电损伤骨骼肌细胞微区Ca^2＋的实验研究

目的观察电损伤骨骼肌细胞微区Ca2＋变化,探讨它在电损伤中的作用。方法新西兰大白兔36只,随机均分为实验组和对照组,选取其右后肢胫骨前肌为研究对象。以电压600V,电击时间9ms,累积电击3次,造成单束骨骼肌电损伤。分别于处理后2h、8h、24h、48h、72h、5d每组随机抽取3只兔,留取肌组织标本。EPMA法检测肌细胞微区Ca^2＋含量。结果实验组细胞浆Ca^2＋快速升高,肌浆网Ca2＋降低,而线粒体Ca^2＋含量8h才明显上升,三微区Ca^2＋含量至5d仍未恢复正常水平,与对照组比较差异有统计学意义。实验组细胞浆和肌浆网Ca^2＋呈反向性变化,细胞浆和线粒体则呈同向性变化。结论电击后骨骼肌细胞三微区Ca^2＋发生再分布,并存在长时间的细胞钙超载,它可能是电损伤骨骼肌进行性坏死的重要原因。     

心肌缺血再灌注亚细胞钙变化电镜细胞化学研究

应用Ｃａ（２＋）细胞化学探针－焦锑酸钾技术，结合ｘ线电子探针微区分析研究心肌缺血再灌注肌浆网、线粒体等亚细胞Ｃａ（２＋）原位分布变化。结果表明，正常细胞Ｃａ（＠＋）主要位于肌浆网内、细胞膜及细胞核内，胞浆及线粒体内无Ｃａ（２＋）颗粒。缺血３０ｍｉｎ，Ｃａ（２＋）分布变化不明显。再灌注３０ｍｉｎ及６０ｍｉｎ肌浆网及肌膜Ｃａ（２＋）明显减少，同时胞浆及线粒体内出现大量Ｃａ（２＋）沉淀颗粒。Ｘ线电子探针微区分析证实心肌亚细胞高电子密度沉淀颗粒主要成分为Ｃａ（２＋）。本研究直接证实心肌肌浆网Ｃａ（２＋）聚集能力障碍及线粒体Ｃａ（２＋）沉积增多是心肌缺血再灌注损伤的重要原因。     

静力负荷对大鼠骨骼肌线粒体及肌浆网功能的影响

目的：了解静力负荷作用下对骨骼肌线粒体及肌浆网功能的影响。方法：选择16只健康雄性Wistar大鼠,随机分为对照组、负荷组,每组8只。将大鼠麻醉后游离其左下肢比目鱼肌远端,负荷组施加100 g负荷,持续时间为90 min。在4℃条件下,9 000 r/min离心20 min分离比目鱼肌线粒体;40 000 r/min离心15 min,分离肌浆网,分别检测骨骼肌线粒体及肌浆网Ca2＋浓度、Ca2＋-ATPase活性和丙二醛（malondialchehyche,MDA）水平。结果：负荷组与对照组比较,线粒体Ca2＋浓度增加111.11%,Ca2＋-ATPase活力下降25.88%,MDA含量增加188.57%,差异均有显著性（P〈0.01）;肌浆网Ca2＋浓度下降75.89%,Ca2＋-ATPase活力下降61.49%,MDA含量增加122.86%,差异均有显著性（P〈0.01）;结论：静力负荷可致大鼠骨骼肌线粒体钙超载和肌浆网摄钙能力下降,肌浆网、线粒体膜Ca2＋-ATPase活力下降、MDA增多。     

家兔未成熟心肌缺血再灌注肌浆网摄钙功能的初步研究

目的 :从亚细胞水平研究未成熟心肌缺血 -再灌注损伤中肌浆网 (SarcoplasmicReticulum ,SR)摄钙功能。方法 :36只家兔随机分为 4组 ,进行离体心灌注。组Ⅰ :幼兔 ,单纯灌注 30min ;组Ⅱ :幼兔 ,停搏 6 0min ,再灌注 30min。组Ⅲ、组Ⅳ为成兔 ,处理分别同组Ⅰ、组Ⅱ ,进行对照。测定各组心功能、冠状动脉流出液血气 ,单细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i) ,肌浆网Ca2 + -ATPase活性 ,肌浆网45Ca2 + 摄取。结果 :缺血 -再灌注后 ,成熟与未成熟心肌均发生钙超载 (P >0 .0 5 )。未成熟心肌肌浆网Ca2 + ATPase活性 ,肌浆网45Ca2 + 摄取恢复率 ,明显高于成熟心肌 (P <0 .0 5 )。结论 :未成熟心肌缺血 -再灌注损伤钙超载机制不同于成熟心肌 ,肌浆网钙摄取功能 ,在钙超载损伤中不起主要作用。     

