儿童急性白血病WT1和bcl-2基因的表达及意义

目的研究急性白血病患儿WT1和bcl-2基因表达情况及其相关性，探讨两者与儿童急性白血病发病机制和预后的关系。方法应用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定56例急性白血病患儿及12例对照患儿的WT1基因表达，同时采用免疫荧光流式细胞术观察40例急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿抗凋亡基因bcl-2的表达。结果56例急性白血病患儿中38例WT1基因表达阳性，较对照组明显为高（P＜0．01）；在ALL和急性髓系白血病（AML）患儿WT1基因表达阳性率分别为65．96％和77．78％，差别没有统计学意义（P＞0．05）；WT1表达阳性患儿的完全缓解率（CR）低于表达阴性患儿（P＜0．05）。40例ALL患儿中bcl-2高表达28例，较对照组明显为高（P＜0．01）；AML患儿的bcl-2表达与WT1基因表达正相关（Pearson相关系数为0．262）；bcl-2高表达患儿CR低于低表达患儿（P＜0．05）；联合WT1及bcl-2表达情况将ALL患儿分为高危、中危和低危三组，其CR率分别为33．33％、72．73％和100％，三组间差异有显著性（P＜0．05）。结论WT1基因和bcl-2表达与儿童急性白血病的发病和预后密切相关；WT1基因及bcl-2的共同表达情况可作为预测ALL患儿预后的重要指标。     

肿瘤相关基因fgfr3mRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义

本研究旨在了解白血病细胞中fgfr3基因的表达水平及其和临床的关系。应用RT—PCR法检测4个白血病细胞系及96例白血病患者和14例对照者骨髓样本中fgfr3mRNA的表达，并分析了其与临床指标及染色体异常的相关性。96例白血病患者包括36例AML，29例ALL和31例CML。结果表明：fgfr3基因在K562和U937细胞中有表达，而在HL-60和SHI-1细胞中无表达。AL组和CML组fgfr3基因的阳性率（分别为46．15％和51．61％）与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。AML组和ALL组fgfr3基因的阳性率（分别为44．44％和48．28％）均高于对照水平，差异有统计学意义（p〈0．05）。fgfr3基因的阳性表达与外周血高白细胞计数（≥20×10^9／L）呈显著性正相关（P〈0．05）。ALL患者中fgfr3基因的表达与bcr／abl融合基因的异常呈显著正相关（r=0．151，P〈0．05）。而AL患者fgfr3基因的阳性表达与染色体预后分组无显著相关性。结论：AL和CML患者均存在fgfr3基因的过表达，提示fgfr3基因可能参与了AL和CML的发病。     

WT1基因在骨髓增生异常综合征及急性白血病患者中的表达

为了研究WT1基因在骨髓增生异常综合征 (MDS)和急性白血病 (AL)患者中的表达及其与临床预后的关系 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 2 2例MDS和 6 9例AL的WT1mRNA的表达。结果表明 ,WT1mRNA在MDS RA及MDS RAS中低表达 ,阳性率为 10 % (1/10 ) ;在MDS RAEB和MDS RAEB t中高表达 ,阳性率为 91.7% (11/12 ) ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。WT1mRNA在各型急性白血病中均有表达 ,初发和复发急性白血病中WT1mRNA的阳性率 (6 9% )高于缓解患者 (12 .5 % ) (P <0 .0 1)。初发与复发AL的WT1mRNA的相对表达量无差异 ,而MDS RAEB和RAEB t的表达量低于初发AL患者。WT1mRNA阳性的AML患者的化疗缓解率 (4 1% )低于阴性患者 (78% ) ;WT1基因相对表达量≥ 1的AML患者的CR率 (18% )低于 <1的患者 (5 5 % )。结论 :WT1基因在MDS RAEB和MDS RAEB t中的表达明显高于MDS RA和MDS RAS ,动态监测WT1基因的表达可能有助于监测MDS的病情变化。WT1基因表达与否及表达高低与初发AL的预后有关 ;WT1基因是急性髓细胞白血病的一个独立的预后因素。     

