CD49a阳性NK细胞参与类风湿关节炎疾病进程

目的 研究外周血中CD49a阳性NK细胞的功能及其在类风湿关节炎中的作用。方法 流式细胞术检测健康志愿者和类风湿关节炎患者外周血NK细胞及其亚群包括CD56brightNK、CD56dimNK细胞群上CD49a及IFN-γ的表达;ELISA检测健康志愿者和类风湿关节炎患者血浆中IFN-γ的表达。结果 与健康志愿者相比,RA患者外周血NK细胞及其2个亚群上CD49a的表达均显著升高。在RA患者血浆、外周血NK细胞及其亚群上IFN-γ的表达显著升高;同时CD49a与IFN-γ双阳性的NK细胞比例增加,且CD49a阳性NK细胞较CD49a阴性NK细胞表达更高水平的IFN-γ。结论 CD49a阳性NK细胞参与类风湿关节炎疾病进程。     

类风湿关节炎外周血树突状细胞亚群的分析

类风湿关节炎（RA）是目前最为常见的自身免疫性疾病之一．其发生和发展是由多种诱发因素和机体免疫异常所造成的,其中抗原提呈功能的异常是一个重要方面。树突状细胞（DC）是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞（APC）,它不仅是机体免疫应答的始动者,而且在诱导免疫耐受、调节T细胞介导的免疫应答方面都发挥着重要的作用。目前国内有关DC与RA发病关系的研究少见报道,研究采用流式细胞分析技术,通过组合性DC表面标志的测定,观察RA患者外周血DC表型表达状况、DC亚群水平变化及其与RA活动指标和活动度的关系,探讨DC在RA发病中的作用。     

类风湿关节炎外周血单核细胞亚群CD64表达及意义

目的：探讨CD64在类风湿关节炎（RA）患者外周血单核细胞亚群上的表达及临床意义,以阐明其在RA发生和发展中的作用。方法：应用流式细胞仪检测44例RA患者和22例正常对照者外周血单核细胞亚群的比例及其CD64的表达,比较RA组和正常对照组之间各单核细胞亚群的比例及其表面CD64表达水平,并分析各单核细胞亚群表面CD64表达与实验室检查数据的相关性。两组间比较采用t检验或者非参数检验,两变量之间相关性采用Pearson或Spearman相关分析。结果：(1)RA组中间型单核细胞比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);RA组经典型单核细胞比例和非经典型单核细胞比例低于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。(2)RA组各单核细胞亚群CD64表达(MFI)显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)RA患者外周血经典型单核细胞和中间型单核细胞CD64表达(MFI)与DAS28呈正相关(r_s=0.308,P=0.044;r_s=0.302,P=0.049)。(4)RA患者各单核细胞亚群CD64表达(MFI)与ESR,CRP呈正相关(r_s=0.410,P=0.008;r_s=0.475,P=0.003;r_s=0.448,P=0.003;r_s=0.473,P=0.004;r_s=0.348,P=0.026;r_s=0.340,P=0.042)。(5)RA患者RF阳性组、ACPA阳性组外周血经典型单核细胞、中间型单核细胞上CD64表达(MFI)明显高于对应的阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)中间型单核细胞CD64高表达组血清细胞因子IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：RA患者外周血单核细胞亚群CD64表达异常,经典型单核细胞和中间型单核细胞CD64表达与炎症水平、自身抗体产生和疾病活动性有明确的相关性。以外,中间型单核细胞CD64的表达与细胞因子相关。     

NKT细胞的发育分化及细胞因子分泌状态的调控机制

自然杀伤(NK)T细胞是从传统T淋巴细胞在早期发育中分支出的一种特殊类型的T淋巴细胞亚群, 它们直接在胸腺内阶段分化发育成熟, 或在外周分化发育为功能稳定的成熟细胞.     

