人HIF-1αRNA干扰质粒构建及其转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞

目的 构建人HIF-1α的miRNA干扰表达载体并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞.方法 设计合成针对人HIF-1α基因的miRNA前体寡核苷酸,通过退火成为双链DNA片段,以T4 DNA连接酶与线性化pcDNA(tm)6.2-GW/EmGFP-miR质粒连接,构建含HIF-1α前体miRNA的重组质粒.经测序鉴定后,通过脂质体介导转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞.结果 经测序鉴定针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒构建成功,并能够成功转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞.结论 成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞,为后续研究HIF-1α基因在人急性髓性白血病骨髓基质的功能奠定基础.     

人HIF-1αRN干扰质粒构建及其转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞

目的构建人HIF-1α的miRNA干扰表达载体并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞。方法设计合成针对人HIF-1α基因的miRNA前体寡核苷酸,通过退火成为双链DNA片段,以T4 DNA连接酶与线性化pcDNA（tm）6.2-GW/EmGFP-miR质粒连接,构建含HIF-1α前体miRNA的重组质粒。经测序鉴定后,通过脂质体介导转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞。结果经测序鉴定针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒构建成功,并能够成功转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞。结论成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞,为后续研究HIF-1α基因在人急性髓性白血病骨髓基质的功能奠定基础。     

人参皂苷Rg3抑制急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF的表达及其机制探讨

目的探讨人参皂苷Rg3对急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF表达的作用及其可能的机制。方法培养正常人及急性白血病患者的骨髓基质细胞,MTT法检测人参皂苷Rg3对正常及急性白血病骨髓基质细胞增殖的抑制作用;RT-PCR检测人参皂苷Rg3处理前后急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α及VEGF mRNA表达的变化;Western blot、免疫荧光检测人参皂苷Rg3处理前后急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF、p-Akt、p-ERK蛋白表达的变化。结果人参皂苷Rg3对骨髓基质细胞增殖抑制的最适作用时间为24h,最适作用浓度为40μg/ml;处理24h后,急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达及蛋白表达均明显减少(P<0.05);p-Akt及p-ERK蛋白表达亦较处理前明显减少(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可明显抑制急性白血病骨髓基质细胞HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白水平的表达,同时可抑制与血管形成密切相关的MAPK、PI3K/Akt途径中Akt、ERK蛋白的磷酸化,提示人参皂苷Rg3可能通过阻断PI3K/Akt、MAPK信号途径抑制急性白血病骨髓的血管生成。     

PTEN?VEGF?FLT1基因在髓系白血病中的表达及其相关性研究

目的:探讨肿瘤抑制基因PTEN及血管内皮生长因子(VEGF)及其受体FLT1(VEGFR1)在白血病中的表达及其相关性。方法:应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测50例初治急性髓系白血病(AML),10例缓解期AML,10例慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)、10例CML急变期(CML-BC)患者和10例正常人骨髓单个核细胞(MMNCs)中PTEN、VEGF、FLT1 mRNA的表达。结果:初治AML患者PTEN mRNA表达水平明显低于缓解组AML和正常对照组,CML-BC患者PTEN mRNA表达水平低于CML-CP患者,在AML初治白血病中PTEN mRNA与VEGF和FLT1 mRNA表达负相关,PTEN低表达、VEGF和FLT1高表达与AML缓解率及髓外浸润相关。结论:髓系白血病患者中低表达PTEN基因,高表达VEGF及FLT1基因,并与白血病预后不良及髓外浸润密切相关,三者相互作用共同参与了白血病的发病。     

BAG-1蛋白在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的表达

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白的表达及意义。方法:用免疫细胞化学SP染色法分别检测初治AML患者(76例)、急性髓系白血病完全缓解(AML-CR)患者(49例)、急性髓系白血病难治复发(RRAML)患者(17例)及正常对照者(15例)的骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白的表达。结果:四组BAG-1蛋白阳性表达率差异有统计学意义(字2=47.857,P0.001);初治AML组和RRAML组中BAG-1蛋白阳性表达率均高于AML-CR组和正常对照组(P0.001);AML各分型患者的BAG-1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(字2=1.920,P0.05);初治AML患者骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白阳性表达率与白细胞计数及髓外浸润有关(字2=9.248,13.689,P0.01)。结论:BAG-1可能参与了急性髓系白血病的发生发展。     

