慢性氟中毒大鼠骨组织中G蛋白的表达

目的观察慢性氟中毒大鼠骨组织中激动型G蛋白(Gs)和抑制型G蛋白(Gi)含量的变化。方法将48只断乳2周的Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(自来水)组和50、150、250 mg/L NaF染毒组,每组12只,雌雄各半。采用自由饮用的方式进行染毒,连续染毒6个月。检测大鼠尿氟、骨氟含量及氟斑牙发生率以及骨组织中Gs和Gi的水平。结果与对照组比较,各剂量NaF染毒组大鼠骨氟含量及雄性大鼠尿氟含量以及150、250 mg/L NaF染毒组雌性大鼠尿氟含量均较高,各剂量NaF染毒组大鼠氟斑牙的检出率也均较高,仅150 mg/L NaF染毒组雌性大鼠骨组织中Gs含量以及雄性大鼠骨组织中Gs、Gi含量均较高,差异有统计学意义(P0.05);各剂量NaF染毒组大鼠骨组织中Gi/Gs值无明显变化。随着NaF染毒剂量的升高,大鼠的尿氟、骨氟含量均呈上升趋势;而骨组织中Gs、Gi含量均呈先升高后下降的趋势。对照组大鼠无氟斑牙发生,而各剂量NaF染毒组大鼠氟斑牙的检出率均为100%。结论 G蛋白在氟骨症的形成过程中可能发挥一定的促进作用。     

氟对雄性大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响的研究

目的探讨氟对大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响。方法将30只4～5周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低剂量组、高剂量组。分别按0、10和20mg/kg染毒剂量隔日灌胃氟化钠(NaF)染毒39天,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,用放射免疫法测定大鼠血清睾酮含量,用免疫组化(ICH)检测睾丸中Fas蛋白表达情况,同时镜检成熟精子质量。结果各染氟组大鼠睾丸氟含量均高于对照组(P0.05)且随染毒剂量的增加而逐渐升高;各染氟组大鼠血清睾酮含量低于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,睾酮含量逐渐降低;各染氟组大鼠生精细胞Fas蛋白阳性表达率高于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,Fas蛋白阳性表达率逐渐升高;各染毒组大鼠精子数量和精子活动率低于对照组(P0.05);精子畸形率高于对照组(P0.05)。结论染氟雄性大鼠血清睾酮水平降低,激活了生精细胞Fas/FasL系统,从而导致生精细胞损伤。     

亚慢性氟中毒对大鼠骨组织Runx2 mRNA表达的影响

目的观察亚慢性氟中毒对大鼠骨组织中转录因子Runx2 mRNA表达的影响,探讨Runx2在氟骨症发生中的可能作用。方法 40只Wistar大鼠按体重随机分成4组,染氟组大鼠饮用含氟50、100、150 mg/L的自来水,对照组大鼠饮用自来水;3个月后测定大鼠血清及骨组织氟含量,并采用SYBR Green Real-time RT-PCR法检测骨组织中Runx2 mRNA表达情况,同时观察骨组织病理学改变。结果 HE染色显示染氟组大鼠呈现骨皮质增厚、骨小梁增多等骨硬化表现;染氟组大鼠骨组织中Runx2 mRNA表达显著高于对照组,且随染毒剂量升高,表达亦逐渐升高。结论过量的氟可能通过增加骨组织Runx2基因表达水平来促进间充质干细胞向成骨细胞系分化,使骨形成增加。     

