CD59在sMAC诱导EL—4细胞增殖效应中的作用

以表达人ＣＤ５９ｃＤＮＡ及ＣＤ５９－ＴＭｃＤＮＡ的小鼠胸腺瘤细胞为研究对象,探讨了ＣＤ５９在ｓＭＡＣ诱导ＥＬ－４细胞增殖效应中的作用。结果发现;１）用抗体交地ＣＤ５９／ＥＬ－４细胞的增殖有促进效应,而对ＣＤ５９－ＴＭ／ＥＬ－４细胞的增殖无明显影响;２）ｓＭＡＣ对ＣＤ５９／ＥＬ－４细胞的增殖有促进作用,而对ＥＬ－４及ＣＤ５９－ＴＭ／ＥＬ－４细胞则均未出现上述现象;３）阻断信号传导的蛋白酪氨酸激酶途径     

098膜辅蛋白—补体活化调节剂家族新成员

膜辅蛋白是一种广泛分布于Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ结合细胞胞表面的糖蛋白，它属于补体活化调节剂基因族家族，ＭＣＰ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈两条完全不同的带，其表达量在不同的细胞类型型有所不同，已用探针从ｃＤＮＡ文库获得了其ｃＤＮＡ片段并测序，基因组构成也已确定。ＭＣＰ在补体调控途径中发挥很重要的作用，它可与Ｃ３结合，并具Ⅰ因子依赖性辅因子活性。     

人树突状细胞cDNA质粒文库的构建及其大规模随机测序体系的 …

目的：建立人树突状细胞的ｃＤＮＡ文库。通过大规模随机测序克隆免疫新分子,方法：来源于正常人外周血的单核细胞,体外经ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４培养,扩增出高纯度的ＤＣ,抽提纯化ｍＲＮＡ,转录成ｃＤＮＡ,定向插入ｐＳＰＯＲＴ２．０载体,建立人ＤＣ的ｃＤＮＡ质粒文库;用ＡＢＩ３７７全自动测序仪对该文库进行随机测序,将得到的ＥＳＴ在Ｓｕｎ－Ｅ４５０服务器中与ＥＭＢＬ及Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ数据库进行同源性比较,筛     

人补体C1—抑制物基因在COS—7细胞中的表达

利用全长人Ｃ１－ＩＮＨ ｃＤＮＡ片段构成建功可在ＣＯＳ－７细胞中瞬间表达重组人Ｃ１－ＩＮＨ的表达质粒ｐＳＶＬＣ１。通过ＤＥＡＥ－Ｅｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，经体外标记、免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹后发现，转染细胞可分泌一条分子量约１１０ｋＤ的免疫活性蛋白带。     

膜辅蛋白─补体活化调节剂家族新成员

膜辅蛋白（ＭＣＰ，ＣＤ４６）是一种广泛分布于Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ结合细胞表面的糖蛋白。它属于补体活化调节剂（ＲＣＡ）基因簇家族。ＭＣＰ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈两条完全不同的带，其表达量在不同的细胞类型有所不同。已用探针从ｃＤＮＡ文库中获得了其ｃＤＮＡ片段并测序，基因组构成也已确定。ＭＣＰ在补体调控途径中发挥很重要的作用，它可与Ｃ３结合，并具有Ⅰ因子依赖性辅因子活性。     

CD4^＋CD45^＋T细胞对SLE病人B细胞产生自身抗体的调节作用

选择体外抗ＤＮＡ，抗ＣＤＬ抗体双阳性的ＳＬＥ病人Ｂ细胞做为靶细胞，分别与不同的ＳＬＥ病人或正常人ＣＤ４＾＋ＣＤ４５＾＋Ｔ细胞亚群共同培养，结果显示，ＳＬＥ病人ＣＤ４＾＋ＣＤ４５ＲＯ＾＋Ｔ细胞对自身抗体的产生有明显的辅助作用，而ＣＤ４＾＋ＣＤ４５ＲＡ＾＋Ｔ细胞的作用不明显。     

CD4单克隆抗体在体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡

为研究抗ＣＤ４ ＭｃＡｂ引起胸腺细胞减少的机理，本课题探讨了ＣＤ４ ＭｃＡｂ诱导胸腺细胞发生凋亡的可能性。小鼠注射抗ＣＤ４ ＭｃＡｂ后，皮质胸腺细胞体积缩小，染色质凝聚；ＰＩ染色后经流式细胞计测定，显示大量的亚二倍体细胞（凋亡细胞，Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ），与正常小鼠相比Ｐ〈０．００１；片断化ＤＮＡ的百分比也明显高于正常小鼠，Ｐ〈０．０１。片断化ＤＮＡ在凝胶电泳上呈现典型的阶梯现象。细胞内     

