RNA 干扰研究的新进展

RNA干扰技术(RNA interference, RNAi) 诞生5年来,无论在技术本身的改进上还是应用上都有了很大的发展,尤其是siRNA的产生和引入方法有了一系列的改进,使siRNA的长期稳定表达成为可能.RNAi的生殖细胞传递现象的发现,进一步拓宽了RNAi的应用潜力.然而,除了对靶基因的沉默效应外,引入的siRNA还可以导致siRNA序列特异性、而非靶基因特异性的基因沉默现象(off-target效应).这就提示,在注释特定siRNA产生的沉默效应时要特别注意,尤其是将siRNA用于疾病治疗时.     

RNA干扰的体内应用研究进展

RNA干扰是由双链RNA引发的序列特异性基因沉默现象,目前已成为体外实验中抑制基因表达的首选方法。在体内实验中,近年也已经发表了上百篇将siRNA运用于哺乳动物的研究,说明RNA干扰同样可成为体内实验的强有力工具,并有望成为一种有效的疾病治疗手段。本文就RNA干扰体内实验中的影响因素、实验设计及近年研究进展等进行综述。     

RNA干扰分子机制研究进展

RNA干扰 (RNA interference,RNAi)即双链 RNA(double- stranded RNA,ds RNA)介导的同源m RNA特异性降解过程。作为一种简单有效的影响基因表达和一定程度上替代基因敲除的遗传学工具 ,RNAi已在秀丽新小杆线虫、黑腹果蝇、拟南芥、红色面包霉菌等多种模式生物体中得到广泛证实。同时 ,RNAi的分子机制的研究也不断取得进展 ,包括对基因转录后水平、翻译水平、基因组甲基化及沉默信号的传递等层次的研究。清晰地阐明 RNAi作用机理 ,将为大规模的基因系统筛查、新基因的发现、人类肿瘤及难治性疾病的基因治疗提供重要的理论依据和有力的工具。     

RNA干扰应用新进展

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是近年发展起来的一种特异的靶基因失活技术 ,它可以象基因敲除一样非常有效地鉴定特定基因的功能。RNAi已被证明是破译各种生物中的基因功能的强大工具 ,并将为新型高效药物的开发和基因治疗的发展开辟新的领域。     

RNA干扰及其在哺乳动物基因功能研究中的应用

RNA干扰是由与靶基因序列同源的小的双链RNA所诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。它能特异性地抑制某些基因的表达。小于30nt的小双链RNA是哺乳动物RNA干扰现象的中介因子。随着对RNA干扰发生机制的深入研究，它作为一项遗传学技术已被应用于哺乳动物基因及蛋白质功能的研究，并在基因治疗中显示出巨大的潜力。得益于载体导入系统的发展，这项技术将有广阔的应用前景。     

RNA干扰及其在哺乳动物基因功能研究中的应用

RNA干扰是由与靶基因序列同源的小的双链 RNA所诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。它能特异性地抑制某些基因的表达。小于 30 nt的小双链 RNA是哺乳动物 RNA干扰现象的中介因子。随着对 RNA干扰发生机制的深入研究 ,它作为一项遗传学技术已被应用于哺乳动物基因及蛋白质功能的研究 ,并在基因治疗中显示出巨大的潜力。得益于载体导入系统的发展 ,这项技术将有广阔的应用前景。     

一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究

目的：用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法：通过基因合成的方法，将mir30前体骨架进行全长基因合成，并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆，然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的小干扰RNA克隆到以上表达载体中，通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果：同目前常用的含polⅢ的小干扰RNA表达载体相比较，用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论：用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。     

RNA干扰技术应用的新进展

RNA干扰(RNAinterferenceRNAi)技术是一种发展快并有应用前景的基因控制技术,它能特异地沉默内源或外源性靶基因,目前已应用于多学科的研究。RNAi技术在多种生物体的研究中都可应用,包括植物、真菌、病毒、哺乳类动物等。这项新技术在医学领域的应用尤为突出,不仅可应用于基础研究,还有望成为攻克肿瘤、艾滋病、遗传性疾病等的新的克星,尤其siRNA在治疗疾病方面将有更广阔的前景。RNAi是近10年来分子生物学领域最热门的研究方向之一。     

小干扰RNA对大鼠OX40基因表达的沉默作用

目的:研究靶向大鼠OX40基因的二聚体小干扰RNA(siRNA-OX40) 对靶基因表达的沉默作用.方法:建立并筛选稳定表达OX40基因的293T转染细胞株,用脂质体转染法将体外合成的siRNA-OX40转染上述细胞株,采用实时荧光定量PCR检测靶基因OX40 mRNA表达情况.结果:用不同浓度的siRNA-OX40转染细胞48小时,10 nmol/L浓度对293T细胞靶基因表达的抑制作用最强 [抑制率(68.3±8.7)%],1 nmol/L浓度仍有一定的抑制作用[(37.2±4.8)%];25、10 nmol/L siRNA转染293T细胞后,均在24小时内起效[(21.4±3.2)%,(26.8±3.8)%],抑制作用至少能维持72小时[(61.7±8.4)%,(39.6±5.6)%].结论:siRNA-OX40对293T细胞外源性靶基因表达有较强的特异性沉默作用,siRNA在24小时内起效,48～72小时达高峰,抑制作用至少能维持72小时.本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据.     

