胸腺淋巴细胞“钻”肿瘤细胞的形态观察

<正> 体内的致敏T淋巴细胞具有杀伤恶性肿瘤细胞的作用。在体内外均可察见淋巴细胞“钻入”(emperipolesis)瘤细胞;这种奇特的生物学现象可能是淋巴细胞或其某一亚群的自然本能。它对肿瘤的发生、发展能产生一定的影响。“钻”瘤作用与淋巴细胞的细胞毒功能呈正相关。胸腺是T细胞发育的主要场所,它所产生的T细胞与肿瘤细胞接触后而致敏,增强其增殖反应,同时可迅速将肿瘤细胞杀伤和溶解。本文报告小鼠 Ehrlich腹水癌细胞作为刺激细胞,自身胸腺淋巴细胞作为效应细胞,按比例混合培养,对胸腺淋巴细胞“钻”肿瘤细胞的现象作形态观察。结果显示淋巴细胞主动向瘤细胞移动,并相互接触,最后“钻入”瘤细胞内使肿瘤细胞解体。其“钻”瘤指数及电镜观察将另文报道。     

负性刺激分子PD-L对T细胞介导小鼠L929肿瘤细胞免疫效应的影响

目的：探讨负性刺激分子在肿瘤细胞逃避免疫效应中的作用.方法：以L929细胞为靶细胞,体内致敏C57BL/6小鼠,注入PD-L1、PD-L2抗体阻断,并设立未致敏对照组.分离小鼠脾细胞,体外采用3H-TdR掺入法、荧光标记双染色FCM以及PI染色FCM法分别检测淋巴细胞增殖反应、活化诱导的细胞凋亡以及脾细胞及其培养上清对肿瘤细胞的杀伤效应.结果：L929细胞表达PD-L1,而不表达PD-L2.体内与体外联合应用PD-L1抗体,能显著增强L929肿瘤细胞诱导的致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和特异性杀伤效应,并可抑制活化诱导的T细胞凋亡;PD-L1抗体亦可增加L929细胞诱导的未致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和促进其脾细胞培养上清对L929细胞的杀伤效应.结论：PD-L1抗体可通过阻断PD1/PDL途径促进初始T细胞和致敏T细胞介导的抗瘤效应.     

外周血树突状细胞的快速募集及其体外抗肿瘤免疫效应

目的：在外周血中快速募集树突状细胞（DC）,研究其诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对肿瘤细胞的体外杀伤效应.方法：B6小鼠尾静脉注射灭活的痤疮丙酸杆菌（P.acnes）,分选出外周血B220^-CD11c^＋细胞,以GM-CSF、IL-4及mTNF-α培养5～6天,检测其表型和混合淋巴细胞反应;对荷载肿瘤抗原的B220^-CD11c^＋细胞,测定其诱导T细胞对靶肿瘤细胞的杀伤效应.结果：注射P.acnes后小鼠外周血中出现了大量的B220^-CD11c^＋细胞,经诱导可成为成熟DC.当荷载肿瘤抗原后,可致敏CD3＋T细胞在与靶肿瘤细胞反应中产生高水平的INF-γ并特异性地杀伤肿瘤细胞.结论：注射P.acnes可以直接快速动员B220^-CD11c^＋ DC前体细胞进入小鼠外周血,这些DC前体细胞可诱导强烈的体外杀伤肿瘤效应.     

T细胞受体和自己、非己的识别

近年来,T 淋巴细胞对肿瘤细胞、病毒感染细胞的识别机理,已经很明确了。一、杀伤 T 细胞对靶细胞的识别机理杀伤 T 细胞损害靶细胞,是由于辨别主要组织相容性抗原中的 SD 抗原的差异所致。SD 抗原系用血清反应检出的同种异型抗原。杀伤 T 细胞损害肿瘤细胞和病毒感染细胞,也与 SD 抗原有关。即免疫细胞的 SD     

