粉防己碱抑制心肌细胞〔Ca~(2 )〕_i的瞬间变化

用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ做荧光指示剂，测量粉防己碱对电刺激诱导的〔Ｃａ２＋〕ｉ瞬间变化的作用。粉防己碱３—１００μＭ浓度和时间依赖性地抑制电刺激诱导〔Ｃａ２＋〕ｉ的瞬间变化幅度，而没有影响静息〔Ｃａ２＋〕ｉ水平。该浓度的粉防己碱抑制ＫＣｌ除极化所致的细胞〔Ｃａ２＋〕ｉ增加。高浓度的粉防己碱（６０—１００μＭ）明显延长〔Ｃａ２＋〕ｉ衰减的时间，也减少Ｃａｆ－ｆｅｉｎｅ诱导〔Ｃａ２＋〕ｉ瞬间变化幅度。结果提示粉防己碱除了抑制Ｃａ２＋内流外，在高浓度也影响心肌细胞肌质网Ｃａ２＋的摄取或释放     

钙指示剂Fura－2／AM对血小板功能及细胞内游离钙测定结果的影响

本实验结果表明，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载家兔洗脱血小板，当Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的浓度低于２μｍｏｌ／Ｌ时，３μｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ花生四稀酸（ＡＡ）诱导的血小板聚集（透光度增加：７２．５±７．８４％）及释放反应（ＡＴＰ释放：１．１２±０．２１μｍｏｌ／４×１０５血小板）不受影响，但随Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度增加，ＡＡ的聚集和释放反应明显减弱（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度对单一血小板内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的静息水平无影响，但Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为２μｍｏｌ／Ｌ时，ＡＡ诱导的［Ｃａ２＋］ｉ动员最明显。另外，标本中血小板的数量也明显影响［Ｃａ２＋］ｉ的测定结果（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。提示，Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度过高，很可能导致过多的钙离子被螯合，降低了血小板的功能，同时，细胞内游离钙与Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的结合过程存在着饱和性。     

粉防己碱抑制心肌细胞[Ca^2＋]i的瞬间变化

用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ做荧光指示剂，测量粉防己碱对电刺激诱导的〔Ｃａ＾２＋〕ｉ瞬间变化的作用。粉防己碱３－１００μＭ浓度和时间依赖性地抑制电刺激诱导〔Ｃａ＾２＋〕ｉ的瞬间变化幅度，而没有影响静息〔Ｃａ＾２＋〕ｉ水平。该浓度的粉防己碱抑制ＫＣｌ除极化所致的细胞〔Ｃａ＾２＋〕ｉ增加。高浓度的粉防己碱（６０￣１００μＭ）明显延长〔Ｃａ＾２＋〕ｉ衰减的时间，也减少Ｃａｆｆｅｉｎｅ诱导〔Ｃａ＾２＋〕ｉ瞬间变化     

胞内Ca^2＋,Na^＋和ATP的稳定性介导NMDA诱导兴奋保护作用

目的;研究Ｎ－甲基－Ｄ－天冬氨酸（ＮＭＤＡ）诱导大鼠小脑颗凿神经元兴奋毒性保护作用的机制。方法：分别用Ｃａ＾２＋和Ｎａ＾＋敏感的染料Ｆｕｒａ－２／ＡＭ和ＳＢＦＩ／ＡＭ测定胞内Ｃａ＾２＋和Ｂａ＾＋浓度「（Ｃａ＾２＋）ｉ,（Ｎａ＾＋）ｉ」,并用反向高效液相法测定胞内三磷酸腺苷（ＡＴＰ）的含量。结果：（１）在ＮＭＤＡ预处理组与非处理组,谷氨酸均迅速触发胞内Ｃａ＾２＋反应高峰,两者无显著性差异。而后在ＮＭ     

