福建省志贺菌PFGE分型研究

目的了解福建省志贺菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型情况,描述基因群的流行及分布特征,探讨优势血清群的变迁规律。方法收集2005-2010年志贺菌96株,分离自临床患者。选择NotⅠ进行酶切,H9812作为脉冲场凝胶分子量标准。采用脉冲场凝胶电泳技术分析电泳酶切指纹图谱,运用BioNumer-ics软件进行聚类分析。结果按照100%的相似度可将34株福氏志贺菌酶切图谱分为27种PFGE型别;将62株宋内志贺菌酶切图谱分为43种PFGE型别。根据TENOVER原则,福氏志贺菌有2个优势基因群G1-G2,宋内志贺菌有4个优势基因群GI-GIV。优势基因群集中分布于7～10月,其他PFGE型别分布比较分散,无明显时间和地区的聚集性。结论福建省志贺菌分子分型呈现多样性,宋内和F4c的某些基因群可能逐渐演变为福建省优势且稳定的志贺菌流行菌株。     

天津地区志贺菌志贺肠毒素基因分布与脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 了解天津地区志贺菌流行株的志贺肠毒素基因分布和PFGE分子分型情况.方法 采用PCR方法检测天津地区2005-2007年分离的62株志贺菌编码志贺肠毒素的基因(set1A、set1B、sen),并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型和聚类分析.结果 62株志贺菌中福氏志贺菌占58.06%,其中福氏2b...     

志贺菌临床分离株菌群分布与福氏志贺菌分子分型

目的了解新疆食源性疾病监测中志贺菌临床分离菌株的菌群分布及福氏志贺菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型的特征。方法通过对80株志贺菌临床分离株的生化和血清学鉴定,掌握其菌群和菌型的分布,同时用PFGE和Bio Numerics 6.6软件对福氏志贺菌的DNA指纹图谱进行分子分型和聚类分析。结果 2013年-2015年食源性疾病监测分离到的80株志贺菌中以福氏志贺菌占比最高(83.75%),其次为宋内志贺菌(12.5%)、痢疾志贺菌(2.5%)。福氏志贺菌为优势菌群,其菌型则以福氏2a型占比最高(38.81%),其次为福氏2b型(20.90%)、福氏1b(14.93%),不同年间菌型的分布有所不同。结论福氏志贺菌2a型、2b型为新疆食源性监测中志贺菌的优势菌型,福氏志贺菌PFGE带型呈多样性,同一种血清型的PFGE带型分布呈集中和分散2种形式,同一血清型呈现不同带型,其遗传相关性与表型并不一致。     

山东省2011-2014年志贺氏菌分子分型及耐药性分析

  目的  通过对山东省2011-2014年分离的志贺氏菌（Shigella）进行血清、毒力基因、分子分型和药敏等分析,了解山东省志贺氏菌的特性及流行趋势。  方法  用玻片凝集法进行血清分型,PCR方法扩增相关毒力基因,用脉冲场凝胶电泳技术进行分子分型,采用微量肉汤稀释法测定菌株抗生素敏感性。  结果  44株志贺氏菌主要为福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）（54.55%）和宋内志贺氏菌（Shigella sonnei）（43.18%）。ipaH、set1、sen、ial毒力基因携带率分别为100%、43.18%、56.82%、50.00%。经脉冲场凝胶电泳分型（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）,福氏志贺氏菌被分为18种带型,且总体相似度偏低;宋内志贺氏菌被分为14种带型,且89.47%的菌株相似度在90%以上。44株志贺氏菌对15种抗生素中的14种均存在不同程度的耐药。93.18%的菌株为多重耐药菌株。  结论  山东省志贺氏菌以福氏和宋内血清群为主,毒力基因携带率高,有聚类分布出现,耐药严重,应加强对志贺氏菌菌型、溯源和耐药性的监测。     

