铅对仔鼠海马蛋白激酶C和钙调蛋白表达的影响

目的 研究慢性铅染毒对不同发育时期仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)表达的影响.方法 孕鼠随机分为蒸馏水对照组、0.2%醋酸铅和1.0%醋酸铅组,从怀孕第0灭起开始通过自由饮水染毒.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠浓度相同的含铅水.分别于出生后8、50 d处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,Western-blotting法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含最明显高于出生后8 d,差异有统计学意义(P＜0.01).不同发育时期的染铅组仔鼠海马的PKC、CaM的蛋白表达均相应地下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达降低可能是铅致仔鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.     

铅对胎鼠脑组织中蛋白激酶C和钙调蛋白M表达的影响

目的 研究铅对不同发育时期胎鼠脑组织中蛋白激酶C(PKC)与钙调蛋白(CaM)mRNA和蛋白表达的影响.方法 孕鼠随机分为去离子水对照组、0.2%醋酸铅组和1.0%醋酸铅组,从妊娠第0天起开始通过自由饮水染铅.分别于孕12、18 d处死孕鼠,取胎鼠脑组织,原子吸收光谱法测定脑铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Westen blotting)法分别观察各组PKC与CaM mRNA及蛋白的表达情况.结果 同一发育时期的染铅组胎鼠脑铅含量高于对照组,同一剂量染铅组孕18 d时胎鼠脑铅含量高于孕12 d时,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05).孕12 d时,与相应的对照组(mRNA:PKC:1.03±0.01、CaM:0.80±0.01,蛋白:PKC:0.70±0.05、CaM:0.75±0.05)相比,1.0%醋酸铅组胎鼠脑内PKC与CaM的mRNA(0.86±0.03、0.71±0.02)和蛋白表达(0.49±0.03、0.46±0.03)均降低;孕18 d时,0.2%和1.0%醋酸组胎鼠脑内PKC与CaM的mRNA和蛋白表达均较对照组降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 孕期母鼠染铅可使胎鼠脑组织铅含量升高,并引起PKC与CaM mRNA和蛋白表达水平的下降.     

铅对大鼠海马齿状回长时程增强和蛋白激酶C表达的影响

目的观察慢性铅暴露对大鼠海马齿状回长时程增强(Long-Term Potentiation,LTP)和蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)表达的影响及可能的机制。方法 24只大鼠随机分为2组,即对照组和铅暴露组。铅暴露组每天饲以醋酸铅水溶液(0.05g/L),对照组供以蒸馏水。在28 d后,用在体细胞外脑电记录方法比较强直刺激前后海马齿状回群体峰电位(Population Spike,PS)幅度,Westernblot方法检测海马PKC的表达。结果铅暴露组强直刺激后平均PS幅度增幅为(126.13±1.94)%,显著低于对照组的(183.79±1.35)%。海马齿状回PKC表达量减少。结论铅暴露明显抑制了大鼠海马齿状回LTP,并且抑制海马PKC的表达,从而导致学习记忆功能的下降。     

铅对仔鼠海马蛋白激酶C和钙调蛋白基因表达与学习记忆的影响

目的 观察慢性铅染毒对仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)mRNA表达的影响,探讨铅神经毒性的分子机制.方法 孕鼠随机分为对照组、0.2%醋酸铅染毒组和1.0%醋酸铅染毒组,从妊娠第0天开始通过自由饮水染毒.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠相同的饮用水.出生后8 d内行悬崖回避试验,50 d行跳台试验,随后处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的mRNA表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含量明显高于生后8 d,差异有统计学意义(P＜0.01).染铅组仔鼠悬崖回避试验完成率和跳台学习成绩明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).不同发育时期的1.0%醋酸铅染毒组仔鼠海马的PKC、CaM的mRNA表达下降(分别为0.53±0.04、0.59±0.02和0.65±0.01、0.62±0.01),与相应的对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 慢性铅染毒可使仔鼠海马PKC、CaM的mRNA表达降低,这可能是铅致仔鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.     