白血病患者WT1基因表达及其临床意义观察

目的：观察WT1基因在白血病细胞中的表达及其临床意义，初步探讨WT1基因表达与白血病疗效关系。方法：采用逆转录～聚合酶链法(RT-PCR)检测治疗前47例各类型和白血病患者WT1基因的表达，并观察缓解后患者WT1基因表达的变化，并对33例WT1表达阳性者进行单链构象多态性分析(SSCP)分析。结果：急性白血病37例中30例(81．08％)WT1表达阳性，其中急性髓细胞白血病16／19例(84．21％)阳性，急性淋巴细胞白血病14／18例(77．78％)阳性；慢性粒细胞白血病(CML)急变期3／5例阳性，CML慢性期5例均阴性。WT1表达阳性对治疗缓解率无明显影响。对WT1表达阳性的21例急性白血病治疗后WT1表达动态观察，当获得完全缓解时，WT1表达转阴性；在白血病复发前及复发时，WT1表达转阳性。SSCP分析33例WT1阳性表达者第7～10外显子区PCR产物，未发现泳动异位条带。结论：WT1在急性白血病中表达阳性率较高；慢性粒细胞白血病慢性期未见WT1表达，急变期阳性率增高；WT1表达阳性对治疗完全缓解无明显影响。WT1基因作为泛白血病标志用于白血病微小残留病灶的检测有重要实用价值。     

急性白血病患者WT1基因表达及其临床意义

目的 观察WT1基因在白血病细胞的表达及其临床意义,探讨WT1基因表达与白血病疗效关系。方法 用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测初治及复发急性白血病患者73例治疗前WT1基因的表达,结合临床观察WT1表达阳性与急性白血病治疗疗效关系,并观察缓解后患者WT1基因表达的变化。结果 73例急性白血病患者WT1阳性53例（72．6％）,其中46例急性髓细胞白血病阳性32例（69．6％）,23例急性淋巴细胞白血病阳性17例（73．9％）。3例急性混合细胞白血病及1例急性浆细胞白血病均表达阳性。在急性淋巴细胞白血病和非M3型急性髓细胞白血病中,WT1表达阳性对治疗缓解率无明显影响。对21例患者治疗后动态观察,当完全缓解时,WT1表达转阴性;复发时WT1表达又转阳性。结论 WT1在急性白血病阳性率较高,但阳性与否对临床疗效无明显影响。WT1基因作为白血病标志用于急性白血病微小残留病的检测有重要价值。     

白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白基因的表达及其临床意义

目的：探讨白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白（Sorcin)基因的表达及其与临床耐药和疗效的关系。方法：应用半定量RT－PCR检测95例急性白血病患者、27例非白血病患者和健康人的Sorcin基因表达水平，并分析了Sorcin基因表达的临床意义。结果：白血病患者Sorcin基因表达高于对照组，差异有显著性（P＜0．001）；急性髓系白血病（AML）复发难治组高于初诊组和完全缓解（CR）组；临床耐药组Sorcin基因表达显著高于非临床耐药性（P＜0．001）；Sorcin基因阳性表达的CR率为20．0％，Sorcin基因阴性表达的CR率为80．0％，差异有显著性（P＜0．001）；AML各亚型Sorcin基因过度表达存在差异，以M5的阳性表达率最高。结论：Sorcin基因过度表达与白血病患者临床耐药密切相关，是影响预后的重要因素，可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一。     

