小儿巨细胞包涵体体病组织中病毒抗原检测及其临床意义的研究

目的 探讨儿小巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染组织病变及与临床的关系。方法 用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白＝过氧化物酶连结法（简称Ｓ－Ｐ法）,检测４４例小儿巨细胞包涵体病（ＣＩＤ）尸检腮腺、肾、肝组织石蜡切片组织中ＣＭＶ感染情况。结果 ＣＭＶ不仅存在于包涵体巨细胞,还广泛存在于无包涵体形成的巨细胞及开矿正常的细胞。腮腺、肺、直组织ＣＭＶ抗原阳性率分别为９１％、５９％、３７％、２７％。６２％的全身型ＣＩＤ合并     

巨细胞病毒性疾病的诊断

小儿巨细胞病毒性疾病是由巨细胞病毒（CMV）引起的疾病,简称CMV病。在作诊断时,必须了解我国小儿主要由母婴传播获得感染,多在婴幼儿期患病。以后病毒长期潜伏在宿主体内。由于年龄特点、个体差异和各脏器致敏性不同,小儿CMV病临床变化众多。总的来说,新生儿（包括胎儿）可以产生以中枢神经系统受损为主的疾病;婴儿感染后多数可有不同程度的肝胆受损,少数发生间质性肺炎;其他大年龄小儿,仅为无症状性CMV感染（有时CMV也可复制,但不引起疾病）。诊断CMV性疾病必须具备活动性CMV感染和宿主脏器病变临床表现这两个基本条件。由下列检测中任何一项阳性即为活动性CMV感染,如病毒分离阳性,病毒抗原pp65检测阳性,病毒核酸检测特异性CMV mRNA阳性,血清学检测CMVIgM阳性。由于婴儿期CMV病以肝胆和肺部疾病多见,除非直接从病变组织中检出活动性CMV感染标记物,才可确定是由CMV引起,若从血、尿等标本查得,就必须排除能够引起同样临床表现的其他病因和病原。     

小儿巨细胞包涵体病组织中病毒抗原检测及其临床意义的研究

目的　探讨小儿巨细胞病毒（ＣＭＶ） 感染组织病变及与临床的关系。方法　用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连结法（简称ＳＰ法）,检测４４ 例小儿巨细胞包涵体病（ＣＩＤ） 尸检腮腺、肺、肾、肝组织石蜡切片组织中ＣＭＶ感染情况。结果　ＣＭＶ不仅存在于包涵体巨细胞,还广泛存在于无包涵体形成的巨细胞及形态正常的细胞。腮腺、肺、肾、肝组织ＣＭＶ抗原阳性率分别为９１ ％ 、５９ ％ 、３７％ 、２７％ 。６２％ 的全身型ＣＩＤ合并多脏器受累。肺组织炎症反应级别和临床症状的轻重与肺ＣＭＶ感染的严重程度平行相关。结论　ＣＭＶ感染细胞广泛,有些感染细胞无形态学变化。全身型ＣＩＤ 易合并多脏器受累。ＣＭＶ 相关性肺炎以间质性肺炎为主,且ＣＭＶ 在其中可能起主导作用。     

巨细胞病毒和巨细胞病毒感染的诊断

巨细胞病毒感染（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）是由人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＣＭＶ）引起［１］,在我国相当普遍,且大多在幼年时期发生。据我们１９９５年至１９９７年连续３年对１６７８例就诊小儿筛查结果发...     

血尿患儿尿和肾组织中巨细胞病毒抗原检测及其临床意义

目的 探讨血尿患儿巨细胞病毒（CMV）感染状况。方法 应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白－地氧化物酶连结法,检测55例血抗CMV－IgM阳性的血尿患儿尿中巨细胞病毒早期抗原（CMV－EA）,并对其中6例行肾穿刺活检,进行肾组织中CMV－EA检测。结果 单纯性血尿组患儿尿CMV－EA阳性率为80％（32／40）。非单纯性血尿组患儿尿CMV－EA阳性率为20％（3／15）。对照组尿CMV－EA阳性率为19％（10／53）。单纯性血尿组尿MCV－EA阳性率明显高于非单纯性血尿组和对照组（P＜0．005,P＜0．05）。6例肾组织CMV－EA检测5例阳性（83％）。肾组织CMV感染细胞多为皮质区小管上皮细胞。结论 巨细胞病毒感染可能是单纯性血尿的主要病因。     