人外周血NKT细胞亚群表型及生物学特征

目的:观察正常人周围血NKT细胞的频率、表型特征及功能,进一步了解NKT细胞在免疫应答中的作用。方法:分离正常成年人PBMCs,利用流式细胞术(FCM)检测TCRvβ11、CD4、CD8、CD45RA、CD62L、CCR7等表面分子的表达;PMA+Ionomycin刺激PBMCs后,检测细胞因子的产生。结果:正常成年人周围血CD3+TCRvβ11+NKT细胞的平均频率为0.35%,其范围为0.11%～1.20%。根据CD4和CD8分子的表达,可将CD3+TCRvβ11+NKT细胞分为CD4+、CD8+、CD4-CD8-三个亚群,分别为56.24%、25.82%、16.47%。此外多数CD3+TCRvβ11+NKT细胞表达CD45RA,近半数细胞表达CD62L,少数细胞表达CCR7。细胞因子表达的结果显示,经PMA和Ionomycin刺激后,近30%的CD3+TCRvβ11+NKT细胞分泌IFN-γ,6.9%的细胞分泌IL-4。CD4+NKT细胞产生IL-4的量要明显高于CD8+NKT细胞,但IFN-γ的表达二者没有明显差别。重要的是初始和记忆性NKT细胞都能产生细胞因子,以记忆性NKT细胞为主。结论:正常人周围血中CD3+TCRvβ11+NKT细胞的频率很小,但其表型复杂,产生细胞因子IFN-γ和IL-4的频率高,参与免疫调节及免疫应答的过程。     

人外周血NK细胞亚群、表型和生物学特征

目的：探讨人外周血NK细胞的异质性和生物学特征。方法：利用多种标记抗体进行细胞表面和细胞内细胞毒效应分子染色，再利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析NK细胞亚群的多样性和生物学特征。结果：NK细胞可分为CD56^ 、CD56^ ’CD16^ 和CD16^ 三个亚群。所有CD56^ NK细胞均表达CD95，但表达水平的高(CD95^bright)和低(CD95^dim)不同。在CD95^bright和CD8^ 细胞亚群中有43．5％的细胞同时表达颗粒酶B和穿孔素。而CD56^ CD16^ 和CD16^ 细胞表达CD95均为CD95^bright，同时表达颗粒酶B(83．6％)和穿孔素(89．8％)。结论：NK细胞乃异质性群体，随着CD56表达减少和CD16表达增加。其生物效应功能逐渐成熟。     

自然流产患者外周血与蜕膜NK细胞亚群数量变化的研究

目的：研究自然流产患者外周血与蜕膜组织自然杀伤细胞亚群数量的变化。方法：对36例自然流产患者及30例正常健康早孕者（对照）外周血及蜕膜组织中淋巴细胞进行单克隆抗体标记,应用流式细胞仪定性、定量分析技术对NK细胞（natural killer)亚群进行分析。结果：（1）流产组外周血及蜕膜组织NK细胞CD56＋CD16＋百分比较对照组明显升高。（P＜0．01）,而蜕膜组织中NK细胞CD56＋CD16－百分比明显低于对照组（P＜0．001）。（2）外周血与蜕膜组织NK细胞CD56＋CD16＋亚群存在相关性（γ＝0．516,P＜0．05）。结论：NK细胞亚群的数量变化可以引起蜕膜免疫微环境的失调,导致自然流产。外周血与蜕膜NK细胞CD56＋CD16＋亚群存在正相关关系。     

黄芪多糖佐剂对脾脏NK细胞及NKT细胞的作用

目的观察脾脏NK细胞及NKT细胞在黄芪多糖（APS）发挥免疫佐剂功能的作用。方法使用鸡卵白蛋白（OVA）与APS经皮下免疫C57BL/6小鼠3次。末次免疫7～14d,取血清,使用ELISA观察OVA特异性抗体的含量;分离脾脏淋巴细胞,使用流式细胞仪检测NK和NKT细胞的百分比含量;使用PMA和Ionimycin刺激淋巴细胞,使用细胞内细胞因子染色的方法检测IFN-γ和IL-4的分泌情况。结果 APS组小鼠OVA特异性抗体含量明显高于OVA组小鼠（P〈0.05）,但小鼠脾脏内NK和NKT细胞的百分比含量与OVA组和正常小鼠差别不大（P〉0.05）。经PI刺激以后,APS组小鼠脾脏内NK细胞中IL-4＋细胞明显高于OVA组和正常组（P〈0.05）,且IFN-γ＋细胞的比例明显下降（P〈0.05）;虽然经过PI刺激以后,APS组小鼠脾脏内NKT细胞中IL-4＋细胞升高不明显,但是IFN-γ＋细胞的比例明显下降（P〈0.05）。结论 APS可以通过调节NK和NKT细胞的功能来促进体液免疫应答。     

