泌功能的影响。方法 25只6周龄ICR雌鼠,取卵巢皮质切块后,根据不同冷冻方法随机分成5组:新鲜对照组、二甲亚砜慢速冷冻组(A组)、丙二醇慢速冷冻组(B组)、冷冻管玻璃化冷冻5min组(C组)及冷冻管玻璃化冷冻8min组(D组)。分别进行卵巢组织冷冻复苏,复苏后体外培养2周以及复苏后同种移植饲养2周实验。比较各组体外培养液中以及复苏移植后小鼠静脉血中雌二醇(E2)水平。结果体外培养过程中,各组培养液中E2水平均随培养时间不断增加(F=14.146,P0.001);同一天的E2水平比较,A、B组显著高于对照组及C、D组(P0.05),C、D组与对照组无统计学差异(P0.05)。移植饲养2周后,DMSO慢速冷冻复苏移植组、PROH慢速冷冻复苏移植组的平均E2水平显著高于两组玻璃化复苏移植组、新鲜组织移植对照组、未处理自然对照组及去势未移植对照组(P0.05),新鲜移植对照组、两组玻璃化复苏移植组及去势未移植对照组的平均E2水平显著低于未处理的自然对照组(P0.05)。结论慢速冷冻及玻璃化冷冻的小鼠卵巢组织复苏后,经过体外培养及同种移植均能保持一定的内分泌功能;慢速冷冻效果可能优于冷冻管玻璃化冷冻。     

人卵巢组织玻璃化冻存方案优选的实验研究

目的评价4种玻璃化冷冻保存液对人卵巢组织的冻存效果,以筛选出较优的玻璃化冷冻保存液配方。方法收集2018年3月至2019年12月期间在北京大学深圳医院妇科因疾病手术治疗的4例患者的卵巢组织,将人卵巢分割为(5~10)mm×10 mm×1 mm大小的组织块进行玻璃化冷冻保存,根据玻璃化冷冻保存液组成成分不同将组织块随机分为4组[A组为20%乙二醇(EG)+20%二甲基亚砜(DMSO)+0.5 mol/L蔗糖+20%人工合成血清替代品(SSS)+M199培养基;B组为38%EG+0.5 mol/L海藻糖+6%SSS+M199培养基;C组为15%EG+15%DMSO+0.5 mol/L蔗糖+20%SSS+M199培养基;D组为商品化Cryotissue Kit VT301/VT302成品]以及对照组(未经冻融处理的新鲜卵巢组织)。采用液氮液滴法在显微镜下观察4种保存液在快速降温和复融时的玻璃化状态;HE染色比较冻存后各组卵巢组织形态学改变;采用免疫组化法检测各组中凋亡标志物细胞色素C(Cytochome C)与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达情况。结果液滴法检测发现,在液氮中快速降温时A、B和D组冻存液均能保持完全玻璃化状态,C组冻存液呈部分结晶;在复融过程中,A、B和C组冻存液均出现结晶,D组冻存液则绝大部分保持透明的玻璃化状态。HE染色结果发现,A、B、C和D组人卵巢组织中的正常卵泡率与对照组比较均无显著性差异(P>0.05);免疫组化结果显示,D组和对照组卵泡中Cytochome C显著低于C组(P<0.05),C组卵泡Caspase-3阳性率显著高于其他组(P<0.05)。结论通过液氮液滴法观察冻存液在快速降温和复融时的玻璃化状态方便直观,可用于对人卵巢组织玻璃化冷冻液的初步筛选;商品化Cryotissue Kit VT301/VT302冻存液冻融后人卵巢组织细胞凋亡较少,为较优的冻存液配方。     

玻璃化法保存异体动脉的实验研究

目的　探讨玻璃化法保存动脉的可行性和异体移植的有效性。　方法　家兔6 0只。其中2 4只切取双侧股动脉共计4 8条,平分为2组,分别采用玻璃化法和低温冷冻法保存14 d,作为移植材料。其余36只作为移植对象,平分为3组,每组12只2 4条动脉。A组行新鲜家兔动脉自体移植,B组行玻璃化保存家兔动脉异体移植,C组行低温冷冻保存家兔动脉异体移植。移植前对动脉进行大体和组织学观察。术后行动脉造影了解移植后动脉的通畅率,并分别于术后14、30、6 0和12 0 d取材,对动脉进行大体和组织学观察,测定内膜/中膜比值,并进行组间比较。　结果　移植前B组的动脉完整率为91.6 7% ,优于C组的5 4 .17% ,二者差异有统计学意义(P<0 .0 1)。移植后B组的累计通畅率达到87.5 0 % ,与A组差异无统计学意义,但优于C组的6 6 .6 7% ,二者差异有统计学意义(P<0 .0 5 )。B组的内膜/中膜比值与A、C组比较,差异有统计学意义(P<0 .0 5 )。　结论　玻璃化法保存动脉在降温和复温过程中冰晶较少,对动脉整体结构和活性影响较小,能较好地保存动脉的组织结构;玻璃化法保存的动脉异体移植的效果优于低温冷冻法保存的动脉异体移植。     