hTERT多表位肽致敏mDC诱导CTL对HLA-A24+肿瘤细胞的特异性杀伤作用

目的:研究人工合成人端粒酶逆转录酶(hTERT)多表位混合肽经髓样树突状细胞(mDC)提呈后,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HLA-A24+肿瘤细胞的免疫杀伤效应.方法:人工合成四分支的树状串联hTERT表位肽(MAPs)及其各单表位多肽.取HLA-A24+健康志愿者的外周血,用免疫磁珠分选并培养mDC.用尼龙毛柱纯化T淋巴细胞并培养.以各表位肽致敏mDC后,诱导特异性CTL增殖,并以表达hTERT且以HLA-A24+肿瘤细胞株SMMC-7721及HLA-A24-肿瘤细胞株SKOV3为靶细胞行杀伤实验.用ELISA法检测不同时间点培养基上清液中IL-12、TNF-α的分泌量;用流式细胞术检测CTL对肿瘤细胞的杀伤效应.结果:以源于hTERT的T淋巴细胞表位I540(ILAKFLHWL)、V461(VYGFVRACL)及L766(LTDLQPYMRQFVAHL)合成4分支MAPs多肽及各单表位混合多肽.以人工合成的hTERT 多表位混合肽致敏mDC后,能刺激CTL增殖,并可诱导对HLA-A24+肿瘤细胞株SMMC-7721的特异性杀伤作用,且MAPs多肽较单表位混合多肽的致敏效果更具显著性(P＜0.05).结论:以人工合成的hTERT多表位混合肽致敏mDC 能激活同源淋巴细胞(CTL),可特异性杀伤HLA-A2A+的肿瘤细胞,在肿瘤免疫治疗中具有重要的意义.     

不同大鼠胶质瘤抗原致敏的DC体外诱导CTL活性的研究

目的: 比较大鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells, DC)体外经由大鼠C6胶质瘤细胞由不同方式制备的不同抗原致敏后,对特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)的诱导作用。方法: 自大鼠骨髓分离DC前体细胞,经重组大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)+白细胞介素4(rrIL-4)诱导培养、扩增;由C6胶质瘤细胞经由反复冻融、煮沸灭活及超声破碎细胞抽提其总蛋白的方法制备各种不同抗原致敏DC,致敏的DC与T淋巴细胞进行共培养诱导CTL;以ELISA法检测CTL诱导过程中淋巴细胞趋化因子(lymphocyte chemoattractant factor)及细胞因子IFN-γ分泌水平:以 -TdR掺入法检测DC诱导T细胞增殖及其特异性CTL杀伤活性。 结果: 体外应用煮沸灭活瘤细胞制备的肿瘤抗原致敏DC,能诱导更强的刺激T细胞增殖的能力、并且可以诱导杀伤活性更强的CTL。结论: 应用煮沸灭活的瘤细胞制备瘤抗原负载DC获得瘤苗可获得更强的抗肿瘤保护作用。     

CD80分子共刺激T细胞联合苯乙酸钠抗肿瘤的实验研究

目的:研究分化诱导剂苯乙酸钠处理肝癌细胞后,其对CD80(B7-1)分子活化的T细胞杀伤敏感性的变化。方法:将CD80共刺激的人T淋巴细胞与苯乙酸钠处理的肝癌细胞共同培养,用噻唑蓝法(MTT)检测T细胞粘附肿瘤细胞和杀伤肿瘤细胞活性,取上清测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果:苯乙酸钠处理肝癌细胞BEL-7402和SMMC-7721后,T细胞对其杀伤敏感性明显增加(P＜0.01),明显增加T细胞与肿瘤细胞之间的粘附性(P＜0.05)和T细胞产生TNF-α的能力(P＜0.05)。结论:苯乙酸钠处理肝癌细胞能增加T细胞对其杀伤活性。     

发现天然“抗癌”细胞

在对机体“免疫监视”的细胞研究中,免疫学家已经发现了多种多样的淋巴样细胞,分别具有不同的功能。在培养条件适宜的情况下,若干类型的细胞能杀伤其它类型的细胞,包括肿瘤细胞。这些细胞包括一个 T 淋巴细胞亚群和“天然的”杀伤细胞,之所以称为“天然杀伤细胞”是因为无需激活或致敏即可从血液或淋巴器官中分离出来,有活性及细胞毒性作用。     

