全脑缺血再灌注后磷酸化ERK蛋白的表达及应用PD98059后对其表达的影响

目的：全脑缺血再灌注后磷酸化ERK（p-ERK）蛋白的表达与细胞凋亡的关系及应用ERK通路抑制剂PD98059后对其表达的影响，以探讨ERK通路在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：健康雄性SD大鼠90只，随机分为三组：缺血再灌注组（IR，n=30）：采用4-VO法建立全脑缺血再灌注模型，6min缺血后给予再灌注。假手术组（PO，n=30）：只暴露血管而不夹闭，PD98059组（PD，n=30）：缺血前20min经尾静脉注入PD98059，另两组予以生理盐水行干预。各组动物于再灌注后2h、6h、12h、24h、48h、72h处死，将脑组织切片进行HE染色、免疫组化染色和TUNEL检测。结果：HE染色结果PD组变化显著，细胞破坏更严重，于各时间点细胞形态变化较IR组更为明显；IR组p-ERK在海马CA1区锥体细胞未见表达，CA3区于再灌注后2h有弱表达，于再灌注6h达高峰后逐渐下降，至再灌注后48h未见表达，PD组表达弱于IR组（P〈0．05）；IR组中CA1区2h即有散在的凋亡细胞，24h～48h达峰值，PD组各时点于各区凋亡细胞计数多于IR组（P〈0．05）。结论：ERK信号转导通路在脑缺血再灌注中参与了缺血后神经元的保护，发挥抗凋亡作用。     

ERK抑制剂PD98059对SD大鼠全脑缺血再灌注后海马Caspase-3表达的影响

目的 研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)抑制剂对大鼠全脑缺血再灌注后海马caspase-3表达的影响,以探讨ERK在全脑缺血再灌注损伤中的作用机制.方法 健康雄性SD大鼠90只,随机分为三组:假手术组(sham,n=30),缺血再灌注组(IR,n=30),PD98059组(PD,n=30),采用4-VO法建立全脑再灌注模型.分别于再灌注后2,6,12,24,48,72 h给予处死,标本行HE染色、免疫组化染色观察SD大鼠海马CA1区细胞形态、细胞凋亡计数及P-ERK和Caspase-3表达.结果 HE染色显示PD组损伤较IR组轻.免疫组化结果表明,PD组海马CA1区12-72 h P-ERK表达和各时间点Caspase-3表达均较IR组明显减少(P<0.05).TUNNEL染色显示,PD组各时间点凋亡指数显著小于IR组(P<0.05).结论 PD98059抑制全脑缺血再灌注后SD大鼠海马CA1区Caspase-3表达,减少了细胞凋亡.提示全脑缺血再灌注损伤中,ERK表达参与了损伤机制.     

全脑缺血再灌注损伤中JNK及Bim蛋白的表达

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注氨基末端激酶或应激活化激酶（p—JNK）及与Bcl-2相互作用的细胞死亡调解子（Bim）蛋白表达的变化。方法 构建大鼠全脑缺血再灌注模型，采用TUNEL法原位检测凋亡锥体细胞，免疫印迹检测不同实验组中Bim及p—JNK蛋白表达。结果 缺血再灌注各组神经元细胞的凋亡率明显高于假手术组（P〈0．05）。缺血再灌注组p—JNK及Bim蛋白表达积分光密度值与假手术组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论 在脑缺血及在灌注损伤中存在有JNK途径的过度激活，p-JNK蛋白与Bim蛋白表达为正相关。JNK途径的激活导致Bim蛋白表达增加，进而导致神经元细胞的凋亡明显增加。     

磷酸化ERK1／2在糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达意义

目的：探讨细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）在糖尿病脑缺血再灌注大鼠神经元中表达的作用.方法：采用链脲佐菌素（STZ）诱导和双血管阻塞联合放血法建立糖尿病大鼠全脑缺血模型,应用TUNEL、免疫组化方法观察糖尿病脑缺血组与正常血糖脑缺血组在全脑缺血15min、再灌注1,3h海马CA4区神经元凋亡和磷酸化ERK1/2（P-ERK1/2）的表达变化.结果：糖尿病脑缺血组在缺血15min、再灌注1,3h各时间点海马CA4区神经元凋亡发生率均明显高于正常血糖脑缺血组（P〈0.05）;糖尿病脑缺血组在各时间点磷酸化ERK1/2均有较高表达,于再灌注1,3h明显高于正常血糖组（P〈0.01）.结论：ERK1/2可能参与并介导了糖尿病加重的脑缺血再灌注神经元的损伤.     