人树突状细胞cDNA质粒文库的构建及其大规模随机测序体系的建立

目的：建立人树突状细胞（ＤＣ）的ｃＤＮＡ文库,通过大规模随机测序克隆免疫新分子。方法：来源于正常人外周血的单核细胞,体外经ＧＭＣＳＦ和ＩＬ４培养,扩增出高纯度的ＤＣ,抽提纯化ｍＲＮＡ,转录成ｃＤＮＡ,定向插入ｐＳＰＯＲＴ２０载体,建立人ＤＣ的ｃＤＮＡ质粒文库;用ＡＢＩ３７７全自动测序仪对该文库进行随机测序,将得到的ＥＳＴ在ＳｕｎＥ４５０服务器中与ＥＭＢＬ及Ｓｗｉｓｐｒｏｔ数据库进行同源性比较,筛选出代表未知基因ＥＳＴ,然后在ＧＣＧ软件中进行分析,对重要的未知ＥＳＴ克隆其全长ｃＤＮＡ。结果：所扩增的ＤＣ经流式细胞仪分析高表达ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ、Ｂ７、ＣＤｌａ和ＣＤ８３等表面标志,能强烈刺激同种异体Ｔ淋巴细胞的体外增殖反应;建立的ＤＣｃＤＮＡ文库９２％以上克隆有平均１６ｋｂ大小的插入片段;从所测的１２０００余条ＥＳＴ中筛选出代表未知基因的３０００余条,克隆到１０９条全长新基因,包括属于细胞因子、细胞因子受体、趋化因子和粘附分子等家族的免疫新分子,部分全长基因已在Ｇｅｎｅｂａｎｋ中登录。结论：成功建立了人ＤＣ的ｃＤＮＡ基因文库及其大规模随机测序体系,并克隆到免疫分子。     

系统性红斑狼疮病人血T,B淋巴细胞Bcl—2的表达

目的：探讨Ｂｃｌ－２在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）发病机制中作用。方法：采用流式细胞仪双标记法检测３１例ＳＬＥ病人外周血Ｔ、Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达。结果：发现活动期ＳＬＥ病人活动期ＳＬＤ病人ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于非活动期ＳＬＥ病人、其他疾病组和正常对照组。ＣＤ１９＾＋Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达在各组之间并无统计学差异。ＣＤ３＾＋Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达的平均     

乙型肝炎病毒在丁型肝炎病毒包装中的作用机理研究

用含ＨＢＶ全基因和ＨＢＶ大、中、小分子表面蛋白基因的真核细胞表达质粒（ＣＭＶ－ＨＢＶ、ＣＭＶ－ＬＳ、ＣＭＶ－ＭＳ、ＣＭＶ－Ｓ）分别与含ＨＤＶ ｃＤＮＡ三聚体的重组质粒共转染ＣＨＯ细胞。转染后３天在上述４种转染细胞内及培养上清中均检出了ＨＤＶ ＲＮＡ和ＨＤＡｇ表明上述４种转染细胞的培养上清中均有ＨＤＶ病毒颗粒的包装和分泌。提示：ＨＤＶ病毒的包装可能仅需ＨＢＶ Ｓ 基因及其小分子表面蛋白的辅助。     

抗D型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其初步应用

应用小鼠杂交瘤技术获得了５株分泌抗Ｄ型葡萄球菌肠毒素（ＳＥＤ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞（ＤＣ３、ＤＣ４、ＤＢ１１、４Ｄ３和４Ｄ５）。其中４Ｄ３为ＩｇＭ（λ），其余为ＩｇＧ１（ｋ）。这组ＭｃＡｂ除ＤＣ３外，其它４株ＭｃＡｂ识别的抗原构象表位相同，其相亲和力依次为４Ｄ５〉ＤＣ３〉ＤＣ４〉４Ｄ３〉ＤＢ１１。利用抗ＳＥＤ多克隆抗体ＨＲＰ标记的ＤＣ３和４Ｄ３（针对不同表位）混合ＭｃＡｂ建立了夹心ＥＬＩＳＡ法，并     

