三氧化二砷对人胃癌耐药细胞系SGC7901/ADM耐药逆转及凋亡诱导作用的探讨

目的:探讨中药三氧化二砷(As2O3)对人胃癌多药耐药细胞系(SGC7901/ADM)的耐药逆转及凋亡诱导作用.方法:应用免疫细胞化学方法(PV法)测定不同剂量的As2O3用药前后细胞内mdr-1基因产物P-gp的表达变化;同时用流式细胞仪对以上各组细胞进行细胞周期解析和凋亡率的测定.结果:As2O3在0.10～0.75μmol/L浓度范围内能够逆转SGC7901/ADM细胞内P-gp的表达,并将细胞阻滞于G0～G1期、诱导细胞凋亡(P＜0.01),其作用随As2O3剂量增加而增大.结论:在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADM中,As2O3具有耐药逆转和凋亡诱导双重作用,并呈剂量依赖性.     

下调PHLDB3对胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR药物敏感性的影响

目的:探讨下调PHLDB3对胃癌耐药细胞系 SGC7901/ADR 药物敏感性的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（Western blot）的方法检测胃癌及癌旁正常组织中PHLDB3的表达（分别是20对和10对）;qRT-PCR和Western blot检测PHLDB3在胃癌细胞系 SGC7901以及胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表达;MTT法检测SGC7901、SGC7901/ADR及转染PHLDB3 siRNA后 SGC7901/ADR的半数抑制浓度（IC50）值;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:qRT-PCR和Western blot结果显示:PHLDB3在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织（P<0.000 1）;PHLDB3在耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表达明显高于其亲本细胞系SGC7901（P<0.000 1和P<0.05）。Western blot结果显示:相对于转染 PHLDB3 negative control（NC）组,转染 PHLDB3 siRNA组的SGC7901/ADR细胞中PHLDB3的表达降低（P<0.005）。MTT结果显示:SGC7901与 SGC7901/ADR的IC50值分别为（1.5±0.1） μg/ml与（5.5±0.2） μg/ml（P<0.000 1）;SGC7901/ADR 转染 PHLDB3 siRNA 后对顺铂的IC50值明显下降（P<0.05）。流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测凋亡,结果显示:下调PHLDB3的表达后,SGC7901/ADR细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）。结论:PHLDB3能够促进胃癌细胞系 SGC7901/ADR产生多药耐药。     

mrp反义RNA逆转胃癌细胞系SGC7901对VCR的耐受性

目的：探讨以多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）作为靶分子进行胃癌多药耐药基因治疗的可行性。方法：采用已构建成功的ｍｒｐ反义ＲＮＡ真核载体ｐｃＤＮＡ－Ａｍｒｐ转染胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１,用Ｇ４１８抗性筛选出稳定细胞克隆,命名为Ｍ－ＳＧＣ７９０１;用＾３２Ｐ标记的寡核苷酸探针打点杂交检测Ｍ－ＳＧＣ７９０１细胞中ｍｒｐ ｍＲＮＡ表达的变化;从细胞生长曲线中,观察Ｍ－ＳＧＣ７９０１细胞生长速度的变化;经０．００     

下调CACNA2D1对胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR药物敏感性的影响

目的:探讨下调CACNA2D1对胃癌耐药性细胞系SGC7901/ADR耐药的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)的方法检测16对胃癌及癌旁组织以及胃癌细胞系SGC7901和SGC7901/ADR中的CACNA2D1 的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹技术（Western blot）检测CACNA2D1的蛋白表达情况;MTT法检测SGC7901、SGC7901/ADR及转染CACNA2D1 siRNA后SGC7901/ADR的IC50值;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:qRT-PCR结果显示:CACNA2D1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01);CACNA2D1在耐药细胞系SGC7901/ADR中的表达明显高于其亲本细胞系SGC7901(P＜0.01)。蛋白免疫印迹技术结果显示相对于转染CACNA2D1 negative control（NC）组,转染CACNA2D1 siRNA组的胃癌细胞CACNA2D1表达降低;MTT结果显示细胞系SGC7901与SGC7901/ADR的阿霉素半数抑制浓度（IC50）分别为（1.3±0.6）μg/ml与（5.5±0.45）μg/ml;SGC7901/ADR转染CACNA2D1 siRNA后对阿霉素的IC50明显下降。流式细胞术检测凋亡结果显示,CACNA2D1的表达下调后,SGC7901/ADR细胞的凋亡比明显增加。 结论:CACNA2D1能够促进胃癌SGC7901/ADR细胞系产生多药耐药。     