坎离颗粒对心衰大鼠膈肌张力及细胞肌浆网钙转运的影响

目的:探讨中药坎离颗粒对腹主动脉缩窄致慢性心衰大鼠膈肌细胞肌浆网钙转运及膈肌张力的影响。方法:采用腹主动脉缩窄法制备Wistar大鼠左室舒张功能不全模型。分为假手术组、模型组、坎离颗粒组、培哚普利组。坎离颗粒组、培哚普利组分别于造模后1周予坎离颗粒和培哚普利,其余两组予双蒸水,共干预32周。干预结束后处死各组大鼠并取膈肌,离体状态下测定大鼠膈肌抗疲劳能力及张力恢复程度,Fura-2法检测各组大鼠膈肌细胞肌浆网钙摄取和释放功能,定磷法测定肌浆网钙泵(SERCA2a)的活性。结果:1腹主动脉缩窄32周心衰大鼠的膈肌抗疲劳能力下降、张力恢复程度降低;2受损膈肌细胞肌浆网(SR)Ca2+-ATP酶活性下降,钙摄取速率降低,钙释放速率有下降趋势;3以中药验方坎离颗粒干预,可显著增加膈肌抗疲劳能力和张力恢复程度,提高膈肌细胞SR的Ca2+-ATP酶活性,增加SR钙摄取速率。结论:腹主动脉缩窄所致舒张性心衰大鼠存在骨骼肌张力减退,可能与肌细胞SR的Ca2+-ATP酶活性减弱所致SR钙转运障碍有关;坎离颗粒干预可逆转这种病理改变。     

骨骼肌胞浆Ca2+稳态与肌疾病

骨骼肌胞浆内Ca~(2+)稳态是Ca~(2+)转运系统对Ca~(2+)释放和Ca~(2+)摄取保持动态平衡的结果。本文将从细胞和分子水平 讨论肌浆网(SR)钙转运系统的分子基础以及某些肌疾病的发病机制。1 胞浆Ca~(2+)的来源 骨骼肌兴奋-收缩偶联过程中有两个因素,即肌膜的去极化和胞浆内大量的Ca~(2+)快速聚集。前者通过二氢吡啶受     

渐进性咬合紊乱大鼠咬肌线粒体Ca2+超载及超微结构变化的研究

目的 研究渐进性咬合紊乱对大鼠咬肌线粒体Ca2+含量及超微结构的影响. 方法 8周龄雌性SD大鼠50只,实验组(40只)以推第3磨牙向远中移动的方法建立渐进性咬合紊乱,其中10只仅建立咬合紊乱,20只给予含硝苯地平的二甲基亚砜(DMSO)溶液,10只仅给予DMSO溶液;另外10只为操作对照.各组分别于实验开始后1周和4周取材,观察咬肌超微结构,测定咬肌线粒体Ca2+含量. 结果 各时间点的咬合紊乱组及咬合紊乱给予DMSO组双侧咬肌均出现超微结构紊乱及线粒体Ca2+含量的明显增加(P<0.001);而咬合紊乱给予硝苯地平组与操作对照组之间无明显差异(P>0.05),超微结构未观察到明显改变. 结论 渐进性咬合紊乱可导致大鼠咬肌运动性损伤,表现为线粒体Ca2+超载及超微结构异常.     

偏侧咀嚼对大鼠咬肌线粒体的影响

目的 探讨偏侧咀嚼对大鼠咬肌线粒体的影响,进一步研究偏侧咀嚼致咬肌功能紊乱的机制。方法 用电镜观察线粒体形态和数目的变化并计算线粒体损伤指数;用原子分光光度法检测Ca2+含量;用分光光度法检测线粒体渗透性转换孔道（MPTP）的开放程度。结果 实验组拔牙侧线粒体损伤指数评分均低于实验组非拔牙侧,并且明显低于对照组（P＜0.01）,其中,4周组评分最低。除8周组以外实验组拔牙侧Ca2+含量均升高,且明显高于对照组（P＜0.05）。其中,4周组Ca2+含量升高最为明显。实验组拔牙侧线粒体渗透性转换孔道的开放程度均大于实验组非拔牙侧和对照组（P＜0.05）,6周组达到最高。线粒体渗透性转换孔的开放程度与线粒体损伤程度呈负线性相关（r=-0.74,P＜0.05）。结论 高含量Ca2+激活了线粒体通透性转换孔开放的相关信号通路,引起线粒体损伤和细胞凋亡,这可能是偏侧咀嚼致咬肌功能紊乱的发生机制之一。     