B细胞活化基因的研究Ⅰ．人活化B细胞cDNA文库的构建

本文报导以人活化Ｂ淋巴细胞的３Ｄ５细胞的ｍＲＮＡ为模板，逆转录合成ｃＤＮＡ的第一链：按常规的自身引物法，以合成的第一链为模板合成ｃＤＮＡ第、二链；以及λｇｔ１１Ｓｆｉ－Ｎｏｔ噬菌体为载体，定向插入构建了人活化Ｂ细胞。ＤＮＡ表达文库。该文库的大小为２．５×１０６ｐｆｕ，插入片段长度大于１ｋｂ；用抗ＣＤ７１及ＣＤ９８单克隆抗体为探针，对所构建的文库进行筛选，均获得了阳性克隆，ＣＤ７１及ＣＤ９８均为人Ｂ细胞活化时才得以表达的分化抗原，从而证明，新构建的ｃＤＮＡ文库是人活化Ｂ细胞的ｃＤＮＡ表达文库。     

HSV—1 SM44株糖蛋白D基因真核表达载体的构建及其免？…

目的 构建ＨＳＶ－１型ＳＭ４４株糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因的真核表达载体,并用此重组质粒直接免疫小鼠,探讨ＨＳＶ－１ ｇＤ基因作为基因疫苗的可能性。方法 从ＨＳＶ－１基因组中扩增ｇＤ的全编码基因,克隆入载体ｐＵＣ１９中,测序鉴定后转入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）。所得重组质粒ｐｃＤ－ＮＡ－ｇＤ以电穿孔法转染ＣＨＯ细胞,并以荧光染色法鉴定表达效果。用ｐｃＤＮＡ－ｇＤ免疫小鼠,ＥＬＩＳＡ法检测基因免疫     

IL—4在诱导CD4,45RA^＋和CD4,45RO^＋T细胞向IL—4产生细胞分化？…

应用ＥＬＩＳＰＯＴ（Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔａｓｓａｙ）单细胞检测技术，研究了淋巴因子在诱导ＣＤ４，４５ＲＯ和ＣＤ４，４５ＲＡＴ细胞向ＩＬ－４产生细胞分化过程中的影响，在存在ＰＭＡ和ｉｏｎｍｙｃｉｎ的情况下，ＩＬ－２和ＩＬ－４均可以诱导ＣＤ４，４５ＲＯＴ细胞分化为ＩＬ－４产生细胞，但是只有ＩＬ－４可以诱导ＣＤ４，４５ＲＡＴ细胞向ＩＬ－４产生细胞分化，ＩＦＮγ既不能诱导ＣＤ４，４     

超抗原SEB激活诱导CD4^＋T细胞凋亡模型的建立

目的 为了探讨超抗原活化诱导ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞凋亡分子机理及其信号传导途径,有必要建立超抗原活化诱导ＣＤ４＾＋Ｔ细胞凋亡模型。方法 采用电镜观察细胞凋亡的形态学特征,借助流式细胞仪ＰＩ染色观察细胞凋亡的光散射特征及亚二倍体核型峰特征,琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的ＤＮＡ片段化图谱,最后采用改进的二苯胺（ＤＰＡ）法定量分析细胞凋亡ＤＮＡ片段化百分率。结果 ４ｕｇ／ｍＬ ＳＥＢ刺激静息的ＳＥＢ应答ＣＤ４＾＋Ｔ细胞１２ｈ后,电镜下观察呈现典型的凋亡形态学特征;流式细胞仪ＰＩ染色分析表明,在二倍体峰的左侧出现亚二倍体核型峰典型凋亡特征,在光散射图谱上呈现低于正常细胞的前向散射和高于正常细胞的侧向散射;琼脂糖凝胶电泳分析呈现典型的凋亡ＤＮＡ梯状图谱;ＤＮＡ片段化百分率分析表明,超抗原ＳＥＢ活化诱导ＣＤ４＾＋Ｔ细胞凋亡率的     

CD4单克隆抗体改变新生小鼠胸腺亚群的分布和功能

新生期小鼠腹腔注入ＣＤ４，ＭｃＡｂ、可引起胸腺细胞表型和功能变化。胸腺细胞表型分析显示；胸腺细胞总数，ＤＰ和ＣＤ４ＳＰ细胞明显减少；ＣＤ８ＳＰ细胞数增加ＤＮ细胞数目变化不大。上述变化与ＣＤ４ＭｃＡｂ和胸腺细胞表面的ＣＤ４分子的结合有关。功能试验表明：实验组小鼠胸腺细胞对有丝分裂素ＣｏｎＡ，ＰＷＭ的反应性降低，混合淋巴细胞反应也明显低于对照组。     

