VEGF和c-Myc在血管瘤不同时期的表达

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和c-Myc在血管瘤不同时期的作用。方法:采用免疫组织化学SP法检测56例血管瘤标本(增殖期30例,消退期26例)中VEGF和c-Myc的表达。统计学分析采用SPSS11.0统计软件。结果:VEGF在增殖期血管瘤组织中均呈阳性表达,阳性率为100%;而在消退期血管瘤中阳性率为61.54%;两组之间的差异有显著性(P<0.05)。c-Myc在增殖期血管瘤中阳性率为76.67%,在消退期血管瘤组织中的阳性率为100%,两组之间的差异有显著性(P<0.05)。结论:VEGF在增殖期血管瘤血管内皮细胞上高表达,促进血管瘤增殖;在消退期血管瘤血管内皮细胞上低表达,有利于血管瘤消退。c-Myc在增殖期血管瘤血管内皮细胞上低表达,有利于血管瘤增殖;在消退期血管瘤的血管内皮细胞上高表达,促进血管瘤消退。增殖期血管瘤中c-Myc和VEGF协同作用,可能促进血管瘤的增殖;血管瘤消退期中,VEGF低表达时,高表达的c-Myc可能加速血管瘤消退。     

间充质干细胞与血管瘤自发消退期的脂肪形成

血管瘤是婴幼儿常见的良性肿瘤,以出生后第1年的快速增殖和随后的缓慢消退为特点。在组织学上,增殖期血管瘤由大量的幼稚血管内皮细胞组成,而消退期含有内皮细胞衬里的血管腔隙和凋亡的内皮,消退完成期则以疏松的纤维脂肪组织环绕少量残存毛细血管为特点。对血管瘤自发消退过程中脂肪形成的机制仍不清楚,该文推测,血管瘤组织内存在间充质干细胞(MSCs),并有分化成脂肪细胞     

P16蛋白在人血管瘤不同时期的表达及意义

目的探讨P16蛋白在人血管瘤发生、发展及消退过程中的表达状况及其生物学意义。方法 采用免疫组织化学方法（SABC法）检测人血管瘤增生期、消退期及正常组织中P16蛋白的表达水平。结果增生期血管瘤内皮细胞P16蛋白的表达水平低于消退期,消退期血管瘤内皮细胞P16蛋白的表达水平低于正常组织,各组之间差异均有显著性（P〈0.05）。结论①P16蛋白的表达水平与血管瘤的发生、发展及消退有关。②P16蛋白通过抑制血管瘤内皮细胞的增殖和血管生成在血管瘤的消退过程中起重要作用。     

细胞凋亡抑制基因bcl-2和survivin在血管瘤不同时期的表达

目的:探讨血管瘤自然消退过程与细胞凋亡的关系.方法:收集血管瘤及血管畸形标本63例,均经病理证实;所有患者均未经过激素或其他药物治疗.其中血管瘤44例,按照组织学特征将其分为增殖期23例,退化期21例;血管畸形19例.每例标本采用SABC法免疫组化,检测bcl-2、survivin 2种细胞凋亡抑制基因的蛋白表达,同时以8例正常皮肤组织作为对照.采用SPSS11.0软件包行×列表卡方检验.结果:血管瘤增殖期和退化期的bcl-2表达不同,具有显著性差异(P＜0.01);而survivin的表达无显著性差异(P＞0.05).结论:Bcl-2在血管瘤增殖期血管内皮细胞的高表达与退化期表达有显著性差异.提示该基因可能在血管瘤增殖期抑制内皮细胞凋亡方面发挥作用;而survivin在血管瘤增殖期内皮细胞的高表达,与退化期表达无显著性差异,提示该基因与血管瘤的自然消退关系不大.     

