HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清、肝组织HBV全基因序列分析

目的 了解HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清和肝组织中的HBV基因序列,并比较其差异性.方法 以1例长期随访HBsAb阳性隐匿性HBV感染者作为研究对象,用多种试剂盒检测其血清HBsAg、HBsAb,提取外周血血清和肝组织HBV DNA进行全基因组分段扩增,行序列测定及同源性比较.结果 多种试剂盒检测均提示该例患者HBsAg阴性、HBsAb阳性;血清HBV DNA为103～ 105拷贝/mL;血清和肝组织来源的HBV DNA全基因测序完全相同,均为3 215个碱基、B基因型,与参照序列核苷酸同源性为98.82％,各编码区均没有缺失或移码突变,不同编码区的核苷酸序列同源性为98.37％～ 100％,氨基酸序列同源性为98.18％～ 100％,在S区存在几种变异如PreS1的Q80H、S的C64Y、E164G、L175S,但前S区、“a”决定簇、1 762/1 764、1 896位点均未见变异.结论 HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清和肝组织来源的HBV基因序列无明显差异.     

HBsAg和HBsAb双阳性检测结果的初步分析

目的对临床检测中少见的HBsAg和HBsAb双阳性结果进行分析,寻找可能的产生原因。方法对3家医院初筛HBsAg和HBsAb双阳性的81份血标本进行同种和不同种试剂盒复检,并检测HBsAg145位氨基酸变异（G145R变异）、HBVDNA基因型和血清型分析。结果81份双阳性标本经复检有30例（37％）仍然为双阳性;对30例复检双阳性标本应用不同试剂盒再次检测,HBsAg／HBsAb仍为双阳性者18例（22．2％）;18例双阳性标本G145R检测全部为阴性;其中8例HBV DNA阳性血清的基因型分布为B型2例和C型6例,血清型分布为adw2例、adr5例和ayr1例,与9份对照血清的检测结果比无显著性差异。结论HBsAg和HBsAb双阳性检测结果大多数与操作或试剂的质量有关,少数可能为S基因变异或不同血清型的再次感染等有关。     

表面抗原和抗体双阳性慢性乙型肝炎病毒感染者病毒S基因的变异分析

目的 了解HBsAg和抗-HBs双阳性慢性HBV感染者的S基因变异情况.方法 分别对8例HBsAg和抗-HBs双阳性(实验组)及9例HBsAg阳性、抗-HBs阴性慢性HBV感染者(对照组)的S基因进行PCR扩增并测序,将测序结果进行对比分析.基因型和血清型分布比较、主要亲水区变异位点数比较采用Fisher'S精确检验,核苷酸和氨基酸序列的同源性比较采用t检验.结果 感染HBV的基因型分布:实验组为B型2例、C型6例,对照组为B型6例、C型3例,两组间差异无统计学意义(P>0.05);血清型分布:实验组为adw 2例、adr 5例、ayr 1例,对照组为adw 6例、adr 3例,两组间差异无统计学意义(P>0.05).实验组和对照组HBV前S1区的核苷酸替换率(2.29%比1.8%)和氨基酸替换率(2.66%比1.59%)差异无统计学意义(t值分别为1.56和1.39,P值均>0.05),前S2区的核苷酸替换率(1.74%比0.91%)差异有统计学意义(t=4.68,P<0.01),氨基酸替换率(3.18%比2.05%)差异无统计学意义(t=1.85,P>0.05);S区的核苷酸替换率(2.13%比0.81%)和氨基酸替换率(4.37%比1.52%)差异有统计学意义(t值分别为6.00和5.32,P值均<0.01).主要亲水区内外均存在氨基酸的替换,"a"决定簇变异相对较高(P<0.05).结论 HBsAg和抗-HBs双阳性慢性HBV感染者的S基因变异率相对较高.     