编码与大鼠ERα-甘露糖苷酶同源的人6A8 cDNA在真核细胞的表达

目的观察６Ａ８ｃＤＮＡ（１３５８ｂｐ）在真核细胞的表达。方法Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，构建６Ａ８ｃＤＮＡ表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ，转染ＣＯＳ－７细胞，及基因免疫小鼠。结果６Ａ８ｃＤＮＡ有４．３ｋｂ和３．５ｋｂ两种ｍＲＮＡ转录形式。４．３ｋｂｍＲＮＡ以外周血白细胞最丰富，其次为淋巴结、脾脏和骨髓，胸腺组织表达较少，胎肝则缺如。３．５ｋｂ者也以外周血白细胞最丰富，其次为肝脏、淋巴结和骨髓，胸腺和脾脏表达量最少。ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ在ＣＯＳ－７细胞表达了分子量４５０００左右的蛋白质，与单抗６Ａ８有反应。ｐＲｃ／ＣＭＶ－６Ａ８ｃＤＮＡ基因免疫小鼠，６／１０只小鼠血清与人活化Ｂ细胞株３Ｄ５细胞膜有反应，５／５只对照小鼠血清呈阴性反应。结论６Ａ８ｃＤＮＡ（１３５８ｂｐ）在真核细胞获得表达，但此ｃＤＮＡ非为全长。     

以Bacmid-杆状病毒-昆虫细胞系统表达人FGF-9

目的：在Ｂａｃｍｉｄ－杆状病毒－昆虫细胞系统中表达人ＦＧＦ－９。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,自新鲜人脑胶质瘤组织获取人ＦＧＦ－９全编码区ｃＤＮＡ,将其克隆入ｐＣＲ＾ＴＭⅡ质粒及ｐＹＥＸ４Ｔ－１真核表达质粒,经ＤＮＡ自动测序仪进行ＤＮＡ序列测定。将人ＦＧＦ－９ｃＤＮＡ定向克隆入ｐＦａｓｔＢａｃ质粒,进一步将其转座入Ｂａｃｍｉｄ中,在昆虫细胞Ｓｆ９中进行表达,采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对表达产物进行分析。     

EXPRESSION OF HUMAN CD59 ANTIGEN ON MOUSE NIH3T3 AND EL-4 CELLS CONFERS PROTECTION AGAINST HUMAN COMPLEMENT ATTACK

ＣＤ５９分子是广泛分布于各组织细胞表面的１８ｋＤａ糖蛋白,通过肌醇磷脂酰聚糖（ＧＰＩ）锚固于细胞膜,具有抑制同源补体攻膜复合物（ＭＡＣ）形成和参与介导Ｔ细胞活化等多种功能。本文应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从Ｊｕ－ｒｋａｔ细胞的总ＲＮＡ中扩增得到３９６ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,经测序证实该片段包括２５ａａ信号肽在内的全部的ＣＤ５９编码序列。进一步将此ＣＤ５９的ｃＤＮＡ重组于逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ,电穿孔转染ＰＡ３１７细胞,并用病毒上清感染小鼠成纤维母细胞ＮＩＨ３Ｔ３及小鼠胸腺瘤细胞ＥＬ－４。经Ｇ４１８加压筛选,ＦＡＣＳ检测获得表达ＣＤ５９的阳性细胞克隆。补体杀伤实验结果表明：表达ＧＰＩ－型ＣＤ５９分子的ＮＩＨ３Ｔ３和ＥＬ－４细胞对人血清补体溶破的抵抗作用较空载体转染的非表达细胞明显增强。证实了用逆转录病毒载体可成功地将人ＣＤ５９基因导入异源细胞,使表达ＣＤ５９的异源细胞获得抑制人补体溶破的功能。本研究为探讨ＣＤ５９分子与细胞活化的关系及其信号转导机制建立了良好的细胞模型,并为进一步应用于异种器官移植,或对由于ＣＤ５９遗传缺损所致ＰＮＨ进行基因治疗奠定了基础。     

T细胞识别HLA—DRB1＊0901分子显示TCR BV基因取用的高 …

目的 分析ＤＲ９纯合细胞刺激下ＤＲ９阴性正常人ＴＣＲ ＢＶ基因片段的取用格局,确定和分离出ＤＲ９关联性疾病中的自身反应性Ｔ细胞史隆。方法 常规方法获取ＰＢＭＣ经ＰＣＲ－ＳＳＯ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ ＤＮＡ分型,确定ＤＲ、ＤＱ、ＤＰ等位基因后,进行单向混合淋巴细胞培养,抽提总ＲＮＡ并合成北一链ｃＤＮＡ,定量ＰＣＲ检测２２种ＴＣＲ ＢＶ 基因片段的取用格局。结果 Ｔ细胞对ＤＲ９分子的识别和扩增具有寡克隆笥