染氟大鼠血清雌二醇水平与生精细胞端粒酶逆转录酶表达关系的研究

目的了解氟中毒大鼠雌激素水平与生精细胞端粒酶表达的关系。方法将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量染毒组、高剂量染毒组,分别按0、10和20mg/kg体重的染毒剂量隔日腹腔注射氟化钠(NaF)溶液39天后,用放射免疫法测定大鼠血清中雌二醇含量,用原位杂交法检测端粒酶逆转录酶(TERT)表达情况。同时镜检成熟精子质量和睾丸组织病理学改变。结果染毒各组大鼠血清雌二醇含量低于对照组(P<0·05);且随着染毒剂量的增加,雌二醇含量逐渐降低。染毒各组大鼠生精细胞TERT阳性表达率分别低于对照组(P<0·05);且随着染毒剂量的增加,TERT阳性表达率逐渐降低。各染毒组大鼠精子数量和精子存活率低于对照组(P<0·05);精子畸形率高于对照组(P<0·05);随着染毒剂量的增加,精子数量、精子存活率降低(P<0·05),精子畸形率升高(P<0·05)。各染毒组大鼠血清雌二醇含量与生精细胞TERT表达率均呈正相关,低剂量染毒组r=0·941,P<0·01;高剂量染毒组r=0·929,P<0·01。结论NaF很可能是通过雌激素/雌激素受体-端粒酶逆转录酶-精子途径对生殖系统造成损害的,各染毒组大鼠血清雌激素含量与生精细胞TERT表达率呈显著正相关。     

慢性氟中毒大鼠骨组织中AC-cAMP-PKA信号转导通路的表达

目的观察慢性氟中毒大鼠骨组织中AC、cAMP、PKA的表达。方法将48只断乳2周的Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别为对照组(自来水)和低剂量组(含50 mg/L NaF自来水)、中剂量组(含150mg/L NaF自来水)、高剂量组(含250 mg/L NaF自来水),每组12只,雌雄各半。采用自由饮用的方式进行染毒,连续染毒6个月。检测大鼠尿氟、骨氟浓度及氟斑牙发生率以及骨组织中AC、cAMP、PKA的水平。结果与对照组比较,各剂量染毒组大鼠尿氟、牙氟及骨氟浓度均较高(P<0.05),斑牙检出率随染毒时间延长而增高,随染毒剂量的增加氟斑牙程度越严重;而各组骨组织中AC、cAMP、PKA含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论在本次实验中未观察到氟化钠引起大鼠骨组织AC、cAMP含量的改变。     

煤烘高氟玉米染毒大鼠的血清TRACP-5b表达变化

[目的]观察煤烘高氟玉米染毒大鼠的血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)的表达变化,探讨骨吸收在氟骨症发生机制中的作用. [方法]将断乳4周的SD大鼠120只随机分为4组,对照组给予商品化饲料,3个实验组在对照饲料基础上给予不同比例煤烘高氟玉米,低、中、高剂量染毒组饲料含氟量分别为9.56、15.89及23.00 mg/kg.于连续染毒至第30、90、180天时,检测大鼠骨氟、尿氟含量及氟斑牙发生率、股骨病理组织学积分,ELISA法检测血清TRACP-5b水平. [结果] (1)各剂量组骨氟、尿氟、氟斑牙发生率及股骨病理学积分均随着染毒剂量的增加而升高(P＜0.05).染毒至第30、90、180天时,各剂量组的骨氟、尿氟均高于对照组(P＜0.05),且剂量较高的组别的尿氟、骨氟高于剂量较低的组别(P＜0.05).染毒至第90天和180天时,各剂量组氟斑牙发生率高于对照组(P＜0.05)；中、高剂量组股骨病理切片积分高于低剂量组和对照组(P＜0.05).(2)各组染毒至180天时,血清TRACP-5b均高于同剂量组90天及30天时的水平(P＜0.05).在第30天及90天时,各组血清TRACP-5b差异无统计学意义；染毒至180天时,高剂量组TRACP-5b高于对照组和中剂量组(P＜0.05),其余各组间差异无统计学意义. [结论]摄入煤烘高氟玉米剂量较高,且摄入时间较长时,可能引起血清TRACP-5b表达升高.     