7 血管瘤最新研究进展

血管瘤是婴幼儿最常见的肿瘤．其显著特点是出生后以不成熟的血管内皮细胞增殖为特点的快速增殖期及随后的自发消退期。其快速生长及自发消退的特点与其他的脉管疾病存在显著不同。     

婴幼儿血管瘤中livin和caspase-3表达及其与细胞凋亡的关系

目的:研究凋亡调控基因livin和caspase-3在婴幼儿血管瘤组织中的表达及与细胞凋亡的关系,探讨其变化对血管瘤病程演化的影响。方法:采用免疫组织化学SABC法检测血管瘤组织标本中livin和caspase-3的表达,同时采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记染色(TUNEL)技术检测血管瘤细胞的凋亡情况。应用SPSS17.O软件包对结果进行统计学分析。结果:Caspase-3阳性表达率在增殖期和消退期血管瘤分别为42.31%和81.82%,2组之间差异显著(P<0.01);Caspase-3在血管畸形和正常皮肤组织不表达或低表达。Livin阳性表达率在增殖期和消退期血管瘤分别为88.46%和31.82%,2组之间差异显著(P<0.01);Livin在血管畸形和正常皮肤组织不表达或低表达。Livin与caspase-3的表达呈负相关(r=-0.539,P<0.01)。血管瘤消退期细胞凋亡显著高于增殖期,在血管瘤内皮细胞中,Livin与凋亡呈负相关(r=-0.640,P=0.004),而caspase-3与凋亡呈正相关(r=0.471,P=0.042)。结论:Livin和caspase-3与血管瘤的发生、发展密切相关。     

生长激素对血管瘤内皮细胞生长的影响

目的：研究生长激素对血管瘤发生发展的关系。方法：用细胞培养的方法，检测生长激素（GH），血管内皮生长因子（VEGF）、胰岛素生长因子1（IGF－1）对血管瘤内皮细胞是否具有直接的增殖作用，用流式细胞仪检测血管瘤内皮细胞表面是否表达生长激素受体；用免疫组织化学的方法检测增殖期血管瘤标本中是否表达生长激素受体。结果：生长激素没有明显促进血管瘤内皮细胞增殖，VEGF及IGF－1能直接促进血管瘤内皮细胞增殖，并且，在促进Py-4-1细胞增殖方面VEGF与IGF－1间具有协同作用，生长激素受体在血管瘤内皮细胞及增殖期血管瘤标本中无明显表达。结论：生长激素对血管瘤的发生发展无直接的生理作用。但还不能否定其间的生理作用。     

婴幼儿血管瘤“等待观察”的治疗策略应予改变

婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma,IH)是儿童最常见的良性肿瘤,约60%发生于头颈部[1],其典型临床表现是出生后12～18个月内快速增殖,以后缓慢消退。根据病变发展的过程,血管瘤可分为增殖期、消退期和消退完成期3期。由于血管瘤具有自行消退的特点,因此,过去一直主张对血管瘤采取"等待观察(wait and see)"的治     

不同时期血管瘤内皮细胞黏附分子和HLA-DR的表达

目的:探讨黏附分子对血管瘤增殖退化病理生理演变过程的影响及作用机制。方法:应用SABC免疫组化法,检测增殖期血管瘤及退化期血管瘤的细胞间黏附分子-3(Intercellularadhesionmolecule-3,ICAM-3)、CD34和有核细胞表面的组织相容性抗原DR型(Histocompatibilityantigens-DR,HLA-DR)在血管内皮细胞上的表达情况,将2个时期进行比较;同时以血管畸形及正常皮肤为对照。采用行×列表卡方检验进行统计学分析。结果:ICAM-3和CD34均在增殖期血管瘤高表达(分别为26/28和28/28),而退化期低表达或不表达(分别为20/22和20/22),2个时期差异有显著性(P<0.001);而血管畸形和正常皮肤几乎不表达,这与不同时期血管瘤相比差异有显著性(P<0.001);HLA-DR则与血管内皮细胞的高分化阶段密切相关,增殖期基本不表达(4/28),在分化好的退化期高表达(17/22),2个时期差异有显著性(P<0.001)。结论:ICAM-3、CD34可能在血管形成早期发挥作用,介导内皮细胞间黏附,参与血管瘤发病和消退的病理过程。HLA-DR可能与内皮细胞成熟表型的获得及活化状态有关。     