广东省福氏志贺菌F4c的病原学特征分析

目的了解广东省新型福氏志贺菌F4c菌株的流行与病原学特征。方法对2000—2004年广东省痢疾监测收集的227株志贺菌进行血清学分型,并对其中46株福氏志贺菌F4c菌株以及2004、2007年2起痢疾暴发监测收集的5株和2005年散发病例收集的2株F4c菌株（共53株）进行生化、血清学试验、药敏试验和PFGE分型;并用气相色谱仪测定其中6株的脂肪酸成分。结果 2000—2004年广东省痢疾监测发现：227株志贺菌除20株为宋内氏志贺菌外,其余均为福氏志贺菌,其中F2a的菌株数最多,有55株（占菌株总数的24.2%）,其比例从2000年的44.0%下降至2004年8.6%,F4c有46株,占20.3%,从2000年未检出F4c菌株,至2003年F4c占菌株总数的比例上升至71.7%（38/53）。53株F4c的生化结果符合志贺菌特征,血清学均为福氏多价＋,IV型因子＋,7,8群血清＋;53株F4c菌株对头孢曲松、诺氟沙星、头孢噻肟和环丙沙星4种药物敏感,敏感率分别为100.0%、92.9%、92.9%、71.4%,对四环素、复方新诺明、萘啶酸、氯霉素和氨苄西林均产生耐药,除氨苄西林的耐药率为91.7%外,其余均达到100.0%。PFGE对43株F4c进行分子分型,共分为21个不同的型别;6株志贺菌F4c的主要脂肪酸成分为12∶0酸、14∶0酸、Sum In Feature2、Sum In Feature 3、16∶0酸、17∶0 cyclo、Sum In Feature 8和19∶0 cyclo w8c等8种脂肪酸。结论福氏志贺菌4c菌株用PFGE进行分子分型在整体上表现出较大的遗传多样性;福氏志贺菌4c在广东省的流行出现上升趋势,并在部分地区暴发疫情,提示F4c菌型可能逐步演变成为一类稳定的福氏志贺菌菌株。     

深圳市志贺菌脉冲场电泳分子分型分析

目的 分析深圳市2001-2006年分离志贺菌菌株之间的相关性,初步建立志贺菌的脉冲场电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型监测网络.方法 55株志贺菌基因组DNA经Xba Ⅰ酶切,通过PFGE获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析.结果 55株志贺菌被分为41种PFGE图谱,聚类分析显示32株细菌谱型属于同一个群,其余菌株谱型差异较大.结论 深圳地区存在遗传紧密相关的志贺菌流行克隆,也存在遗传不相关克隆.PFGE分子分型监测网络的建立,有助于细菌性痢疾的主动监测、暴发调查和传染源追踪.     

北京市2010年细菌性痢疾病原学分析

目的掌握北京市2010年细菌性痢疾的血清学分布以及脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分子分型特征,为流行病学研究提供合理依据。方法从形态特征、生化反应、血清分型、PFGE分子分型方面对北京市6个区的肠道多病原监测点分离到的195株志贺菌进行了系统鉴定和病原学分析。结果 195株志贺菌包括福氏志贺菌33株(16.92%)、宋内志贺菌162株(83.08%);福氏志贺菌血清型以F2a为主。7、8、9三个月志贺菌的发病率最高。选择其中55株宋内志贺菌进行脉冲场凝胶电泳分析,结果显示55株菌可以分为27个带型,其中以J16X01.BJ0016带型(11株)和J16X01.BJ0011(7株)为主。结论北京市2010年6个监测区县分离到的志贺菌包括福氏和宋内2种血清群,以宋内志贺菌为优势血清群,福氏志贺菌以F2a血清型为主。8月份为志贺菌高发季节。J16X01.BJ0016为宋内志贺菌PFGE优势型别。     

REP、RAPD和PFGE方法在志贺菌分子分型中的应用评价

目的探索一种简便、准确、快速的分子分型方法用于志贺菌传染源的追溯和调查。方法采用细菌基因组重复序列(REP)、随机扩增多态性分析(RAPD)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分别对62株志贺菌进行分子分型,根据分型结果比较3种方法的优点与不足。结果 REP仅分出A、B 2个型,RAPD可分出A、B、C、D、E、F 6个型,53株福氏志贺菌共分5个PFGE带型,9株宋内志贺菌为1个型,包括3个亚型。结论 REP用于相似度较高的菌株分辨效果较差,不适用于区域内菌株的分型;PFGE分型准确度高,但操作繁琐、时间较长;RAPD分型虽与PFGE分型有所差异,但分辨效果较好,且操作简便、价格低廉。RAPD可用于细菌性痢疾暴发事件的分子流行病学调查。     