促红细胞生成素对大鼠全脑缺血再灌注后海马蛋白激酶B表达的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区蛋白激酶B表达的影响,进一步探讨EPO脑保护作用的机制.方法采用改良的Pulsinelli四血管阻断方法制作大鼠全脑缺血再灌注模型.将SD大鼠随机分为4组:正常组、假手术组、缺血再灌注组和EPO治疗组.各组动物分别于缺血15min再灌注6h、24h、48h、72h、7d断头取脑.鼠脑灌注及固定后制作石蜡切片,HE染色观察海马的病理变化,用TUNEL方法检测海马CA1区神经细胞凋亡,免疫组织化学SP法观察磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)表达.另外再取24只大鼠分为4组:正常组、假手术组、缺血再灌注组和EPO治疗组,应用Y型迷宫法对缺血再灌注7 d的大鼠进行缺血后学习和记忆功能的测定.结果 (1)TUNEL染色:假手术组48 h、72h可见个别阳性细胞.缺血再灌注组于再灌注24h可见少量阳性细胞;再灌注48h可见较多TUNEL阳性细胞,72h出现大量TUNEL阳性细胞,7d明显减少.EPO治疗组TUNEL阳性细胞在各时间点明显少于缺血再灌注组[(948.6±91.0)个vs(502.7±97.3)个,P＜0.01].(2)认知功能变化:全脑缺血再灌注后7 d大鼠学习能力降低,尝试次数明显增多(P＜0.01).EPO治疗组尝试次数减少,有显著性差异(P＜0.01).学习能力测试后24h记忆功能测定,结果发现缺血再灌注组成绩明显低下,EPO处理组可改善缺血造成的大鼠记忆功能障碍[(20.06±3.85)s vs(12.93±3.04)s,P＜0.01].(3)p-PKB免疫组化染色:缺血再灌注组于再灌注6h即出现p-PKB明显表达增高,72h达高峰,7 d明显下降.EPO治疗组于再灌注6h、48h、72h、7 d,p-PKB蛋白表达较缺血再灌注组增高[(25.42±3.86)vs(11.64±2.13),P＜0.01].(4)相关分析:TUNEL阳性细胞与p-PKB蛋白表达则呈负相关,而大鼠学习能力与海马CA1区存活神经细胞数呈正相关趋势.结论 EPO能减少大鼠脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经细胞的坏死和凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤后大鼠学习、记忆功能障碍.EPO可能通过增强海马神经细胞p-PKB的表达,发挥神经细胞保护作用.     

JNK蛋白在全脑缺血再灌注损伤中的表达

目的:探讨大鼠全脑缺血再灌注氨基末端激酶或应激活化激酶(JNK)蛋白表达的变化。方法:构建大鼠全脑缺血再灌注模型,采用TUNEL法原位检测凋亡锥体细胞,免疫印迹检测不同实验组中JNK蛋白表达。结果:缺血再灌注各组神经元细胞的凋亡率明显高于假手术组(P<0.05)。缺血再灌注组JNK蛋白表达积分光密度值与假手术组相比有显著差异(P<0.05)。结论:在脑缺血及再灌注损伤中存在JNK途径的过度激活,进而导致神经元细胞的凋亡明显增加。     

糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马CA4区神经元中磷酸化ERK1/2的表达上调

目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)在糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马CA4区神经元表达的意义.方法 在链脲佐菌素性糖尿病大鼠脑缺血再灌注模型基础中,应用TUNEL、免疫组化方法 观察糖尿病脑缺血组与正常血糖脑缺血组在全脑缺血15 min、再灌注1 h海马CA4区神经元凋亡和磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)的表达变化.结果 糖尿病脑缺血组在缺血15 min、再灌注1 h海马CA4区神经元凋亡发生率均明显高于正常血糖脑缺血组(P<0.05);糖尿病脑缺血组各时间点磷酸化ERK1/2明显增高,于再灌注1 h明显高于正常血糖组(P<0.01).结论 糖尿病加重脑缺血再灌注神经元的损伤,其机制可能与ERK1/2的激活有关.     

