TNF-α和mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI-1活性的作用及其机制

内皮细胞能产生分泌纤溶酶原激活物 (t- PA )和 t- PA抑制剂 (PAI- 1) ,调节凝血和纤溶的平衡。 t- PA通过激活纤溶酶原 ,启动纤维蛋白的降解过程。 PAI- 1是 t- PA的生理性抑制剂 ,是纤溶系统功能的重要调节因子。体内外实验均表明 ,PAI- 1活性及含量可因炎症及动脉粥样硬化相关致病因子的作用而异常增高 ,从而严重影响了血浆凝血和纤溶系统的平衡 ,导致血栓形成或出现血栓倾向。所以内皮细胞功能改变所引起的 PAI- 1含量及活性增高是动脉粥样硬化等心血管疾病发生发展的一个重要环节。本实验采用肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)和轻度…     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞中NO和eNOS的影响

目的 讨论肿瘤坏死因子-α（TNF—α）对内皮细胞一氧化氮（NO）产生及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性的影响。方法 以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为实验材料，检测与不同浓度TNF—α作用不同时间后．细胞培养上清液和细胞中NO水平的变化，以及细胞eNOS活性的改变。结果 （1）随着TNF—α浓度的升高，eNOS的活性减弱，而细胞和上清液中NO的含量增加；（2）随着干预时间的延长，eNOS的活性减弱；而细胞和上清液中NO的含量在作用24h后升高，且明显高于对照组；（3）L一单甲基精氨酸（L—NMMA）和地塞米松（DXM）均能阻断TNF-α引起的细胞和细胞上清中NO的表达增加。结论 TNF-α降低eNOS活性，却在高浓度和长时间作用后增加NO的合成，可能与激活诱导型一氧化氮合酶有关，因为NO的变化可以被L—NMMA和DXM阻断。     

罗格列酮对TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞CF6表达的影响

目的 研究噻唑烷二酮类药物罗格列酮(ROS)对肿瘤坏死因子仅(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)核因子-κB(NF-κB)激活与线粒体偶联因子6(CF6)表达的影响.方法 体外培养的第3～5代HUVEC用于实验.采用RIA检测培养基中CF6的含量,用免疫组织化学分析检测细胞NF-κB亚单位p65的表达程度.结果 TNF-α能有效激活NF-κB并诱导HUVEC表达CF6增加;ROS干预能抑制NF-κB激活并减轻TNF-α诱导的HUVEC之CF6表达.结论 TNF-α通过激活NF-KB使CF6表达增加;ROS可抑制TNF-α对NF-κB激活,进而抑制NF-κB对CF6的表达上调,这可能是噻唑烷二酮类药物抗高血压的机制之一.     

川芎嗪对TNF-α诱导的人腹膜间皮细胞t-PA和PAI-1表达的影响

【目的】探讨川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMCs）在肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）诱导后组织型纤溶酶原激活物（t‐PA）和纤溶酶原激活物抑制因子‐1（PAI‐1）表达的影响。【方法】应用胰蛋白酶消化法分离HPMCs进行原代培养并传代,分为5组（每组设3个样本）：正常对照组（完全培养液）、单纯TNF‐α（1μg／L）诱导组和TNF‐α诱导加低、中、高剂量川芎嗪（10、20和40 mg／L）组。采用半定量反转录聚合酶链反应（RT‐PCR）法检测细胞内t‐PA和PAI‐1 mRNA表达;酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中t‐PA和PAI‐1的蛋白质水平。【结果】与正常组比较,TNF‐α诱导组上清液中 t‐PA的含量减少和PAI‐1含量显著升高,且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．01）;与TNF‐α诱导组比较,低、中、高剂量川芎嗪组上清液中t‐PA的含量增加,PA I‐1的含量显著降低,且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．05或 P ＜0．01）。与正常组比较,单纯TNF‐α诱导组 HPMCs t‐PA／β‐actin mRNA 下降（87＆#177;5）％和 PAI‐1／β‐actin mRNA 上升（3．63＆#177;0．12）倍（ P ＜0．01）;与TNF‐α诱导组相比,低、中、高剂量川芎嗪组t‐PA／β‐actin mRNA表达明显增加（ P＜0．05或 P ＜0．01）和PAI‐1／β‐actin mR‐NA表达明显减少（ P＜0．05,P＜0．01）,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】川芎嗪干预后能促进 HPMCs在炎症状态下t‐PA生成增加并抑制PAI‐1的表达,从而减少纤维化的发生。     