人巨细胞病毒对多向造血祖细胞的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）对多向造血祖细胞（CFU－Mix)的抑制作用及其机制。方法：采用造血祖 外半固体培养技术,研究HCVMVAD169株对脐血CFU－Mix集落生长的影响;用原位聚合酶链反应（IS－PCR）检测集落细胞中的HCVM DNA;用免疫组化方法检测集落细胞中HCV早期蛋白P52。结果：HCMVAD169在体外能明显抑制UF－Mix集落生长,集落数随病毒感染滴度的增高而减少,抑制幅度亦加大的趋势;经IS－PCR检测发现病毒感染线CFU－Mix集落细胞中有HCVMVDNA存在,免疫组化检测发现病毒感染缄CFU－Mix涨集落细胞中有HCMV P52的表棕,结论HCMV AD169可抑制 CFU－Mix的分化、增殖;HCMV AD169对CFU－Mix有直接损害作用。此作用可能 是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少,贫血的主要原因;并证实CFU－Mix集落细胞右存在HCMV蛋白的早期表达。     

人巨细胞病毒研究新进展

人巨细胞病毒(HCMV)为疱疹科β属的双链DNA病毒,是人类先天性感染的常见病原,在免疫功能低下的人群中可引起严重疾病。对HCMV致病机制、诊断方法、防治措施等的研究始终是国内外医学界关注的热点,近年来在这些方面也取得了许多有意义的新进展。本文就最近几年来在HCMV免疫逃避机制、与肿瘤关系、定量聚合酶链式反应(PCR)诊断技术、疫苗等方面取得的研究进展作一简要介绍。     

人巨细胞病毒感染的实验室检测与诊断

人巨细胞病毒(HCMV)是儿童先天性感染和出生后获得性感染的重要病原,可引起多种急、慢性感染和神经系统迟发后遗症。早期、准确诊断HCMV感染意义重大,但仅依靠临床表现难以对HCMV感染做出明确诊断。现简要介绍HCMV感染的实验室检测及诊断新技术。     

实时定量PCR技术与短时培养法检测尿样本HCMV的比较

目的建立实时定量PCR系统定量检测尿样本中HCMV并与短时培养快速诊断半定量法比较。方法根据HCMVul123基因保守区设计特异性引物和taqman探针,以GAPDH为内参照校准所检测样本的细胞数,建立实时定量PCR检测系统,定量检测132份尿标本中HCMV拷贝数与短时培养结果比较,并同时分析19例接受更昔洛韦治疗前后尿排毒量的变化。结果132份尿标本实时定量PCR结果:短时培养(-)组HCMVDNA为(83±155)拷贝/5×105细胞(n=16例),( )组为(571±231)拷贝/5×105细胞(n=26例),( )组为(792±303)拷贝/5×105细胞(n=35例),( )组为(1126±416)拷贝/5×105细胞(n=16例),( )组为(2201±1043)拷贝/5×105细胞(n=9例);19例38份更昔洛韦治疗前后尿样本中3例治疗前后短时培养结果无改变,而实时定量结果明显改变。结论实时定量PCR法比短时培养法更适于评价抗病毒疗效,而短时培养法判断HCMV是否为活动感染优于实时定量PCR法。     