全脑缺血再灌注损伤后ERK在大鼠海马的表达及热休克预处理对其表达的影响

目的: 研究全脑缺血再灌注损伤后ERK在SD大鼠海马的表达及热休克预处理对其表达的影响,以阐明ERK在脑缺血再灌注损伤中作用机制. 方法: 健康雄性SD大鼠90只,随机分为假手术组(SO组,n=30),缺血再灌注组(IR组,n=30),热休克预处理组(HSP组,n=30),以四血管法建立全脑缺血再灌注模型,将大鼠置于42℃中15 min行热休克预处理,全脑缺血6 min后2, 6, 12, 24 h, 3, 5 d再灌注后处死,取海马组织行HE染色,ERK免疫组化染色,TUNEL法检测凋亡细胞. 结果: IR缺血再灌注后2 h ERK在CA1区开始表达,24 h达到高峰,5 d仍有表达,CA3区弱于CA1区,同时CA1区细胞损伤明显,HSP组ERK在CA1和CA3区相应时点均弱于IR组(P＜0.05),细胞损伤轻微,凋亡细胞减少(P＜0.05). 结论: 全脑缺血再灌注损伤后ERK过度表达参与了神经元损伤过程,热休克预处理通过下调ERK过度表达具有脑保护作用.     

不同脑温对全脑缺血再灌注后相关基因及细胞凋亡的影响

目前国内外学者开始尝试低温治疗脑缺血、脑出血和重型颅脑外伤 [1 ] ,但是脑缺血后脑温控制到何种程度方可发挥最大的脑保护作用 ,同时又不产生严重的并发症 ,至今尚未见统一的标准。为此 ,本研究以大鼠全脑缺血再灌注模型 ,观察不同程度降温对脑缺血后海马 CA1 区的 c- fos和大脑皮质bcl- 2相关基因以及脑细胞凋亡表达的影响。1　材料与方法1.1　动物及分组　健康雄性 Sprague- Dawley(SD)大鼠 ,体重 2 5 0± 15 g,随机分为假手术组和脑缺血组 ,后者再分为常温 (37～ 38℃ )组、亚低温 (31～ 32℃ )组和高温 (41～ 42℃ )组 ,每组 6只…     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及认知功能的研究

目的探讨大鼠脑缺血再灌注海马神经元凋亡及认知功能变化。方法雄性SD大鼠60只,随机分成假手术组（SH组）、模型组（IR组）。模型组采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,不同时间点进行水迷宫测试。TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞。结果尼氏染色显示,与假手术组间比较,缺血组海马CA1区神经元数量显著下降（P〈0.01）;TUNEL法检测显示：与假手术组相比,凋亡指数显著增加（P〈0.01）。Morris水迷宫检测,与假手术组相比,模型组大鼠学习阶段寻台时间明显延长,而其记忆测试潜伏期也明显长于假手术组。结论大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡显著增加,认知功能明显下降。     

