Nogo-66受体在大鼠神经组织中的表达

目的观察Nogo-66受体(NgR)蛋白在脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经的表达.方法采用免疫荧光组织化学-激光共聚焦显微镜观察9只正常SD大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经中NgR蛋白表达.结果9只大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经切片中NgR蛋白均表达阳性,荧光染色位于神经元及其突起.9只大鼠坐骨神经切片中NgR蛋白均表达阴性.结论在大鼠中枢神经系统神经元中NgR广泛分布,而在周围神经坐骨神经则无NgR表达,提示NgR的阳性表达与中枢神经系统再生能力低下密切相关.     

大鼠坐骨神经损伤后嘌呤P 2Y 4受体表达变化的实验探究

目的 探讨大鼠坐骨神经受损是否会影响嘌呤P2Y4受体表现,对三磷酸腺苷/三磷酸鸟苷(ATP/UTP)对周围受损神经起到的积极作用进行研究.方法 取36只SD大鼠作为研究对象,将36只大鼠随机均分为正常组、对照组以及观察组.对观察组大鼠行一侧坐骨神经切断修复模型,分别在术后1d、1、2、3、4周后处死大鼠,取出部分坐骨神经,脊髓以及神经节.对照组大鼠仅做切口,不进行其他手术;正常组为正常参照对象,同时检测RT-PCR(半定量逆转录-聚合酶链式反应)产物的序列.结果 正常组大鼠与对照组大鼠脊髓与坐骨神经均发现P2Y4mRNA表达[正常组脊髓:(0.215±0.032),坐骨神经:(0.643±0.011);对照组脊髓:(0.221±0.027),坐骨神经:(0.653±0.012)];2组对比差异无统计学意义.观察组大鼠坐骨神经切断后,吻合口远端P2Y4mRNA表达呈逐渐变强现象.结论 观察组大鼠坐骨神经切断后,吻合口远端P2Y4mRNA表达呈逐渐变强现象,近端呈逐渐减弱现象.     

髓鞘相关蛋白Nogo-A在纯化细胞核中的表达

目的：检测Nogo-A蛋白在纯化后的大鼠脊髓和小脑细胞核中的表达。方法：通过差速离心法得到大鼠脊髓和小脑样本的各亚细胞成分,利用非离子性去污剂NP-40纯化细胞核组分,采用Western blot方法检验核纯度并检测Nogo-A在各亚细胞成分中的表达。结果：纯化的细胞核抽提物中检测到特异的Nogo-A反应条带。结论：Nogo-A在纯化的细胞核中仍有明确表达,进一步证明了Nogo-A蛋白在中枢神经元的细胞核中有定位,并提示Nogo-A很可能以全长形式入核。     

大鼠坐骨神经损伤后嘌呤P2Y4受体表达变化的实验研究

目的：观察嘌呤P2Y4受体在大鼠坐骨神经损伤后脊髓、背根神经节及坐骨神经中表达的变化规律,初步探讨三磷酸腺苷/三磷酸鸟苷（ATP/UTP）在周围神经再生中的作用机理。方法：42只SD大鼠随机分为正常组（6只）,对照组（6只）和实验组（30只）,实验组大鼠制成一侧坐骨神经切断修复模型,分别于术后1d,1、2、3、4周切取坐骨神经近远断端各5mm、腰膨大部位脊髓以及对应损伤侧背根神经节,以β-肌动蛋白作为内参对照,应用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法观察P2Y4 mRNA表达的变化规律。对照组大鼠只做切口不做手术,正常组大鼠取材作为正常对照,并对RT-PCR产物进行序列测定。结果：在正常组及对照组脊髓及坐骨神经有P2Y4 mRNA的表达,背根神经节则无表达。坐骨神经切断后,吻合口远端P2Y4 mRNA的表达逐渐增加,近端则逐渐降低;脊髓内表达2周达高峰,4周恢复正常;在背根神经节,术后1、2、3周出现弱阳性,4周时表达消失。结论：ATP/UTP通过P2Y4受体参与了周围神经损伤后的病理生理改变,在周围神经损伤后的修复过程中起一定作用。     

坐骨神经切断后脊髓前角GDNF mRNA的表达变化及其意义

目的：探讨大鼠坐骨神经切断后,脊髓前角胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）mRNA的表达变化及其意义。方法：切断SD大鼠两侧坐骨神经,建立脊髓前角运动神经元损伤模型,应用半定量RT-PCR方法,观察大鼠L3-L5脊髓前角运动神经元GDNFmRNA的表达。结果：坐骨神经切断前,GDNF mRNA在脊髓前角少量表达,坐骨神经切断后1天表达减少20%,4天减少40%,7天减少70%,14天后减少80%。结论：脊髓前角运动神经元GDNF mRNA表达减少,是“细胞体-轴突-靶器官”轴质流中断所致,为应用外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。     