345株福氏志贺菌血清型分布与PFGE分子分型

目的了解引起细菌性痢疾的福氏志贺菌PFGE分子分型特征,为新疆细菌性痢疾的预防和控制提供科学依据。方法对2013年-2016年细菌性腹泻病例粪便样本中分离出的345株福氏志贺菌,经生化和血清学鉴定,确认血清型,经NotI酶切,对占比前3位优势菌型的DNA指纹图谱进行聚类分析。结果 345株福氏志贺菌中,血清型以F2a型占比最高(47.83%),其次为F2b型(14.49%)、F1b型(10.72%)。按照相似度100%,可将PFGE图谱分为225种型别,带型呈现多样性,其中163株F2a型呈现97种带型,有4种优势带型,49株F2b型有41种带型,37株F1b型PFGE有31种带型。结论福氏志贺菌因血清型复杂,PFGE带型呈现多样性,带型分布呈个别带型集中,其他带型菌株间并存相近的多种变异,较为分散。带型间的差异与福氏志贺菌抗原结构复杂,血清型多,菌株来源地区、生存条件和环境的不同有关。     

南通市1997—2011年志贺菌病原学监测

目的了解南通市志贺菌菌型变迁趋势及对临床常用抗生素的敏感性,为防治菌痢提供科学依据。方法型别鉴定采用血清玻片凝集、生化反应及肉汤稀释法;药敏试验采用纸片琼脂扩散法。结果 15年间共上送志贺菌97株,1997—2004年44株志贺菌均为B群,分布于10个亚型,以福氏2a(29.5%)所占比例最高,其次为福氏1c(18.2%);2009—2011年53株志贺菌中,A群1株;B群29株,分布于3个亚型;D群23株,以宋内氏Ⅰ相(35.8%)为主。对头孢类、喹诺酮类等临床常用抗生素的高敏感率分别为64.6%和67.7%;期间共报告两起菌痢暴发疫情,均按突发公共卫生事件处理,暴发菌型为福氏5b和福氏2b。结论南通市志贺菌流行菌型仍以福氏为主,菌型变化不大。     

荧光定量PCR和DNA分子分型在菌痢暴发中的应用

[目的]探讨实时荧光PCR快速检测和脉冲肠凝胶电泳（PFGE）分型方法在菌痢暴发流行病学研究中的应用。[方法]采用实时荧光PCR检测技术对一起菌痢患者的24份肛拭增菌液进行快速检测，同时从患者肛拭中分离的5株福氏4型志贺氏菌采用脉冲场凝脉电泳的方法进行了分子分型。[结果]在这一起菌痢疫情中，实时荧光PCR快速检测24份肛拭增菌液．5份阳性，并从PCR阳性的增菌液中分离到5株福氏4型志贺氏菌，而且5株志贺氏菌的脉冲场凝胶（PFGE）图谱显示DNA条带完全一致，具有高度的同源性。[结论]实时荧光定量PCR技术特异性强，灵敏度高，能在采样后数小时内检测到病原菌的DNA，达到快速诊断的目的。PFGE具有分型能力强，重复性好等特点，能直观地判断致病菌的亲缘关系，及时查明暴发流行的传染源从而有效控制疫情的蔓延，在志贺氏菌的分子流行病学研究中具有重要作用。     

无锡市志贺氏菌血清型分布的研究

[目的]为掌握无锡市志贺氏菌血清型分布的情况，为我市卫生防病工作提供科学的依据。[方法]按何晓青主编的卫生防疫细菌检验相关章节和细菌性痢疾诊断标准及处理原则对2005年无锡市腹泻病门诊分离的66株志贺氏菌进行血清学分型。[结果]66株志贺氏菌进行血清学分型，主要以B群为主43株。占总数65．15％；D群20株，占总数30．30％；A群2株，占总数3．03％；C群1株，占总数1．52％。在最多在B群中分型，4型23株，占B群54．49％，2型12株，占B群27．91％，1型8株，占B群18．60％。[结论]我市痢疾病人中优势流行菌型有所改变，主要以福氏志贺氏菌4型和D群，而且有变异的菌株。     