NKT细胞:独特的T淋巴细胞亚群

NKT细胞是一种特殊类型的T淋巴细胞 ,同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记 ,具有较为恒定的TCRα链和独特的CD1限制性 ,参与自身免疫、感染免疫、抗肿瘤免疫和移植免疫等多种免疫反应 ,被认为是连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁     

C D4＋ T细胞亚群在类风湿关节炎中的研究

类风湿关节炎（ rheumatoid arthritis, RA）是由多因素共同作用引起的自身免疫性疾病,至今发病机制仍未完全阐明, CD4＋T细胞在RA的发生发展中发挥重要作用。早期发现Th1／Th2细胞后,新的CD4＋T细胞亚群不断被发现,包括Th17细胞、 Treg细胞、 Th22细胞、 Th9细胞和Tfh细胞。不同CD4＋T细胞亚群在RA中表达异常,深入研究不同亚群CD4＋T细胞在RA中的作用可为RA的发病机制提供线索。     

NKT细胞、NK细胞和T细胞亚群在活动性肺结核患者外周血的表达及意义

目的:探讨活动性肺结核病人外周血CD3+T、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Tc、CD3-CD16+56+NK、CD3+CD16+56+NKT、Th/Tc的表达变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术分析45例肺结核病人、16例肺部感染病人及30例健康人外周血CD3+Th、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Tc、CD3-CD16+56+NK、CD3+CD16+56+NKT、Th/Tc的表达和变化情况。结果:初、复治肺结核患者的外周血NKT比例明显高于健康人(P<0.05);Th低于健康人(P<0.05);Tc高于健康人(P<0.05);Th/Tc低于健康人(P<0.05)。初、复治肺结核患者之间T、Th、Tc、NK、NKT、Th/Tc未见明显差异。肺部感染、活动进展Ⅰ期、活动进展Ⅱ期病人NKT阳性细胞数高于健康人和吸收好转期病人且结果有统计学意义(P<0.05);活动进展Ⅱ期组高于肺部感染组且结果有统计学意义(P<0.05)。活动进展Ⅰ期、活动进展Ⅱ期病人Tc阳性细胞数高于健康人组且结果有统计学意义(P<0.05)。Th/Tc吸收好转期、肺部感染、活动进展期、活动进展Ⅱ期均低于健康人组且结果有统计学意义(P<0.05)。轻症、中症、重症患者,重症者Th升高、Tc下降、Th/Tc升高。结论:NKT细胞与肺结核的发展和转归有关。Tc细胞的升高是免疫系统对于结核杆菌的反应,与肺结核病变的发展、范围和程度紧密相关。重点监测外周血NKT细胞和Tc细胞对于掌握活动性肺结核发展和预后有特殊的意义。     

CD226在NK细胞亚群上表达规律与功能关系的研究

目的：观察CD226分子在NK细胞亚群上的分布和其他NK细胞活化性受体和抑制性受体的共存规律，及与NK细胞功能的关系。方法：分别以IL-2或IL-15刺激PBMC和MLC细胞为模型，采用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析，观察CD226分子在CD56^bright和CD56^dim NK细胞亚群上的表达，及与NK细胞活化性受体CD16和抑制性受体NKG2A的共存关系，同时用ELISA方法检测培养上清中IFN-γ的水平。用4小时^51Cr释放试实验检测NK细胞杀伤水平。结果：在PBMC中，CD226主要分布于CD56^dim亚群，在IL-2作用下，CD226主要分布于CD56^bright,亚群，而在IL-15作用下，NKG2A^ CD226^ 双阳性细胞明显增加。在MLC活化的NK细胞中，CD226主要分布于CD56^dim亚群，在IL-15作用下，CD226主要分布于CD56^bright亚群，IL-2和IL-15都能促进CD16^ CD226^ 和NKG2A^ CD226^ 双阳性细胞的增殖。IL-2和IL-15能明显提高PBMC培养上清中IFN-γ的水平，并能促进PBMC和MLC中NK细胞的杀伤活性。结论：CD226主要分布于活化NK细胞CD56^bright群上，其表达水平及与CD16及NKG2A共存关系可能受不同细胞因子调节并与NK细胞功能相关。     