脊髓损伤后肾上腺髓质素表达水平的变化

目的：观察肾上腺髓质素在大鼠正常及损伤脊髓组织中mRNA及蛋白表达的变化。方法：采用原位组织化学杂交、放免、计算机图象分析技术，对肾上腺髓质素在正常及损伤脊髓组织中mRNA及蛋白的表达，进行组织定位和定量分析。结果：在正常大鼠脊髓组织中即有大量肾上腺髓质素mRNA及蛋白表达，在损伤后30min表达量增加，8h达高峰，阳性细胞主要分布于灰质前角。结论：鼠脊髓损伤后肾上腺髓质素在脊髓中的含量有明显变化，提示其可能在继发损伤期中发挥了重要作用。     

脊髓脑源性神经营养因子表达水平评估大鼠坐骨神经缺损修复程度

目的研究应用脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)表达程度评价大鼠坐骨神经缺损修复情况。方法取大鼠30只,随机分成正常组、自体神经组和硅胶管组,每组10只。自体神经组将剪断的10 mm神经缝合于原处,硅胶管组用10 mm医用硅胶管桥接神经缺损,正常组不手术。饲养4个月,于脊髓腰膨大处取材,切片,免疫荧光染色,荧光显微镜下观察。结果各组脊髓前角内均有BDNF表达,表现为点状红色荧光,均匀弥漫分布,胶质细胞内及周围均有分布,未染出神经元。光密度正常组>自体神经组>硅胶管组。结论应用脊髓脑源性神经营养因子表达程度可以评价周围神经损伤的修复情况。     

经皮电刺激促进坐骨神经损伤大鼠脊髓GAP—43mRNA的表达

目的：观察经皮电刺激对坐骨神经损伤大鼠的脊髓中神经生长相关蛋白－43（GAP－43）mRNA表达的影响。方法：60只Wistar大鼠制成坐骨神经损伤模型,经皮电刺激治疗后,用原位杂交技术观察坐骨神经相应脊髓节段GAP－43mRNA的表达。结果：电刺激组第1d阳性细胞数增多,7d达高峰,14d后明显减少,28天后基本未见阳性细胞存在;模型组第1d至第7d持续阳性细胞数增多,14d略减少,28d后仍可见阳性细胞存在。结论：电刺激能缩短GAP－43mRNA表达时间,有利于突触重建。     

滋阴固本方对急性EAE模型大鼠脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达的影响

目的 :观察滋阴固本方对急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脊髓损伤后轴突生长抑制因子(Nogo-A)蛋白表达的影响。方法:雌性Wistar大鼠72只,按随机数字表法分为6组,建立EAE模型。观察各组大鼠体质量、饮食量和神经行为学评分、脊髓组织的病理变化、脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达情况。结果:各组大鼠的行为学改变与模型组比较,各中药组发病率降低,临床症状改善、体质量下降(P0.01);神经功能评分中药低剂量组与高、中剂量组比较差异有统计学意义(P0.01)。各组大鼠Nogo-A免疫组织化学结果:模型组可见Nogo-A蛋白的表达呈强阳性,与之比较,激素组与中药高、中剂量Nogo-A蛋白的表达相对减少(P0.01),中药高、中剂量与低剂量比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:滋阴固本方在急性期对Nogo-A蛋白的表达有明显抑制作用,使受损的神经系统得到良好的修复。     

层粘连蛋白和纤连蛋白在大鼠视神经和坐骨神经的表达

目的 观察层粘连蛋白(LN)和纤连蛋白(FN)在大鼠不同发育时期视神经及坐骨神经的表达，探讨视神经与坐骨神经细胞外基质的差异。方法 50只SD大鼠按出生后天数分成5组，取视神经和坐骨神经，免疫组织化学方法和计算机图像分析技术，测定大鼠视神经和坐骨神经LN和FN表达。结果 LN和FN在坐骨神经表达水平明显高于视神经，出生后7d组明显高于其他年龄组。结论 大鼠视神经和坐骨神经LN和FN表达差异有显著性。     

BDNF在脱细胞同种异体神经移植物修复神经缺损后不同组织中的表达

目的探讨脱细胞同种异体神经移植物(ANA)修复大鼠坐骨神经缺损后促神经再生的分子作用机制。方法将36只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组,自体移植组,桥接2,4,8,12周组,每组6只,分别观测患侧L4脊髓及胫前肌内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA表达。结果ANA桥接大鼠坐骨神经缺损后2周患侧脊髓内BDNF表达增高,4周时达高峰,持续到8周,然后逐渐降低,12周时仍显著高于正常对照组,与自体移植组相比无差异。而患侧胫前肌最初4周内逐渐降低,然后逐渐升高,12周时达到正常水平,与自体移植组相比无差异。BDNF mRNA的表达基本与蛋白表达一致。结论ANA具有良好的组织相容性,也许可替代自体神经修复大鼠坐骨神经长距离缺损,此作用可能与上调脊髓BDNF蛋白及mRNA表达有关。     

