小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率.结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性.小檗碱处理后72 h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰.结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值.     

小檗碱对体外血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:观察小檗碱对体外血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和凋亡的影响。方法:培养兔主动脉平滑肌细胞至8～10代,根据小檗碱作用时间不同分成24h、72h组,每一时间组据小檗碱浓度不同分为5组:0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L组。用台盼蓝活细胞计数法和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对VSMCs增殖的影响。用Boyden小室法检测穿膜细胞数,观察小檗碱对VSMCs迁移的影响。用TUNEL法及流式细胞仪检测小檗碱对VSMCs凋亡的影响。结果:台盼蓝活细胞计数显示小檗碱作用24h、72h后,随小檗碱浓度增加,活细胞数减少(P<0.05)。MTT法检测显示小檗碱作用24h、72h后,随小檗碱浓度增加,生长抑制率增高,随小檗碱干预时间延长,细胞生长抑制率增加(P<0.01)。Boyden小室法检测显示随小檗碱浓度增加,穿膜细胞数减少(P<0.05)。TUNEL检测显示各组施加干预48h后,对照组和各实验组的凋亡阳性率分别为13.15%、12.04%、10.62%、9.73%和9.72%(P>0.05)。流式细胞仪检测小檗碱作用48h后,对照组、50μmol/L和100μmol/L浓度小檗碱组的细胞凋亡率分别为20.4%、18.7%和17.2%。结论:小檗碱对VSMCs的增殖和迁移有显著抑制作用,而小檗碱对VSMCs的凋亡无促进作用。     

小檗碱对酒精所致心肌细胞凋亡的影响研究

目的:探讨小檗碱对酒精损伤性大鼠心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法:取无特定病原体(SPF)雄性SD大鼠随机分为空白对照组、酒精组、酒精组+小檗碱保护组(简称保护组),12周后检验血清肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶(CK)、C反应蛋白(CRP)浓度水平,HE染色观察心肌病理学改变,RT-PCR法检测心肌组织中细胞凋亡及凋亡相关基因-B细胞白血病/淋巴瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl相关蛋白(Bax)的表达。结果:与对照组比较,酒精组血清cTnT、CK、CRP均明显升高,显微镜下心肌细胞肿胀,心肌纤维排列紊乱,心肌间质炎细胞浸润,Bcl-2表达减弱,Bax表达明显增强,差异有统计学意义。保护组与酒精组相比,血清cTnT、CK、CRP升高不明显,显微镜下部分心肌细胞肿胀,排列紊乱,心肌间质无炎性细胞浸润,Bcl-2表达明显增强,Bax表达减弱。结论:酒精性心肌损伤中存在细胞凋亡,小檗碱可抑制心肌细胞凋亡,减少酒精对心肌的损伤,达到保护心肌的作用。     

小檗碱诱导人胃癌细胞BGC-823细胞凋亡

目的观察小檗碱对人胃癌细胞BGC-823凋亡的诱导作用,以探讨具抗癌作用机理.方法采用体外细胞培养技术,以lO～40 mg/L小檗碱作用于培养的BGC-823细胞48 h后,进行光镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪和TUNEL法的观察和分析.结果小檗碱作用后,光镜、TUNEL观察到细胞呈现凋亡特征,琼脂糖凝胶电泳显示细胞DNA呈梯状降解,流式细胞仪分析出现典型亚二倍体峰.结论小檗碱可诱导人胃癌细胞BGC-823细胞凋亡,这可能为小檗碱抗癌的机理之一.     

盐酸小檗碱抑制TLR4的表达对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨盐酸小檗碱对A375黑素瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 将黑素瘤A375细胞株根据盐酸小檗碱浓度分为4组：对照组（0μmoL／L）、低剂量组（40μmoL／L）、中剂量组（80μmoL／L）、高剂量组（120μmoL／L）。然后使用CCK8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,通过Transwell法检测各组细胞的迁移能力,同时使用RT-PCR和Western blot检测A375细胞TLR4 mRNA及蛋白表达水平。采用SPSS22.0软件进行统计分析,多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。结果 盐酸小檗碱（0、40、80、120μmoL／L）分别处理A375细胞后,随盐酸小檗碱浓度的增加,A375细胞存活率（分别为100.00±4.76、70.37±3.06、48.33±0.64、26.60±2.67）逐渐降低（F=298.78,P<0.01）;细胞凋亡率逐渐升高（F=101.76,P<0.01）;细胞迁移力（分别为331.67±7.64、248.67±8.08、155.33±5.03、109.33±9.02）逐渐降低（F=510.81,P<0.01）;同时 TLR4 mRNA及蛋白表达量逐渐降低(p<0.05)。结论 盐酸小檗碱可以促进黑素瘤A375细胞凋亡、抑制A375细胞的增殖和迁移能力,且这种作用与盐酸小檗碱存在剂量-依赖关系。同时其抗肿瘤机制可能与抑制TLR4信号通路有关。     

Dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞增殖凋亡的影响

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,以Dnmt1(DNA methyltransferase 1)为靶基因,设计构建重组体pshRNA-Dnmt1,研究其对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法:设计shRNA的寡核苷酸片断,再克隆至载体pTZU6 1中构建重组体pshRNA-Dnmt1,转染胃癌细胞株AGS,用Western Blot检测DNMT1蛋白水平变化,用RT-PCR法评估mRNA水平,MTT法动态监测活细胞数,AO/EB法、电镜和TUNEL观察其促凋亡作用.结果:成功构建重组质粒pshRNA-Dnmt1 后,进行序列分析得到确证. RT-PCR检测结果证实: 重组质粒pshRNA-Dnmt1 对胃癌AGS细胞中Dnmt1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24 h抑制率在21.63%左右;48 h为52.97%;72 h为72.06%. Western Blot检测结果表明:pshRNA-Dnmt1 转染AGS细胞后24 h出现DNMT1蛋白表达量减少,抑制率为28.24%;48 h为68.54%;72 h为81.47%. MTT结果提示: 转染后24, 48和72 h细胞数存活率为对照组的79.49%, 51.63%和39.16%. AO/EB法、电镜和TUNEL都看见大量典型的凋亡和坏死细胞,转染后48 h的细胞凋亡率由对照组的5%上升为35%左右.结论:重组质粒pshRNA-Dnmt1 能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内Dnmt1基因的表达,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,从而为肿瘤的基因治疗开辟了新途径.     

盐酸小檗碱抑制人胃癌细胞与诱导凋亡的实验研究

目的:探讨盐酸小檗碱体外对人胃癌细胞的抑制与诱导凋亡的影响.方法:以人胃腺癌细胞株SGC-7901为实验模型,用盐酸小檗碱大(8μg/ml)、小(4μg/ml)两个剂量组进行干预,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,光镜、扫描电镜、流式细胞术方法对细胞抑制、凋亡进行定性、定量检测,并设对照组对比.结果:不同浓度的盐酸小檗碱作用不同时间后,均对SGC-7901细胞产生抑制作用,且药物浓度越高、作用时间越长,抑制作用越强.扫描电镜下观测到细胞固缩,微绒毛消失,细胞间连接稀疏,凋亡小体形成.凋亡细胞发生率与药物浓度呈正相关.结论:盐酸小檗碱对人胃癌细胞生长具有明显抑制作用,并能显著诱导凋亡,这可能为该药抗胃癌作用的重要机理.     

小檗碱诱导人胃癌细胞凋亡与调控基因表达的实验研究

目的探讨黄连的主要有效成分小檗碱诱导人胃癌细胞凋亡与调控基因表达水平.方法以人胃腺癌细胞株SGC-7901为实验模型,用盐酸小檗碱大(8μg/mL)、小(4 μg/mL)2个剂量组进行干预,采用光镜、扫描电镜、流式细胞仪对凋亡细胞进行定性与定量检测,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测胃癌细胞中P53和Bcl-2的mRNA表达水平.结果小檗碱8μg/mL作用72 h,电镜下出现凋亡小体;4μg/mL、8 μg/mL作用72 h,流式细胞仪DNA直方图出现典型的亚二倍体峰;4μg/mL作用72h,Bcl-2基因表达水平降低,野生型P53基因表达水平升高;8μg/mL作用72h,Bcl-2基因不表达,野生型P53基因表达水平显著升高.结论小檗碱能诱导胃癌细胞凋亡,其机理主要为下调Bcl-2基因的表达,上调野生型P53基因表达.     

盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的观察盐酸小檗碱对大鼠主动脉内皮细胞增殖与凋亡的作用,以探讨盐酸小檗碱促进内皮细胞凋亡的机制。方法 25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L浓度小檗碱分别干预大鼠主动脉内皮细胞1 h、2 h、4h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h。MTT法检测细胞增殖活性,Western Blot方法检测促凋亡蛋白BAX的表达。结果不同浓度盐酸小檗碱作用于大鼠主动脉内皮细胞可显著抑制其增殖(P<0.001);盐酸小檗碱与大鼠主动脉内皮细胞作用24 h,促凋亡蛋白BAX随浓度增加而上调(P<0.001)。结论盐酸小檗碱可抑制大鼠主动脉内皮细胞增殖,并上调促凋亡蛋白BAX水平。     

和厚朴酚对人肺小细胞癌N446细胞增殖与凋亡的影响

目的在体外培养条件下,研究不同浓度的和厚朴酚对人肺小细胞癌N446细胞的影响,探讨和厚朴酚对增殖与凋亡的作用,评价和厚朴酚的抗肿瘤作用。方法应用MTI＇法检测不同浓度的和厚朴酚对N446细胞增殖的影响,用流式细胞仪测定和厚朴酚对N446细胞凋亡率的影响。结果各种浓度的和厚朴酚均可抑制N446细胞增殖,且抑制作用随浓度的增加和时间的延长呈明显增强趋势。3种不同浓度的和厚朴酚（5、10、20μg/ml）培养48h均可使N446细胞凋亡率升高,与对照组比较有统计学意义。结论和厚朴酚可抑制N446细胞的增殖,并诱导N446细胞的细胞凋亡。     

阿司匹林对人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞生长和凋亡的影响

 目的研究阿司匹林对体外培养的人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度及作用时间下阿司匹林对子宫内膜腺癌Ishikawa细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测不同浓度阿司匹林对细胞周期和凋亡率的影响;应用透射电镜观察阿司匹林作用后细胞的形态学变化。结果阿司匹林对人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈时间与剂量依赖性(P<0.05);阿司匹林使细胞阻滞在G1期,细胞凋亡率增加,与药物作用浓度相关(P<0.05);阿司匹林作用后细胞体积缩小,染色质浓缩致密,可见凋亡小体形成。结论阿司匹林能够显著抑制人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞的增殖,并诱导其发生凋亡。     

Effects of Spinach Powder Fat-Soluble Extract on Proliferation of Human Gastric Adenocarcinoma Cells

INTRODUCTIONMoreandmoreattentionhasbeenfocusedontheanti-cancereffectofvegetablesinre-centyears.Inpreviousepidemiologcalstudies,ithasbeenconcludedthatahighlevelofconsumptionofvegetablesandfruitsisconsistentlyassociatedwithareducedriskofepithe-lialcancers,particulariythoseofthealimentaryandrespiratorytracts(SteinmetsandPot-ter,l99l).Meanwhile,manyresearchershavestudiedthepossiblemechanismsforthean-ti-cancereffectsofvegetablesandfruits(SteinmetsandPotter,l992).Ininvitrostudies,someofthefat-…     

Caveolin-1基因转染对人胃腺癌细胞生长的影响

目的 探讨外源性Caveolin-1基因在人胃腺癌细胞中的表达作用.方法 将pcl-neo-caveolin-1人全长质粒转染入MGC803细胞中,用G418筛选得到细胞克隆并扩大培养,获得稳定表达caveolin-1的细胞系,通过Western-blot、细胞计数及流式细胞术等方法检测基因表达、细胞增殖分化等情况.结果 与对照组和pcl-neo空质粒转染组相比,转染caveolin-1基因后的MGC803细胞的caveolin-1的表达明显增高,而P-ERK1/2的表达却明显下降;细胞的群体倍增时间明显延长:由46.67或47.32小时延长至65.46小时,差异有显著性(P＜0.01); 细胞周期分布发生明显变化:G0/G1期细胞比例由35.02%增加到51.98%,S期比例由56.97%下降至39.80%,G2、M期无明显变化.结论 Caveolin-1通过抑制MGC803细胞的增殖而导致其发生G0/G1期阻滞,可为肿瘤基因治疗提供实验依据.     

菊米提取液对人胃癌细胞AGS增殖和凋亡的影响

目的观察菊米提取液对人胃癌细胞株AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法 AGS细胞与0.001、0.002、0.005、0.010mg/ml的菊米提取液共同孵育48h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况,分光光度法检测caspase-3/7酶及caspase-6酶活性。结果不同浓度(0.001～0.010mg/ml)的菊米提取液对AGS细胞的生长具有明显的抑制作用,呈现出一定的剂量依赖性;含菊米提取液0.002、0.005、0.010mg/ml的药物组细胞凋亡发生率分别为(11.03±2.01)%、(15.53±1.96)%及(23.77±1.65)%,不含药的对照组细胞凋亡发生率为(1.77±0.60)%;与对照组相比,除最低浓度(0.001mg/ml)药物组以外,其余药物组(0.002、0.005、0.010mg/ml)caspase-3/7酶及caspase-6酶活性有显著增强。结论菊米提取液在体外可呈浓度依赖性抑制人胃癌细胞株AGS的增殖并通过caspase-3、6、7通路促进其凋亡。     