金属硫蛋白和同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞PAI-1活性及mRNA表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)与金属硫蛋白(metallothionein,MT)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)纤溶酶原激活物抑制剂(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)活性及mRNA表达的影响.方法0.1 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L Hcy及1.0 mmol/L Hcy加不同浓度MT(1nmol/L,5 nmol/L,10 nmol/L,50 nmol/L)分别作用HUVECs 6 h后,用PAI-1发色底物法检测PAI-1活性;用RT-PCR技术检测PAI-1 mRNA.结果Hcy呈浓度依赖性地增加HUVECs PAI-1活性及其mRNA表达(P均＜0.01);不同浓度的MT均可显著降低Hcy所致的PAI-1活性及其mRNA表达的增高(P均＜0.05),且呈剂量依赖性.结论MT可降低Hcy所致的PAI-1活性及其mRNA表达增高作用.     

肿瘤坏死因子-α对人脐静脉内皮细胞中组织蛋白酶K表达的影响

目的：观察不同浓度肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）和不同TNF-α作用时间对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）中组织蛋白酶K（Cat K）表达的影响。方法取对数生长期HUVEC进行实验。将HUVEC分为正常对照组、0．1 ng／ml TNF-α组、1 ng／ml TNF-α组、10 ng／ml TNF-α组、100 ng／ml TNF-α组,分别采用DMEM培养基、0．1 ng／ml TNF-α、1 ng／ml TNF-α、10 ng／ml TNF-α、100 ng／ml TNF-α作用24 h。另取HUVEC分为对照组、TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组、TNF-α48 h组,对照组DMEM培养基作用24 h,其他组采用10 ng／ml TNF-α作用相应时间。检测各组HUVEC 中的Cat K mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,不同TNF-α浓度组的Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平均升高（P＜0．05）。0．1 ng／ml TNF-α组、1 ng／ml TNF-α组、10 ng／ml TNF-α组 Cat K mRNA 和 Cat K 蛋白的表达水平依次增高（P＜0．05）,100 ng／ml TNF-α组Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平较10 ng／ml TNF-α组下降（P＜0．05）。与对照组比较,TNF-α各作用时间组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平增高（P＜0．05）;TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平依次增高（P＜0．05）;TNF-α48 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平较TNF-α24 h组明显下降（P＜0．05）。结论在一定作用浓度及作用时间内,TNF-α可以呈剂量和时间依赖性刺激HUVEC中Cat K表达。 TNF-α可能通过促进Cat K的表达促进动脉硬化的发生。     

番茄红素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的探讨番茄红素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用.方法体外培养HUVEC,用0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的TNF-α与HUVEC共同孵育30min,乳酸脱氢酶实验检测TNF-α处理对HUVEC的毒性作用.选取TNF-α干预对HUVEC细胞造成损伤的最佳浓度,并在处理前加入不同浓度的番茄红素作用1h,WST-1实验检测HUVEC的增殖情况.结果10 ng/mL TNF-α与细胞共同孵育30min后,对细胞造成的毒性作用最明显.当HUVEC预先与5μmol/L 番茄红素孵育后,能显著降低TNF-α诱导的细胞毒性.结论番茄红素能显著降低TNF-α诱导的细胞毒性,这可能是番茄红素防治一些炎症相关性疾病的机制之一.     

2型糖尿病血管并发症TNF-α、t-PA/PAI-1变化

通过检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、血浆组织型纤溶酶原激活物（t-PA）与血浆纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）的比值，证明2型糖尿病（DM）血管并发症患者TNF-α水平明显增高，t-PA／PAI-1比值明显减低。以便正确分析2型糖尿病（DM）血管并发症发生及预后情况。     

高糖对人脐静脉内皮细胞ET-1、vWF表达的影响

目的 探讨体外培养条件下高糖状态对人脐静脉内皮细胞假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)表达的影响. 方法 体外培养,利用高浓度葡萄糖诱导内皮细胞HUVEC-12细胞株功能损伤.实验分为正常对照组、低剂量高糖组、中剂量高糖组和高剂量高糖组,普通光镜和Hoechst 33258荧光染色观察HUVEC-12细胞形态和核形态的变化;逆转录-聚合酶链式反应检测细胞内ET-1、vWF mRNA的表达;细胞免疫荧光检测细胞内ET-1、vWF蛋白水平的改变. 结果 与对照组细胞比较,不同浓度高糖处理内皮细胞72 h后,普通光学显微镜下观察到,细胞数目减少,圆形细胞明显增多,细胞间隙增宽,细胞边界不清;Hoechst33258染色结果表明有细胞核浓缩、出现高亮度蓝色荧光的凋亡细胞,并呈剂量依赖性损伤细胞;细胞ET-1、vWF mRNA及蛋白表达上调. 结论 高糖对人脐静脉内皮细胞有显著的损伤作用,可能与vWF、ET-1表达升高有关.     