活血解毒方对糖尿病大鼠脊髓和坐骨神经中降钙素基因相关肽及其调控途径的影响

目的观察活血解毒方对糖尿病大鼠脊髓及坐骨神经中降钙素基因相关肽(CGRP)及其调控途径的影响,探讨其防治糖尿病神经病变的机制。方法雄性SD大鼠分为正常组、模型组、甲钴胺组、活血解毒方高和低剂量组。链脲佐菌素(STZ)腹腔注射65 mg/kg造模,给药16周后,定量PCR法检测脊髓内CGRP不同亚型mRNA水平,免疫组化法检测坐骨神经中CGRP、钙调蛋白(CaM)的表达,等离子体发射光谱法检测坐骨神经中Ca2+含量。结果与正常组比较,模型组大鼠脊髓内CGRPα及CGRPβmRNA水平降低,坐骨神经内CGRP、CaM蛋白水平降低。与模型组比较,活血解毒方组大鼠脊髓内CGRPα及CGRPβmRNA水平升高,坐骨神经内CGRP、CaM蛋白水平升高。结论活血解毒方可能是通过增加CaM蛋白的表达,促进CGRP水平升高,从而防治糖尿病神经病变。     

神经损伤与再生中GAP-43mRNA表达和蛋白合成的实验研究

目的：研究周围神经损伤与再生过程中生长相关蛋白（Growth-associated protein,GAP-43)mRNA表达和蛋白质合成的变化规律。方法：建立大鼠坐骨神经中段钳夹损伤模型，用原位杂交和免疫组化技术观察大鼠腰髓和背根神经节的GAP－43mRNA表达和蛋白质合成变化。结果：大鼠坐骨神经损伤后，腰髓腹角运动神经元和感觉神经元GAP－43mRNA表达和蛋白质合成增强。结论：周围神经损伤与再生中GAP-43mRNA表达显著增强，神经再生完成后表达减弱，表明GAP－43在神经再生过程中起重要作用。     

大鼠坐骨神经损伤后脑源性神经营养因子对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43 表达的影响

目的探讨大鼠坐骨神经损伤后内源性脑源性神经营养因子(BDNF)对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43表达的调节。方法大鼠坐骨神经压榨损伤后,腹腔注射BDNF抗体中和内源性BDNF,对照组注射生理盐水,动物存活7d或14d,用Western blot与RT-PCR观察GAP-43在脊髓腰骶膨大部前角的表达。结果与对照组相比,注射BDNF抗体后坐骨神经损伤侧脊髓前角内GAP-43蛋白与其mRNA的表达明显下降,上述改变在统计学上均有显著意义(P<0.01)。结论大鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF可能参与脊髓前角内GAP-43表达的调节。     

β1,4-GalT I在大鼠坐骨神经损伤后脊髓和背根神经节中的表达

目的:观察β1,4-GalTImRNA在坐骨神经损伤后相应节段脊髓和背根神经节中的表达变化。方法:采用real-timePCR方法,分析β1,4-GalTImRNA在大鼠坐骨神经损伤后相应脊髓和背根神经节中的表达变化。运用原位杂交检测β1,4-GalTI在脊髓和背根神经节中的定位情况。结果:Real-timePCR显示,与正常脊髓和背根神经节相比,β1,4-GalTI在坐骨神经损伤后发生表达变化。原位杂交结果显示β1,4-GalTI在正常脊髓中的表达较弱,主要表达于脊髓灰质中,而损伤后在灰质和白质中均可见有大量的阳性信号。β1,4-GalTI在背根神经节中则主要定位于神经元。结论:本实验发现β1,4-GalTI在正常脊髓和背根神经节中有表达,并在坐骨神经损伤后发生表达变化。提示β1,4-GalTI在周围神经损伤后再生和退变过程中可能发挥一定的作用。     