高钾离子引起PC12细胞内游离Ca2+浓度升高的机制

目的：分析高钾离子（Ｋ＾＋）引起ＰＣ１２细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）升高的可能机制。方法：利用ＭｉｒａＣａｌ Ｉｍｉａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ检测［Ｃａ＾２＋］ｉ，Ｃａ＾２＋荧光探针为Ｆｕｒａ－２／ＡＭ。结果：（１）ＫＣ１浓度为３０￣１００ｍｍｏｌ／Ｌ时，可剂量依赖性地诱导ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ升高；（２）在细胞外无Ｃａ＾２＋时，高Ｋ＾＋对ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ无影响；（３）Ｌ－     

应用Fura-2/AM测定兔视网膜细胞内游离钙的方法

目的：建立适宜条件下，用荧光指示剂Ｆｕｒａ－２测定乳兔视网膜细胞内游离钙（简称［Ｃａ２＋］ｉ）的方法。方法：用酶解制备视网膜细胞悬液。Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载进行荧光测定。结果：经０．０５％胰蛋白酶消化１０分钟，可使细胞存活率达９０％以上。在３７℃条件下与Ｆｕｒａ－２／ＡＭ温育４０分钟，于３０分钟内测定为最佳条件。结论：静息状态下（［Ｃａ２＋］ｉ）水平为（２２３±２７）ｎｍｏｌ／Ｌ，其值在文献报道范围内。高钾去极化，在Ｋ＋为２５ｍｍｏｌ／Ｌ和５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，分别使（［Ｃａ２＋］ｉ）增加了５９％和１４８％，由此证明视网膜细胞悬液制备和测定方法是可行的。     

缺氧缺血后脑细胞内Ca^2＋含量变化及药物干预

了解缺氧缺血后新生离脑细胞胞浆及线粒体Ｃａ＾２＋浓度的动态变化及ＭＫ－８０１，硫酸镁，苯巴比妥钠干预对胞浆钙超载的影响。结扎左颈总动脉并吸入８％氧气２ｈ制成缺氧缺血模型，用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ法及原子吸收火焰法测定。缺氧缺血后１ｈ胞浆及线粒体Ｃａ＾２＋浓度均明显升高，２４ｈ胞浆Ｃａ＾２＋浓度恢复正常，线粒体Ｃａ＾２＋含量进一步升高，４８及７２ｈ两均降至正常；预防性应用ＭＫ－８０１及硫酸镁可抑制缺氧     

Fas抗原在超抗原诱导T细胞凋亡中的作用

目的：研究Ｆａｓ抗原介导的死亡效应在超抗原诱导Ｔ细胞凋亡中的作用。方法：ＳＥＡ诱导从人外周血建立的短期ＳＥＡ反应Ｔ细胞系凋亡,１．８％琼脂凝胶ＤＮＡ电泳观察凋亡的特征条带;ＦＣＭ检测Ｆａｓ,ＦａｓＬ的表达量变化,Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光批示剂检测胞浆「Ｃａ＾２＋」ｉ的变化。     

荧光试剂法测定小鼠受精卵胞质游离Ca^2＋

目的 通过测定小鼠卵细胞受精过程中胞质游离Ｃａ＾２＋浓度的变化，研究其变化规律及在胚胎早期发育中的作用。 方法 采用Ｃａ＾２＋特导荧光试剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ和ＡＲ／ＣＭ／ＭＩＣ型单细胞阳离子测定系统，测定了休止于第二次成熟分裂中期（ＭⅡ）的小鼠卵母细胞受精过程中的胞质游离Ｃａ＾２＋浓度。 结果 小鼠卵受精过程中胞质游离Ｃａ＾２＋浓度发生波动或振荡。 结论 这对胚胎发育的早期研究有一定意义。     