干扰素和人的自发胞毒现象

IF 有抑制病毒复制、抑制细胞增殖、调节免疫反应、抗肿瘤等作用。本文报告,用以治疗人体肿瘤的那批人白细胞干扰素制品,能增强正常人非致敏淋巴细胞体外杀伤同种异体肿瘤细胞的胞毒作用。所用的靶细胞系为:从 Burkitt 淋巴瘤来的Raji 细胞,从人羊水细胞来的 U 细胞,从骨肉瘤来的393T 细胞及2T 细胞,从人肝来的张细胞。用[~3H]胸苷法测定 DNA 的合成。用微池法及(~51)Cr 释出法测定胞毒作用。测定的结果是:1.IF 及正常人淋巴细胞分别能抑制 Raji 细胞的 DNA 合成,但二者同时使用效果较为明显。这种协同作用可能是由于 IF 对淋巴     

腺病毒诱导人淋巴细胞的细胞毒作用的实验研究

以腺病毒感染的Hela细胞作为靶细胞,以腺病毒致敏的长期培养的人淋巴细胞作为效应细胞,进行了淋巴细胞介导的细胞毒实验研究。首次得出以下结论:1.腺病毒可诱导产生特异性人杀伤性T淋巴细胞,对感染腺病毒的宿主细胞有明显杀伤作用,显示出明显损伤作用的时间是在效应细胞与靶细胞按触后10小时左右。此结果为腺病毒感染的免疫损伤假说首次提供了直接证据。2.腺病毒致敏的人杀伤性T淋巴细胞不产生型间的细胞毒交叉反应,其作用具有型特异性。3.效应细胞与靶细胞接触后4小时,出现轻度靶细胞死亡现象,这种细胞毒作用是非特异性的,很可能是NK细胞或LAK细胞介导的细胞毒作用所致。     

肿瘤抗原联合CD40L致敏树突状细胞诱导CTLs杀伤K562细胞的实验研究

目的：以健康人外周血单核细胞为前体细胞，体外诱导为树突状细胞（DCs），负载K562细胞冻融抗原，并联合CD40L诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）对K562细胞的杀伤作用。方法:密度梯度离心法、贴壁法分离健康人外周血单核细胞，应用rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α等细胞因子诱导扩增，培养DCs，用K562细胞冻融抗原联合rhsCD40L致敏DCs。实验分4组：K562细胞冻融抗原致敏DCs为实验组A，联合CD40L致敏DCs为实验组B，未致敏DCs为对照组A，单核细胞+异体淋巴细胞组为对照组B，观察CTLs对K562细胞的杀伤效应。结果:培养出具有典型特征的DCs，表达CD40最高达96%、CD86达97%、CD80为77%、CD1a为 69%，体外能诱导强烈的同种异体混合淋巴细胞增殖反应。在效靶比为 20∶1 时，实验组A对K562细胞的杀伤率为71.3%，实验组B为86.9%，对照组A为37.6%，对照组B为21.1%。实验组均显示高水平杀伤率，与对照组比较差异显著（P＜0.05），实验组B加CD40L杀伤率高于实验组A（P＜0.05） 。结论：K562细胞冻融抗原冲击致敏DCs能有效诱导T细胞特异性抗白血病作用，联合CD40L能增强其CTL的杀伤作用。     

自身骨髓瘤抗原致敏树突细胞介导特异性CTL反应的研究

目的：研究多发性骨髓瘤(MM)患者肿瘤冻融物致敏的树突细胞(DC)能否诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应。方法：用MM患者骨髓CD34^ 细胞诱生DC。将MM患者骨髓瘤冻融物冲击致敏DC。MTT法检测骨髓瘤抗原致敏及非致敏DC诱导的自身T细胞对不同靶细胞(患者骨髓瘤细胞、K562细胞)的杀伤率。结果：骨髓瘤冻融物致敏DC诱导的自身T细胞对患者骨髓瘤细胞的杀伤远大于对K562细胞的杀伤。结论：患者骨髓瘤冻融物致敏的DC能有效诱导自身T细胞特异性抗瘤免疫。     