氟中毒大鼠体内氟的蓄积及钙的拮抗作用

目的研究过量氟在大鼠体内的蓄积以及钙的拮抗作用。方法将80只初断乳清洁级SD大鼠随机分为8组,分别为对照(蒸馏水)组、单独加钙(100 mg/kg碳酸钙)组和低剂量(2.1 mg/kg Na F)、中剂量(8.5 mg/kg Na F)、高剂量(34 mg/kg Na F)单独染氟组及低剂量(2.1 mg/kg Na F+25 mg/kg碳酸钙)、中剂量(8.5 mg/kg Na F+50 mg/kg碳酸钙)、高剂量(34 mg/kg Na F+100 mg/kg碳酸钙)钙氟联合染毒组,每组10只,雌雄各半。采用灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒90 d。每15 d测定24 h尿氟浓度,染毒结束后测定骨氟含量。结果与对照组比较,低、中、高剂量单独染氟组和中、高剂量钙氟联合染毒组大鼠骨氟含量升高,低、中、高剂量单独染氟组和低、中、高剂量钙氟联合染毒组大鼠尿氟浓度升高,差异有统计学意义(P0.05)。随着氟暴露剂量的升高,大鼠的骨氟含量和尿氟浓度均呈上升趋势。与相同剂量单独染氟组比较,钙氟联合染毒组大鼠骨氟含量有所降低,差异多有统计学意义(P0.05);而不同性别大鼠在不同钙氟联合染毒组、不同时间点下,钙对尿氟浓度的拮抗作用程度不尽相同。结论适量的钙可拮抗氟在大鼠体内的蓄积作用。     

Wnt信号通路在氟中毒肾脏中表达及其意义

目的观察Wnt/β-catenin信号通路及其相关信号分子蛋白及mRNA表达水平在实验性氟中毒大鼠肾组织中的变化, 探讨氟中毒发病机制。方法选择健康成年SD大鼠36 只, 雌雄各半, 随机分为:对照组(饮水含氟量<1 mg/L), 低、高氟组(饮水加氟量5、50 mg/L), 每组12 只, 观察大鼠氟斑牙发生情况, 测定尿氟、骨氟含量及肾功能变化;光镜观察肾组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测肾组织中Wnt4、β-连环蛋白(β-catenin)、E-粘钙蛋白(E-cadherin)蛋白及mRNA表达。结果低氟组大鼠氟斑牙检出率为75%(9/12), 高氟组为91.7%(11/12), 与对照组比较, 染氟组大鼠尿氟、骨氟含量随染氟浓度增加而逐渐升高, 差异有统计学意义(P<0.05);染氟组大鼠血清肌酐及尿素氮明显高于对照组(均P<0.05);光镜观察染氟组大鼠肾小管上皮细胞明显水肿、渗出、坏死, 细胞间界限不清, 且随着染氟浓度增高, 损伤加重;低、高氟组大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin、E-cadherin蛋白表达分别为[(7.78±1.17)、(6.66±0.59)、(3.23±0.82)]和[(17.46±3.18)、(12.46±0.89)、(1.23±0.35)], mRNA表达分别为[(3.01±0.81)、(1.86±0.43)、(0.276±0.12)]和[(5.79±0.86)、(5.84±1.19)、(0.12±0.46)], 与对照组比较, 氟中毒组大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin蛋白和mRNA表达升高, 而E-cadherin蛋白及mRNA表达降低。结论慢性氟中毒时, 氟通过刺激Wnt信号通路中Wnt4、β-catenin过表达、E-cadherin低表达, 导致肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)。     

饮水型SD大鼠氟斑牙模型的研制

目的建立饮水型大鼠氟斑牙模型,为深入研究氟性骨损伤发病机制提供科学依据。方法采用饮水加氟的方法复制大鼠氟斑牙模型,染氟剂量采用日测体重然后按体重(mg/kg)给予及尿氟、血氟监测的方法进行,尿氟、血氟采用微量氟法测定,血清中碱性磷酸酶(ALP)采用全自动生化分析仪测定,氟斑牙采用数码相机拍照,按照氟斑牙观测标准进行诊断及分度。结果 90 d末,高、中剂量组大鼠均出现明显氟斑牙,尿氟、血氟及血ALP含量与对照组相比均明显升高(P<0.05)。染氟剂量与尿氟水平显著相关(r=0.924,P=0.038);染氟剂量与血氟水平呈显著相关(r=0.948,P=0.026);高、中剂量组大鼠氟负荷水平明显高于对照组;氟斑牙发生率与染氟剂量呈正相关(r=0.983,P=0.017)。结论染氟剂量与氟斑牙的发生存在明显的剂量-反应关系:16 mg/kg和32 mg/kg的染氟剂量,14 d即可发生Ⅰ度氟斑牙,35 d即可发生典型氟斑牙。     