aFGF对肺腺癌AGZY—83A细胞株TPK,PKC活性及Ca^2＋浓度的影响

目的：观察ａＦＧＦ与细胞膜上特异受体结合后引起的细胞内信号转导途径，探讨ａＦＧＦ导致细胞增殖的机理。方法：以不同浓度的ａＦＧＦ处理ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞，利用［γ－３２Ｐ］ＡＴＰ掺入外源性底物的方法测定受体的酪氨酸蛋白激酶活性（ＴＰＫ）及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性；用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为荧光指示剂测定［Ｃａ２＋］ｉ。结果：随着ａＦＧＦ浓度增加，ＴＰＫ及ＰＫＣ活性随之升高。当ａＦＧＦ浓度为１．１２μｇ／ｍｌ时ａＦＧＦ处理组的ＴＰＫ是对照组的４倍；膜ＰＫＣ活性也是对照组的４倍，胞浆ＰＫＣ活性是对照组的１．７５倍。［Ｃａ２＋］ｉ是对照组的３倍。结论：该细胞株中ａＦＧＦ受体具有ＴＰＫ活性。ＴＰＫ激活后进一步促进蛋白质和酶磷酸化，而使ＰＫＣ活性及［Ｃａ２＋］ｉ升高，即ＰＫＣ和Ｃａ２＋是ＴＰＫ的下游信号分子，进一步促进ｃ－ｆｏｓ、ｊｕｎ基因表达增加，导致细胞增殖     

aFGF和Genistein对AGZY—83A细胞内PKC活性及[Ca^2＋]i的影响

目的：探讨ａＦＧＦ及ＴＰＫ抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞内ＰＫＣ活性游离Ｃａ＾２＋浓度的影响。方法：用不同浓度的ａＦＧＦ和Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ诱导ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞,（γ－Ｐ＾３２）－ＡＴＰ标记的Ｈｉｓｔｏｎｅ Ⅰ为底物,液体闪烁测定ＰＫＣ活性;Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载荧光光度法测定细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度。结果：ａＦＧＦ诱导后,细胞内ＰＫＣ活性及Ｃａ＾２＋浓度升高,且与ａＦＧＦ呈剂     

Fura－2荧光测定中药有效成分对神经细胞内Ca~（2＋）浓度的变化

将中药有效成分黄芩甙、豆腐果甙、金丝桃甙、熊果酸与大白鼠神经细胞一起进行温育，应用新型钙离子荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定神经细胞内游离Ｃａ２＋浓度变化。结果表明，上述中药有效成分均能影响胞内Ｃａ２＋释放和胞外Ｃａ２＋内流。从而有效地保护神经元免受兴奋性毒性作用     

荧光试剂法测定小鼠受精卵胞质游离Ca~(2 )

目的通过测定小鼠卵细胞受精过程中胞质游离Ｃａ２＋浓度的变化，研究其变化规律及在胚胎早期发育中的作用。方法采用Ｃａ２＋特导荧光试剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ和ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ型单细胞阳离子测定系统，测定了休止于第二次成熟分裂中期（ＭⅡ）的小鼠卵母细胞受精过程中的胞质游离Ｃａ２＋浓度。结果小鼠卵受精过程中胞质游离Ｃａ２＋浓度发生波动或振荡。结论这对胚胎发育的早期研究有一定意义     

Fura－2荧光测定中药有效成分对神经细胞内Ca2＋浓度的变化

将中药有效成分黄芩甙、豆腐果甙、金丝桃甙、熊果酸与大白鼠神经细胞一起进行温育,应用新型钙离子荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定神经细胞内游离Ｃａ２＋浓度变化。结果表明,上述中药有效成分均能影响胞内Ｃａ２＋释放和胞外Ｃａ２＋内流。从而有效地保护神经元免受兴奋     

血管紧张系Ⅱ受体基因敲除对跨膜钙内流的作用

目的 观察血管紧张素Ⅱ受体亚型（ＡＴ１ａ）基因敲除对跨膜钙内流的影响。方法 培养ＡＴ１ａ基因敲除及其野生型对照小鼠的主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）和应用荧光倒置显微镜及钙荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ动态观测ＶＳＭＣ钙离子（Ｃａ＾２＋）ｉ变化。结果 在血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激下钙内流显著增加,ＡＴ１ａ敲除组ＶＳＭＣ钙净增值为（２０４±２２）ｎｍｏｌ／Ｌ,基础（Ｃａ＾２＋）ｉ为（１０８±９）ｎｍ     