靶向人胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药基因1小分子干扰RNA的有效序列筛选

目的筛选靶向人胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药基因1(MDR1)小分子干扰RNA(siRNA)的有效序列。方法设计并体外转录靶向MDR1的4条siRNA(MDR1si326、MDR1si1513、MDR1si2631和MDR1si3071),转染SGC7901/VCR细胞。用RT PCR检测MDR1mRNA表达,免疫印迹检测P糖蛋白(P gp)表达,流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)蓄积,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对ADR的敏感性。结果4条siRNA均能不同程度逆转SGC7901/VCR细胞MDR1介导的多药耐药。转染后48h,MDR1si326组和MDR1si2631组的mRNA表达水平分别为0.42±0.07和0.49±0.02,较MDR1si1513或MDR1si3071组明显下降(P<0.05);MDR1si326组细胞内ADR蓄积最显著,中位数为30.03,MDR1si2631组次之,MDR1si3071组较少,MDR1si1513组最少(P<0.05);MDR1si2631组对ADR耐药的相对逆转率最高,为(98.12±0.26)%,MDR1si326组次之(P<0.05),MDR1si1513组和MDR1si3071组的差别不大(P>0.05)。转染后72h,MDR1si326组蛋白质表达水平下降最明显。结论MDR1si326对人胃癌SGC7901/VCR细胞MDR1介导的耐药逆转效果最好,MDR1si2631次之,MDR1si3071较差,MDR1si1513最差。     

Af116609基因对胃癌细胞系SGC7901/VCR耐药性的影响

目的 研究Af116609基因转染胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR后,对胃癌细胞耐药性的影响。方法 采用RT-PCR法克隆Af116609基因,用Northern blot检测其差异表达,以基因转染技术调节其表达,通过体外药敏实验观察其对胃癌耐药表型的影响。结果 从胃癌耐药细胞SGC7901／VCR中克隆到Af116609基因的CDS序列327bp,该序列与GenBank登录的一致。Northern blot结果显示,该基因在耐药细胞高表达。体外药敏实验发现,转染正义真核表达载体的药敏细胞中该基因上调,对长春新碱、5-氟脲嘧啶和阿糖胞苷的耐药性增加,而对阿霉素的抗性有损害,对氨甲喋呤的抗性无明显影响;转染反义真核表达载体的耐药细胞中该基因下调,对上述5种药物的抗性均减弱。结论 Af116609基因与胃癌MDR表型相关,可作为逆转胃癌MDR的候选靶分子。     

槲皮素对人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR~(+/+))多药耐药基因mdr1及P-gp蛋白表达的影响

背景与目的:探讨槲皮素对人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)多药耐药基因mdr1及P-gp蛋白表达的影响.材料与方法:经槲皮素干预B-MD-C1(ADR+/+)细胞后,RT-PCR法检测细胞多药耐药基因mdr 1表达的变化;免疫组织化学法检测多药耐药蛋白P-gp表达的变化;共聚焦激光扫描显微镜检测耐药细胞及相应敏感细胞内阿霉素(ADM)的分布情况;MTT法检测槲皮素作用后B-MD-C1(ADR+/+)细胞对化疗敏感性的变化. 结果:经不同浓度槲皮素干预后,B-MD-C1(ADR+/+)细胞多药耐药基因mdr 1及相应蛋白P-gp表达水平下调(P<0.05);槲皮素干预后,能恢复ADM在B-MD-C1(ADR+/+)细胞内的分布,增加细胞内ADM浓度,从而逆转细胞的耐药性(P<0.05).结论:槲皮素逆转B-MD-CI(ADR+/+)细胞多药耐药性,该作用可能与下调细胞多药耐药基因mdr 1及其编码蛋白P-gp的表达有关.     