HBsAg/HBsAb双阳性慢性乙型肝炎患者HBV S基因免疫逃逸相关变异分析

目的分析HBsAg/HBsAb双阳性慢性乙型肝炎患者HBV S基因主要亲水区免疫逃逸相关位点变异特点。方法收集89例HBsAg/HBsAb双阳性和148例HBsAg单阳性的慢性乙型肝炎患者血清及临床资料,提取患者血清HBV DNA,扩增患者HBV S基因并进行测序,应用DNASTAR Lasergene Meg Align软件对主要亲水区已有文献报道的46个免疫逃逸相关位点及新增N-糖基化变异进行比对分析。结果 2组患者在年龄、ALT、TBIL、HBV DNA载量和HBe Ag阳性率方面差异均无统计学意义(P均0.05)。HBsAg/HBsAb双阳性患者HBV S基因主要亲水区变异的总检出率为31.46%,明显高于HBsAg单阳性患者的18.92%(P0.05),其中s L110I/S、s T113N/S、s T131I/N/P和s S143L/M/T的变异检出率明显高于单阳性组;双阳性患者多位点联合变异检出率亦明显高于单阳性患者(20.22%vs.6.08%,P0.05)。双阳性患者新增N-糖基化变异检出率高于单阳性患者(7.87%vs.2.03%),差异具有统计学意义(P0.05)。结论 HBsAg/HBsAb双阳性患者比HBsAg单阳性患者的HBV S基因免疫逃逸相关变异种类更多,单位点和多位点联合变异检出率更高,并且新增N-糖基化变异检出率也更高,这些变异可能是引起慢性乙型肝炎患者HBsAg/HBsAb双阳性共存的驱动因素之一。     

HBsAg与抗-HBs同时阳性慢性乙肝患者HBV基因全序列分析

目的 报告HBsAg与抗-HBs同时阳性慢性乙肝患者基因序列变化特点.方法 对三例HBsAg与抗-HBs同时阳性慢性乙肝患者血清中HBV DNA基因全序列进行PCR扩增、测序,并对测序结果及S区氨基酸进行分析.结果 测序结果发现三例患者血清中HBV S区氨基酸均发生替换突变,并且,三例患者中HBV DNA发生碱基替换的位点大部分相同,且替换后碱基基本相同.结论 HBsAg与抗-HBs同时阳性慢性乙型肝炎患者常发生S区氨基酸序列突变,双阳现象的出现亦可能与S区外其他位点碱基突变有关.     

HBsAg阴性/抗HBc阳性献血员HBV感染状况调查

目的 对431例HBsAg阴性献血员检测抗-HBc、抗-HBs,抗-HBc阳性者196例(45.5％),其中单项抗-HBc阳性者35例(17.9％),抗-HBc/抗-HBs阳性者161例(82.1％)。对抗-HBc阳性者检测抗-HBc IgM和HBV DNA(聚合酶链法),抗-HBc IgM的检出率为32.1％(63/196),其中抗-HBc/抗-HBs阳性者检出率为29.8％(48/161),单项抗-HBc阳性者检出率为42.9％(13/35),二者无差异;HBV DNA检出率为14.8％(29/196),单项抗-HBc阳性者HBV DNA检出率为25.7％,显著高于抗-HBs/抗-HBc阳性者(12.4％)(P<0.05);抗-HBc IgM阳性者HBV DNA检出率(39.7％)也显著高于抗-HBc IgM阴性者(3.0％)(P<0.001),二者阴阳性符合率则为78.6％(154/196)。HBsAg阴性/抗-HBc阳性献血员仍有传染性存在,尤以抗-HBc IgM阳性者最具血源传播HBV的危险性,因此,建议对HBsAg阴性献血员再进一步筛检抗-HBc IgM。     

HBsAg与抗-HBs同时阳性的慢性乙型肝炎患者临床特点分析

目的分析HBsAg与抗-HBs同时阳性的现象及其临床特点,并探讨其产生的原因。方法收集2011年2月-2014年2月东南大学附属第二医院体检者2260例,其中被诊断为慢性乙型肝炎的患者830例。采用化学发光微粒子免疫分析法筛选HBsAg与抗-HBs同时阳性的患者188例,分为HBeAg阳性组(n=101)和HBeAg阴性组(n=87)。同时选取200例HBsAg阳性、抗-HBs阴性者作为对照,其中HBeAg阳性组80例,HBeAg阴性组120例。检测HBV血清学标志物、肝功能、病毒载量并结合临床进行分析。计数资料组间比较采用χ2检验。结果 HBV血清学标志物在HBsAg与抗-HBs双阳性情况下共有5种模式,其中以HBsAg、抗-HBs、HBeAg及抗-HBc阳性,且抗-HBe阴性多见,占47.9%(90/188),肝功能指标总异常率为69.1%(130/188),HBV DNA总阳性率为56.9%(107/188)。HBeAg阳性的2组HBV DNA均存在高水平复制,其中HBsAg与抗-HBs双阳性组HBV DNA阳性率与对照组比较,差异无统计学意义(χ2=2.632,P0.05);HBeAg阴性组中,HBsAg与抗-HBs双阳性组HBV DNA定量1×105IU/ml的比例与对照组比较,差异有统计学意义(χ2=10.740,P0.05)。对HBV S区进行测序分析发现,测序的80例HBsAg与抗-HBs双阳性患者中有27例患者的HBV S区发生变异,突变率33.7%,且S区变异位点主要有P29L、S61L、P62L、I126T/S、Q129N、M133K、F134L、G145R/K、L175S和L186H等。结论 HBsAg与抗-HBs同时阳性者在乙型肝炎患者中有一定比例,其主要原因可能是病毒株变异所致。这种情况并不代表疾病好转,且抗-HBs出现并不一定能完全有效清除HBsAg,病毒DNA往往存在持续复制,需引起重视。     