PDCD4、TGF-β1在急性髓系白血病患者骨髓中的表达及意义

目的探讨程序性细胞凋亡因子4(PDCD4)与转化生长因子β1(TGF-β1)在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达及其相关关系。方法采用RT-PCR、ELISA和Western blotting三种方法分别从基因水平和蛋白水平检测30例初诊急性髓系白血病患者(AML组),30例急性髓系白血病完全缓解患者(AML-CR组),20例缺铁性贫血患者(对照组)骨髓单个核细胞中PDCD4、TGF-β1的表达情况,并分析相互间的相关性。结果 PDCD4、TGF-β1的RT-PCR结果均显示,AML组mRNA的表达量明显低于对照组(P<0.05),AML-CR组表达量虽明显高于AML组,但差异没有统计学意义(P>0.05)。ELISA结果显示,AML组TGF-β1的蛋白表达量明显低于对照组和AML-CR组(P<0.05)。Western blotting结果显示,AML组PDCD4蛋白表达明显低于对照组和AML-CR组(P<0.05)。PDCD4、TGF-β1的表达呈正相关关系(P<0.05)。结论 PDCD4、TGF-β1在初诊AML中低表达,PDCD4、TGF-β1在白血病的发生发展中具有相关关系。     

Livinα和Livinβ在儿童急性白血病骨髓单个核细胞中的表达及临床意义

目的 研究Livinα和Livinβ在儿童急性白血病(childhood acute leukemia,CAL)骨髓单个核细胞(marrow mononuclear cell,MMNC)中的表达与临床意义.方法 采用实时PCR(real-time PCR)和Western blot检测Livinα和Livinβ在CAL骨髓单个核细胞中mRNA水平和蛋白质水平的表达.结果 Livinα和Livinβ在初诊的39例儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)和12例急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)MMNC中的表达率和表达水平均高于对照组(P<0.05),Livinα的表达水平高于Livinβ(P<0.01).ALL化疗后第19天,幼稚细胞≤5%组Livinα和Livinβ的表达水平较化疗前明显降低(P<0.01).幼稚细胞5%组化疗后较化疗前也降低(P<0.05),但化疗后Livinα和Livinβ的表达水平仍明显高于对照组(P<0.01).结论 Livinα和Livinβ在CAL中高表达可能对评估CAL临床危险度及预后有重要意义;提示Livinα和Livinβ可作为观察CAL预后的分子指标之一.     

急性白血病骨髓基质细胞生物学特点的观察

目的探讨白血病骨髓基质对白血病形成的作用机制.方法白血病患者和正常人的骨髓单个核细胞行基质细胞培养,动态观察贴壁时间、小丛形成时间、集落形成时间、融合形成时间等生长特性,计数CFU-F集落,检测基质细胞VCAM-1、Fn及培养上清液中的IL-6、TNF-α含量.结果急性白血病骨髓基质细胞生长延迟,贴壁形成时间、小丛形成时间、集落形成时间和融合形成时间均明显晚于正常骨髓基质组(P<0.05);CFU-F计数和VCAM-1表达水平均明显低于正常对照组(P<0.05),Fn与正常对照组无显著性差异(P>0.05);骨髓基质细胞培养上清液中IL-6、TNF-α含量明显高于正常对照组(P<0.05).结论急性白血病存在造血微环境异常.     

AML病人MN1和PTEN基因表达及临床意义

目的探讨脑膜瘤1(MN1)基因和PTEN基因表达与急性髓系白血病(AML)病情发展及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测38例AML病人(初治组16例,缓解组12例,复发组10例)骨髓单个核细胞中MN1和PTEN mRNA的表达水平,另取非恶性血液病病人及正常人骨髓共13例作正常对照组。结果 MN1和PTEN mRNA在AML病人骨髓单个核细胞中阳性表达率分别为76.3%和60.5%。初治组MN1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高,PTEN mRNA表达水平较正常对照组显著下降(F=2.385、2.054,q=2.305、2.867,P<0.01);缓解组MN1 mRNA表达水平下降,PTEN mRNA表达水平上升,与初治组比较差异均有统计学意义(q=2.121、2.756,P<0.05);在复发组中MN1 mRNA的表达水平复又升高,PTEN mRNA的表达水平复又下降,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(q=2.361、2.723,P<0.05)。MN1和PTEN基因在AML中的表达水平呈负相关(r=-0.321,P<0.05)。结论 MN1和PTEN基因的表达与AML发病及预后密切相关,可作为AML发病、复发及预后判断的有意义指标。     