染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系

目的探讨染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为6组,即对照28d组、低剂量染毒28d组、高剂量染毒28d组、对照38d组、低剂量染毒38d组和高剂量染毒38d组。通过腹腔注射NaF溶液的方法建立氟中毒模型,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,放射免疫的方法检测血清雌二醇水平,采用TUNEL方法检测凋亡的生精细胞。结果随着染毒剂量加大和时间延长,染氟大鼠血清雌二醇水平显著下降(P<005),睾丸氟含量显著升高(P<005),生精细胞凋亡率显著升高(P<005),且血清雌二醇水平与睾丸氟含量和生精细胞凋亡率均呈负相关(P<005)。结论氟在一定剂量和作用时间内可致血清雌二醇水平紊乱,是导致生精细胞凋亡的重要原因之一。     

氟化钠对大鼠骨组织碱性磷酸酶和骨形态发生蛋白-2 mRNA表达的影响

目的探讨氟化钠(NaF)对大鼠骨组织碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)mRNA表达的影响。方法将96只8周龄SD雄性大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(自来水)组和50、150、250 mg/L NaF染毒组,每组24只。采用自由饮水进行染毒,连续染毒24周。分别于染毒第8、16、24周时,每组选择8只大鼠,检测尿氟、血氟水平和氟斑牙及ALP、BMP-2 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,不同浓度NaF染毒不同时间大鼠的尿氟、血氟浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05);与第8周相比,不同浓度NaF染毒第16、24周大鼠的尿氟、血氟浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着NaF染毒时间的延长和染毒浓度的升高,大鼠尿氟和血氟的浓度均呈上升趋势。与对照组相比,不同浓度NaF染毒不同时间大鼠的氟斑牙检出率均较高,除50 mg/L NaF染毒第8周外,差异均有统计学意义(P0.05);随着染毒浓度的升高和染毒时间的延长,大鼠氟斑牙的检出率均呈上升趋势,损伤程度趋于严重。与对照组相比,不同浓度NaF染毒不同时间大鼠骨组织ALP m RNA的表达水平均较高,除50 mg/L NaF染毒第24周外,差异均有统计学意义(P0.05);随着染毒浓度的升高,大鼠骨组织ALP m RNA的表达水平均呈上升趋势;与第8周比较,50、150 mg/L NaF染毒第16、24周大鼠骨组织ALP m RNA的表达水平均较低,而250 mg/L NaF染毒第16、24周大鼠骨组织ALP mRNA的表达水平均高,差异均有统计学意义(P0.05);随着染毒时间的延长,50、150 mg/L NaF染毒大鼠骨组织ALP mRNA的表达水平均呈下降趋势,而250 mg/L NaF染毒大鼠骨组织ALP mRNA的表达水平呈上升趋势。与对照组比较,除50、150 mg/L NaF染毒第24周大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平较低(P0.05)外,不同浓度NaF染毒不同时间大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);随着染毒浓度的升高,染毒第8、16周大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平均呈上升趋势,而染毒第24周大鼠骨组织BMP-2 mRNA的表达水平呈先下降后升高的趋势;与第8周比较,50、150 mg/L NaF染毒第16、24周大鼠骨组织BMP-2 mRNA的表达水平均较低,而250 mg/L NaF染毒第16、24周大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平均高,差异均有统计学意义(P0.05);随着染毒时间的延长,50、150 mg/L NaF染毒大鼠骨组织BMP-2 m RNA的表达水平均呈下降趋势,而250 mg/L NaF染毒大鼠骨组织BMP-2 mRNA的表达水平呈先上升后下降的趋势。结论摄入过量的氟可促进大鼠骨组织ALP、BMP-2 mRNA的表达;而随着氟摄入时间的延长,大鼠骨组织ALP、BMP-2 m RNA的表达均不同程度地下降。     