MIC-1在婴幼儿血管瘤中的表达及其与VEGF、p53表达的相关性

目的 研究巨噬细胞抑制因子1（macrophage inhibitory cytokine-1,MIC-1）与血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）以及p53在婴幼儿血管瘤中的表达及其关系,探讨MIC-1在血管瘤发病过程中的作用。方法：采用免疫组织化学SABC法检测血管瘤组织标本中MIC-1和VEGF、p53的表达情况,分析MIC-1与VEGF、p53在不同时期婴幼儿血管瘤中表达的相关性。采用SPSS17.0软件包进行χ²检验、Spearman等级相关分析。结果：MIC-1在增殖期和消退期血管瘤中的阳性表达率分别为85.19%和34.78%,2组之间差异显著(P<0.01);VEGF在增殖期和消退期血管瘤中的阳性表达率分别为96.30%和43.48%,2组之间差异显著(P<0.01);p53在增殖期和消退期血管瘤中的阳性表达率分别为81.48%和30.43%,2组之间差异显著(P<0.01);MIC-1在血管畸形和正常皮肤组织中不表达或低表达。MIC-1与VEGF的表达呈正相关 (r=0.613,P<0.01),与p53的表达也呈正相关(r=0.753,P<0.01)。结论：MIC-1可能与血管瘤的发病及发展有密切关系。     

兔骨髓基质干细胞培养及鉴定

目的：对新西兰大白兔骨髓基质干细胞（BMSCs）进行体外培养及扩增,观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点,获得足够量的细胞用于材料细胞相容性实验。方法：骨髓髓腔冲洗获得新西兰大白兔幼兔股骨骨髓,用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSCs,胰酶消化传代,用条件培养基培养传代细胞。逐日倒置显微镜观察细胞生长情况,对传代细胞进行HE染色和碱性磷酸酶（ALP）染色。结果：幼兔骨髓基质干细胞体外培养生长良好,原代细胞约2周汇成单层,传代后1周左右长满瓶底。HE染色光镜下观察见兔骨髓基质干细胞为单核细胞,细胞呈梭形或不规则长多边形,传代细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性。结论：兔骨髓基质干细胞的体外增殖能力强,可诱导为成骨细胞,可作为骨缺损材料细胞相容性研究的受试细胞。并且可以作为骨组织工程的种子细胞。     

小鼠重组Periostin对人牙周膜细胞粘附、伸展和移动的影响

目的：研究小鼠重组Periostin对人牙周膜细胞（PDL细胞）粘附、伸展及移动的影响。方法：采要用固相结合分析以及细胞机械创伤模型等细胞方法,观察PDL细胞在Periostin基质上的粘附率、伸展率及其定向移动的能力。结果：Periostin可促进PDL细胞的粘附、伸展和移动,当浓度在40mg/L时,作用最为显著（P＜0．01）,与纤维结合蛋白（FN0的作用相似。结论：小鼠重组Periostin可有效促进PDL细胞的附着、伸展及移动,但其作用的确切分子机制还需深入研究。     

侵袭性牙周炎龈上皮细胞凋亡的研究

目的 观察侵袭性牙周炎龈上皮凋亡细胞形态特征,了解牙周炎发病机理.方法 以24例病变龈上皮组织为研究对象,利用透射电镜观察凋亡细胞的超微形态结构改变,流式细胞术测定分析细胞周期,及免疫细胞与细胞凋亡的关系.结果 凋亡细胞形态学改变分为四型,流式细胞术测试在G1期前出现亚G1期峰,凋亡细胞为19.9%;免疫细胞发生活化.结论 龈上皮细胞确有凋亡细胞存在,凋亡是在免疫细胞活化的基础上诱导进行的,由于细胞凋亡而导致牙周袋加深,形成侵袭性牙周炎.     