肝细胞癌患者血清乙型肝炎病毒X区及前S/S区基因变异特点

H CC是常见的恶性肿瘤之一。众多流行病学资料显示，慢性HBV感染是HCC的主要病因。HBV感染致HCC的确切机制尚未彻底阐明，有学者认为HBV基因变异与肝癌发生发展密切相关!‘]。HBVC区变异与HBeAg血清转换及肝炎活动相关，与HCC发生关系不大121。而P基因区变异与抗病毒药物耐药有     

HBV基因型和S基因序列特点与慢性乙型肝炎患者HBsAg/抗-HBs共存关系

目的探讨HBV基因型及S基因序列特点与慢性乙型肝炎（CHB）患者HBsAg和抗-HBs共存的内在相关性以及HBsAg＋/抗-HBs＋的发生机制及意义。方法共收集49例HBsAg＋/抗-HBs＋CHB患者的血清HBVDNA样本,采用PCR-RFLP及测序法鉴定其基因型,并与267例HBsAg＋/抗-HBs-CHB患者的HBV基因型分布进行比较。对6例HBsAg＋/抗-HBs＋CHB患者（Ⅰ组）的HBVS基因进行克隆测序,并与HBsAg＋/抗-HBs-CHB患者（Ⅱ组）进行对比,分析变异种类及频率等的差异。结果 HBsAg＋/抗-HBs＋CHB患者HBV基因型B、C及B/C混合感染的构成比分别为63.3%（31/49）、26.5%（13/49）、10.2%（5/49）,而对照组上述构成比分别为52.8%（141/267）、46.1%（123/267）、1.1%（3/267）,两组构成比差异有统计学意义（P〈0.01）。Ⅰ组HBsAg各区段,特别是主要亲水区（MHR）的变异位点明显多于Ⅱ组;发现了若干新变异、少见的W196和C69终止突变,1例患者检测到G145R变异。某些患者HBsAgMHR-2（包含a决定簇）并未发现变异。结论 HBV基因型的差异及HBsAg变异增多可能是部分CHB患者出现HBsAg＋/抗-HBs＋的原因之一;基因型B或B/C混合感染相对更易出现HBsAg＋/抗-HBs＋。HBsAg变异增多是CHB患者出现HBsAg＋/抗-HBs＋的重要机制之一。某些患者HBsAgMHR-2并无变异,提示HBsAg/抗-HBs共存还存在其他机制。     

HBV前S/S区变异与HBV相关肝病的关系

HBV前S(pre-S)/S区基因变异导致了多种相关的病理及临床后果,包括隐匿性乙型肝炎、暴发性肝炎或肝衰竭、HBs Ag/抗-HBs双阳性的HBV感染、原发性肝癌,其参与了这些HBV相关疾病的发生发展。介绍了HBV pre-S/S基因组变异与这些HBV相关性疾病发生发展的关系,对相关临床及基础研究的结果作一综述,并强调了目前研究中尚存在争议的问题,为其进一步研究提供线索。     

HBsAg、抗HBs共存与HBV基因型及基因变异的关系

目的探讨无锡地区HBV感染者HBsAg与抗HBs共存模式与基因型、S基因变异、病毒复制的关系.方法采用微粒子捕获酶联放射免疫法及ELISA测定HBV M;套式PCR扩增HBV DNA,并作序列分析;荧光定量法检测HBV DNA含量.结果抗HBs阳性血清加入多价HBsAg后,抗HBs可阴转;21份血清出现S区多位点变异,造成HBsAg肽36、47、63、77、89、90、115、126、129、139、154位氨基酸替换,该变异不影响病毒复制;本模式中B基因型1例(3.2%),C基因型30例(96.8%),没有发现A、D、E、F、G基因型;基因变异与否和基因型无显著性差异,P＞0.05.结论S基因变异可改变HBsAg抗原性,导致HBsAg与抗HBs结合力降低,以及检测灵敏度的提高,这些是造成HB-sAg与抗HBs共存的原因;本模式以C基因型占绝对优势,且基因型与基因变异无相关性.     