静力负荷对大鼠骨骼肌超微结构的影响

目的：了解不同强度、不同时间静态负荷对骨骼肌细胞超微结构的影响。方法：96只雄性Wistar大鼠,随机分为12组,3个对照组,9个实验组。麻醉后游离左下肢比目鱼肌远端,分别施加负荷0 g、25 g、50 g和100 g,观察30 min、60 min、90 min后比目鱼肌细胞超微结构变化。结果：随着负荷加大和持续时间的延长,骨骼肌超微结构出现由线粒体数目增多、肌浆网扩张等轻微改变至肌节排列紊乱、肌丝溶解、线粒体呈髓鞘和空泡样等严重变化。结论：长时间静态负荷作用于骨骼肌,可引起骨骼肌超微结构的改变。     

心肌缺血再灌注损伤肌浆网钙泵活性变化电镜酶细胞化学研究

目的研究心肌缺血再灌注损伤肌浆网、肌膜钙泵(Ca2+-ATPase)功能变化.方法采用大鼠离体心脏模型应用电镜酶细胞化学及生化技术,研究缺血再灌注心肌肌浆网、细胞膜原位钙泵分布及活性变化.结果心肌细胞钙泵以高电子密度颗粒主要分布于肌浆网、肌膜等膜结构,缺血30min钙泵反应产物显著减少,再灌注30min及60min酶进一步减少或缺失.生化钙泵活性测定显示心肌缺血30min时为(0.048±0.010)μmol/mg·h     

兔酒精性股骨头缺血性坏死模型构建及超微结构观察

目的观察长期大量摄入酒精后兔股骨头骨细胞超微结构变化,探讨酒精诱发股骨头缺血性坏死组织病理学机制。方法雄性新西兰大白兔白酒（酒精含量56%）8 ml/（kg·d）连续灌胃6周,观察兔股骨头骨细胞超微结构变化。结果透射电镜显示兔股骨头缺血性坏死骨细胞线粒体肿胀,嵴结构模糊,粗面内质网上多聚核糖体脱颗粒,骨细胞内可见脂滴出现。结论长期大量的酒精摄入会引起兔大体形态及兔股骨头骨细胞超微结构的改变。     

大鼠肢体缺血再灌流损伤骨胳肌超微结构的变化

观察了大鼠肢体缺血再灌流过程中骨胳肌超微结构变化。5h缺血骨胳肌糖原颗粒减少,线粒体肿胀、基质减少,嵴断裂,肌浆网扩张。5 h缺血后再灌流30min及12h骨胳肌线粒体高度扩张、膜断裂,出现致密颗粒,肌原纤维失去正常结构。结果表明较长时间缺血后再灌流加重组织损伤。     

骨复生对激素性股骨头缺血坏死家兔TXA2-PGI2系统的影响

目的：探讨激素性股骨头缺血坏死（简称ANFH）中前列环素（简称PGI2）、血栓烷（简称TXA2）的变化及骨复生对其影响及作用。方法：选用40只有兔造模，成功后分为骨复生组（A）、马氏骨片组（B）、模型组（C）和空白对照组（D）。并在造后与中药治疗后观测动物组织形态学及血浆PGI2、TXA2各项指标变化。结果：（1）激素且动物组织形态学检查示骨坏死发生严重。2）中药治疗组动物组织形态学检查及指标检测示骨坏死发生较轻。结论：（1）激素造成血栓前状态，产生血管内凝血（简称IC）而导致ANFH发生。（2）骨复生可恢复TXA2－PGI2系统平衡。     

