耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌耐药机制的研究进展

碳青霉烯类抗生素是一类含β-内酰胺结构的新型抗生素,具有广谱的抗菌活性,并且对β-内酰胺酶高度稳定.随着产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBLs)的细菌越来越多,临床上常将碳青霉烯类药物作为ESBLs感染后的有效治疗方法,也因此增加了临床使用此类药物的频率.其直接结果就是导致耐碳青霉烯类抗生素菌株的产生,并且表现为泛耐药.早期报道的对碳青霉烯类耐药的细菌多是铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌,但是近年来发现了越来越多的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(Carbapenem-Resisitant Enterobacteriaceae,CRE).这逐渐成为临床抗感染用药中的难题.因此,对细菌耐药机制进行研究,了解细菌的耐药性,以期待更好的指导临床使用抗生素.     

碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的耐药机制探讨

目的探讨本院存在的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药机制。方法临床检出碳青霉烯类抗菌药物非敏感肠杆菌科细菌6株。改良Hodge实验、EDTA协同试验检、改良三维实验检测其耐药表型;引物特异性PCR法检测其碳青霉烯酶耐药基因及外膜蛋白基因存在情况。结果 1株大肠埃希菌中改良Hodge实验弱阳性,EDTA协同试验阳性,改良三维实验结果可被CLA单独抑制,PCR扩增结果IMP4碳青霉烯酶基因阳性。5株产气肠杆菌改良Hodge实验,阴性3株,阳性两株,EDTA协同试验阴性;改良三维实验中,5株均可被CLO+CLA混合液完全抑制,PCR未扩增出目的基因条带和膜蛋白基因。结论本地区大肠埃希菌的耐药机制可能与IMP4型金属碳青霉烯酶存在有关,产气肠杆菌耐药机制可能与ESBLs和AmpC酶同时存在、膜蛋白表达缺失及其他未检测到的碳青霉稀酶存在有关。     

2017-2020年某院临床分离耐碳青霉烯阴沟肠杆菌检测及分析

摘要：目的 通过研究本院近3年耐碳青霉烯阴沟肠杆菌,探讨其临床分布及相关耐药基因分布情况。方法 收集2017年1月至2020年9月山西白求恩医院分离的33株耐碳青霉烯阴沟肠杆菌为研究对象,利用全自动快速生物质谱检测系统(美国Bruker,MicroflexLT/SH)进行细菌鉴定,VITEK2-Compact全自动微生物分析系统进行细菌药敏试验。采用改良碳青霉烯灭活试验进行耐药表型筛选。采用PCR方法检测碳青霉烯酶基因(blaIMP、blaKPC、blaNDM 、blaVIM和blaOXA-48)。对所有菌株进行MLST分型和同源性分析。质粒接合转移实验研究耐药质粒的传播。结果 22株阴沟肠杆菌对厄他培南、亚胺培南、美罗培南均耐药,11株仅对厄他培南耐药。其中16株阴沟肠杆菌产NDM-1,4株产NDM-5,2株产IPM-1,1株菌同时产NDM-1和KPC-2。11株仅对厄他培南耐药阴沟肠杆菌中有两株检出blaNDM-1、两株检出blaKPC-2基因。MLST分型主要流行株为ST418型。质粒接合转移实验有14株转移成功。结论 本院耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌从2017年逐年增加,2020年出现暴发流行。携带的碳青霉烯酶基因以blaNDM为主,ST418型菌株占多数。耐药基因可通过质粒水平传播,所以加强临床耐药菌株筛检及控制对临床抗感染治疗作用关键。     

碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降肠杆菌科细菌耐药基因型研究

目的 研究碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降肠杆菌科细菌的耐药情况及产碳青霉烯酶基因型。方法 对临床分离到非重复的36株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌,应用改良Hodge试验进行产碳青霉烯酶的表型确证,PCR扩增技术分析产碳青霉烯酶基因型。结果 药敏试验显示36株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌具有对第3,4代头孢菌素、碳青霉烯类、氟喹诺酮类和酶抑制剂复合制剂等多重耐药。36株菌株中有16株改良Hodge试验阳性;PCR结果10株细菌携带bla_KPC,未检出bla_IMP、bla_VIM、bla_GIM、bla_SIM、bla_NDM-1基因条带。结论 产KPC酶是台州医院碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降肠杆菌科细菌的主要耐药机制,其中KPC是主要基因型。     

阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制研究

目的 探讨阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制。方法 运用双纸片协同试验和正交三维试验检测耐药菌株的产酶情况，通过接合传递试验和质粒谱分析等方法探讨耐药性播散的规律。结果 37株耐药菌中，产ESBLs的有2l株菌，占56．8％；产去阻遏型AmpC酶的有13株菌，占35．1％；两种酶均阳性的菌株有2株，均阴性的有l株。在同时产两种酶的2株菌中，其中l株菌CH29的两种酶均在质粒上，耐药表型可通过质粒传递到受体菌株大肠埃希氏菌ECNK5449，属于超超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)。结论 产生ESBLs和去阻遏型AmpC酶是阴沟肠杆菌临床株对第三代头孢菌素耐药的主要机制。发现l株产SSBLs的临床分离株，可能与耐药性的水平传播有关。     

北京与银川两家医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的流行特征研究#br#

目的 调查研究北京与银川两家医院耐碳青霉烯类肠杆菌(carbapenem-resistance Enterobacteriaceae, CRE)的流行病学特征,为CRE的临床诊治及其传播控制提供依据。方法 收集2008年1月至2017年12月间北京地区解放军302医院及银川地区宁夏医科大学总医院的临床标本中分离的CRE,分析其流行趋势、标本来源、病原特点及基因型组成,探讨CRE的流行病学特征。结果 两地区10年间分离鉴定出266株CRE,呈上升趋势,北京地区CRE检出率由2008年为0.45%上升到2017年的5.84%;银川地区CRE检出率由2008年的0.26%上升到2017年的3.1%。CRE感染患者以男性为主(159例,59.77%),主要来自重症监护病房(intensive care unit,ICU)70例(26.31%)。北京与银川两家医院分离出CRE的主要标本为痰液(29.4%与26.3%),血液(18.4%与6.5%)和尿液(10.5%与19.7%),血液和尿液标本占比差异显著(P=0.015和0.045)。北京与银川两家医院CRE菌株以克雷伯菌属(66.32%和44.74%)、埃希菌属(20.00%和9.21%)及肠杆菌属(7.89%和36.84%)为主,差异均具有统计学意义(比较P值分别为0.0012、0.0340和0)。266株CRE总体对碳青霉烯类和头孢类抗生素的耐药率较高,对其他类抗生素包括磷霉素和左氧氟沙星的耐药率达到80%以上,对阿米卡星的耐药率近60%;对头孢他啶/阿维巴坦的耐药率为42.86%,耐药率较低的包括替加环素(4.51%)和多黏菌素B(4.14%);北京地区CRE对阿米卡星和左氧氟沙星的耐药率显著高于银川地区。北京地区的blaKPC在克雷伯菌、埃希菌属和肠杆菌属中均占绝对优势(93.75%、61.9%和80%),而blaNDM仅在埃希菌属中检测到;银川地区均以blaNDM基因为主,三个菌属中占比分别为36%、74%和85.71%,两地碳青霉烯酶耐药基因分布差异明显(P=0)。结论 北京与银川两地区的CRE菌株流行呈增长趋势,在标本来源、病原特点、碳青霉烯酶耐药基因分布等方面特征鲜明,临床应根据本地区的CRE流行特点采取针对性治疗。     