流式细胞术检测PP65抗原血症在诊断巨细胞病毒感染上的应用

目的　探讨流式细胞技术检测PP6 5抗原血症对巨细胞病毒 (CMV)感染的诊断价值。方法　对 136例CMV感染患儿流式细胞技术检测血PP6 5抗原、实时荧光定量PCR(RFQ PCR)检测尿CMVDNA及血清ELISA法检测CMVIgM ,比较 3种方法的检测结果 ,并以 35例非CMV感染的患儿作为PP6 5检测的阴性对照。对 18例PP6 5抗原阳性患儿进行短期随访。结果　 136例CMV感染患儿从血单个核细胞 (MNC)中检出PP6 5抗原 118例 (118/ 136 ,阳性率 86 8% )。其中 5 3例患儿分别作MNC和多形核白细胞 (PMNL)检测 ,从MNC中检出PP6 5抗原 4 5例 (45 / 5 3,阳性率 84 9% ) ,PMNL中检出PP6 5抗原 4 3例 (43/ 5 3,阳性率 81 1% ) ,MNC与PMNL阳性率差异无统计学意义 (χ2 m=0 2 5 ,P >0 0 5 )。PP6 5与尿CMVDNA2种方法所检测的结果间差异无统计学意义 (χ2 m=1 78,P >0 0 5 ) ;但PP6 5与血CMVIgM检测结果间差异有统计学意义 (χ2 m=5 2 92 ,P <0 0 1)。PP6 5抗原水平与CMV感染的病情程度有明显相关性 ,全身性感染通常伴高水平抗原血症 ,单脏器感染抗原水平相对较低或阴性(χ2 =38 5 1,P <0 0 0 5 )。PP6 5在感染恢复期转为阴性或低水平 ,病情恶化时明显增高。结论　流式细胞技术检测PP6 5抗原血症是诊断活动性CMV感染的有效手段 ,量化结     

早期诊断和监测系统性红斑狼疮患儿活动性人类巨细胞病毒感染的研究

目的：了解系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE)患儿活动性人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV)感染的状况,并比较不同实验室检测方法的诊断价值,方法：实验组观察了２１例初诊为ＳＬＥ并接受免疫抑制治疗的患儿,对照组观察了２１例免疫力正常的骨科患儿,治疗前后应用间接免疫荧光法检测外周自多形核白细胞（polymorphonuclear leukocytes,PMNLs）中的ＨＣＭＶpp65抗原和p７２抗原,ＰＣＲ方法检测血清中的ＨＣＭＶＤＮＡ,ＥＬＩＳＡ方法检测血清中的ＨＣＭＶＩgM和ＩgG抗体,结果,实验组活动性ＨＣＭＶ感染发生率为２９％（６／２１）,４例发生于免疫抑制治疗后,另外２例发生免疫抑制治疗前,对照组无１例发生活动性感染,两组相比差异有显著性（Ｐ＝０．０２７）,实验组各项实验室检测的阳性率分别为:pp6524%(5/21),p7214%(3/21),DNA43%(9/21),IgM10%(2/21),IgG91%(19/21).实验组各项实验室检测方法诊断活动性ＨＣＭＶ感染的敏感性分别为：pp6583%(5/6),p7250%(3/6),NDA100%(6/6),IgM33%(2/6),IgG(双份血清抗体滴度呈≥４倍增高）５０％（３／６）,特异性ＰＣＲ方法为８０％（１２／１５）外,其余均为１００％（１５／１５）,结论：ＳＬＥ患儿活动性ＨＣＭＶ感染发生率较免疫力正常的儿童显著增高,免疫抑制治疗前后可发生,ＨＣＭＶpp65抗原血症检测是早期诊断和监测ＳＬＥ患儿活动性ＨＣＭＶ感染的较好指标。     

增强化学发光酶免疫法测定血清促甲状腺激素方法的建立及初步应用

目的进一步提高血清促甲状腺激素（ＴＳＨ）检测的敏感性。方法通过正交试验,并经方差分析,获得增强发光酶免疫检测法的最佳实验条件,将其与ＴＳＨ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）试剂盒相结合,建立ＴＳＨ的增强化学发光酶免疫检测法,并用此方法对５９例健康儿童和４９例甲状腺疾病患儿进行了血清ＴＳＨ的检测。结果该方法检测人血清ＴＳＨ的灵敏度为０．０１ｍＩＵ／Ｌ。５９例健康儿童ＴＳＨ的９０％正常值范围为０．７４～８．５３ｍＩＵ／Ｌ;１７例甲状腺功能亢进患儿ＴＳＨ值范围为０．０２～０．４０ｍＩＵ／Ｌ,无一例与正常值重叠;１６例甲状腺功能正常的弥漫性甲状腺肿患儿ＴＳＨ值均在正常范围上限;１６例甲状腺功能低下患儿的ＴＳＨ值均大于３０ｍＩＵ／Ｌ。结论该方法与ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ比较,有良好的相关性,可基本分清甲状腺功能亢进、低下、正常三种状态,适于临床甲状腺功能的评估。     