类风湿关节炎T细胞亚群4-1BB的表达与其分泌TH1/TH2细胞因子的关系

目的探讨体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)T淋巴细胞上共刺激分子4-1BB的表达,及与其分泌T_H1/T_H2细胞因子的关系。方法应用流式细胞术检测体外培养的30例RA患者和20例正常对照者T细胞活化前后4-1BB的表达,并且应用ELISA方法检测培养上清液中IFN-γ、IL-4水平。结果RA患者CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB明显高于正常对照组(表达百分率分别为18.56%±4.08%和10.33%±2.13%;1.24%±0.12%和0.87%±0.09%,P<0.01),经抗CD3单抗体外刺激后CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB均显著高于活化前(表达百分率为33.21%±4.29%和21.35%±8.12%,P<0.01)。RA患者CD4~ T/CD8~ T比值明显升高,而且与4- 1BB~ CD4~ T细胞数呈正相关关系(r=0.84,P<0.01),RA患者T淋巴细胞培养液上清中IFN-γ、IL-4均高于正常对照组(P<0.05),经抗CD3单抗体外刺激后上清液中IFN-γ及Ib-4均明显高于活化前,以IFN-γ升高最为显著(P<0.01)。而且抗CD3单抗刺激前后4-1BB~ CD4~ T细胞数与培养上清液中IFN-γ水平均呈正相关关系(r=0.721,r=0.487,P<0.05)。结论类风湿关节炎患者T细胞表达的4-1BB在类风湿关节炎的发生发展中具有重要意义,4-1BB可能通过对CD4~ T细胞活化,促使T_H1细胞因子分泌,参与关节炎症和免疫损伤。     

中国HIV/AIDS患者NK细胞及NKT细胞变化的检测

目的　探讨HIV感染后机体NK(naturalkillercells)及NKT细胞的变化情况。方法　取外周血细胞 ,用标记荧光的抗体进行染色 ,流式细胞仪分析HIV AIDS患者NK和NKT细胞的变化。结果　HIV AIDS患者NK、NKT细胞和CD4 + T细胞显著低于正常对照 ;CD8+ T细胞显著高于正常对照。HIV AIDS患者NK百分数显著低于正常对照 ,与CD4 + T细胞数量成正比 ,r=0 .2 89,P <0 .0 1 ;NKT细胞数量与CD4 + T细胞数量成正比 ,r =0 .378,P <0 .0 1 ;与CD8+ T细胞数量成正比 ,r =0 .340 ,P <0 .0 1 ;长期不进展组NKT、NK细胞数量与正常对照组差异无显著性。结论　HIV感染可明显降低HIV AIDS患者NK和NKT细胞数量 ,NK和NKT细胞变化与疾病进展密切相关。     

CD244 与活动性肺结核患者CD56bright NK 细胞表型及功能的关系研究

目的:探索CD244 与活动性肺结核患者CD56brightNK 细胞表型及功能的关系。方法:用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),用流式细胞术检测活动性肺结核患者与正常对照者CD56brightNK 细胞表面CD244、CD94、NKG2D表达差异,进一步检测活动性肺结核患者CD56bright NK 细胞CD244 与Tim3、CD27、CD62L、CCR7、CD107a、IFN-β表达的关系。结果:不经过结核菌抗原刺激的外周血中的CD56brightNK 细胞表面CD244 表达在活动性肺结核患者和正常对照中并没有显著性差异;经过结核菌抗原刺激的活动性肺结核患者CD56bright NK 细胞表面CD244 表达显著高于正常对者;CD56bright NK 细胞表面CD94 和NKG2D 表达,在活动性肺结核患者与健康对照者之间无显著性差异;活动性肺结核患者CD244+ CD56bright NK 细胞表面Tim3+细胞显著性升高,而细胞表面CD62L 显著性降低,细胞内IFN鄄酌显著性降低;然而CD244+ CD56bright NK 细胞和CD244- CD56brightNK 细胞之间CD107a 表达无显著性差异。结论:在活动性肺结核患者PBMCs 中CD56brightNK 细胞表面高表达CD244,可能与抑制受体Tim3 协同抑制IFN-β的表达,但是与NK 细胞的脱颗粒作用无关。     