颞下颌关节盘前移位的透射电镜研究

目的 :观察颞下颌关节盘前移位动物模型和临床标本的超微结构改变 ,了解关节盘前移位的病理变化过程。方法 :手术使兔颞下颌关节盘前移位 ,在术后 2 ,4 ,8,12周应用透射电镜观察实验动物关节盘的病理性改变同时在临床上取颞下颌关节盘前移位的标本进行相同研究。结果 :在关节盘前移位早期的标本中 ,关节盘胶原纤维排列紊乱 ,纤维断裂 ,软骨细胞粗面内质网扩张、线粒体肿胀。后期出现软骨细胞的坏死 ,细胞胞浆内有扩张的粗面内质网、大量微丝、空泡 ,关节盘胶原纤维排列紊乱、并出现弹力纤维。结论 :颞下颌关节盘前移位早期出现关节盘的退行性改变 ,后期关节组织病变与修复同时存在。     

血府逐瘀汤对用血瘀证兔血清损伤的血管内皮细胞的形态学影响

[目的]从形态学角度观察血府逐瘀汤对用血瘀证兔血清损伤的内皮细胞的保护作用。[方法]将正常组、血瘀证组、正常加中药组和血瘀证加中药组兔血清分别加入同批培养的政党中外文 动脉内皮细胞中,用光镜和电镜观察其形态结构的变化。[结果]光镜检查表明血瘀证组内皮细胞收缩变形,细胞间隙增大,胞浆中有暗色颗粒;血瘀证加中药组细胞间隙增大不明显,电镜观察发现,与正常组和正常加中药组相比,血瘀证组细胞内饮液泡明显增多,粗面内质网数目减少并有扩张,线粒体细小,嵴不清,细胞表面仅有少量细长的微绒毛,末端膨大融合;而血瘀证加中药组粗面内制裁网数目较少但不扩张,细胞表面微绒毛未见融合。[结论]血瘀证组兔血清严重损伤体外培养的正常血管内皮细胞,血府逐瘀汤对用血瘀证兔血清损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。     

糖尿病性肝病的病理研究

应用光镜、电镜及特殊染色方法对２１例糖尿病性肝病的肝穿、手术切除和尸检肝组织进行病理研究。结果：光镜主要变化为核内糖原空洞、脂肪变性、脂肪性肉芽肿及间质纤维组织增生；电镜变化为肝细胞核内染色质呈絮状并中心空虚，胞质有脂肪滴、糖原颗粒增多。线粒体减少、模糊。粗面内质网减少、脱粒。滑央内质网和溶酶体增多、间隙胶元纤维增生。３例进行治疗前后对比，治疗后病变减轻或消失，提示糖悄病性肝病的病理变化是可逆的。     

肌肉损伤磁共振成像的病理基础研究

目的：探讨肌肉损伤后磁共振成像（ＭＲＩ）的信号变化与病理改变之间的关系。方法采用１４只灰兔建立肌肉损伤的动物模型,损伤后即刻、１、３、５、７、１０、１４、１８、２２、２６、３２、３８、４４天分别行ＭＲＩ检查,损伤后即刻、１、３、５、７、１４、２１、３５天分别处死１只兔子并进行光镜和电镜。结果ＭＲＩ表现,肌肉损伤后即刻加权像（Ｔ１ＷＩ）表现为大片境界模糊稍高信号影响,７天信号强度达到高峰,但境界清楚     

糖尿病大鼠心肌超微结构及钙离子调控蛋白基因表达的改变

目的:研究糖尿病心肌细胞的结构变化及Ca2 调控蛋白基因表达的改变.方法:经大鼠尾静脉注射四氧嘧啶(40 mg/kg ) 复制糖尿病大鼠模型,对照组注射生理盐水,分别于2、4、6周处死,取心尖部组织行普通光镜及透射电镜观察大鼠心肌结构的改变.应用逆转录-聚合酶反应技术以肌动蛋白为内参,测定钙离子调控蛋白基因表达的改变.结果:4周、6周大鼠的心脏/体重比显著大于正常对照组.电镜下糖尿病组大鼠心肌细胞的亚细胞器出现重构,表现为肌原纤维含量明显减少,排列紊乱,内质网扩张,线粒体变性等改变.6周的糖尿病组大鼠心肌肌浆网Ca2 -ATP酶的 mRNA表达无明显变化,但磷酸受纳蛋白的mRNA表达显著高于对照组,1,4,5三磷酸肌醇受体2型,兰尼碱受体2型的mRNA表达显著低于对照组.结论:糖尿病大鼠心肌细胞的亚细胞器出现重构,肌浆网磷酸受纳蛋白的mRNA表达增加,RyR2、IP3R2的mRNA表达下降.