黄芪注射液对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症因子的影响及其分子机制

目的 观察黄芪注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)核因子-κβ(NF-κβ)激活与白介素-6(IL-6)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)分泌的影响,探讨其分子机制.方法 体外培养的第2代HUVECs用于实验,免疫组织化学分析检测细胞NF-κβ亚单位p65的表达程度,Western blot检测核内NF-κβ含量变化,ELISA法检测培养液中IL-6、ICAM-1浓度.结果 TNF-α有效激活NF-κβ并诱导HUVECs分泌IL-6、sICAM-1增加;黄芪注射液预先孵育2 h能抑制NF-κβ表达并减轻TNF-α诱导的上述反应.结论 TNF-α可能通过激活NF-κβ使IL-6、sICAM-1增加,从而损伤血管内皮功能;黄芪注射液对上述反应有拮抗作用,推测是通过抑制NF-κβ途径实现血管内皮保护功能.     

低温缺氧/复温供氧损伤性人脐静脉内皮细胞缺氧诱导因子-1α的表达

目的检测低温缺氧/复温供氧缺损的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达。方法原代培养HUVECs随机分为对照组(C组)和三个实验组(H2,H4,H4R2组),H2和H4组予以单纯低温(10℃)缺氧(5%O2)培养2及4h,H4R2组低温缺氧4h后,再于常温(37℃)高氧(95%O2)环境培养2h。结合形态学和细胞存活率反映HUVECs损伤程度,采用免疫组化(SP法)检测HIF-1α蛋白表达水平。结果H4R2组细胞膨胀呈球形,细胞存活率明显下降(与另3组比较,P<0.01);H2,H4组HIF-1α表达升高(与C组比较,P<0.05),H4R2组下降(与H2,H4组比较,P<0.05),但仍较C组高。结论低温缺氧/复温供氧可致HUVECs损伤,且主要发生于复温供氧期,HIF-1α参与了此过程。     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞活性及PD-L1蛋白表达的影响

目的 研究外源性肿瘤坏死因子α(TNF-α)对原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性及程序性死亡因子配体PD-L1蛋白表达的影响,探讨动脉粥样硬化的免疫机制.方法 体外培养HUVECs,加入不同浓度TNF-α持续刺激48 h,CCK-8法检测450 nm波长处吸光度值(OD值),计算细胞生长存活率.选同代细胞重复培养并干预,Western blot方法检测细胞PD-L1蛋白表达.使用SB203580阻断p38MAPK通路后再用TNF-α干预HUVECs,比较各组细胞PD-L1蛋白表达.结果 实验组HUVECs在450 nm波长处的吸光度值较空白对照组明显降低(P＜0.05),细胞存活率依次下降.实验组细胞PD-L1蛋白表达随TNF-α浓度增高逐渐降低(P＜0.05).TNF-α单独刺激组PD-L1蛋白表达较TNF-α与SB203580共刺激组明显降低(P＜0.05),SB203580阻断效应明显.结论 TNF-α可明显抑制HUVECs细胞活性,并降低PD-L1蛋白表达,p38MAPK通路可能参与了这一过程.     