新藤黄酸与ERK抑制剂PD98059联合应用对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的 研究新藤黄酸与ERK特异性抑制剂PD98059联合应用后对肺腺癌A549细胞生长的影响。方法 新藤黄酸与ERK特异性抑制剂PD98059处理肺腺癌A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内活性氧的变化;Western blot法检测ERK,p-ERK蛋白的表达。结果 MTT法结果表明新藤黄酸在2.5μM对肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用,与ERK抑制剂PD98059合用后,24h抑制作用达到50.3％,与单独应用新藤黄酸相比抑制作用更加明显;倒置显微镜观察表明新藤黄酸作用肺腺癌A549细胞24 h后,细胞固缩变圆,体积变小,部分细胞贴壁不牢,呈半贴壁状态;新藤黄酸和ERK抑制剂PD98059合用后,可观察到多数细胞固缩变圆,脱落,漂浮于培养液中,少数细胞体积增大、肿胀、破裂呈坏死状;流式细胞仪检测结果表明,相较于新藤黄酸2.5μM处理组,PD98059 2.5μM新藤黄酸共同处理组作用于A549细胞24 h后,细胞内活性氧显著增加(p<0.01)。Western blot表明p-ERK蛋白在A549细胞加入PD98059作用24 h后,与新藤黄酸组比较表达量显著降低。结论 新藤黄酸能诱导肺腺癌A549细胞凋亡,合用ERK抑制剂PD98059后可减少ERK蛋白的活化,增加肺腺癌A549细胞的凋亡;结果初步表明新藤黄酸诱导肺腺癌A549细胞的凋亡可能与调节ERK信号通路有关。     

PD98059对人子宫颈癌细胞株Siha增殖和凋亡的影响

目的探讨ERK1/2抑制剂PD98059对人子宫颈癌细胞株Siha细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度（10μmol/L25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L）PD98059作用于Siha,取不同时间点（6h,12h,24h,48h）,然后采用MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果 PD98059能够抑制Siha细胞增殖,诱导细胞凋亡,并且呈时间-剂量依赖性（P〈0.05）。结论 PD98059能够抑制子宫颈癌细胞株Siha细胞增殖,诱导凋亡,可能与PD98059抑制了RAS-RAF-MEK-ERK信号转导途径有关。     

眼针对脑缺血再灌注模型大鼠ERK1/2信号转导通路影响的实验研究

 目的：探索脑缺血再灌注损伤后ERK1/2信号转导通路的激活情况,研究眼针疗法对该通路的影响。方法：应用线栓法复制出脑缺血再灌注损伤大鼠的模型,采用眼针治疗。再灌注24 h后处死取材,采用Western-blot方法对各组大鼠海马组织中ERK1/2及p-ERK1/2的表达进行检测。结果：眼针疗法能够显著上调脑缺血再灌注损伤后大鼠海马组织中ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达,与模型组比较,有统计学意义。结论：眼针疗法能够显著上调脑缺血再灌注模型大鼠ERK1/2及p-ERK1/2的表达;眼针疗法的脑保护作用可能通过激活ERK1/2信号转导通路而实现。     

PD98059对肝癌HepG2细胞Tec信号转导作用的初步研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对肝癌细胞株HepG2细胞中Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)及ERK2作用.方法免疫细胞化学方法检测Tec、ERK2在HepG2细胞中的表达;用RT-PCR和Westernblot方法检测,不同浓度PD98059处理细胞后,HepG2细胞中的Tec、ERK2 mRNA及蛋白表达.结果Tec、ERK2在HepG2细胞中呈高表达,PD98059明显影响HepG2细胞Tec、ERK2 mRNA以及蛋白表达,呈剂量依赖性,40 μmol/LPD98059细胞抑制最明显.结论Tec可能是肝癌细胞内Ras/Raf/ERK信号转导途径上游的信号蛋白,与Ras/Raf/ERK信号转导通路存在着某种信号联系.     