大鼠脂肪干细胞体外培养及成骨诱导分化研究

目的:观察SD大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)体外培养的基本生物学特性、鉴定其诱导成骨分化潜能。方法:无菌条件下取6周龄SD大鼠腹股沟处脂肪组织,0.1%I型胶原酶消化,分离培养。显微镜下观察细胞形态;采用MTT比色法绘制细胞生长曲线;用流式细胞仪检测细胞表面标志物;取第3代细胞行成骨和成脂诱导培养,分别用碱性磷酸酶(ALP)、茜素红染色和油红O染色鉴定成骨诱导效果。结果:从SD大鼠脂肪组织中分离获得的ASCs呈长梭形或多角形,呈集落生长;细胞生长曲线呈"S"型,具有较强的增殖能力;流式细胞仪分析示:CD29、CD90高表达,CD34、CD45低表达;成骨诱导后ALP染色及茜素红染色阳性,成脂诱导后油红O染色阳性。结论:分离培养的细胞为ASCs,具有成骨潜能。     

Estimates,from salivary analyses,of the turnover time of the oral mucosal epithelium in humans and the number of bacteria in an edentulous mouth

The objectives were to obtain rough estimates of the number of bacteria in an edentulous mouth and the mean turnover time of the oral mucosa and the conditions under which the salivary phase in the mouth might act as a bacterial continuous culture system. The premise was that at steady state in vivo, the rates of loss of bacteria and epithelial cells in saliva must be equal to their rates of proliferation. Drooled saliva was collected from 17 subjects and the number of epithelial cells per millilitre was determined in a Coulter Counter. The numbers of adherent bacteria per epithelial cell were counted on cells stained with Toluidine Blue. For 10 subjects, salivary bacterial counts were obtained after saliva had been diluted in Reduced Transport Fluid and grown anaerobically on Blood Agar for 5 days. From the known surface areas of the oral mucosa and individual epithelial cells and the rate of loss of epithelial cells into saliva, the surface layer of epithelial cells was calculated to be replaced every 2.7h. From the calculated number of epithelial cells lining the oral mucosa, the number of bacteria per epithelial cell, and the rate of swallowing of the bacteria in saliva, the number of bacteria in an edentulous mouth was calculated to be about 1.58 x 10(9) and the mean time between bacterial cell divisions to be 1.38h. Given a residual volume of 0.8ml and a maximal bacterial division rate of 3h(-1), the salivary phase in the mouth could act as a continuous culture system for certain fast-growing bacteria only if the maximum flow rate were <0.04ml/min.     

钙对成釉细胞系ALC细胞生物学特性的影响

目的 观察钙对成釉细胞系ALC细胞增殖、凋亡及细胞周期等生物学特性的影响。方法 培养ALC细胞系,在高糖DMEM培养基中配制0、2.0、2.5、3.0、3.5 mmol/L CaCl₂溶液,利用倒置显微镜检测在两种培养时间(24、48 h)下ALC细胞形态是否改变。通过CCK-8法分析钙离子对ALC细胞增殖的作用,运用Hoechst染色观察钙离子对ALC细胞凋亡的影响;通过PI染色FCM法分析钙离子对ALC细胞生长周期的干预。利用Western blot检测钙离子对ALC细胞中周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D表达的调节。结果 0 mmol/L CaCl₂组,ALC细胞形态呈卵圆或多边形,细胞间连接紧密呈铺路石样生长。其他不同浓度的钙干预24、48 h后,ALC细胞形态未见明显变化;CCK-8法结果显示钙干预24、48 h后,随着钙浓度增加,ALC细胞的存活率呈微弱降低趋势,但此趋势无统计学意义;Hoechst染色结果显示不同浓度的钙干预24、48 h后,ALC细胞的凋亡数目随时间延长可见增加,但不同钙离子浓度组间差...     