慢性氟砷联合暴露对大鼠骨骼Runx2及其下游相关因子的影响

目的 研究慢性氟砷联合暴露对大鼠骨骼代谢Runx2及其下游相关因子的影响.方法 将54只8周龄清洁级SD大鼠按析因设计方法随机分成9组,每组6只,雌雄各半,分为对照组、低氟组、高氟组、低砷组、高砷组、低氟低砷组、低氟高砷组、高氟低砷组及高氟高砷组.使用氟化钠(NaF,低氟组5mg/kg、高氟组20 mg/kg)和亚砷酸钠(NaAsO2,低砷组2.5 mg/kg、高砷组10 mg/kg)灌胃染毒6个月;测定大鼠骨骼中Runx2、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、成骨相关转录因子(Osterix)核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)蛋白浓度.结果 对照组、低砷组、高砷组无氟斑牙出现,低氟组、高氟组氟斑牙比例(分别为5/6、6/6)与对照组(O)相比,差异均有统计学意义(x2=8.57、12.00,p＜0.05).骨氟含量随着氟染毒剂量的增加而升高,无氟染毒组[对照组、低砷组、高砷组的几何均数(最小值～最大值)分别为0.005(0.003 ～0.009)、0.006(0.003～0.021)、0.007(0.002～0.100)mg/g]、低氟组[低氟组、低氟低砷组、低氟高砷组分别为3.395(2.416 ～5.871)、3.809(1.471 ～7.799)、3.853(1.473～6.732)mg/g]、高氟组[高氟组、高氟低砷组、高氟高砷组分别为70.086(46.183～ 131.927)、69.925 (40.503 ～ 96.183)、67.950(52.622 ～ 89.487) mg/g]组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).骨砷含量随着砷染毒剂量的增加而升高,其中低砷组[低砷组、低氟低砷组、高氟低砷组分别为7.195(5.060 ～9.860)、6.518(2.960 ～ 12.130)、6.970(3.400 ～9.730)μg/g]、高砷组[高砷组、低氟高砷组、高氟高砷组分别为8.823 (5.760 ～ 10.840)、9.470(7.230～12.860)、8.321(2.420 ～17.540)μg/g]浓度均高于无砷染毒组[对照组、低氟组、高氟组分别为1.785(0.300～3.750)、2.226(1.410～3.980)、2.030(1.040 ～3.850) μg/g],差异有统计学意义(P＜0.05),而低砷组与高砷组骨砷含量差异无统计学意义(P＞0.05).氟与Runx2、MMP-9、Osterix、RANKL蛋白含量间呈正相关(氟染毒量与蛋白含量间相关系数分别为0.647、0.354、0.582和0.613),骨氟含量与蛋白含量间相关系数分别为0.559、0.387、0.487、0.525,P值均＜0.01,砷染毒剂量与Runx2呈负相关(相关系数为-0.527,P＜0.05),与MMP-9、RANKL、Osterix无相关关系(P＞0.05).氟砷联合染毒与Runx2、MMP-9、RANKL、Osterix蛋白含量具有交互效应(F值分别为3.88、15.66、2.92、6.42,P值均＜0.05).结论 氟砷联合暴露对大鼠骨骼代谢Runx2及其下游相关因子的交互作用表现为拮抗作用.     

氟诱发Runx2高表达对成纤维细胞成骨作用的影响

目的通过观察氟致大鼠皮肤成纤维细胞中核心结合因子(Runx2)浓度及碱性磷酸酶(ALP)活力的变化,探究氟对成纤维细胞成骨作用的影响。方法选取和培养大鼠皮肤成纤维细胞,分7个染氟组(染氟浓度分别为0.0001、0.001、0.01、0.1、1.0、10、20mg/L)和对照组,检测和分析染氟后不同时间(24、48、72、96h)各组培养液中Runx2浓度和ALP活力。结果 72h时0.001、0.1、1、10、20mg/L染氟浓度组及96h时所有染氟组Runx2的浓度较对照组均明显升高,差异有统计学意义(F=17.59,P<0.05;F=13.31,P<0.05)。72h时0.1、20mg/L浓度组及96h时0.001、0.1、10、20mg/L浓度组ALP活力较对照组明显升高,差异有统计学意义(F=30.05,P<0.05;F=27.59,P<0.05)。结论氟暴露致成纤维细胞中Runx2浓度升高,并且ALP活力增强。提示,氟可诱发成纤维细胞Runx2的高表达,以此促进成纤维细胞的成骨作用。     