安徽省 2012 年小肠结肠炎耶尔森菌分离株特征分析

目的对安徽省2012年小肠结肠炎耶尔森菌分离株进行PFGE分型,分析菌株相关性。方法对22株菌株通过血清凝集实验和生物分型了解菌株生物学特征,采用PFGE对菌株进行分子分型,并分析PFGE与血清型和生物型的关系。结果 22株小肠结肠炎耶尔森菌分为11个生物型别,K6GN11C30021为优势PFGE型。结论 PFGE与血清型和生物型有一定相关性,提示PFGE可用于分析爆发流行和常规监测,追踪传染源。     

浙江省引起暴发的宋内志贺菌的耐药性及分子分型研究(2006)

目的：了解引起浙江省菌痢暴发的宋内志贺菌耐药性及分子分型情况，为流行病学溯源及合理有效使用抗生素提供依据。方法：77株志贺菌均按GB16002-1995标准进行鉴定分型，并采用Kirby-Bauer法检测其对14种抗生素的敏感性，并采用WHONET5．3软件，对菌株的耐药性进行分析。同时，通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对菌株进行分子分型，通过同源性分析以确定菌株间的亲缘关系。结果：77株宋内志贺菌对氨苄西林、利福平的耐药率最高，达100．0％，其次是红霉素98．7％；对诺氟沙星、环丙沙星最敏感，其敏感性高达98．7％。脉冲场凝胶电泳分型77株试验菌株共分为3个PFGE基因型，1型16株占20．8％，庆元、苍南菌痢暴发可能源于同一宋内志贺菌克隆系；2型34株占44．2％，常山、龙湾菌痢暴发可能源于同一宋内志贺菌克隆系；3型27株，均分离自江山，占35．0％。结论：宋内志贺菌是2006年引起浙江省菌痢暴发的主要菌型，多重耐药现象严重，基因型间差异较小，抗生素型与基因型间无明确关系。     

乌鲁木齐市儿童志贺菌感染及耐药性分析

目的 了解新疆乌鲁木齐市2003-2009年儿童志贺菌属感染情况及耐药性,掌握细菌性痢疾的流行与分布.方法 收集2003-2009年3所医院收治的腹泻儿童的粪便标本,采用全自动细菌鉴定仪鉴定分离菌株,血清凝集法进行分型,采用抗生素纸片扩散法(K-B)检测菌株对抗生素的耐药性,采用世界耐药监测网软件(WHONET5.4)进行统计分析.结果 乌鲁木齐市儿童中志贺菌属主要分布在0～3岁,占54.06%;时间以5～10月居多,占85%:志贺菌属的菌型分布以B群福氏志贺菌为主,其次为D群宋内志贺菌,分别为276,27株;4群志贺菌对青霉素类抗生素耐药率为50%～100%,对三代头孢菌素和喹诺酮类耐药率为0～62.6%,对亚胺培南100%敏感.结论 乌鲁木齐市儿童菌痢流行型为福氏志贺菌;菌群耐药性存在明显地区差别.     

2005～2007年郑州市腹泻患者志贺菌监测结果分析

[目的]了解郑州市志贺菌的菌型分布,为防控菌痢流行提供可靠数据。[方法]按照《全国细菌性痢疾监测工作方案》对郑州市市辖医院20052007年腹泻患者粪便标本进行志贺菌分离培养、生化鉴定和血清学分型以及药敏试验。[结果]20052007年郑州市共检测1 321份标本,检出志贺菌116株,检出率为8.78%。志贺菌分布在福氏和宋內氏2个群,未检出A群和C群。不同年份间菌株均以B群志贺菌为主,分别为39、37和21株,分别占当年阳性菌株的92.86%、77.08%、80.77%;福氏志贺菌以F4c（47株）为主,占48.45%,其次是F1a（21株）、F2a（17株）,分别占21.65%和17.53%;志贺菌对萘啶酸和四环素100.00%耐药。[结论]各年优势菌群均为福氏志贺菌,F4c为优势菌型,多种菌型并存,临床治疗要根据耐药情况合理使用抗生素。     