姜黄素对TNF-α诱导的HUVEC表达ICAM-1的调节作用

目的 :细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM)-1在炎症性肠病患者肠道炎症的发生中起着十分重要的作用。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α可诱导内皮细胞ICAM-1的过度表达。本研究通过姜黄素干预人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),观察姜黄素是否能够影响TNF-α诱导ICAM-1的表达。方法:从新生儿脐带中获取HUVEC进行原代培养,取第3~5代的细胞,并将其分成3个实验组:空白对照组,不做处理;TNF-α组,加入10 ng/ml TNF-α干预3 h;姜黄素组,先加入10μmol/L姜黄素干预2 h,再加入10 ng/ml TNF-α干预3 h。通过流式细胞仪检测3组HUVEC细胞表面ICAM-1的表达量;同时通过免疫荧光技术观察3组细胞表达ICAM-1的荧光强度;Real-time PCR技术检测3组细胞中ICAM-1 m RNA的表达。结果:1流式细胞检测发现,TNF-α组中HUVEC表面ICAM-1的表达较空白对照组明显增加[(88.69±3.14)%vs(9.82±1.21)%,P<0.01];姜黄素组中ICAM-1表达[(41.85±8.39)%]较TNF-α组明显下降(P<0.01),但高于空白对照组(P<0.01);2免疫荧光检测也显示,TNF-α组中HUVEC细胞表面ICAM-1的表达强度明显高于空白对照组,而姜黄素组ICAM-1的表达强度较TNF-α组减弱。3Real-time PCR显示,TNF-α组中ICAM-1 m RNA的表达较空白对照组增加(34.70±14.99 vs 1.03±0.26,P<0.05);姜黄素组中ICAM-1 m RNA表达(15.34±8.42)较TNF-α组下降(P<0.01),比空白对照组增加(P<0.05)。结论:姜黄素可抑制TNF-α诱导的HUVEC表面ICAM-1蛋白的表达,这与其能够抑制细胞内ICAM-1 m RNA的表达有关。     

高静水压培养对人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1的影响

目的探讨高静水压培养对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）t—PA和PAI-1的影响及其可能的作用机制。方法选用第4～6代HUVECs，接种于24孔培养板中。依培养压力分为3组：大气压组（0mmHg），中压组（90mmHg）和高压组（180mmHg），每组18份标本。在同一压力组，根据不同药物干预又分为3个亚组：对照组（Ctrl组），双丁酰环磷腺苷组（DBA组，10μmoL／L）和硝普钠组（NP组，10^-4moL／L），每组6份标本。采用ELISA法测定上清液t-PA和PAI-1的抗原浓度，并用细胞内总蛋白进行标化，同时测定细胞内Ca^2＋浓度。结果与大气压组的对照组比较，中压和高压组t-PA浓度均显著降低（P〈0.01），PAI-1浓度显著增高（P〈0.01），t-PA／PAI-1比值显著降低（P〈0.01），[Ca^2＋]i也显著增高（P〈0.01）。cGMP诱导剂NP显著降低三个压力组的PAI-1浓度（P〈0.01）和增高t—PA／PAI-1比值（P〈0.05），cAMP的同功异构体DBA显著升高三个压力组的PAI-1浓度（P〈0．01，P〈0．05）。DBA和NP对t-PA浓度没有显著影响（P〉0.05）。结论高静水压可损害内皮细胞的抗纤溶功能。第二信使cAMP、cGMP和细胞内钙离子在此可能起调节作用。     

三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞损伤后活性的影响

目的:检测三七总皂苷对人脐静脉内皮细胞损伤后的影响,探索三七总皂苷对内皮细胞的保护作用。方法:把体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代培养,共分为6组,即正常组,模型组,三七总皂苷4个浓度组,用10μg·L~(-1)的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)造成细胞损伤模型,三七总皂苷组分别加入不同浓度的三七总皂苷2.5 mg·L~(-1)、5 mg·L~(-1)、10 mg·L~(-1)、20 mg·L~(-1),用CCK-8方法检测各组细胞活性。结果:CCK-8检测结果显示,人脐静脉内皮细胞在TNF-α诱导损伤后,用4个浓度的三七总皂苷干预,随着时间的延长,细胞存活率逐渐降低,组间差异具有统计学意义,其中6 h的细胞存活率最高,24 h的细胞活性最差,差异无统计学意义;和模型组相比,三七总皂苷4个浓度组细胞活性明显较高(P0.01或P0.05),其中5 mg·L~(-1)三七总皂苷组细胞活性最高,与模型组相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:三七总皂苷能提高人脐静脉内皮细胞损伤后的活性。     

姜黄素减弱TNF-α刺激的人脐静脉内皮细胞的炎症反应

炎症和内皮细胞机能障碍是动脉粥样硬化的关键早期事件。研究了姜黄素对肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,以了解姜黄素对内皮细胞的抗炎作用的途径,为防治细胞因子诱导的内皮细胞机能障碍提供新方法。以 MTT 法检测了姜黄素对 HUVEC 的细胞毒     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞分泌tPA、PAI-1抗原的影响