电针对家兔高血压及心肌细胞游离钙镁浓度的影响

利用ＡＲ－ＣＭ－ＣＯＭ阳离子测定系统和离子探针Ｆｕｒａ－２－ＡＭ及Ｆｕｒａｐｔｒａ－ＡＭ，观察了电针在治疗家兔实验性高血压时心肌细胞内游离钙离子２和游离镁离子２（「Ｍｇ＾２＋」）的变化情况，静脉滴注去甲肾上腺素（ＮＥ）造在家兔实验性高血压，心肌细胞（「Ｃａ＾２＋」），随血压升高而增大，「Ｍｇ＾２＋」，则降低，「Ｃａ＾２＋」／「Ｍｇ＾２＋」，比值升高，电针两侧“足三里”穴位后，治疗有兔血压明显降低，     

反复呼吸道感染患儿T细胞增殖及胞浆游离钙浓度的变化

目的：探讨反复呼吸道感染（ＲＲＴＩ）患儿Ｔ细胞增殖（ＴＬＰ）及其胞浆游离钙浓度（〔Ｃａ２＋〕ｉ）的关系。方法：采用ＭＴＴ比色法测定３０例ＲＲＴＩ患儿及３１名健康儿童ＴＬＰ，使用Ｆｕｒａ－２／Ａｍ做荧光探剂，双波长荧光分光光度仪测定Ｔ细胞活化及未活化时〔Ｃａ２＋〕ｉ。结果：ＲＲＴＩ患儿ＴＬＰ明显低于对照组，Ｔ细胞未活化时两组间〔Ｃａ２＋〕ｉ的差异无统计学意义，当Ｔ细胞活化时ＲＲＴＩ患儿〔Ｃａ２＋〕ｉ明显低于对照组。结论：ＲＲＴＩ患儿ＴＬＰ降低，Ｔ细胞活化过程中〔Ｃａ２＋〕ｉ的动员存在一定程度异常，这是其ＴＬＰ降低的原因之一。     

成年大鼠脑细胞内钙的测定

目的：探讨成年大鼠脑细胞分离及其细胞内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的测定。方法：低浓度胰蛋白酶消化及机械吹打等方法分离脑细胞，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ２＋－敏感的荧光指示剂，应用荧光分光光度计测定［Ｃａ２＋］ｉ。结果：分离的脑细胞存活率在９５％以上，在细胞外Ｃａ２＋１ｍｍｏｌ／Ｌ的情况下［Ｃａ２＋］ｉ为（２７０±３５）ｎｍｏｌ／Ｌ，高钾使［Ｃａ２＋］ｉ急剧增加。结论：本方法分离成年大鼠脑细胞简单、可靠，且能准确反映［Ｃａ２＋］ｉ的变化。     

呼吸中枢M受体亚型与细胞内钙

目的探讨呼吸中枢Ｍ受体亚型与细胞内钙的关系。方法采用Ｆｕｒａ－２双波长荧光法测定Ｍ１和Ｍ２受体激动剂和拮抗剂对胎鼠桥脑和延脑神经细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响。结果在静息状态下，其［Ｃａ２＋］ｉ为７２±６ｎｍｏｌ／Ｌ，加入２００μｍｏｌ／ＬＡｃｈ，［Ｃａ２＋］ｉ升高３８％，匹鲁卡品（Ｐｉｌ）０．４～２００μｍｏｌ／Ｌ无明显的升高细胞内钙的作用，而Ｍ２受体激动剂６β－乙酰氧基去甲托烷（６β－ＡＮ）１～１０μｍｏｌ／Ｌ。对神经细胞内的游离钙均无明显影响。Ｍ１－Ｒ拮抗剂哌仑西平（Ｐｉ）６０μｍｏｌ／Ｌ能拮抗Ａｃｈ升高细胞内钙的作用，Ｍ２－Ｒ拮抗剂ＡＦ－ＤＸ１１６２０μｍｏｌ／Ｌ不能拮抗。结论Ｍ１－Ｒ兴奋与细胞内钙升高有关。     

大鼠感染性脑损伤中神经细胞内游离钙的变化

采用荧光法测定负载Ｆｕｒａ－２／ＡＭ大脑皮层突触体内游离钙「Ｃａ＾２＋」ｉ浓度大鼠感染性脑损伤中的变化及其意义。