N-乙酰半胱氨酸对胃腺癌细胞株增殖凋亡及细胞内Ca2 浓度的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸对胃腺癌细胞株增殖、凋亡以及细胞内钙离子信号传导系统的影响.方法:应用MTT法、TDT法,流式细胞仪观察细胞的增殖、凋亡情况,Fluo-3荧光标记流式细胞仪检测法观察细胞内Ca2 离子浓度的变化.结果:所研究的1、2、4、8 mmol的N-乙酰半胱氨酸均对胃腺癌细胞株细胞的增殖、凋亡产生影响,且引起细胞内Ca2 浓度升高.结论:N-乙酰半胱氨酸可对胃腺癌细胞株增殖、凋亡以及细胞内钙离子信号传导系统产生影响.     

稳定转染靶向autotaxin的shRNA对胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭力的影响

目的研究shRNA抑制人胃癌细胞株AGS中自分泌运动因子Autotaxin表达对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法通过基因序列设计合成特异性ATX-shRNA及随机阴性对照mock-shRNA,构建相应的表达质粒pSUPER-ATX及pSUPER-mock,在阳离子脂质体的介导下将此表达质粒及空载质粒pSUPER-control转染至人胃癌细胞株AGS。于转染后24、48、72h收集细胞,用RT-PCR和Western blot法检测转染后各组细胞及野型AGS细胞的内源性ATX mRNA和蛋白的表达;体外实验(MTT法、transwell法及matrigel法)测定肿瘤细胞增殖、体外迁移及侵袭能力。结果 shRNA表达载体pSUPER-ATX经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。转染pSUPER-ATX后的胃癌细胞ATX mRNA和蛋白较其他组表达明显降低(P<0.01),其增殖、体外迁移及侵袭力也明显降低。结论 shRNA能有效持续抑制人胃癌细胞株AGS的ATX基因与蛋白的表达,并降低癌细胞的迁移及侵袭力。     

膜联蛋白A7过表达对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨膜联蛋白A7(A N X A7)过表达对人胃癌M G C-803细胞增殖和凋亡的影响.方法 将人胃癌MGC-803细胞分为ANXA7过表达组、阴性对照组,脂质体转染法将pcDNA3.1-ANXA7重组质粒以及空质粒分别转染ANXA7过表达组和阴性对照组.采用Western blot鉴定ANXA7过表达;转染4...     

清金得生片对人肺腺癌细胞(LAC)抑制与凋亡的诱导作用

【目的】观察清金得生片对人肺腺癌细胞(LAC)的抑制与凋亡的影响。【方法】以8 g/kg剂量的清金得生片,0.2 g/kg剂量的替加氟(FT-207)灌胃SD大鼠制备体积分数为10%、20%、30%的中药含药血清和体积分数为20%的FT-207含药血清,并设空白血清对照;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法观察清金得生片对LAC的抑制作用;采用硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色法,以流式细胞仪检测清金得生片对LAC细胞早期凋亡的影响;采用透射电镜观察中药对LAC超微结构的影响。【结果】不同剂量中药含药血清对LAC增殖的抑制作用与药物浓度及作用时间呈一定依赖关系,其中体积分数为30%的中药含药血清作用72 h时的抑瘤率达32%;各剂量组中药含药血清均具有一定诱导LAC细胞凋亡的作用;中药含药血清高、中剂量组透射电镜下可见明显凋亡特征,低剂量组凋亡特征不明显。【结论】清金得生片的抗肿瘤机制可能与其能抑制LAC增殖、诱导细胞凋亡作用有关。     

黄连素对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨黄连素对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:用浓度分别为0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L的黄连素与人胰腺癌Panc-1细胞共同培养,MTT法检测胰腺癌细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化检测细胞中的Caspase-3蛋白的表达。结果:黄连素对人胰腺癌Panc-1细胞增殖抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增强;黄连素作用48 h后人胰腺癌Panc-1细胞凋亡率明显增加,且随药物浓度的增加而升高;黄连素作用48 h后人胰腺癌Panc-1细胞的Caspase-3蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄连素能抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖,而且可能通过增加Caspase-3蛋白的表达来增强胰腺癌细胞的凋亡。