妊娠期至成年期氟铝联合暴露对子代大鼠骨组织中miR-21及其血清中抗酒石酸酸性磷酸酶-5b水平的影响

目的了解妊娠期至成年期氟铝联合暴露对子代大鼠骨组织中miR-21及血清中抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)的影响。方法将36只健康成年清洁级SD孕鼠随机分为9组,分别为对照(自来水)组和氟化钠(60、240mg/L)、氯化铝(600、1 000 mg/L)染毒组及氟化钠+氯化铝联合染毒组,每组4只。采用自由饮水方式染毒,母鼠染毒从妊娠第0天至子代大鼠出生第21天(断乳);断乳后从每组随机选取8只子代大鼠(雌雄各半)延续同组剂量染毒至出生后第90天。采用氟离子选择电极法测定尿氟、骨氟,采用石墨炉原子吸收光谱法测定尿、骨中铝含量,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测骨组织中miR-21的表达水平。采用固相夹心ELISA法检测血清中抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)的含量。结果与对照组比较,除单独氯化铝染毒组和60 mg/L NaF+1 000 mg/L氯化铝染毒组外,其余染毒组仔鼠的尿氟浓度均升高(P0.05);除单独NaF染毒组和240 mg/L NaF+600 mg/L氯化铝染毒组外,其余染毒组仔鼠的尿铝浓度均升高(P0.05);除单独氯化铝染毒组和60 mg/L NaF+1 000 mg/L氯化铝染毒组外,其余染毒组仔鼠骨氟含量均升高;单独氯化铝染毒组和240 mg/L NaF+1 000 mg/L氯化铝染毒组仔鼠的骨铝含量均升高(P0.05)。尿氟浓度在各浓度NaF+氯化铝联合染毒组中均表现为拮抗作用(P0.05);尿铝浓度在60 mg/L NaF+1 000 mg/L氯化铝联合染毒组中均表现为协同作用,在其余各浓度NaF+氯化铝联合染毒组中均表现为拮抗作用(P0.05);骨氟含量在各浓度NaF+氯化铝联合染毒组中均表现为拮抗作用(P0.05);骨铝含量在各浓度NaF+氯化铝联合染毒组中未见交互作用(P0.05)。与对照组比较,240 mg/L NaF染毒组和60 mg/L NaF+1 000 mg/L氯化铝染毒组、240 mg/L NaF+1 000 mg/L氯化铝染毒组仔鼠血清中TRACP-5b的水平均降低(P0.05);60 mg/L NaF染毒组、1 000 mg/L氯化铝染毒组和60 mg/L NaF+600 mg/L氯化铝染毒组、240 mg/L NaF+600 mg/L氯化铝染毒组仔鼠骨组织中miR-21的表达水平均升高(P0.05)。氟铝联合染毒对血清中TRACP-5b水平的影响表现为拮抗作用。氟铝联合染毒对不同性别仔鼠骨组织中miR-21表达的影响均存在交互作用(P0.05);对不同性别仔鼠骨组织中miR-21表达的影响在60 mg/L NaF+600 mg/L氯化铝染毒组、240mg/L NaF+600 mg/L氯化铝染毒组中均表现为协同作用(P0.05),在其余联合染毒组中表现为拮抗作用(P0.05)。结论氟铝联合暴露可能通过升高骨组织中miR-21表达和降低血清中TRACP-5b水平,从而促进妊娠期至子代大鼠成年前仔鼠骨组织中破骨细胞的活性。     