髂骨双钉在腰-髂重建结构中的生物力学优势

目的 评价髂骨单钉与髂骨双钉技术对腰-髂重建结构稳定性的影响.方法 7具成人新鲜尸体L2-骨盆标本,于L3-L5行椎弓根钉固定,将该结构定义为完整状态.对完整状态进行测试后制作骶骨全切失稳模型,每一标本均应用四种髂骨钉技术行L3-髂骨钉-棒稳定重建:A组,髂骨单枚短钉;B组,髂骨单枚长钉;C组,置入髂骨上、下柱的髂骨双枚短钉;D组,置入髂骨下柱的髂骨双枚短钉.髂骨钉的安装及测试顺序随机产生.在MTS材料试验机上,对标本施加800 N压缩和7 N·m扭转载荷,记录L3-髂骨的结构刚度.结果 (1)轴向压缩下,四组的压缩刚度依次为完整状态的73%、76%、98%和112%,A组和B组低于完整状态及C组和D组(P<0.05).其中A组与B组差异无统计学意义,D组与C组差异有统计学意义(P<0.05).(2)在扭转测试中,四组的扭转刚度依次为完整状态的72%、79%、105%和109%,A组和B组低于其他三组(P<0.05).其中A组与B组,完整状态、C组与D组间的差异无统计学意义.结论 对骶骨完全切除所导致的失稳,单枚髂骨短钉与长钉均难以恢复局部的初始稳定性;而双枚髂骨短钉在抗压缩与抗扭转能力方面均高于单枚髂骨钉,可获得与初始状态等同的稳定性.     

前路融合内固定方式对颈椎曲度的影响

目的分析颈椎前路减压融合术中,不同植骨融合内固定方式对恢复颈椎生理曲度的影响。方法2000年1月～2002年12月施行颈椎前路减压内固定手术治疗颈椎伤病患者67例,将26例单节段减压内固定病例分为前路钢板 髂骨植骨融合组(A组,11例)及Cage植骨融合组(B组,15例);将41例多节段(双或三节段)椎体次全切除减压内固定病例分为钢板 髂骨植骨融合组(C组,19例)及钢板 钛网植骨融合组(D组,22例)。以D值法(颈椎侧位X线片上,C4椎体后下缘到齿突后缘与C7椎体后下缘连线的垂直距离)分别比较A、B两组及C、D两组在恢复颈椎生理曲度方面的疗效。结果术后即刻A、B两组及C、D两组之间D值的增值差异无显著性(P >0.05)。全部病例随访10～36个月(平均21.5个月),均获骨性融合。A、B两组及C、D两组之间末次随访时D值增值差异无显著性(P >0.05),各组内术后即刻与末次随访时D值增值的差异无显著性(P >0.05),多节段减压组(C D组)与单节段减压组(A B组)D值增值在术后即刻与随访时差异均有显著性(P< 0.01)。结论在均行单节段或多节段减压融合的病例中,采用不同的前路融合内固定方式对恢复颈椎曲度无明显影响,由此推断正确掌握前路手术适应证是有效恢复颈椎生理曲度的首要因素,恢复颈椎生理曲度的关键步骤在术中而非术后。     

Qtracker体外标记兔成骨诱导分化后细胞的初步研究

目的 探讨Qtracker体外标记兔成骨诱导分化后细胞的特点及可行性.方法 抽取3个月龄健康新西兰大白兔骨髓,贴壁培养骨髓基质干细胞(BMSCs),传至第3代后向成骨细胞诱导,并做鉴定.Qtracker分别以1、2、4、8、16和32 nmol/10~6细胞的浓度标记成骨诱导分化后细胞,分别记为A、B、C、D、E、F组;未标记的细胞作为空白对照组(G组).分别利用荧光显微镜计数和流式细胞术两种方法枪测标记阳性率,台盼蓝拒染法检测标记后细胞存活率,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察Qtracker染料对细胞增殖的影响.结果 兔BMSCs经诱导后能向成骨细胞诱导分化.经Qtracker标记后,荧光显微镜下胞浆呈绿色荧光.随着标记浓度的增加,A、B、C、D、E、F组细胞标记阳性率逐渐增高,于8 nmol/10~6细胞的浓度标记时,在荧光显微镜下计数,标记率可达到(93.58±2.08)%;通过流式细胞仪检测,其标记率为(95.24±1.31)%,经两种方法测定,D、E、F组间标记率差异均无统计学意义(P>0.05),且与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.05);G组各时间点标记阳性率均为0.以不同浓度标记后各组细胞存活率均在96%以上,且各组之间差异无统计学意义(P>0.05).标记Qtracker后对细胞的增殖无影响(P>0.05).结论 Qtracker可用于兔成骨诱导分化后细胞的体外标记,在浓度为8 nmol/10~6细胞下可得到最佳的标记率,且其对成骨诱导分化后细胞的增殖无明显影响.     