cdx2基因在儿童白血病的表达及临床意义研究

本研究旨在探讨cdx2基因在儿童急性白血病骨髓及外周血单个核细胞中的表达及临床意义。采取33例初发儿童白血病患儿骨髓及外周血,运用RT-PCR方法检测cdx2基因在各型白血病及正常对照组中的表达,随访25例并观察其与疗效的关系。结果发现,病例组中30例急性白血病(AL)患儿cdx2表达阳性25例(83.3%),30例中21例急性淋巴细胞白血病(ALL)和9例急性髓细胞白血病(AML)cdx2表达阳性分别为20例(95.2%)和5例(55.6%),两组相比有统计学意义(p<0.05);3例慢性粒细胞白血病(CML)中1例cdx2表达阳性。对照组20例健康体检者外周血cdx2表达阴性,与病例组比较差异有统计学意义(p<0.01)。25例AL患儿cdx2阳性21例(ALL17例,AML4例)与阴性者4例(ALL1例,AML3例)经治疗后均达到完全缓解(CR)。cdx2是否阳性表达可能与CR率无相关关系。对8例cdx2表达阳性AL患儿治疗后动态观察,结果初诊cdx2阳性表达在CR时仍阳性,但随着CR延长cdx2表达逐渐转为阴性,而初诊时cdx2阴性表达在骨髓CR时仍为阴性。结论:cdx2在儿童AL患者中广泛高表达,ALL者该基因表达阳性率高于AML患儿。CML患儿中也有cdx2表达;cdx2基因表达与AL患者CR率无明显相关。     

儿童白血病WT1 MRP基因表达及临床意义

目的　探讨WT1基因、多药耐药相关蛋白基因 (MRP)表达与儿童急性白血病的关系及意义。方法　应用逆转录—聚合酶链反应 (RT -PCR)法测定 4 8例不同类型儿童急性白血病及 10例正常儿童WT1、MRP基因的表达。结果　 4 8例儿童急性白血病患者中 15例WT1基因表达阳性。WT1基因表达阳性患者的完全缓解率 (CR)低于表达阴性者 (分别为 4 4 %和81 8% ,P <0 0 5 )。 10例正常儿童WT1基因表达阴性。MRP基因表达阳性者 18例 ,MRP基因表达阳性者CR低于表达阴性者 (分别为 33 3%和 80 % ,P <0 0 5 )。 10例正常对照基因表达阴性。WT1基因表达阳性患者的MRP阳性率与WT1基因表达阴性者无明显差异 (分别为 5 5 %和 4 2 86 % ,P >0 0 5 )。统计学提示 :WT1与MRP之间无相关性。但同时表达时 ,多数发展成为难治性白血病。结论　儿童急性白血病的发生、发展、转归与WT1、MRP过度表达有关。二者均可作为临床指导治疗和判断预后的指标。     

实时定量RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞WT1基因表达

目的探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞WT1基因表达水平。方法建立实时定量RT PCR方法 ,检测了 10 8例AL患者和 2 3例非白血病患者骨髓细胞WT1基因及内参照 β 胆色原脱氢酶 (GAPDH)基因的表达水平。结果初诊与复发AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平经GAPDH校正后分别为 75 .10和 89.5 6 ,明显高于完全缓解组和对照组 (分别为 2 .0 7和 1.5 1) ,对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间无统计学差异 ;70例初诊AL中急性淋巴细胞白血病、M1、M2 、M3 亚型WT1基因表达水平明显高于M5,即粒系表达明显高于单核系 ,且WT1基因表达水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比例、mdr1基因表达无相关性 ,但与染色体核型有关。对其中 2例患者动态检测WT1基因表达可提示白血病复发情况。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞高表达 ,可作为白血病疗效评价及监测残留病灶的指标。     

利用SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR方法检测白血病患者RbAp46基因的表达

目的探讨白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.方法建立实时定量RT-PCR方法,利用SYBR Green Ⅰ染料检测140例急性白血病(AL)、13例慢性粒细胞白血病(CML)慢性期和7例CML急变期患者以及32例非白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.结果初诊与复发AL患者骨髓中RbAp46基因表达水平的M估计值分别为178.23和213.65,明显高于完全缓解组和对照组(分别为85.89和88.08);CML慢性期组M估计值为58.27,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而CML急变期组M估计值为173.24,明显高于CML慢性期组和对照组.98例初诊AL中除M2、M4亚型M估计值(62.63,130.67)与对照组相比差异无统计学意义外,余均明显高于对照组.初诊AL中RbAp46基因表达水平与bcr/abl、PML-RARα、mdrl基因的表达无相关性,但与WT1基因的表达水平呈正相关,与AML1/ETO融合基因表达呈负相关.结论RbAp46在AL初诊、复发及CML急变期患者骨髓细胞中高表达,可能参与白血病的发生.     