HBsAg阴性/HBV DNA阳性与S基因变异的关系——附8例报告

目的研究无锡地区HBV感染者HBsAg缺失与S基因变异的关系,探讨其形成机理。方法采用ABBOTT测定 HBV M;套式 PCR检测 HBV DNA并作S基因序列分析;荧光定量法测定HBV DNA含量。结果8例HBsAg缺失者S基因出现了变异,导致HBsAg肽63、82、89、90、91、101、115、154位氨基酸替换,且89、90位氨基酸为联合变异;该模式75％(6/8)系慢性肝炎病人,87.5％(7/8)未使用免疫制剂,其HBV DNA含量是低的,而血清抗-HBs中位数值达239.1mU/ml。结论 HBsAg缺失模式多为自然发生的变异,变异主要发生在 a决定簇以外部分,可改变HBsAg的抗原性,使其不能被现行的试剂所检出,此外HBsAg阴性也与血液中HBV DNA含量低有关。     

Sequence analysis of the S gene region in HBV DNA from patients positive for both HBsAg and HBsAb tests

Aims: To study the characteristics of mutation in the amino acids coded by the S gene region in the HBV DNA sequence and to comprehensively explore and analyze the cause of the double positive result phenomena in both HBsAg and HBsAb tests. Methods: Specimens collected from 43 cases of chronic hepatitis B patients with positive results for both HBsAg and HBsAb tests were used as the experimental group; specimens collected from 43 cases randomly picked from all patients with chronic hepatitis B with a single positive result for HBsAg test were used as the control group. In HBV DNA, the S gene region was amplified and sequenced. Amino acid sequences were grouped, and mutations were analyzed based on the sequencing results. Results: The patients were infected with HBV of the genotype B and C and those who with genotype C show more mutations than genotype B carriers. Compared with the control group, the experimental group had a marked increase in S gene amino acid mutations; a higher amino acid mutation rate was observed in the first loop (aa124–137) of the a‐determinant (aa124–147) and there was a statistical difference (genotype B: 2.68% vs. 0.00%, P = 0.041; genotype C: 7.14% vs. 2.01%, P < 0.001). Conclusion: The first loop in a‐determinant of S gene sequence possesses a large numbers of mutated amino acids, leading to changes of antigenicity and simultaneous positive results in both HBsAg and HBsAb tests finally.     

母婴传播后母子体内乙型肝炎病毒前S/S基因变异研究

目的 通过经母婴传播获得乙型肝炎病毒(HBV)感染的慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)母子体内HBV PreS/S基因序列研究,了解来源相同的HBV在不同程度病毒血症情况下PreS/S基因变异的特点。方法 选择15对母孕前为HBV感染、未接种过乙型肝炎疫苗且均未使用过抗HBV药物的ASC母子。应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-PreS/S、双酶切进行鉴定,每个患者选2个酶切鉴定正确的克隆测序并进行分析。结果 选择15对ASC母子,根据HBV病毒血症高低分为3组,每组5对,A组母子均为高病毒血症,B组子女为高病毒血症、母亲为低病毒血症,C组子女为低病毒血症、母亲为高病毒血症。高病毒血症患者均为乙型肝炎e抗原( ),低病毒血症均为抗-HBe( )。母子HBV亚型相同,各组中有4/5对母子为B/adw2、1/5对母子为C/adrq 亚型。对每组中B/adw2亚型HBV患者的PreS/S基因进行分析显示:高病毒血症组间或低病毒血症组间HBV PreS/S基因变异数目及位点差异均无显著性,变异与年龄无关,低病毒血症患者变异数目及位点明显高于高病毒血症患者。两个低病毒血症组PreS/S基因绝大多数变异位点相同(113个),其中变异热点85个、可引起37个氨基酸变异,这些变异的氨基酸大多位于免疫表位内或(和)其附近。结论 HBV变异可能与感染的时间长短无关;在发生乙型肝     