罗格列酮逆转丝裂霉素对人胃癌SGC7901/VCR细胞株耐药的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(ROS),对耐药胃癌SGC7901/VCR细胞药物敏感性的影响。方法以长春新碱(VCR)诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR及其亲代SGC7901为研究对象,应用MTT比色法及集落形成实验,研究罗格列酮对丝裂霉素(MMC)抑制人胃癌SGC7901细胞及其耐药亚系SGC7901/VCR细胞生长及增殖的影响及罗格列酮逆转SGC7901/VCR细胞对MMC的耐药作用。结果 ROS对SGC7901/VCR及SGC7901细胞生长具有明显抑制作用,且其作用与ROS浓度呈时间-剂量依赖关系;40μmmol/L、80μmmol/L ROS逆转SGC7901/VCR细胞对MMC的耐药倍数(RI)分别为9.6、10.5,与增敏对照组作用相当(P>0.05);集落形成实验结果显示,ROS与MMC联用降低SGC7901/VCR细胞的集落形成率。结论罗格列酮能部分逆转多药耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR对MMC的耐药。     

Ro60在耐药胃癌细胞系SGC7901/ADR中的克隆及表达

目的:在耐药胃癌细胞系SGC7901/ADR中对Ro60进行克隆,对Ro60在耐药胃癌细胞系SGC7901/ADR和药敏胃癌细胞系SGC7901中的表达情况进行比较分析。方法:应用RT-PCR法克隆Ro60的编码基因,通过DNA序列测定对所克隆的基因进行验证。应用半定量RT-PCR法检测Ro60在耐药胃癌细胞系SGC7901/ADR和药敏胃癌细胞系SGC7901中的表达情况。结果:在耐药胃癌细胞系SGC7901/ADR中,成功克隆了Ro60的编码基因,其DNA序列与Ro60的cDNA序列完全一致。半定量RT-PCR结果显示,Ro60在耐药胃癌细胞系SGC7901/ADR中的表达强度显著高于药敏胃癌细胞系SGC7901细胞中的表达强度,P<0.01。结论:Ro60在耐药胃癌细胞系中高表达,该分子可能是一种胃癌多药耐药相关分子。     

Reversal Effect of Dihydromyricetin on Multiple Drug Resistance in SGC7901/5-FU Cells

Background: One of the most common treatment for gastric cancer is chemotherapy, however, multiple drug resistance (MDR) induce the therapeutic effect which result in the failure of anticancer therapy. Dihydromyricetin (DMY) was reported to have antitumor activities on various human cancer cells in vitro, our previous studies demonstrated that DMY combined with mitomycin has inhibitory effect on proliferation of gastric carcinoma cells. However, the underlying role of DMY reversing the MDR of gastric carcinoma is poor understood. The aim of this study was to evaluate the reversal effect of DMY on MDR and investigate the molecular mechanisms in vitro. Methods: Using MTT assay, we identified the toxicity of DMY on SGC7901 and SGC7901/5-FU cells. The effect of DMY on 5-FU induced apoptosis was evaluated by flow cytometry analysis. Using RT-PCR and Western blot, we determined the MDR1 mRNA and protein expression. Results: DMY induced growth inhibition in both SGC7901 and SGC7901/5-FU cells, the IC50 value was 13.64±1.15 µg/mL, 20.69±1.82 µg/mL respectively. DMY treatment sensitized SGC7901/5-FU cells to cytotoxicity of 5-FU. The combination of DMY with 5-FU increased the apoptosis rate (9.91%, 16.67%) comparing with 5-FU alone (5.25%). Comparing with the control group, the MDR1 mRNA and protein expression in SGC7901/5-FU cells after treatment of DMY decreased significantly (P< 0.05). Conclusion: In brief, our study demonstrated that DMY effectively reversed multi-drug resistance occurring in SGC7901/5-FU cells cultured in vitro, and the potential mechanism was involved in the downregulation of the MDR1 expression.     