白血病患者WT1基因的表达及其临床意义

目的：探讨ＷＴ１基因在白血病细胞中的表达及其临床意义。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定Ｋ５６２、ＨＬ－６０、ＴＦ－１及Ｕ９３７四株白血病细胞系，４５例白血病患者，１５名正常人外周血及１０例非血液病患者正常骨髓细胞ＷＴ１基因的表达。结果：Ｋ５６２、ＨＬ－６０及ＴＦ－１三株白血病细胞系均高度表达ＷＴ１，而Ｕ９３７细胞系未测到ＷＴ１。急性髓系白血病（ＡＭＬ）２５例中２１例、急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）１１例中８例、慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）急性变者２例、慢性及加速期ＣＭＬ患者７例中１例ＷＴ１表达阳性。１５名正常人外周血及１０例非血液病患者正常骨髓细胞ＷＴ１基因表达阴性。结论：ＷＴ１基因在大多数急性白血病中表达，与白血病的病程发展可能有关，可作为检测白血病微量残留病的特异性标记。     

抑癌基因PTEN mRNA在白血病细胞中的表达及意义

目的了解白血病细胞中PTEN基因的表达情况及其与临床的关系。方法采用RT-PCR法检测5个白血病细胞系,31例慢性粒细胞白血病(CML),87例初诊急性白血病(AL)[包括59例急性髓系白血病(AML),26例急性淋巴细胞白血病(ALL),2例急性混合细胞白血病],21例完全缓解期急性白血病(AL-CR)患者骨髓标本中PTEN mRNA表达情况,并分析了与临床指标的相关性。结果PTEN基因在K562细胞中有表达,而在Kasum i-1、HL-60、U937、Nalm-1细胞中均无表达。CML组阳性率(61.29%)与正常对照组(78.57%)相比,差异无统计学意义(P>0.05),AL组和AL-CR组阳性率(分别为18.29%和42.86%)均低于正常水平(P<0.01和P<0.05),AL组阳性率又低于AL-CR组(P<0.05)。PTEN基因的阴性表达与外周血高白细胞计数(≥20×109/L)、染色体异常呈显著的正相关。结论AL患者存在PTEN基因的表达缺失,PTEN基因在AL的发病中可能起一定作用。     

WT1反义寡核苷酸对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 了解ＷＴ１反义寡核苷酸对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法 应用ＷＴ１基因的反义寡核苷酸（ＷＴ１ＡＳＯ）处理Ｋ５６２、Ｕ９３７、ＨＬ－６０细胞系,白血病患以及正常人骨髓细胞,然后以台盼蓝拒染法、细胞集落法及流式细胞仪检测法确定白血病细胞的增殖和凋亡。结果 ＷＴ１ ＡＳＯ能够抑制ＷＴ１表达阳性的Ｋ５６２细胞生长,对ＷＴ１表达阴性的Ｕ９３７细胞则无抑制作用;ＷＴ１ ＡＳＯ对８例急性髓系白血病患     

转录因子LYL1在白血病患者中的表达及作用研究

目的 探讨转录因子LYL1在不同白血病患者中的表达及在白血病发病中的作用.方法 应用荧光实时定量聚合酶链反应检测LYL1在不同类型自血病患者中的表达情况;应用特异性小干扰(si)RNA抑制LYL1的表达,观察LYL1表达下调对于白血病细胞系K562细胞增殖和分化能力的影响.结果 与正常骨髓CDM+细胞相比,LYL1在多数急性髓系白血病(AML)(急性早幼粒细胞白血病除外)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中都有异常高表达,AML完全缓解患者表达水平(1.400)较AML未缓解患者(9.985)明显下降(P<0.01);部分慢性粒细胞白血病(CML)患者的检测结果显示LYL1在CML急变期的表达(7.831)高于慢性期(1.672)(P<0.01).联合使用三种特异性siRNA可使K562细胞LYL1表达水平明显下调且对细胞生长和集落形成能力有一定抑制作用.结论 在AML、ALL患者中均有LYL1异常表达.通过siRNA干扰抑制特定癌基因表达对于抑制白血病细胞的增殖有一定效果,在治疗恶性血液病方面具有临床应用潜力.     