藻酸盐诱发的免疫反应对兔腮腺腺细胞的作用

目的:探讨藻酸盐诱发的免疫反应对腮腺腺细胞的作用.方法:采用Alginate-BSA交联物免疫兔,ELISA法检测藻酸盐抗血清效价;实验分5 组:A、空白对照组, B、牛血清白蛋白组, C、藻酸盐组, D、抗藻酸盐血清组和E抗藻酸盐血清+藻酸盐组,分别在1、6、12和24 h采用MTT法检测各组腮腺腺细胞增殖情况.倒置显微镜观察不同组腮腺腺细胞生长、形态和结构变化;扫描电镜观察E组腺细胞超微结构的改变.结果:Alginate-BSA交联物免疫兔约40 d,藻酸盐抗血清的效价达到1∶ 400;二者适宜反应浓度:藻酸盐为40 μg/ml,抗藻酸盐血清的稀释度为1∶ 100;MTT检测结果A、B、C、D、E组在前3 个时间点没有差异,而在24 h时,E组与A、B、C、D组差异显著(P<0.05),说明抗藻酸盐血清和藻酸盐的免疫反应对腺细胞的增殖有显著的抑制.倒置显微镜下在12 h和24 h可观察到E组个别腺细胞表面有破裂,胞质外溢,细胞形态不完整;其它组未见异常.扫描电镜观察E组在6 h即有个别腺细胞胞膜有破裂,呈圆孔形,细胞的轮廓仍清晰完整.12 h可见破裂细胞数增多,且细胞膜上破裂孔、裂也增多变大.24 h可见细胞的形态不完整,有较大范围胞膜破裂,细胞崩解.结论:抗藻酸盐血清和藻酸盐反应对腮腺腺细胞可造成免疫损伤,导致细胞死亡.     

层粘连蛋白对体外培养颌下腺细胞影响的研究

目的：研究层粘连蛋白（laminin，LN）对鼠颌下腺细胞（rat submandibular gland cells，RSGCs）生长及分泌功能的影响。方法：取对数生长期的第2代大鼠颌下腺细胞用于实验，按加入不同浓度LN分4组（0、5．0、25．0和50．0mg／L）进行培养，相差显微镜的观察，绘制生长曲线，MTT比色法、自动生化分析仪检测LN对细胞增殖及淀粉酶分泌功能的影响。结果：培养的RSGCs免疫组化鉴定CK8．13、S-100蛋白染色呈阳性，波形丝蛋白染色呈阴性。培养72h后MTT法检测5．0-50．0mg／LLN组细胞吸光度A值与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。培养96h后检测培养液中淀粉酶的含量，各浓度组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：LN能促进RSGCs的黏附和增殖并保持RSGCs的正常分泌功能。     

Probing interfacial dynamics by phase-shift interferometry in thin cell electrodeposition

In this article the relevance of phase-shift interferometry as an in situ probe for interfacial dynamics in thin cells is emphasized. The efficiency of this technique for dynamical studies of diffusion layers is illustrated by selected examples of electrodeposition and corrosion experiments in thin cells. After a brief survey of the application of interferometry to electrochemistry we turn to phase shift interferometry (PSI) and we show successively that this real time technique can be used for probing both transport processes and chemical mechanisms close to an active surface (μm scales).     

兔骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定

［摘要］ 目的 寻求一种安全高效的兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs )的体外分离培养和鉴定方法。方法 采集兔胫骨骨髓组织,采用全骨髓贴壁培养法体外分离培养和扩增BMSCs;倒置相差显微镜观察细胞,取生长良好的第5代细胞成骨,免疫细胞化学染色和流式细胞术检测细胞表面标志物。结果 原代和传代的 BMSCs 贴壁生长,呈漩涡状排列生长;诱导后碱性磷酸酶活性持续高,有钙结节形成并茜素红染色阳性;CD29、CD44、CD105分子呈阳性, CD45、C-kit、CD34分子呈阴性。结论 成功建立了兔BMSCs 体外分离纯化、培养的有效方法,扩增的 BMSCs 具有多向分化潜能,是理想的组织工程种子细胞。