人巨细胞病毒感染对HEL细胞周期及Cdt1表达的影响

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）感染对人胚肺成纤维（HEL）细胞周期及复制允许因子Cdt1表达的影响,探讨HCMV感染可能的发病机制。方法：用血清饥饿法同步化HEL细胞于G0/G1期, 用HCMV感染同步化的HEL细胞作为感染组（n=106）,同时设模拟感染组为对照组（n=106）。于感染后12,24,48,72,96 h收获细胞。流式细胞术测细胞周期; RT-PCR法检测Cdt1 mRNA的表达水平。结果：①模拟感染组在感染后12 h,24 h 时处于G1期细胞比感染组明显增多,两组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。②两组Cdt1 mRNA表达水平在12 h,24 h和48 h时差异均有显著性（P﹤0.05）。模拟感染组Cdt1 mRNA表达水平的高峰出现在感染后12 h,而感染组的高峰则出现在感染后48 h。结论： ①HCMV感染影响了HEL细胞周期,使大部分细胞停滞在G1期。②HCMV感染使HEL细胞复制允许因子Cdt1 mRNA的表达水平迟滞。③HCMV感染可能通过影响复制允许因子Cdt1的生成而干扰宿主细胞周期,影响宿主细胞DNA合成,导致器官功能障碍。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：580-582］     

定量检测婴儿尿液巨细胞病毒DNA的临床意义

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测尿液巨细胞病毒(CMV)在儿科CMV感染诊断治疗中的意义.方法 应用FQ-PCR方法检测婴儿尿液CMV DNA量.结果 (1)280例疑似CMV感染儿有126例尿液中CMVDNA呈阳性,阳性率是45.0%,为症状性CMV感染儿;同年龄组的70例健康儿童尿液中CMV DNA阳性5例,阳性率是7.1%,为无症状性CMV感染儿.症状性感染儿尿液中CMVDNA拷贝数对数值(4.78±0.85)与无症状性感染儿(4.45±1.02)之间差异无显著性(P＞0.05).(2)90例症状性CMV感染儿应用更昔洛韦诱导治疗结束时尿液CMV DNA拷贝数对数值(3.74±0.58)较治疗前(4.64±0.90)明显减少(P＜0.01),临床症状改善.(3)45例症状性CMV感染儿在治疗后3个月CMVDNA拷贝数对数值(4.41±0.74)较治疗结束时(3.67±0.58)升高(P＜0.01).临床症状明显改善.结论 FQPCR方法检测婴儿尿液中CMVDNA量可以诊断CMV感染,但是不能区分CMV感染是症状性感染还是无症状性感染;应避免盲目反复应用更昔洛韦治疗CMV感染.     

婴儿期巨细胞病毒感染对生长发育影响的前瞻性研究

目的 了解北京地区婴儿期生后巨细胞病毒(cytomegalovlrus,CMV)感染状况及其对婴儿生长发育的影响.方法 2004年11月至2008年3月北京市4家医院联合进行了孕妇、新生儿和婴儿CMV感染的多中心队列研究.本文选取非先天性CMV感染婴儿210例,检测1岁龄婴儿血清CMV IgG.根据婴儿12周龄尿CMV DNA结果和1岁龄CMV IgG结果,将婴儿分为围产期CMV感染组、婴儿期生后CMV感染组和非感染组.收集母婴相关资料并检查婴儿1岁时的生长发育状况、智测、眼睛和听力,对3组婴儿的新生儿期状况、1岁龄的生长发育进行比较,对影响婴儿期生后CMV感染的危险因素进行了非条件Logistic多因素回归分析.结果 210例婴儿中围产期CMV感染42例、婴儿期生后CMV感染98例、非感染70例,婴儿期生后CMV感染率46.40%,结合前期先天性感染、围产期感染结果,婴儿1岁龄时CMV总感染率为66.85%.3组婴儿出生时与1岁龄时的临床表现、生长发育和总发育商比较差异均无统计学意义;要儿期生后CMV感染组中母乳喂养、混合喂养和人工喂养的比例分别为87.76%、9.18%和3.06%,非感染组为61.43%、21.43%和17.14%(χ~2=17.040,P<0.01).结论 我国婴儿CMV感染非常普遍,非母乳喂养是婴儿期生后CMV感染的重要保护因素.婴儿期生后CMV感染对婴儿的健康和发育没有见到明显的不良影响.