燃煤型高氟玉米氟骨症早期大鼠血清骨钙素的变化

目的 研究燃煤型高氟玉米氟中毒骨病变早期血清骨钙素的变化.方法 选择SD大鼠,随机分6组（每组34只,雌雄各半）,设对照组（正常饲料,含氟9.37mg/kg）、低氟组（含20%病区玉米,含氟38.28mg/kg）、中氟营养组（含45%病区玉米加营养,含氟51.52 mg/kg）、中氟组（含45%病区玉米,含氟51.52 mg/kg）、高氟营养组（含75%病区玉米加营养,含氟69.33 mg/kg）、高氟组（含75%病区玉米,含氟69.33 mg/kg）.分2批（实验的第90天,高氟染毒组出现明显氟斑牙为第1批;实验的第130天,中氟染毒组出现明显氟斑牙为第2批）以股动脉放血法处死动物,检查氟斑牙,测定尿氟浓度、骨和肾氟含量,骨密度（BMD）,骨钙含量、尿钙浓度,血清骨钙素（BGP）浓度.结果 建成氟中毒动物模型.各氟染毒组均出现轻度和中度氟斑牙,对照组未见氟斑牙.各氟染毒组大鼠尿氟浓度随染毒时间的延长呈上升趋势.中氟组、高氟营养组和高氟组大鼠尿氟浓度高于对照组（P＜0.05或0.01）.各氟染毒组大鼠骨和肾氟含量随染毒剂量的增加呈上升趋势,一定氟染毒剂量下,营养组骨和肾氟含量低于非营养组.除第1批低氟组外,随着氟染毒剂量增加,两批各氟染毒组大鼠BMD较对照组升高（P＜0.05或0.01）.与对照组比较,随着氟染毒剂量增加,两批各氟染毒组大鼠骨钙含量上升,尿钙浓度下降.各氟染毒组大鼠血清BGP浓度呈上升趋势,氟染毒第90天时,高氟组高于对照组,有统计学意义（P＜0.01）;氟染毒第130天时,中、高氟染毒组高于对照组,有统计学意义（P＜0.01）,且高于第90天时的水平（P＜0.05或0.01）.结论 血清BGP是反映燃煤型高氟玉米氟中毒骨病变的一个早期指标.降低摄氟量及改善营养状况,可缓解氟中毒病情.     

Beclin-1、Bcl-2、Bax在慢性氟中毒大鼠肾脏中表达

目的 观察自噬基因Beclin-1、凋亡基因Bcl-2、Bax在慢性氟中毒大鼠肾脏中的表达变化,探讨Beclin-1、Bcl-2、Bax在氟中毒肾脏损害过程中的作用。方法 将SD大鼠24只随机分为3组,每组8只,对照组(饮用含氟量 < 0.5 mg/L自来水),低、高氟组(自来水含氟量分别为50、100 mg/L);饲养9个月后,观察大鼠氟斑牙发生情况;氟离子电极法测定尿氟、骨氟含量;显微镜下观察大鼠肾组织病理形态学变化;采用免疫组织化学方法检测大鼠肾组织中Beclin-1、Bcl-2、Bax表达量;用原位杂交法测定大鼠肾脏Beclin-1 mRNA含量。结果 低氟组大鼠氟斑牙检出率为75%,高氟组为100%;与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟和骨氟含量分别为[(10.09±0.88)、(18.09±0.89)mg/L和(5 500.84±1 093.47)、(7 477.94±1 315.88)μg /g]明显升高,差异有统计学意义(P < 0.05);染氟大鼠肾脏肾小管上皮细胞水肿、间质血管扩张充血,且随染氟剂量增加损伤改变逐渐加重;与对照组比较,低、高氟组大鼠肾组织中Beclin-1、Bax表达[分别为(168.90±8.68)、(146.32±10.02)和(153.74±10.56)、(134.29±9.85)]明显降低(均P < 0.05);与对照组比较,低、高氟组大鼠肾组织中Bcl-2表达[分别为(167.64±7.51)、(185.32±8.55)]明显升高(P < 0.05);与对照组比较,低、高氟组大鼠肾组织中Beclin-1 mRNA表达[分别为(166.94±13.21)、(146.11±17.66)]明显降低(P < 0.05)。结论 慢性氟中毒可诱导肾小管上皮细胞自噬和凋亡相关分子的异常表达,自噬和凋亡可能共同参与慢性氟中毒肾脏损伤过程。     