脉冲场凝胶电泳分型技术应用于宋内志贺菌溯源分析

目的：分析四川省成都市2006年崇州、大邑两地相继暴发的宋内志贺菌食源性感染疫情中病人分离菌株之间,及其环境分离菌株之间的分子分型特征和遗传相关性,推断传染来源。方法：收集两地疫情暴发期间分离的宋内志贺菌株,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对菌株进行分子分型,所得结果用BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析。结果：共测试56株菌,用XbaⅠ酶切后PFGE可分为14个带型。其中崇州菌株38株,有26株带型完全相同（包括1株环境株）;有37株菌分布于5种带型,其相似性在97%以上。大邑菌株18株,有10株带型完全相同;其余8株有7种带型,相似性较差。两地之间菌株分子分型差异明显,其相似性小于92%。结论：确证崇州、大邑两地确有宋内志贺菌食源性感染疫情的暴发,但两地之间无交叉传染关系;提示崇州的宋内志贺菌疫情是由食物凉拌菜引起;提示大邑本地有较高的宋内志贺菌流行水平和复杂的传染源。     

河南省2011-2014年D群宋内志贺菌病原学监测与分子流行病学研究

目的 分析2011-2014年河南省腹泻患者粪便中分离的216株D群宋内志贺菌毒力基因携带情况、耐药谱及代表性菌株的PFGE指纹图谱特征,为志贺菌病的病原学监测及暴发溯源提供基线数据与方法学参考。方法 采集腹泻患者粪便样本,SS平板分离培养18~24 h,采用克氏双糖铁(KIA)/动力-吲哚-尿素(MIU)与API20E系统进行生化鉴定,利用志贺菌分型血清进行玻片凝集;使用热裂解法制备DNA模板,采用多重PCR鉴定毒力基因种类。根据国际PulseNet细菌性传染病分子分型监测网络公布的宋内志贺菌PFGE分型技术方案进行PFGE分子分型与聚类分析。结果 216株D群宋内志贺菌中,98株为宋内Ⅰ型,118株为宋内Ⅱ型;各菌株均携带不同的毒力因子编码基因,包括SHET-1B、SHET-2、ial、ipaH,具有4种毒力基因组合类型;216株宋内志贺菌均为耐2种以上抗生素的多重耐药菌株,其中耐2~4种为34株(15.7%),耐5~8种为147株(68.1%),耐9~10种为24株(11.1%),耐11种为7株(3.2%),耐13种为4株(1.9%)。100株宋内志贺菌经XbaⅠ酶切与PFGE后共分为31种不同带型,相似度为68.6%~100.0%,各带型包含菌株数为1~13株不等。结论 2011-2014年河南省宋内志贺菌均携带致病性毒力基因,菌株耐药现象比较严重,其PFGE指纹图谱呈现多样性的同时又具有较显著的优势带型特点,部分带型与其对应的耐药谱具有一定的关联性与相同的聚集性。     

艾伯特埃希菌PFGE分子分型及其数据库的建立

目的建立艾伯特埃希菌PFGE分子分型方法,分析不同来源艾伯特埃希菌间的同源关系,并建立其PFGE分型数据库。方法参考非O157大肠埃希菌PFGE分型方法,对从自贡、泸县地区分离的63株艾伯特埃希菌和1株艾伯特埃希菌参考菌株LMG20976进行PFGE分析,利用Bio Numerics 7.5软件分析PFGE图谱并建立数据库,并对分型结果与样本来源、类型、ST型、intimin亚型等进行关联性分析。结果 64株艾伯特埃希菌分型效果明显,被分为46种PFGE带型,分别命名为EASX01001~EASX01046,相似度为55%~100%,包含9种克隆群(≥2种带型形成克隆群),同种带型超过2株的带型共有8种。结论非O157大肠埃希菌PFGE分型方法适用于艾伯特埃希菌分型研究,比MLST技术具有更高的分辨能力,通过图谱分析发现艾伯特埃希菌具有遗传多样性的特点。同时,建立的数据库为深入了解艾伯特埃希菌的分子流行病学特征提供科学依据。     

一起菌痢疫情实验室检测分析

目的查明某校食物中毒事件的原因,为有效控制和处置疫情提供技术支持。方法采集患者粪便、肛拭子、呕吐物;厨师粪便、肛拭子;留样食物和水样进行致病菌检测,对分离的可疑致病菌进行鉴定、药敏试验、PCR毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型比较溯源。结果从患者样品中分离出13株宋内志贺菌;经PFGE分子分型证明13株菌为同一带型;所有菌株均带有ipa H基因,11株携带ial基因,3株携带Sen基因,均不带有Set1基因;分离株对磺胺耐药率最高为61.54%。结论结合实验室结果和流行病学调查,可证实宋内志贺菌是引起这次菌痢疫情的病原菌。