目的:探讨缬沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)产生组织型纤溶酶原激活物(tPA)和1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)抗原的影响.方法:用酶消化法收集并培养HUVECs,将不同浓度的AngⅡ(10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)与HUVECs共同孵育12 h;10-7mol/L AngⅡ和HUVECs作用不同时间(0、2、6、12、24、48 h);10-7mol/L AngⅡ和不同浓度缬沙坦(10-5、10-6、10-7、10-8mol/L)与HUVECs作用12 h;10-6mol/L缬沙坦与HUVECs作用12 h.用酶联免疫吸附法测定上清液中tPA和PAI-1抗原浓度.结果: AngⅡ呈浓度依赖性升高HUVECs的PAI-1抗原水平,10-7mol/L达高峰效应[(211.00±9.34)ng/mL vs (85.67±8.53) ng/mL,P《0.01];10-7mol/L AngⅡ与HUVECs作用2 h,PAI-1含量即升高,12 h达高峰[(198.08±7.85)ng/mL vs (22.93±4.73) ng/mL,P《0.01];缬沙坦呈浓度依赖性降低AngⅡ促HUVECs分泌PAI-1,10-6mol/L缬沙坦达高峰效应[(164.73±5.36)ng/mL vs (211.00±9.34) ng/mL,P《0.01];AngⅡ和缬沙坦对tPA抗原没有明显影响.结论:AngⅡ通过促进HUVECs分泌PAI-1而降低纤溶活性,缬沙坦通过抑制AngⅡ的促PAI-1分泌作用而提高纤溶活性,有助于动脉粥样硬化血栓性疾病的防治.     

CRP对人脐静脉内皮细胞释放ET、PAI-1的影响

目的：探讨CRP对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放内皮素-1(ET—1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI—1)的影响。方法：用不同浓度的C反应蛋白(CRP)与HUVEC培养不同时间后，用放射免疫法分析及用ELISA法检测培养液中ET-1、PAI-1的含量。结果：用CRP作用HUVEC后，ET—1、PAI—1的浓度随CRP浓度增加和CRP作用时间延长而呈递增趋势。结论：CRP可促进HUVEC释放ET—1、PAI-1，从而促使血管痉挛、血栓形成和急性冠脉综合征的发生发展。     

肿瘤坏死因子α作用后脐静脉内皮细胞质内钙离子的变化

目的 :观察不同浓度肿瘤坏死因子α(TNF α)对培养人脐静脉内皮细胞质内钙离子变化的影响。　方法 :用Fluo 3作为钙指示剂 ,用激光共聚焦显微镜观察测定不同浓度TNF α作用后脐静脉内皮细胞质内钙离子 [Ca2 ]i的变化。　结果 :① 10 5U/mlTNF α刺激后 ,脐静脉内皮细胞内 [Ca2 ]i水平迅速升高。随着TNF α刺激浓度的下降 ,内皮细胞内 [Ca2 ]i升高波峰亦逐渐下降 ,10 2 U/mlTNF α作用后内皮细胞内 [Ca2 ]i水平无显著变化。②用D Hanks液平衡后 ,10 5U/mlTNF α刺激后脐静脉内皮细胞内 [Ca2 ]i的水平迅速下降 ,随着TNF α刺激浓度的下降 ,内皮细胞内 [Ca2 ]i下降波峰亦逐渐减缓 ;与此同时 ,细胞外液中Ca2 水平逐渐升高。③用EGTA预处理后 ,不同浓度TNF α作用后脐静脉内皮细胞质内外Ca2 水平无显著变化。　结论 :TNF α可使内皮细胞膜钙离子通透性增高 ,可能与其致凋亡或细胞毒功能有关     

脂联素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞黏附因子mRNA表达的影响

目的 探讨脂联素对肿瘤坏死因子(TNF-α)引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVCEs)分泌黏附因子的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为对照组、TNF-α刺激组和脂联素干扰组.用PCR方法检测脂联素对人脐静脉内皮细胞VCAM-1,ICAM-1和E-selectin mRNA表达的影响.结果 HUVECs经TNF-α刺激6 h后其VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA表达较对照组相比明显增强(P<0.05);当HUVECs在TNF-α刺激之前首先与不同浓度的脂联素共同孵育一段时间后,其VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA表达与单纯给予TNF-α刺激相比明显减弱(P<0.05),并呈现剂量依赖性.结论 脂联素可以通过抑制血管内皮细胞黏附因子的表达水平来调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥其抗炎,抗动脉粥样硬化的作用.