金黄色葡萄球菌肠毒素B的基因克隆与表达

目的 克隆葡萄球菌肠毒素B（SEB）基因,构建其原核表达载体,表达并纯化基因重组SEB,并对其进行活性研究。方法采用PCR技术从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增得到SEB基因,克隆到原核表达载体pET22b（＋）上,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,全自动测序仪测序。IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,用HiTrap^TM chelating HP柱纯化重组表达的SEB,通过ELISA实验检验重组SEB的抗原性。用脂多糖和放线菌素D致敏小鼠模型检测重组SEB的毒性。结果所克隆的SEB基因核苷酸序列与报道的序列完全相同。表达的SEB在SDS-PAGE图谱的位置与预期相符,得到了SDS-PAGE电泳纯的基因重组SEB。ELISA试验结果表明,纯化的重组SEB与抗野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应。小鼠致死性试验表明,重组SEB与野生型SEB具有相同的毒性。结论在大肠杆菌中成功克隆及表达了金黄色葡萄球菌肠毒素B,为进一步分析SEB分子中相关活性位点及研究SEB发病机制打下了基础。     

哮喘大鼠模型信号转导子和转录激活子6在气道上皮细胞表达增强

目的探讨哮喘大鼠肺组织中信号转导子和转录激活子6(STAT6)的活化规律及其意义。方法将SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,后者根据末次激发后处死时相不同分成0、3、8、24、72、120和144 h组。采用透射电镜、细胞计数、免疫组化和图像分析等,分别观察肺组织超微结构、支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)数量及STAT6蛋白表达。结果①哮喘组肺组织EOS炎性浸润较对照组明显增加;②哮喘组STAT6蛋白主要在气道上皮细胞表达;③3 h时STAT6即开始明显升高,24 h达到峰值,其后有所下降;④STAT6蛋白表达的变化与BALF中EOS绝对值及EOS%的动态变化均显著正相关(P<0.01)。结论哮喘大鼠气道上皮细胞存在STAT6的持续活化及过度表达,并与EOS的生成密切相关,提示STAT6的活化在哮喘气道炎症调控中起重要作用。     

Staphylococcal enterotoxin B up-regulates interleukin-2 receptor β chain expression on tonsillar B cells

The superantigen staphylococcal enterotoxin B (SEB) selectively up-regulates the interleukin-2 receptor (IL-2R) β chain (p70) without up-regulating the IL-2R a chain (CD25) on a human tonsillar B cell population depleted of T cells. This action of SEB, probably mediated by binding to major histocompatibility complex class II, renders B cells sensitive to T cell-derived IL-2 and is sufficient for induction of vigorous DNA synthesis with low concentrations of IL-2. This explains one of the mechanisms by which bacterial superantigens activate large numbers of B cells and may reflect a similar mechanism operative in cognate helper T cell/B cell interactions.