北京与银川两家医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的流行特征研究#br#

目的 调查研究北京与银川两家医院耐碳青霉烯类肠杆菌(carbapenem-resistance Enterobacteriaceae, CRE)的流行病学特征,为CRE的临床诊治及其传播控制提供依据。方法 收集2008年1月至2017年12月间北京地区解放军302医院及银川地区宁夏医科大学总医院的临床标本中分离的CRE,分析其流行趋势、标本来源、病原特点及基因型组成,探讨CRE的流行病学特征。结果 两地区10年间分离鉴定出266株CRE,呈上升趋势,北京地区CRE检出率由2008年为0.45%上升到2017年的5.84%;银川地区CRE检出率由2008年的0.26%上升到2017年的3.1%。CRE感染患者以男性为主(159例,59.77%),主要来自重症监护病房(intensive care unit,ICU)70例(26.31%)。北京与银川两家医院分离出CRE的主要标本为痰液(29.4%与26.3%),血液(18.4%与6.5%)和尿液(10.5%与19.7%),血液和尿液标本占比差异显著(P=0.015和0.045)。北京与银川两家医院CRE菌株以克雷伯菌属(66.32%和44.74%)、埃希菌属(20.00%和9.21%)及肠杆菌属(7.89%和36.84%)为主,差异均具有统计学意义(比较P值分别为0.0012、0.0340和0)。266株CRE总体对碳青霉烯类和头孢类抗生素的耐药率较高,对其他类抗生素包括磷霉素和左氧氟沙星的耐药率达到80%以上,对阿米卡星的耐药率近60%;对头孢他啶/阿维巴坦的耐药率为42.86%,耐药率较低的包括替加环素(4.51%)和多黏菌素B(4.14%);北京地区CRE对阿米卡星和左氧氟沙星的耐药率显著高于银川地区。北京地区的blaKPC在克雷伯菌、埃希菌属和肠杆菌属中均占绝对优势(93.75%、61.9%和80%),而blaNDM仅在埃希菌属中检测到;银川地区均以blaNDM基因为主,三个菌属中占比分别为36%、74%和85.71%,两地碳青霉烯酶耐药基因分布差异明显(P=0)。结论 北京与银川两地区的CRE菌株流行呈增长趋势,在标本来源、病原特点、碳青霉烯酶耐药基因分布等方面特征鲜明,临床应根据本地区的CRE流行特点采取针对性治疗。     

鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制的研究进展

鲍氏不动杆菌是一种重要的条件致病菌,其对碳青霉烯类的耐药率有不断上升的趋势.本文从碳青霉烯酶的产生、外膜通透性降低、青霉素结合蛋白改变及主动外排泵等方面就鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药机制的研究进展进行综述.     

碳青霉烯类抗生素的临床应用和耐药现状

概述碳青霉烯类抗生素在重症感染中的临床应用, 阐述细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药现状, 以促使该类抗生素的临床合理应用. 致病菌对各种抗菌药物的耐药已成为临床预防或治疗上的严重问题,碳青霉烯类抗生素是目前临床最有效的抗生素之一. 细菌耐药的产生与抗生素的应用是一对矛盾,所以临床上必须强调合理、慎用这类高效广谱的抗生素, 使碳青霉烯类能长期保持优良的抗菌活性.     

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因型调查

目的了解北京朝阳医院阴沟肠杆菌中产ESBLs的流行情况,并对携带的ESBLs基因型进行调查。方法采用表型筛选法对58株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌进行检测。对20株初筛阳性的细菌进行琼脂稀释法药敏试验、等电点测定,并对β-内酰胺酶编码基因进行克隆测序。结果表型筛选法对58株阴沟肠杆菌检测的结果显示产ESBLs菌株的检出率为34.48%(20/58)。药敏结果显示,单独产生ESBLs的菌株对头孢西丁、头孢吡肟、哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的敏感率分别为100%、32.5%和87.5%。同时携带ESBLs和AmpC酶的菌株只对亚胺培南敏感。20株检测阳性的细菌中,14株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为:SHV-2、SHV-2a、SHV-12、CTX-M-14和CTX-M-22型ESBLs。对另外6株进行粗酶等电点测定发现分别存在7.89、8.0、8.57等电点条带,并被克拉维酸抑制。结论产生超广谱β-内酰胺酶是造成阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的另一重要原因。     

101株阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的：调查分析阴沟肠杆菌对临床常用抗生素的耐药情况。方法：对四川大学华西医院2001年4月－2002年11月从临床分离的101株阴沟肠杆菌采用琼脂平皿对倍稀释法测定12种抗生素的最低抑菌浓度（MIC），分析耐药情况。结果：阴沟肠杆菌对氨苄西林、头孢呋辛的耐药率高达99.00%、87.13%，对第三代头孢菌素、氟喹诺酮类的耐药率高于50％，对关孢哌酮／舒巴坦、头孢吡肟、阿米卡星的耐药率低于40％，亚胺培南对90％以上的分离株具有抗菌活性。氟喹诺酮类药物的交叉耐药严重。结论：阴沟肠杆菌耐药水平高，多重耐药现象普遍存在。亚胺培南对其抗菌活性最强。     