电针对脊髓损伤大鼠 Nogo/NgR 信号通路相关因子基因表达的影响

目的观察电针对脊髓损伤大鼠Nogo/NgR信号通路相关因子基因表达变化,探讨电针治疗脊髓损伤的可能作用机制。方法大鼠随机分为模型组、电针组、阻断剂组、电针+阻断剂组、假手术组,用改良Allen’s撞击法制备T10脊髓损伤模型,分别于治疗后1、7、14 d对各组大鼠进行BBB功能评分;在7、14 d于损伤处提取脊髓组织,以蛋白印迹法(Western blot)测定各组大鼠脊髓组织中Nogo-A、NgR、LINGO-1蛋白的表达变化,实时荧光定量PCR测定Nogo-A、NgR、LINGO-1 mRNA的表达变化。结果脊髓损伤后,造模大鼠1 d后BBB评分均为0分;治疗7、14 d后,各治疗组BBB评分均明显高于模型组(P0.05),且电针+阻断剂组优于电针组、阻断剂组(P0.05)。与假手术组比较,同时间点模型组各基因表达均明显提高(P0.05);与模型组比较,各治疗组基因表达明显下降(P0.05);电针+阻断剂阻组与电针组比较,同时间点LINGO-1基因表达有显著差异(P0.05)。结论 Nogo/NgR信号通路在脊髓损伤后神经的再生与修复过程中起着关键作用,电针通过抑制Nogo/NgR信号通路而对脊髓损伤大鼠起治疗作用。     

He-Ne激光照射对大鼠神经损伤后脊髓CGRP表达的影响

目的 研究１０mW氦氖（Ｈe-Ne)激光照射对大鼠坐骨损伤神经后脊髓ＣＧＲＰ表达的影响。方法 ９６只ＳＤ大鼠制成坐骨神经损伤模型。Ｈe-Ne激光照射损伤的坐骨神龙,免疫组化方法观察脊髓内ＣＧＲＰ的变化。结果 神经损伤后１d脊髓内ＣＧＲＰ表达即增加;载wk及４wk时激光照射组ＣＧＲＰ的表达高于对照组,阳性表达主要存在于脊髓灰质内前角运动神经元和脊根感觉纤维;８wk时ＣＧＲＰ仍保持较高水平的表达,二组无明显差异。结论 １０mW-He-Ne激光照射大鼠损伤的坐骨神经可引起脊髓内神经元ＣＧＲＰ表达的变化,有促进完成神经再生的作用。     

半导体激光照射对大鼠神经损伤后脊髓GAP-43表达的影响

目的　研究 1 5m W半导体激光照射对大鼠损伤坐骨神经后脊髓中神经生长相关蛋白 (growth associated pro-tein,GAP-4 3 )表达的影响 .方法　 96只雄性 SD大鼠制成坐骨神经损伤模型 ,1 5m W半导体激光照射神经损伤部位 ,免疫组化方法观察脊髓内 GAP-4 3表达的变化 .结果　 1 wk内激光照射组和对照组无明显差异 .第 2周和第 4周时激光照射组脊髓内 GAP-4 3表达明显高于对照组 .第 8周时激光照射组较对照组脊髓内 GAP-4 3表达稍低 .结论　 1 5m W半导体激光照射可引起损伤神经后大鼠脊髓中 GAP-4 3表达的变化 ,有促进完成神经再生的作用 .     

兔视神经损伤后Nogo受体在视神经及视网膜的表达变化

目的研究免视神经损伤后Nogo受体在视神经及视网膜的表达变化。方法采用兔球后视神经钳夹伤模型，动物分别于损伤后3，7，14d处死。免疫组织化学染色观察Nogo受体在视神经及视网膜的表达变化。结果视神经损伤后3d，Nogo表达上调，视神经和视网膜均可见Nogo-A表达，其吸光度值分别为（45．3±1．3）×10^-3，（10．7±1．6）×10^-3，至损伤后7d，阳性反应达最高峰，吸光度值分别为（138．3±2．1）×10^-3，（29．4±3．3）×10^-3，至损伤后14d，视神经阳性反应下降，视网膜未见明显阳性表达。结论视神经损伤后，视神经及视网膜均可见Nogo-A阳性表达，且阳性表达随时间后延呈上升趋势，说明Nogo-A在抑制视．神经损伤后轴突再生的机制中可能起重要作用.     

小鼠坐骨神经S180肉瘤侵害后脊髓GAP-43表达的实验研究

目的研究S180肉瘤对小鼠坐骨神经受损害后脊髓生长相关蛋白(GAP-43)表达的影响.方法采用小鼠后肢肌肉内坐骨神经走行处接种S180肉瘤细胞悬液的方法,建立坐骨神经受肿瘤损害的动物模型,分别在坐骨神经损害后4、7、14、21天和28天取出小鼠相应节段的脊髓,免疫组织化学法观察生长相关蛋白GAP-43的表达,并对实验结果进行图像分析.以相同时间段的坐骨神经外伤损伤组为对照.结果实验组和对照组相应节段脊髓灰质细胞均出现GAP-43表达,7天以内两组无差别.对照组于伤后7天达高峰,实验组于神经损害后14天达高峰,与各自时间段比差异有显著性(P<0.01).结论S180肉瘤损害小鼠坐骨神经后可引起脊髓灰质细胞GAP-43表达.