RNA干扰技术应用的新进展

RNA干扰(RNA intemrence，RNAi)技术是一种发展快并有应用前景的基因控制技术，它能特异地沉默内源或外源性靶基因，目前已应用于多学科的研究。RNAi技术在多种生物体的研究中都可应用，包括植物、真菌、病毒、哺乳类动物等。这项新技术在医学领域的应用尤为突出，不仅可应用于基础研究，还有望成为攻克肿瘤、艾滋病、遗传性疾病等的新的克星，尤其siRNA在治疗疾病方面将有更广阔的前景。RNAi是近10年来分子生物学领域最热门的研究方向之一。     

RNA干扰抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IL-1α

目的：确定针对IL-1α的siRNA在细胞内与其具有同源互补序列的靶标位点结合后，特异性降解IL-1α的mRNA，从而抑制其表达的效果。方法:体外PCR扩增合成针对IL-1α靶位点的DNA表达盒，纯化后转染经LPS激活的小鼠脾淋巴细胞，在细胞内源性RNA聚合酶Ⅲ作用下转录形成siRNA，诱发目标mRNA的降解。于转染后 48 h 收集细胞培养上清。用ELISA法测定IL-1α浓度。结果:干扰组IL-1α分泌量明显低于对照组和无关干扰组（P<0.05），抑制率约为15%。结论:RNA干扰技术可以在原代培养的小鼠脾淋巴细胞中发挥特异性干扰作用，产生抑制IL-1α分泌的效果，为IL-1α的基因治疗开拓了新途径。     

RNA干扰抑制小鼠OX40基因表达的实验研究

目的研究靶向小鼠OX40基因的二聚体小干扰RNA(siRNA-OX40)对靶基因表达的沉默作用。方法建立并筛选稳定表达OX40基因的293T转染细胞株,用脂质体转染法将体外合成的siRNA-OX40转染上述细胞株,采用实时荧光定量PCR检测靶基因OX40 mRNA表达情况。结果用不同浓度的siRNA-OX40转染细胞48h,10nmol/L浓度对293T细胞靶基因表达的抑制作用最强(抑制率76.4%),1nmol/L浓度仍有一定的抑制作用(39.4%);25、10nmol/L siRNA转染293T细胞后,均在24h内起效(24.9%,20.5%),抑制作用至少能维持72h(74.4%,38.8%)。结论siRNA-OX40对293T细胞外源性靶基因表达有较强的特异性沉默作用,siRNA在24h内起效,48～72h达高峰,抑制作用至少能维持72h。本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据。     

Dicer酶及其在RNA干扰中的作用

RNA干扰(RNAInterference,RNAi)是双链RNA引起的同源mRNA特异性降解的现象。Dicer酶是核糖核酸酶Ⅲ(RibonucleaseⅢ,RNaseⅢ)家族的成员,在RNA干扰的起始阶段起着重要作用。Dicer酶最早在果蝇中发现,包括Dicer-1和Dicer-2,分别以Dicer-1/R3D1-L、Dicer-2/R2D2复合物的形式作用于微小RNA(microRNA,miRNA)和小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)的产生。Dicer酶除了在RNAi中发挥重要作用外,还在调节动物生殖发育中起作用。     

RNA干扰

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是几近年发现的基因表达调节新机制，双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）以调节子的身份降解目的mRNA，从而调节目的基因的表达。这一发现使人们重新认识了RNA在基因信息流控制过程中的重要性。RNAi的发生机制除了研究最多的转录后基因沉默外，还发现与翻译水平调节和基因组甲基化等事件有关。RNAi被应用于生命科学的很多方面：在基因功能研究中它已成为倍受青睐的基因敲下的工具，而且它正促使新一轮基因组范围内基因功能研究运动的蓬勃开展；在癌症、病毒疾病以及代谢失调症等重大疾病的治疗方面，RNAi正显示出巨大的临床应用潜力，犹如给医药界带来了新鲜空气一样令人振奋。     

小干扰RNA的设计及原理

RNA干扰技术在人类基因功能研究、药物靶点鉴定等方面备受青睐,并且具有潜在的临床应用价值。但只有设计合理的小干扰RNA (siRNA)才能高效、特异地抑制靶基因表达。本文总结了siRNA序列的一般特点以及设计siRNA的方法和相应原理,并介绍了如何利用实验手段,验证RNA干扰的有效性及特异性。从而促进RNA干扰技术的广泛开展。     

小干扰RNA与壳聚糖复合纳米粒制备及基因沉默性能研究

小干扰RNA引发的RNA干扰过程在沉默靶基因表达方面表现出高特异性和高效性,有望成为癌症和流感、肝炎等病毒感染疾病治疗的有效药物,但缺少安全高效的载体系统是其发挥强大功能的主要障碍。本研究以天然阳离子壳聚糖为载体材料,利用聚电解质静电作用,直接复合沉默绿色荧光蛋白的siRNA(siRNA-eGFP),制备出siRNA复合率83%~94%、尺寸90~180 nm、Zeta电位10~30 mV的稳定纳米粒,细胞活性保持率达80%,绿色荧光蛋白基因沉默效率近80%。     

RNA干扰技术及应用的研究进展

RNA干扰是近年被发现的细胞本身固有的对抗外源基因浸害的一种自我保护现象 ,人们利用这一现象对要研究的基因表达进行阻断 ,从而形成了 RNA干扰技术。 RNA干扰具有特异、高效、持久的特点 ,利用 RNA干扰技术对目的基因的阻断过程比基因剔除简便 ,而且应用范围广泛。但是 ,RNA干扰技术尚处于完善阶段 ,其作用机制还未完全明了 ,RNA干扰的方法学也有许多亟待改进之处