榄香烯和PD98059诱导人胃癌SCG-7901细胞株凋亡及其机制的探讨

目的：探讨榄香烯及PD98059对人胃癌SCG-7901细胞株凋亡的影响,及其与ERK1／2、P38MAPK信号通路的关系。方法：用不同浓度的榄香烯和PD98059处理人胃癌SCG-7901细胞,体外细胞增殖抑制实验（MTT）法检测细胞增殖情况;Western—blot法检测ERKl／2、磷酸化ERKl／2（p-ERK1／2）和磷酸化P38（p-P38）的表达;RT-PCR检测bcl-2mRNA及baxmRNA的表达;TUNEL法检测胃癌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果：榄香烯和PD98059单独作用都有抑制胃癌细胞增殖的作用,前者呈浓度和时间依赖性,后者则呈时间依赖性但无浓度依赖性,两药联合作用时对胃癌细胞增殖的抑制作用显著大于单一用药时（P〈0．05）;随榄香烯的浓度增加p-ERK1／2蛋白的表达量增加（P〈0．05）,总FRK1／2无明显变化;榄香烯（0．08mg／mL）、PD98059（50μmol／L）及榄香烯＋PD98059组作用胃癌细胞24h,p-P38的表达均高于对照组（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组较榄香烯组或PD98059组更高（P〈0．05）;随榄香烯浓度的增加,baxmRNA的表达增加,bcl-2mRNA的表达降低,且榄香烯＋PD98059组表现最显著;实验组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．05）,具有浓度依赖性（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组的凋亡率明显高于单一作用组（P〈0．05）。结论：榄香烯及PD98059可以抑制胃癌细胞增殖,前者具有时间和浓度依赖性;榄香烯及PD98059还可以促进胃癌细胞凋亡。榄香烯抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的机制包括促进ERKl／2磷酸化和上调P-P38MAPK信号通路的表达;PD98059抑制ERKl／2的磷酸化,但通过上调p-P38MAPK信号通路的表达而发挥其细胞调节作用。     

异丙酚自身给药对大鼠伏隔核内ERK表达的影响

目的观察异丙酚静脉自身给药对大鼠伏隔核内p-ERK表达的影响。方法 SD大鼠随机分为3组(n=6):对照组(C组)、1.00mg/kg异丙酚组(P1组)、1.70mg/kg异丙酚组(P2组)。用静脉自身给药法建立异丙酚精神依赖模型,Westernblotting法检测大鼠伏隔核内p-ERK和ERK的变化。结果 P1组、P2组的异丙酚可以诱发大鼠建立静脉自身给药行为。与P1组相比,P2组大鼠有效鼻触(P<0.01)和注射次数(P<0.01)明显增加。随着异丙酚剂量的增加,大鼠伏隔核内p-ERK/ERK的表达明显增加(P<0.01)。结论异丙酚静脉自身给药增加了大鼠伏隔核内p-ERK的表达,ERK信号转导通路可能参与了异丙酚的精神依赖性。     

米诺环素对脑缺血再灌注损伤后炎性反应影响

目的 探讨米诺环素对局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响。方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。设定假手术组、生理盐水组、米诺环素预处理组、30min组、4h组。用免疫组织化学法、逆转录聚合链式反应技术（RT-PCR）、放射免疫法和核磁共振T2WI扫描等方法,观察米诺环素对缺血再灌注大鼠脑组织COX-2、ICE的表达、PGE2的含量及脑缺血体积的影响。结果 米诺环素能降低缺血再灌注大鼠脑组织中PGE2的含量,减少COX-2、ICE的表达,缩小脑梗死体积。结论 米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应有抑制作用。     

ERK与bFGF蛋白在乳腺癌中表达及意义

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶ERK在乳腺癌组织中的表达、临床意义及其与bFGF蛋白的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测90例乳腺癌,10例乳腺癌旁组织和15例乳腺良性病变中ERK和bFGF蛋白的表达情况.结果 ERK1/2和bFGF蛋白在浸润性乳腺癌组阳性表达率分别为81.1%和62.2%,与癌旁组织和乳腺良性病变比较,差异有显著性(P<0.05).ERK蛋白阳性表达与乳腺癌的临床分期有关,有腋窝淋巴结转移者的阳性表达高于无转移者,经统计学处理,差异有显著性(P<0.05).bFGF,ERK蛋白阳性表达与乳腺癌的肿瘤直径、组织学类型状态、组织学分级无关(P>0.05).结论 ERK蛋白在乳腺癌组织中表达上调,且与病理分期有关,提示其可能在乳腺癌发生、发展中起重要作用,ERK可能成为乳腺癌治疗中的一个靶基因,ERK与bFGF蛋白可能在乳腺癌的演进中起着协同作用.