MRP1和XIAP基因在急性髓系白血病及细胞株中的表达及临床意义

目的 本研究旨在探讨多药耐药相关蛋白1 (MRP1)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因在急性髓系白血病(AML)患者及K562、K562/ADM细胞株中的表达,探讨其在AML发生及多药耐药中的意义.方法 应用实时荧光定量PCR方法和蛋白免疫印迹法检测81例AML患者与20例正常人骨髓细胞(对照组),以及K562、K562/ADM细胞株中MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达.结果 K562/ADM细胞MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白水平明显高于K562细胞(P＜0.05).AML患者初治组和复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05),复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平明显高于初治组(P＜0.05).结论 MRP1、XIAP基因的异常表达与白血病发病及复发密切相关,可能通过诱导白血病细胞耐药及抑制细胞凋亡的途径发挥作用,其表达水平的高低对评估AML患者预后及治疗效果有重要意义.     

新基因HA117在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的 检测新基因HA117在急性白血病(AL)患儿骨髓单个核细胞(BMMNC)中的表达,并探讨其与多药耐药关系.方法 应用RT-PCR方法检测36例不同时期AL患儿BMMNC HA117基因的表达;以10例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿作为对照.结果 36例AL患儿BMMNC HA117基因阳性表达率为75 00%,急性淋巴细胞白血病(ALL)组其阳性表达率(69.57%)与急性髓细胞白血病(AML)组(91.67%)比较差异无统计学意义.但AML组HA117/β-actin定量表达水平高于ALL组(q=4.5852,P<0.01).AML组和ALL组HA117基因阳性表达率及HA117/β-actin定量表达水平均高于对照组(χ2=5.05,8.81;q=4.4612,6.9695,P<0.05).初诊组患儿BMMNC HA117基因阳性表达率(72.00%)高于对照组(χ2=5.91,P<0.05),与缓解组患儿(77.78%)比较差异无统计学意义.初诊组HA117/β-actin定量表达水平高于缓解组和对照组(q=5.1991,6 3812,P<0.01).缓解组HA117基因阳性表达率高于对照组(χ2=4.24,P<0.05),但其半定量表达水平与对照组比较差异无统计学意义.未缓解组HA117/β-actin定量表达水平高于缓解组和对照组(q=3.1705,4.4102;P<0.05),与初诊组比较差异无统计学意义.结论 新基因HA117在初诊和未缓解AL患儿BMMNC中具有高表达.HA117可能参与了白血病的多药耐药,临床以HA117基因半定量检测更有意义.     

乳腺癌组织中PTEN、VHL的表达及其对HIF-1α的影响

目的研究乳腺癌组织中肿瘤抑制基因PTEN、VHL的表达及其对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,并探讨其意义。方法将乳腺癌患者80例(观察组,包括浸润性乳腺癌67例、乳腺原位癌13例)和正常乳腺组织20份(名)(正常对照组)制成组织芯片,采用免疫组织化学方法对组织芯片进行肿瘤抑制基因PTEN、VHL及HIF-1α检测。结果观察组中浸润性乳腺癌患者肿瘤抑制基因PTEN、VHL的表达为31.3%和31.3%,均低于乳腺原位癌84.6%和61.5%及正常对照组80.0%和75.0%(χ2=12.87、11.92、12.10、14.37,均P<0.01),观察组中浸润性乳腺癌患者HIF-1α的表达为74.6%,高于乳腺原位癌23.1%和正常对照组5.0%(χ2=12.94、30.78,均P<0.05)。肿瘤抑制基因PTEN、VHL阳性者中HIF-1α的表达为40.6%和24.1%,低于阴性者中HIF-1α的表达83.3%和90.1%(χ2=15.66、36.08,均P<0.01)。结论肿瘤抑制基因PTEN、VHL的低表达及HIF-1α的高表达与乳腺癌的浸润有关,肿瘤抑制基因PTEN、VHL的表达与HIF-1α的表达呈负相关。     