阴沟肠杆菌质粒介导耐喹诺酮类药物的机制研究

目的了解深圳地区阴沟肠杆菌中qnrA基因的流行情况、基因定位及其介导喹诺酮耐药性产生的机制。方法收集临床分离的阴沟肠杆菌45株,采用PCR法结合测序的技术筛查qnrA基因,大质粒提取技术、Southern杂交和接合传递试验进行质粒定位,琼脂对倍稀释法进行药物敏感性检测。结果45株阴沟肠杆菌中,7株PCR法及测序证实为qnrA基因。7株菌中6株菌所携质粒被成功提取并进行Southern杂交,qnrA基因定位于80~200kb大小的低拷贝数天然质粒上。4株菌成功进行接合传递试验,使接合子对环丙沙星的MIC值提高了32~64倍。结论质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrA在深圳地区阴沟肠杆菌中具有较高的流行率,可能是导致阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗菌药获得性耐药的重要原因。     

临床分离产AmpC β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的研究我院临床分离阴沟肠杆菌的产AmpC酶耐药情况及ampC基因型。方法收集临床分离的耐药阴沟肠杆菌15株；检测产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的菌株；测定MIC值；PCR扩增检测ampC基因及序列测定。结果15株菌中8株菌（53．3％）产AmpC酶，3株菌（20．0％）产ESBLs。产AmpC酶的菌株除对亚胺培南全敏感外。对其它抗菌药不同程度耐药。ampC基因与阴沟肠杆菌ECLC074的ampC基因高度同源。结论产AmpC酶是阴沟肠杆菌对阻内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一。阴沟肠杆菌ECLC074 ampC基因是我院主要的阴沟肠杆菌ampC基因型。产AmpC酶的阴沟肠杆菌常呈多重耐药，亚胺堵南是治疗此类菌所致感染的最有效药物。     

ESBLs在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中的检出率及耐药情况比较

目的检测我国大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)产生及耐药情况。方法对2000-2001年中国细菌耐药监测研究所收集的来自9座城市13家医院的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌采用平皿二倍稀释法测定抗菌药物对各种致病菌的MIC值，计算MIC50与MIC90，并按NCCLS2002规定的临界浓度，求出各类细菌对所测定的各种抗菌药物的耐药率(R％)。以纸片扩散法确证试验检测产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，以三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的阴沟肠杆菌。结果在总共341株大肠埃希菌和212株肺炎克雷伯菌中共检测到产ESBLs菌100株，检出率18．1％(100／553)。其中产ESBLs大肠埃希菌63株，检出率18．5％(63／341)；产ESBLs肺炎克雷伯菌37株，检出率17．5％(37／212)。产ESBLs菌株对β-内酰胺类抗生素的耐药率明显高于非ESBLs菌株。酶抑制剂联合制剂头孢哌酮／舒巴坦、第四代头孢菌素头孢吡肟和碳青霉烯类对产ESBLs菌株有较好作用。81株阴沟肠杆菌中，28株产ESBLs，检出率34．6％；31株产AmpC酶，检出率38．3％；14株同时产生此二类酶，检出率17．3％。在对头孢曲松中介的14株阴沟肠杆菌中，AmpC酶检出率为42．9％(6／14)，而ESBLs的检出率高达92．9％(13／14)，是AmpC酶检出率的两倍多。但在对头孢曲松耐药的27株阴沟肠杆菌中．情况刚好相反，AmpC酶的检出率为88．9％(24／27)，是ESBLs检出率(40．7％，11／27)的两倍多。头孢噻肟中介和耐药株中两酶的检出情况与头孢曲松相似。头孢他啶只有1株中介株，耐药株中AmpC酶检出率(78．4％，29／37)约是ESBLs检出率(56．8%，21／37)的1．4倍。若将敏感和中介株合并计算可见，头孢他啶敏感和中介株中两酶的检出率明显低于头孢曲松和头孢噻肟。结论①细菌耐药研究显示ESBLs在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率为18．1％；②ESBLs在我国阴沟肠杆菌中有很高的检出率；③在阴沟肠杆菌中，对头孢曲松和头孢噻肟中介的菌株，以产ESBLs为主，而耐药菌株以产AmpC酶为主。     