BsAb HER-2×CD3对过度表达HER-2乳腺癌细胞的细胞毒作用

目的 :研究应用抗HER 2抗原和CD3抗原的双向基因工程抗体BsAbHER 2×CD3介导T淋巴细胞对过度表达HER 2乳腺癌细胞的细胞毒作用。方法 :以过度表达HER 2的乳腺癌细胞株SK BR 3为靶细胞 ,T淋巴细胞为效应细胞 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法测定BsAbHER 2×CD3对靶细胞、效应细胞的抑制作用及其介导的效应细胞对靶细胞的杀伤作用。结果 :BsAbHER 2×CD3具有MAbHER 2和MAbCD3的双重特性 ,既能抑制SK BR 3细胞生长 ,又可促进正常人外周血T淋巴细胞增殖。BsAbHER 2×CD3介导T淋巴细胞对靶细胞产生显著的细胞毒作用 ,明显强于MAbHER 2对靶细胞的作用 ,E∶T =2 0∶1为最佳效靶比。结论 :BsAbHER 2×CD3 ,既可以与HER 2过度表达的肿瘤细胞特异性结合 ,又可以介导T淋巴细胞对肿瘤细胞产生特异性杀伤作用 ,具有明显的抗肿瘤作用     

小鼠胸腺T淋巴细胞“钻入”自身艾氏腹水癌细胞的电镜观察

<正> 机体内T细胞被致敏后,具有杀伤恶性肿瘤细胞的作用,在体内外均可见T细胞“钻入”瘤细胞。这一奇特的生物学现象可能是T细胞或其某一亚群的自然本能。它对肿瘤的发生、发展能产生一定的影响,“钻瘤”作用     

淋巴细胞亚群与肿瘤免疫的初探

应用淋巴细胞单克隆抗体分离主要的淋巴细胞亚群,用间接免疫荧光法测定了癌病人外周血CD_4~+细胞的数量,显著少于正常人。分离了CD_4~+和CD_4~-细胞,分别用PHA激活及~3H-TdR掺入反映其功能变化,发现CD_4~+和CD_4~-细胞的掺入活性均比正常人显著降低。观察了正常人NK、CD_4~+、CD_8~+和B细胞对K_(562)肿瘤细胞的协同杀伤活性,以NK+CD_4~+细胞的活性最高。本文提示癌病人的CD_4~+细胞数量和功能下降,正常人CD_4~+细胞在协同杀伤肿瘤细胞中具有重要作用,说明CD_4~+细胞在肿瘤免疫中的重要意义。     

吸烟者外周血不同T淋巴细胞亚群在体外扩增中的异常增殖及功能研究

目的检测吸烟对外周血T淋巴细胞体外扩增培养过程中免疫杀伤细胞和调节性T细胞增殖和功能的不同影响。方法选择平均年龄30岁的男性吸烟者27例与不吸烟男性健康对照组16例,采用密度梯度离心法从外周血中分离淋巴细胞,添加抗CD3和抗CD28抗体,以及IL-2和IFN-γ等多种细胞因子扩增培养15 d,计算细胞的增殖率,并利用流式细胞术检测扩增后各组淋巴细胞中免疫杀伤细胞(CD3~+CD8~+细胞、CD3~+CD56~+细胞)以及调节性T细胞(CD4~+CD25~+细胞)的比率;CCK8法检测扩增后的免疫杀伤细胞对HeLa细胞的杀伤力,PCR方法检测扩增后淋巴细胞部分功能相关基因的表达。结果吸烟者外周血淋巴细胞增殖能力减弱,且免疫杀伤细胞所占比例低,调节性T细胞所占比例高;吸烟者细胞免疫杀瘤细胞的杀伤力明显低于不吸烟对照组,吸烟组淋巴细胞表达的TNF-α、颗粒酶、穿孔素和IFN-γ等均有不同程度降低,其中颗粒酶和颗粒溶解素下调较为明显;但吸烟组TGF-β1的表达量显著上调,约为对照组的7倍。结论吸烟导致扩增后的外周血淋巴细胞中免疫杀伤细胞所占比例减少,调节性T细胞比例增加,吸烟组TGF-β1的表达增加进一步抑制了免疫杀伤细胞的活化和增殖。     