Expression and significance of MN1 gene in 216 acute myelocytic leukemia adults

目的 通过检测急性髓细胞性白血病(AML)中脑膜瘤1基因(MN1)表达,探讨其与AML预后的相关性.方法 使用荧光定量聚合酶链式反应(RTQ-PCR)定量检测216例AML的MN1、同源异型盒基因5(HOXA5)、ETS相关基因(ERG)、核磷蛋白(NPM1)4种基因的表达,分析MN1表达量与AML治疗效果、预后相关因素、分型等的相关性.结果 初治AML的MN1表达量比缓解AML高(P<0.05);初治急性早幼粒细胞白血病(M3)型比非急性早幼粒细胞白血病(非M3)型低(P<0.05);初治AML一次标准诱导治疗完全缓解(CR)组比未缓解(NR)组低(P<0.05).MN1表达量在初治AML年龄≥60岁、＜60岁组及男、女组中差异无统计学意义;MN1表达量与血象(WBC、Hb、PLT)、骨髓原始细胞比、免疫表型无相关性;Logistic回归分析显示,MN1表达量、年龄、血象、骨髓原始细胞比、免疫表型均与初治AML一次标准方案化疗缓解与否无相关性.MN1表达量与HOXA5、ERG及NPM1表达量无相关性.结论 MN1可能是AML的一个重要不良预后因素,并可能指导AML的个体化诊治.     

髓性白血病骨髓单个核细胞表面CD40、CD40L的表达及其意义

目的 研究共刺激分子CD40、CD40L在人急、慢性髓性白血病治疗前后骨髓单个核细胞表面的表达特点,探讨其与临床疗效的关系.方法 应用免疫荧光标记及流式细胞术（FACS）检测了37例急性髓性白血病及20例慢性髓性白血病患者治疗前后骨髓单个核细胞表面共刺激分子CD40、CD40L的表达.另取8例健康人骨髓作为正常对照组.结果 ①治疗前急性髓性白血病（AML）患者中,除急性早幼粒细胞白血病（M3）外,CD40表达均低于正常对照组（P＜0.05）;（②治疗后完全缓解（CR）和部分缓解（PR）患者CD40较其治疗前显著增高（P＜0.05）,CR患者接近对照者,两未缓解（NR）患者CD40的表达差异无统计学意义（P＞0.05）;③CD40在慢性粒细胞白血病骨髓单个核细胞上的表达与正常对照差异无统计学意义（P＞0.05）;④所有急、慢性髓性白血病患者及正常对照骨髓单个核细胞上的CD40L均存在表达缺陷,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 CD40是参与急性髓性白血病（AML）发病和抗白血病免疫反应的重要共刺激分子,其表达与白血病分化程度及分型有关,CD40表达异常可能是AML发病机制之一,且与临床疗效密切相关;调节单个核细胞上CD40的表达,纠正AML白血病患者细胞免疫功能缺陷,可能是免疫基因治疗人类急性髓性白血病的重要手段之一,具有一定的临床应用价值.     

环氧化酶-2和血管内皮生长因子在急性白血病中的表达及意义

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在急性白血病细胞中的表达及其意义.方法 将58例入选患者按免疫分型分为:急性白血病组(AL)、急性髓细胞性白血病组(AML)、急性淋巴细胞性白血病组(ALL)和缓解组,选取25例患者作为对照组,应用免疫组化法检测COX-2和VEGF在急性白血病细胞中的表达.结果 (1)在急性白血病细胞中COX-2、VEGF的表达与对照组及缓解组差异有统计学意义(P<0.05).缓解组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);(2)COX-2和VEGF在急性白血病细胞中的表达呈正相关(r=0.726,P<0.05).结论 COX-2、VEGF在急性白血病细胞中均为高表达,COX-2与VEGF的表达可能有协同作用,共同促进肿瘤血管生成,在白血病的发生、发展过程中可能发挥重要作用.     