慢性粒细胞白血病慢性期与急变期基因表达差异的研究

目的　研究慢性粒细胞白血病 (CML)不同临床阶段的基因表达差异 ,为阐明CML演变的可能机制提供依据。方法　应用DNA芯片技术 ,对CML慢性期与急变期骨髓单个核细胞的基因表达差异进行了检测。结果　在检测的 1176个基因中 ,有 6 8个基因显示急变期较慢性期明显上调 ,其中转录因子 16个 (2 3.5 % ) ,细胞表面抗原 15个 (2 2 .1% ) ,细胞调节蛋白 13个 (19.1% ) ,其它 2 4个(35 3% )。在差异表达的基因中 ,有 17个基因仅在急变期表达 ,而在慢性期不表达 ,11个 (16 .2 % )与G蛋白基因有关。结论　CML慢性期与急变期骨髓单个核细胞基因表达谱存在显著差异 ,基因高表达是CML急变期的特征之一。G蛋白相关基因在CML急变过程中可能起着重要作用。     

Wt1反义寡核苷酸阻断白血病微小残留病wt1基因表达的体外研究

本研究通过wt1反义寡核苷酸(ASO)抑制wt1基因的表达,观察微小残留病模型及患者基因表达的变化。取56例复诊急性白血病完全缓解(CR)患者骨髓,用RT-PCR方法筛选出wt1基因表达阳性的骨髓标本。白血病细胞系微小残留病(MRD)模型及筛选出的wt1阳性急性白血病CR患者骨髓标本进行了细胞培养并用wt1ASO处理细胞,观察wt1基因表达的变化。结果表明:wt1基因的敏感性是10-3-10-4;56例急性白血病CR患者骨髓wt1基因的表达阳性率为16%。用wt1ASO处理wt1表达阳性的K562、HL-60细胞系MRD模型以及9例存在MRD的急性白血病CR患者骨髓,发现wt1ASO组有效的阻断了wt1基因的表达,而正义寡核苷酸组和对照组wt1基因的表达仍为阳性。结论:wt1ASO体外能够阻断白血病MRD中残留白血病细胞wt1基因的表达。     

CD117在白血病免疫分型中的意义

目的 观察细胞表面分化抗原（ＣＤ）１１７在各型白血病中的表达及其意义。方法 采用单标或双标直接免疫荧光标记法标记２０种细胞表面分化抗原,经流式细胞仪测定。对１８５例白血病患者骨髓或外血白血病细胞的免疫分型及ＣＤ１１７的表达进行分析。结果 ＣＤ１１７在急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中表达率极低,仅占１．５％,ＣＤ１１７在急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）＿ＭＯ,Ｍ１,Ｍ２中表达率较高;ＡＭＬ－Ｍ３患者,表达率     

AML1/ETO9a异构体在M2型急性髓系白血病中表达的研究

目的研究AML1／ETO9a异构体在急性髓系白血病M2型（AML—M2）中的表达。方法应用R带染色体核型分析，结合RT—PCR技术检测各型白血病、骨髓增生异常综合征（MDS）、白血病细胞系及正常人骨髓中AML1／ETO融合基因和AML1／ETO9a异构体的表达。结果在30例初诊AML-M2中有15例AML1／ETO9a异构体表达阳性，同时在20例AML—M2完全缓解患者、18例非M2型急性白血病患者、5例慢性粒细胞白血病（CML）患者、3例MDS患者、3个白血病细胞系（NB4、KG-1、K562）及5份正常骨髓标本中均未检测到AML1／ETO9a异构体。15例AML1／ETO9a异构体阳性患者中有13例同时具有AML1／ETO融合基因及t（8；21），2例仅表达AML1／ETO9a异构体，AML1／ETO融合基因及t（8；21）均未检测到。结论AML1／ETO9a异构体可能与AML—M2相关，并可能与AMLI／ETO融合基因共同参与白血病的发生。