罗格列酮逆转丝裂霉素对人胃癌 SGC7901／VCR祼鼠移植瘤耐药作用的研究

目的：探讨 PPARγ激动剂罗格列酮（ ROS ）逆转人胃癌 SGC7901／VCR 细胞裸鼠移植瘤对丝裂霉素（ MMC）的耐药作用及其可能机制。方法建立人胃癌SGC7901／VCR细胞裸鼠移植瘤模型,将48只裸鼠随机分为6组：空白对照组（生理盐水0．2 ml）、MMC组（ MMC 2．5 mg／kg）、ROS组（ ROS 100 mg／kg）、MMC＋ROS中剂量组（ MMC 2．5 mg／kg＋ROS 50 mg／kg）、MMC＋ROS高剂量组（MMC 2．5 mg／kg＋ROS 100 mg／kg）、MMC＋CSA组（MMC 2．5 mg／kg＋CSA 50 mg／kg）。每组8只裸鼠;用药40天后,观察各组裸鼠体重和移植瘤体积变化,计算抑瘤率,绘制移植瘤的生长曲线;Western-blot法检测P-gp和MGr1-Ag蛋白的表达。结果空白对照组、MMC组移植瘤瘤体积和抑瘤率差异无显著性,ROS组、MMC＋ROS中剂量组、MMC＋ROS高剂量组组、MMC＋CSA组与空白对照组、MMC组比较,移植瘤瘤体积和抑瘤率差异有显著性。空白对照组、MMC组中P-gp、MGr1-Ag蛋白表达最强,ROS组、MMC＋ROS中剂量组、MMC＋ROS大剂量组、MMC＋CSA组与空白对照组和MMC组P-gp、MGr1-Ag蛋白表达比较有统计学意义（ P＜0．05）,MMC＋ROS大剂量组、MMC＋CSA组中其表达最弱,组间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论罗格列酮可抑制人胃癌SGC7901／VCR细胞祼鼠移植瘤瘤体生长,罗格列酮可下调人胃癌SGC7901／VCR细胞裸鼠移植瘤组织中P-gp和MGr1-Ag蛋白的表达。罗格列酮可部分逆转人胃癌SGC7901／VCR细胞祼鼠移植瘤对丝裂霉素的耐药性。     

siRNA对SGC7901/VCR细胞mdr1基因沉默效果的影响因素分析

目的分析siRNA沉默人胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1基因效果的相关因素。方法设计并体外转录合成4条靶向mdr1的siRNA(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RTPCR和免疫印迹检测mdr1mRNA和Pgp的表达、流式细胞仪检测细胞内阿霉素的蓄积和MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性,综合这4方面结果评价4条siRNA的沉默效果情况;用分子生物学软分析siRNA沉默效果的影响因素。结果沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列编码Pgp的跨膜区而且自身无茎和袢;沉默效果较差的mdr1si3071和最差的mdr1si1513靶序列编码Pgp的胞内区,前者自身成茎和成袢。沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列在靶位点和靶位点外间有较少的碱基配对和氢键。siRNA的沉默效果与siRNA3’5’端3个碱基中的A/U数量、N1和N19、GC含量间无规律可循。结论siRNA沉默SGC7901/VCR细胞mdr1的效果与靶序列的结构关系密切。     