HBV基因疫苗联合抗原蛋白免疫小鼠的研究

目的构建乙肝病毒（ＨＢＶ）基因疫苗,观察其与ＨＢＶ表面抗原蛋白（ＨＢｓＡｇ）联合免疫小鼠诱导的免疫应答．方法构建重组真核表达质粒ｐＣＲ３１Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,联合应用纯ＨＢｓＡｇ蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,以单用基因疫苗ｐＣＲ３１Ｓ或纯蛋白ＨＢｓＡｇ免疫小鼠作为对照组．采用ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠血清抗ＨＢｓ,另取免疫小鼠脾细胞,用３ＨＴｄＲ掺入法测定各组免疫小鼠的淋巴细胞增殖活性．结果２,４ｗｋ时联合免疫组抗ＨＢｓ效价低于纯蛋白免疫组,高于基因疫苗免疫组;６ｗｋ后基因疫苗免疫组抗ＨＢｓ效价升至最高,联合免疫组次之．３ＨＴｄＲ掺入法测定显示,各组免疫小鼠的淋巴细胞增殖反应差异不显著．结论乙肝病毒基因疫苗与表面抗原蛋白联合免疫无优势．     

唐山地区乙肝患者HBsAg滴度、HBV DNA水平与乙肝基因突变位点的关系研究

目的:研究唐山地区乙型肝炎(乙肝)患者乙肝表面抗原(HBsAg)滴度、乙肝病毒基因(HBV DNA)水平与乙肝基因突变位点的关系。方法:选择2018年1月—2020年12月唐山地区150例乙肝患者作为研究对象,测定HBsAg滴度和血清HBV DNA水平,通过基因测序分析突变情况,并据此分为突变组与未突变组,比较不同基因突变位点患者的HBsAg滴度、HBV DNA水平,使用线性回归分析唐山地区乙肝患者HBsAg滴度、HBV DNA水平与乙肝基因突变位点的关系。结果:本研究150例乙肝患者中,有62例患者发生了基因突变,基因突变发生率为41.33%(62/150)。其中,rtM204I/V位点基因突变占比最高,为27.42%(17/62),rtL180M次之,为22.58%(14/62);rtL180M+rtM204I/V、rtA181T+rtN236T基因突变患者HBsAg滴度、HBV DNA水平高于rtM204I/V、rtL180M、rtN236T基因突变患者,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,基因突变乙肝患者HBsAg滴度、HBV DNA水平...     

隐匿性乙型肝炎:免疫组织化学和S基因序列分析

目的　了解不明原因慢性肝病中隐匿性乙型肝炎所占比例 ,隐匿性乙型肝炎的发病机制及临床、病理特点。方法　给予 2 0例不明原因慢性肝病患者肝穿刺病理检查 ,应用免疫组织化学方法检测肝组织内的乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)、核心抗原 (HBcAg) ,丙型肝炎病毒NS3、NS4抗原。采用荧光定量PCR方法对血清HBVDNA进行定量 ,用套式PCR方法扩增HBVS基因 ,对PCR产物进行直接测序 ,比较S基因的核苷酸和推导出的氨基酸序列的差异。结果　 5例患者经肝脏病理检查表现为慢性炎症 ,3例在肝组织内HBsAg、HBcAg同时阳性 ,2例仅HBcAg阳性。S基因的氨基酸序列分析显示 ,1例患者S基因的 74位密码子发生终止变异 ,另 1例在HBsAg的“a”决定簇内有 2个氨基酸发生变异 (T13 1N ,M 13 3S) ,其他 3例患者HBsAg的“a”决定簇内未发现变异。 结论　在我国隐匿性乙型肝炎是不明原因肝病的主要原因之一 ,低水平的血清HBVDNA可以引起慢性肝炎。部分隐匿性乙型肝炎HBsAg阴性的原因是S基因变异引起的 ,而有些患者则可能因为血清HBsAg水平过低 ,导致HBsAg检测阴性。     

HBV前S/S基因突变的研究进展

HBV前S/S区基因突变可以是自发的,也可以是外界压力选择的结果。突变株可通过输血、器官移植、分娩等造成HBV感染,也可以引起急性、慢性和隐匿性HBV感染。HBV前S/S基因突变可导致病毒生物学特点和免疫应答发生改变,引起免疫逃逸、疫苗预防失败、HBs Ag阴性感染和疾病重症化等,与肝硬化和肝癌的进展也有密切关系,从而影响HBV慢性感染的临床转归。