氩氦刀冷冻处理的肺癌细胞增强树突状细胞诱导抗肿瘤效应

探讨氩氦刀冷冻处理的肺癌细胞致敏树突状细胞（DCs）后,激活T淋巴细胞的抗肿瘤效应。取肺癌细胞系NCI-H446经氩氦刀处理制备肿瘤粗抗原,在骨髓来源DCs的体外培养过程中,加入上述肿瘤粗抗原,观察细胞毒T淋巴细胞对NCI-H446的杀伤及诱导细胞凋亡的效应。结果表明,肺癌细胞经氩氦刀处理后可致敏DCs,并可诱导细胞毒T淋巴细胞对NCI-H446的杀伤效应,靶细胞凋亡增加。氩氦刀处理的肺癌细胞致敏DCs后,可增强DCs诱导CTLs的抗肿瘤效应（凋亡）。     

人癌胚抗原重组痘苗病毒转染树突状细胞体外诱导的抗肿瘤免疫

目的：研究人癌胚抗原重组痘苗病毒（rV-CEA)转染外周血树突状细胞（DC）后在外体诱导的抗CEA分泌性肿瘤免疫。方法：分离晚期结肠癌患者的外周血单核细胞，在体外用人重组粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白细胞介素4（IL－4）培养成DC，再用rV-CEA转染DC后激发自体T细胞，观察其体外激发自体T细胞的增殖能力及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对自体CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性，并与野生型痘苗病毒（W－VV）及无病毒转染的DC所激发的T细胞进行比较。结果：经rV-CEA转染的DC能显著刺激自体T细胞的增殖，其激活的T细胞对CEA分泌性自体肿瘤细胞具有特异性杀伤作用。结论：rV-CEA转染的DC可以诱导体CEA分泌性肿瘤免疫。     

OY-TES-1诱导的树突状细胞对T淋巴细胞的增殖活化作用

目的通过癌-睾丸抗原OY-TES-1致敏树突状细胞(DC),研究其对T淋巴细胞的增殖活化作用。方法体外诱导培养人外周血DC,观察其细胞形态并经流式细胞仪进行表型鉴定;分别用OY-TES-1融合蛋白(OY-MBP)、麦芽糖结合蛋白(MBP)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)致敏DC,与T淋巴细胞共同培养。CCK-8法检测不同蛋白致敏DC后T淋巴细胞的增殖,ELISA检测致敏DC与T淋巴细胞共同培养后上清液IFN-γ的含量。结果诱导出高表达HLA-DR、CD86、CD83和CD80并具有典型细胞特征的DC。经不同蛋白致敏的DC均能促进T淋巴细胞的增殖活化,其中OY-MBP致敏的DC促进T淋巴细胞增殖的能力明显强于其他各组(P<0.05),IFN-γ分泌量也明显高于其他各组(P<0.05)。结论 DC在体外经OY-TES-1融合蛋白致敏后,可显著促进T淋巴细胞的增殖活化。     

人黑色素瘤抗原-3冲击的树突状细胞诱导抗肿瘤免疫应答

目的:观察经MAGE-3蛋白抗原冲击的树突状细胞在体外诱导抗肿瘤免疫应答的能力。方法:用粒-巨噬细胞集落刺激因子和白介素-4从人外周血分化、诱导树突状细胞,经MAGE-3蛋白冲击后,与T淋巴细胞共培养7d,收集T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验。结果:与MAGE-3冲击后的树突状细胞共培养的T淋巴细胞在体外能有效地杀伤MAGE-3阳性的靶细胞。结论:经MAGE-3蛋白抗原冲击的树突状细胞,在体外能有效提呈抗原,激活抗原特异性CTL,诱导特异性抗肿瘤免疫应答。