甲基莲心碱对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性逆转机制的初步研究

目的探讨新的钙阻断剂甲基莲心碱(Nef)对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法采用MTT比色法,检测药物的细胞毒作用;应用免疫细胞化学SP法及流式细胞术,检测Nef对人胃癌细胞Bcl-2蛋白表达的影响。结果 10μmol/L Nef对SGC7901及SGC7901/VCR无显著细胞毒作用;2.5、5、10μmol/L Nef能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC50从2.32μg/ml依次下降至0.340、0.128、0.053μg/ml,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8。当Nef浓度为10μmol/L时,逆转SGC7901/VCR多药耐药活性较VRP高(P<0.01);SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平较SGC7901细胞高,经Nef处理后,SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显下降,表明Nef能下调SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平。结论甲基莲心碱在体外能逆转耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)的多药耐药性,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达水平有关。     

甲基莲心碱逆转人胃癌细胞株多药耐药性

目的:研究新的钙阻断剂甲基莲心碱(Nef)对耐长春新碱(VCR)人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法:采用MTT比色法测定药物的细胞毒作用,SP法免疫细胞化学及流式细胞术检测Nef对人胃癌细胞多药耐药性相关蛋白(MRP)表达的影响。结果:①在10μmol/L的浓度下,Nef对SGC7901及SGC7901/VCR无显著细胞毒作用;②2.5、5、10μmol/LNef能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC50从2.32μg/ml依次下降至0.340、0.128、0.053μg/ml,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8。在浓度为10μmol/L时,逆转活性较VRP为高(P<0.01);③SGC7901/VCR细胞较SGC7901细胞高表达MRP,经Nef处理后,SGC7901/VCR细胞MRP表达明显下降。表明Nef能下调SGC7901/VCR细胞MRP的表达。结论:甲基莲心碱在体外能逆转耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)的多药耐药性。其机制可能与下调MRP的表达有关。     

环氧合酶-2选择性抑制剂塞莱昔布调节胃癌细胞多药耐药性的实验研究

 目的 观测环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞莱昔布（Celecoxib）对多药耐药细胞株SGC7901／VCR多药耐药（MDR）的逆转及P-糖蛋白（P-gp）的调变作用，探讨COX-2对胃癌细胞MDR调节作用。方法 以长春新碱（VCR）诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901／VCR为研究对象，应用流式细胞术、MTT法及免疫细胞化学方法研究COX-2抑制剂塞莱昔布对耐药性的逆转作用及对P-gp的调变作用。结果 MTT显示塞莱昔布明显抑制SGC7901、SGC7901／VCR细胞的生长，并呈时间、剂量依赖性。经非细胞毒剂量（2.5 μmol／L）的塞莱昔布作用后，SGC7901／VCR细胞的多药耐药性得到部分逆转，表现为靶细胞对多种化疗药物的敏感性显著增加，逆转倍数为1.09 ~ 6.28；流式细胞仪分析发现，塞莱昔布介导的SGC7901／VCR细胞耐药性的逆转伴有胞内多柔比星浓度的升高；免疫细胞化学研究显示，经塞莱昔布作用后耐药株SGC7901／VCR表达P-gp强度下降。结论 塞莱昔布能有效地抑制肿瘤细胞的生长，且部分逆转SGC7901／VCR细胞的多药耐药性，其可能主要通过影响P-gp的药物泵功能实现。     

奥曲肽对胃癌细胞株SGC7901细胞生长抑制作用及其机制的探讨

 目的　研究生长抑素类似物奥曲肽对胃癌细胞株SGC790 1细胞的增殖、蛋白激酶B及端粒酶活性的影响。方法　应用奥曲肽作用于胃癌细胞株SGC790 1细胞不同时间后 ,检测其对体外培养胃癌细胞的抑制率 ,胃癌细胞蛋白激酶B(Akt/PKB)及端粒酶的活性。结果　奥曲肽对胃癌细胞增殖有明显抑制作用 ,呈剂量依赖性。同时能显著抑制胃癌细胞Akt/PKB的活性和端粒酶的活性 (12 ,2 4 ,4 8h均P <0 .0 1)。结论　生长抑素对胃癌细胞株SGC790 1细胞增殖有抑制作用 ,其机制与抑制Akt/PKB及端粒酶活性有关。