医院感染阴沟肠杆菌中整合子的检测及特点

目的 研究整合子在医院感染阴沟肠杆菌中的分布及其与细菌耐药的相关性,探讨Ⅰ类整合子与临床耐药播散的关系.方法 运用K-B法检测临床株的耐药表型,双纸片扩散法检测ESBLs,PCR扩增筛选含整合子的临床菌株,接合传递实验、套式PCR、质粒谱分析及DNA测序研究携带耐药基因的Ⅰ类整合子与耐药播散的关系.结果 医院感染阴沟肠杆菌69.2%含Ⅰ类整合子,未检测出Ⅱ类和Ⅲ类整合子.Ⅰ类整合子可变区扩增片段大小从1.0～2.3kb不等,编码对氨基糖苷类抗生素、磺胺类药物和氯霉素耐药的基因.整合子阳性组中ESBLs、多重耐药菌均明显高于阴性组.整合子可通过质粒在不同菌属间水平传播.结论 Ⅰ类整合子在医院感染阴沟肠杆菌中广泛分布.可通过质粒在不同菌属间水平传播,在耐药基因传播中起重要作用,应引起临床足够的重视.     

阴沟肠杆菌的药物敏感性分析

目的：对临床各类标本中检出的阴沟肠杆菌的药物敏感性进行分析,为临床抗感染治疗制定合理的用药方案提供依据。方法：通过Vitek-AMS全自动微生物分析仪对临床各类标本中分离的58株阴沟肠杆菌进行检测,分析其对各种抗生素的敏感与耐药情况。结果：阴沟肠杆菌对亚胺培南的敏感率为100%;其次是氟喹诺酮类的左氧氟沙星、环丙沙星,均为63.8%;最低的是青霉素类的氨苄西林和头孢一代的头孢唑啉,分别为0%和3.4%。结论：阴沟肠杆菌对多种抗生素均有不同程度的耐药,显示其多重耐药机制较为复杂;碳青霉烯类（如亚安培南）对本菌具有极高的抗菌活性,可作为治疗本菌较严重感染的首选药物;而第三代氟喹诺酮类、四代头孢菌素类和加抑酶剂的青霉素类等药物对本菌仍保持一定的抗菌活性;头孢西丁与氨曲南也可作为治疗本菌较好的药物或联合用药较佳的选择者。     

耐头孢他啶阴沟肠杆菌TEM-28V β-内酰胺酶的特性研究

目的 研究耐头孢他啶阴沟肠杆菌TEM-28Vβ-内酰胺酶的特性。方法用KB纸片扩散法和等电聚焦(IEF)对细菌β-内酰胺酶类型进行初步判断；碱裂解法提取质粒并进行PCR扩增测序；饱和硫酸铵反抽提，并经Sephadex G-75凝胶过滤和DE-52阴离子交换层析法纯化β-内酰胺酶；SDS-PAGE法测定分子量和紫外分光光度法测定酶动力学参数。结果6株临床分离菌均对头孢他啶耐药。IEF显示，每株菌产生一种或两种β-内酰胺酶，等电点(pI)分别为5．5、5．6和8．7。根据基因分析推测，pI为5．6的酶的氨基酸序列与TEM-2同源性为100％。pI为5．5的酶与TEM-28比较存在4个氨基酸突变，其分子量为28．77ku；酶动力学分析证实，TEM-28V能水解头孢他啶、头孢噻肟和氨曲南，不能水解亚胺培南，对舒巴坦和三唑巴坦的IC50分别为107和220nmol／L。结论TEM-28V可能为TEM-28变异型超广谱β-内酰胺酶。     

阴沟肠杆菌AmpC酶阳性菌株中整合子参与的多重耐药

目的 筛选阴沟肠杆菌AmpC酶阳性菌株,探寻阳性菌株中整合子参与的耐药机制,指导合理用药,为临床治疗感染提供理论依据.方法 KB法药敏;纸片表型和三维试验筛选AmpC酶阳性菌株;PCR扩增ampC、ampD和整合子保守序列CS;PCRmapping研究阳性菌株中ampC和ampD在整合子中的位置.结果 74株阴沟肠杆菌对多种抗生素耐药.纸片表型筛选的阳性率为35.1%;三维试验为28.4%.PCR扩增定位的阳性率为89.2%;ampD为86.5%,整合子保守序列CS为49%.PCR mapping阳性率为33.3%,片段均小于1000bp.结论 除哑胺培南和丁胺卡那敏感外,74株阴沟肠杆菌对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类及氨基糖甙类抗生素的耐药率都>50%,为多重耐药菌株.纸片表型筛选更方便实用,适于临床常规开展;三维试验最准确可靠,但操作烦琐,难推广普及;PCR方法 操作复杂、试剂昂贵.插入的耐药基因可能位于整合子上游.