节律基因NPAS2在急性髓系白血病中的表达及对细胞生长的影响

目的 探讨神经元PAS结构域蛋白2(neuronal PAS domain protein 2,NPAS2)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者和细胞系中的表达变化,及其对AML细胞生长的作用。 方法 收集陕西省西安市中心医院血液病研究所2013-2017年收治的初诊急性髓系白血病患者46例,实时定量PCR方法检测NPAS2在AML患者及正常对照组骨髓单个核细胞中的表达,Western blot方法检测AML细胞系及对照组中NPAS2的表达;统计学方法分析NPAS2表达高低对AML患者预后的影响;RNAi方法干扰AML细胞内NPAS2表达,利用CCK-8法检测NPAS2对细胞生长的作用。 结果 NPAS2在AML患者及细胞系中的表达较对照组升高(P<0.05);在M1、M2、M3、M4、M5患者中NPAS2表达较对照组升高(P<0.05),在M6和M7患者中其表达较对照组差异无统计学意义(P>0.05);高表达NPAS2的AML患者其总体生存期较低表达患者短(P<0.05);AML细胞中干涉NPAS2后,与对照组比,干涉组细胞生长明显减慢(P<0.05)。 结论 NPAS2在AML患者中表达上调并与AML患者预后负相关,同时NPAS2促进AML细胞生长。      

低氧对小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1表达的影响

目的 探讨低氧环境对小鼠成骨细胞富含半胱氨酸61(Cyr61/CCN1)表达的影响.方法 分别在氧浓度和去铁敏诱导的低氧环境下培养小鼠成骨细胞,Real-time PCR和Western blotting于不同时间点检测成骨细胞低氧诱导因子- 1α(HIF-1α)、Cyr61/CCN1和血管内皮生长因子的表达.分别敲除小鼠成骨细胞中HIF-1α和VHL基因,检测细胞Cyr61/CCN1的表达.结果 两种低氧环境下,小鼠成骨细胞HIF-1α通路被激活,Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05或P<0.01).HIF-1α基因敲除小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著减少,VHL基因敲除成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05或P<0.01).结论 低氧环境通过激活HIF-1α通路来上调小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1的表达.     

p16、bcl-2、bax和fas/apo-1基因在急性白血病中的表达及其意义

采用免疫组织化学染色法,检测了61例急性白血病（AL）的p16、bcl-2、bax和fas/apo-1基因表达。结果表明:急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）组的p16、bax和fas/apo-1表达均显著低于对照组（P<0.001）. ALL组的 p16、fas/apo-1表达又显著低于AML组（P<0.05）。 AML和 ALL组 bcl-2基因表达均显著高于对照组（P<0.001）。 AML缓解组的 bcl-2基因表达显著低于未缓解组（P<0.01）。提示:AL可同时存在多个凋亡基因缺陷,bcl-2高表达可作为AML患者化疗不敏感的预后指标之一。     

BLCAP基因在急性髓系白血病中的表达及意义

目的 探讨膀胱癌相关蛋白(BLCAP)基因在急性髓系白血病(AML)中的表达及其与治疗疗效和预后的关系.方法 收集我院血液科2008年1月至2012年12月收治的138例原发性急性髓系白血病患者的病理资料,利用实时定量PCR(RQ-PCR)法检测AML患者骨髓液BLCAP基因的表达,并分析其表达与AML临床病理指标及治疗疗效、预后的关系.结果 AML患者均表达BLCAP,BLCAP的表达在AML患者不同年龄、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)等指标间比较差异均有统计学意义(P<0.05);AML治疗后缓解及治疗后无事件生存的患者,其BLCAP表达高于治疗后未缓解及治疗后复发、病情进展及死亡的患者,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 BLCAP基因在AML患者中的表达与其治疗疗效及预后相关,有望成为AML病情评估及疗效预测的指标.但这一结论尚需进一步的研究予以证实.     

Expression of ENTPD5 in bone marrow of acute leukemia

目的 观察内质网酶ENTPD5蛋白在急性白血病(AL)骨髓液中的表达,了解其与AL发病的关系.方法 选取AL患者111例,其中急性髓系白血病(AML)患者78例(初治组48例,复发组10例,缓解组20例),急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者33例(初治组14例,复发组9例,缓解组10例).将62例初治AL患者分为高危组26例,中危组19例,低危组17例.应用Western blot法检测ENTPD5在AL中的表达量,比较在不同分型AL患者中初治、复发、缓解阶段以及在低危、中危、高危组AL患者中该蛋白表达的差异;同时分析ENTPD5表达与临床指标的相关性.结果 ENTPD5的表达水平在AML、ALL患者中初治和复发组均高于缓解组(P<0.05),低危组ENTPD5的表达量明显低于高危组和中危组(P<0.05).ENTPD5的表达量与初治时外周血白细胞计数、骨髓原始细胞百分比、基因WT1和微小残留病灶均有一定相关性.结论 AL存在ENTPD5的表达异常,该蛋白在AL的发生中可能起重要作用.