NKT细胞：独特的T淋巴细胞亚群

NKT细胞是一种特殊类型的T淋巴细胞，同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记，具有较为恒定的TCRα链和独特的CD1限制性，参与自身免疫、感染免疫、抗肿瘤免疫和移植免疫等多种免疫反应，被认为是连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁。     

类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞亚群的分析

目的 研究类风湿性关节炎(RA)患者不同时期外周血Treg和Th1、Th2、Th17细胞以及中性粒细胞上CD64的表达水平,及它们与RA的活动性指标和自身抗体的相关性.方法 采集78例RA患者和21例健康人外周静脉血,采用流式细胞术检测淋巴细胞亚群(Treg,Th1、Th2、Th17细胞)的变化.结果 RA的CD3+ CD4+T细胞和CD4+ CD25+T细胞增多,活动期RA组Treg比率高于缓解期RA组和健康对照组,缓解期RA组Th2细胞减少,RA中Th1,TH17细胞与健康对照组相比无统计学意义,Treg和Th1、Th2、Th17细胞与RA的活动性指标(ESR,CRP和PLT)均无关联.结论 CD4+T细胞亚群数量异常可能与RA疾病发展有关.     

104 NKT细胞：独特的T淋巴细胞亚群

NKT细胞是一种特殊类型的T淋巴细胞，同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记，具有较为恒定的TCRα链和独特的CD1限制性，参与自身免疫、感染免疫、抗肿瘤免疫和移植免疫等多种免疫反应，被认为是连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁。     

他克莫司对肾移植受者外周血NK和NKT细胞比例的影响及临床意义

他克莫司(Tacrolimus)是一种强效免疫抑制剂,现已广泛应用于肾脏、肝脏及心脏移植,有效减低了排异反应的发生,提高了移植受者的存活率.但是他克莫司个体药代动力学差异大,不同个体对其血药浓度的敏感性及耐受性有差异,故单纯依靠血药浓度监测不能有效反映移植受者的免疫状态.因此如何了解移植受者的免疫状态,指导免疫抑制剂的个体化应用,在免疫抑制不足及免疫过度之间寻找平衡,成为困扰移植医生的问题.NK细胞(natrural killer cell)是天然免疫系统的主要效应细胞.     

慢性肝脏疾病中CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT细胞亚群的变化研究

目的探讨CD3^-CD161^＋NK、CD3^＋CD161^＋NKT细胞在慢性肝炎／肝硬化及肝细胞癌患者肝脏组织及外周血中表达及意义。方法利用流式细胞仪对31例肝细胞癌患者、59例慢性肝炎／肝硬化患者肝脏组织及外周血、15例正常肝脏组织、48例正常人外周血中的CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT进行定量分析。结果慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（13．4±1．3）％]和肝细胞癌癌周组CD3^-CD161^＋NK细胞[（16．7±4．8）％]及远离肝癌组的肝脏组织CD3^-CD161^＋NK细胞[（22．0±4．4）％]与正常肝脏组织CD3^＋CD161^＋NK细胞[（35．1±7．2）％]相比,肝细胞癌癌周肝脏组织内含量最低（t值分别为2．301、2．137、2．034,P〈0．05）;外周血中肝细胞癌组CD3^-CD161^＋NK细胞f（11．6±6．3％）]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（14．7±6．2）％]与慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（10．8±1．7）％]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（12．5±0．8）％]、正常对照组CD3^＋CD161^＋NK细胞[（7．5±0．8）％]、CD3^-CD161^＋NKT细胞[（13．8±1．7）％]相比肝癌组CD3^-CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．134,2．099,P〈0．05）,肝癌组CD3^＋CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．125,2．154,P〈0．05）。结论由于NK细胞及NKT细胞数量减少或／和活性降低,使肿瘤细胞逃逸了免疫监视,可能促进了肿瘤的发生、发展及转移。