氟对大鼠肝组织caspase-3和caspase-9mRNA表达的影响

目的研究氟中毒大鼠肝组织中caspase-3、caspase-9 mRNA表达的变化。方法将48只健康清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照(去离子水)组和低(50 mg/L)、中(100 mg/L)、高剂量(200 mg/L)氟染毒组,每组12只。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒120 d。采用荧光定量PCR法检测肝组织中caspase-3、caspase-9 mRNA的表达水平。结果与对照组相比,高剂量氟染毒组caspase-3、caspase-9 mRNA的表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论过量氟从基因水平促进大鼠肝脏组织中caspase-9、caspase-3的表达。     

慢性氟中毒对大鼠肝脏Notch1、Hes1蛋白表达影响

目的 探讨慢性氟中毒对肝损害中Notch1、Hes1蛋白表达的影响。方法 36只SD大鼠按体重随机分为3组, 每组12只, 对照组饮用含氟量<1 mg/L自来水, 低、高氟组分别饮用含氟化钠5、50 mg/L的自来水, 饲养6个月后检测尿氟, 取股骨测定骨氟, 检测血清中肝功能指标;应用免疫组织化学和蛋白印记法检测肝脏组织中Notch1、Hes1及凋亡因子Bcl-2、Bax的蛋白表达;测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及脂质过氧化物(LPO)含量;原位末端转移酶标记法检查肝组织中凋亡细胞定位及数量。结果 与对照组比较, 低、高氟组大鼠尿氟、骨氟含量分别为[(1.89±0.12)、(2.19±0.17)mg/L与(2.10±0.16)、(2.21±0.10)mg/kg]明显升高, 差异有统计学意义(P<0.05), 低、高氟组大鼠肝组织中Notch1、Hes1蛋白表达量分别为[(0.55±0.32)、(0.71±0.28)与(0.74±0.92)、(0.88±0.29)]明显升高, 差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较, 染氟大鼠肝LPO含量逐渐升高, S0D、GSH-Px活性逐渐下降;与对照组比较, 低、高氟组Bcl-2蛋白表达[(0.94±0.24)、(0.71±0.22)]明显降低, Bax蛋白表达[(1.25±0.42)、(1.43±0.46)]显著升高, 差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较, 染氟大鼠肝细胞凋亡细胞数增多。结论 过量氟可引起肝脏氧化应激及肝细胞凋亡, Notch信号通路可能参与氟中毒引起肝脏损伤发病过程。     

牛磺酸锌对慢性氟接触大鼠海马的保护性研究

目的探讨牛磺酸锌(TZC)对慢性染氟大鼠海马损害的保护机制。方法Wistar大鼠30只,随机分为对照组、低氟组、高氟组、低氟补锌组、高氟补锌组,每组6只。自由饮纯净水(对照组),100mg/L(低氟组和低氟补锌组)的氟化钠(NaF)溶液,200mg/L(高氟组和高氟补锌组)的NaF溶液。5个月后,低氟补锌组、高氟补锌组分别隔日交替饮用各自浓度的NaF溶液及340mg/L的浓度TZC溶液,继续喂养1个月。后采用ABC免疫组化法观察大鼠海马一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的变化。结果与对照组比较,各实验组大鼠海马CA1区的nNOS阳性神经元数目均明显减少(P<0.01),且改变与染氟剂量的增加呈量-效关系(P<0.01);除低氟补锌组外,其他各组大鼠海马CA3区、DG区nNOS阳性神经元数目亦均比对照组明显减少(P<0.01);与染氟组比较,补锌组大鼠海马各区的nNOS阳性神经元数目均相应增多(P<0.01)。结论TZC对慢性染氟大鼠海马损害具有保护作用。