右旋美托嘧啶对舒芬太尼-丙泊酚靶控输注效应的影响

目的 研究预先静注小剂量右旋美托嘧啶对舒芬太尼-丙泊酚联合靶控输注效应的影响.方法 选择甲状腺择期手术全麻女性患者40例(ASA Ⅰ～Ⅱ级),随机分成右旋美托嘧啶组(D组)和对照组(C组)两组.D组患者首先给予0.4μg/kg右旋美托嘧啶缓慢静注(5 min注射完毕),C组(对照)患者给予相同方法静注生理盐水;观察10 min之后开始诱导麻醉.记录给药前(T,0)、给药后1 min(T,1)、10 min(T,2)、诱导后插管前(T,3)、插管成功后即刻(T,4)、插管后1 min(T,5)、3 min(T,6)、10 min(T,7)患者心率(HR)、有创动脉血压(SBP、DBP、MAP)、BIS值、OAA/S镇静评分、Ramesay镇静评分;术中每15min记录患者心率(HR)、有创动脉血压(SBP、DBP、MAP)和BIS值;观察停止麻醉后患者自主呼吸恢复时间、初醒(呼之睁眼)时间及清醒拔管时间;计算各时点RPP值(收缩压与心率的乘积);随访术中知晓情况.结果 ①D组患者在静注右旋美托嘧啶后BIS值降低25.6%±4.8%(P<0.05),OAA/S和Ramesay评分也相应下降,与T0时程相比差异有统计学意义(P<0.05),而C组患者则无明显变化;②与T0相比,C组患者SBP、MAP、HR及RPP值在T4时刻均呈明昆升高(P<0.05);D组无明显变化(P>0.05);与D组相比,在T4时刻C组SBP、HR表现出明显降低(P<0.05);③诱导所需丙泊酚靶浓度D组为(1.50±0.53)mg/L,C组为(2.55±0.50)mg/L,组间差异有统计学意义(P<0.05);D组术中所需丙泊酚靶浓度为(1.43±0.56)mg/L,C组为(2.00±0.41)mg/L,组间差异有统计学意义(P<0.05);④术中D组所需舒芬太尼效应室浓度为(0.15±0.5)μg/L,C组则为(0.30 4-0.5)μg/L,组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 诱导前单次静注小剂量右旋美托嘧啶可以有效抑制国人全麻诱导心血管反应,并降低术中舒芬太尼TCI效应室浓度30.2%和丙泊酚TCl血浆浓度21.5%.     

外磁场下磁性纳米C3转移酶载体在大鼠损伤脊髓中的分布

目的:观察施加外磁场后磁性纳米C3转移酶药物载体(简称载药微球)在大鼠损伤脊髓局部的分布情况,并观察不同时间作用的外磁场对该载体分布的影响。方法:构建载药微球,检测其粒径、Zeta电位,透射电镜观察形态、测定磁场顺应性及药物释放;MTT法测定其细胞毒性;观察体外培养条件下细胞的摄取情况。82只大鼠建立T10损伤模型(NYU法),随机分为5组:A组,经尾静脉注射异硫氰酸荧光素组,20只;B组,经尾静脉注射载药微球组,20只;C组,经尾静脉注射载药微球+外磁场15min组,20只;D组,经尾静脉注射载药微球+外磁场30min组,12只;E组,经尾静脉注射载药微球+外磁场1h组,10只。A、B、C组各取10只大鼠,经尾静脉注射1h后,取肝、肾、脾及T10为中心的脊髓组织做冰冻切片并观察载药微球在其中的分布;5组各10只大鼠经尾静脉注射1h后取T10为中心4cm脊髓组织,火焰原子吸收分光光度法测定铁含量;D组取2只大鼠,电镜观察载药微球在脊髓组织中分布。结果:载药微球分散性好,载药微球磁化强度饱和度值为63.5emu/g,载药微球缓慢释放药物且释药时间超过9d,载药微球与细胞共培养,细胞平均存活率为78.10%,与细胞共培养5s后能够在细胞内达到良好聚集效果。C组脊髓损伤中心荧光强度高于A、B组。C组脊髓铁元素含量高于A、B组,D组测定铁含量高于C组(P<0.05),E组测定铁含量高于C组(P<0.05),D组测定铁含量与E组无统计学意义(P>0.05)。电镜观察载药微球聚集在损伤中心,可进入神经细胞胞体内。结论:磁性纳米C3转移酶药物载体可靶向聚集在损伤区局部,载药微球可进入脊髓损伤区神经细胞内;损伤后施加外磁场30min,载药微球可达到最佳聚集效果。