慢性铅暴露对小鼠海马PKC-γ蛋白表达影响

目的观察铅对小鼠海马蛋白激酶C中γ亚型(PKC-γ)蛋白表达的影响。方法幼鼠出生第1 d起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6 mmol/L。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在第14,21,35,48 d处死小鼠,用蛋白免疫印记法检测各组小鼠海马区PKC-γ蛋白表达状况。结果慢性铅露对小鼠脑海马PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组中,PKC-γ蛋白表达与相应对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论铅扰乱PKC-γ蛋白正常表达。     

核干细胞因子的RNA干扰对胶质瘤U251细胞的影响

目的探讨U251细胞株中NS基因表达及被干扰后,U251细胞株在mRNA、蛋白表达水平及细胞增殖变化情况。方法考察U251细胞NS-mRNA和NS-protein的表达水平;合成人类NS基因siRNA片段;转染至U251细胞中,RT-PCR和Westernblot检测转染前后U251细胞中mRNA及蛋白表达水平;MTT检测细胞增殖率。结果 U251细胞NS-mRNA和NS-protein的表达分别为178.91%和97.55%;siRNA转染U251细胞后NS-mRNA抑制率60.79%,NS-protein抑制率94.00%;MTT结果显示干扰72h后细胞增殖抑制率为31.3%。结论 NS基因siRNA片段转染U251细胞后,NS基因表达被特异性沉默,细胞增殖受到抑制。     

金雀异黄素对胶质瘤细胞株细胞生长周期影响

目的 研究金雀异黄素(genistein)对人胶质瘤U251MG细胞生长和细胞周期的影响.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度genistein在不同作用时间下对U251MG细胞生长的影响,用流式细胞仪分析细胞周期分布,蛋白免疫印迹( western blotting)技术检测细胞周期素Bl(cyclinBl)和细胞周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)蛋白表达.结果Genistein对胶质瘤细胞生长有明显抑制作用,使细胞生长停滞于G2/M期,并使细胞cyclin B1、CDK1蛋白表达下降(均P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论Genistein对U251 MG细胞生长有明显抑制作用,诱导G2/M期阻滞可能与下调cyclinB1和CDK1蛋白表达有关.     

铅致大鼠心肌细胞损伤中蛋白激酶C对缝隙连接蛋白43表达的调控作用

目的 研究醋酸铅染毒大鼠心肌细胞株（H9c2）后蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）、缝隙连接蛋白43（connexin 43，Cx43）及其磷酸化蛋白的表达变化，探讨心肌损伤过程中PKC对Cx43的调控作用。方法 （1）将对数生长期H9c2随机分组，以醋酸铅0、5、10、20 μmol/L梯度浓度处理细胞12 h。（2）将对数生长期H9c2细胞随机分为对照组、醋酸铅组、醋酸铅＋佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）组和PMA组。PMA预处理后的醋酸铅+PMA组、醋酸铅组细胞均给予10 μmol/L醋酸铅染毒12 h，PMA组不予染毒。（3）检测各组H9c2细胞培养上清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）活性；采用蛋白质印迹法（Western blot）检测各组H9c2细胞内Cx43、PKC蛋白相对表达含量及s368位点的Cx43磷酸化水平。结果 10、20 μmol/L醋酸铅染毒的H9c2细胞存活率较对照组明显降低（P<0.05）；10、20 μmol/L醋酸铅组H9c2细胞培养液LDH活性较对照组显著升高（P<0.05）；5、10、20 μmol/L醋酸铅组Cx43、p-Cx43s368、PKC蛋白相对表达含量与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05），且呈浓度依赖性降低；20 μmol/L醋酸铅组p-Cx43/Cx43显著低于对照组（P<0.05）。与对照组相比，醋酸铅组、醋酸铅+PMA组H9c2细胞培养液LDH活性显著升高（P<0.05），醋酸铅+PMA组细胞培养液LDH活性显著低于醋酸铅组（P<0.05）。与对照组相比，醋酸铅组、醋酸铅+PMA组细胞内Cx43蛋白相对表达含量降低，差异均有统计学意义（P<0.05）；醋酸铅+PMA组Cx43蛋白相对表达含量显著高于醋酸铅组（P<0.01）。结论 铅致心肌细胞损伤机制可能与PKC、Cx43及其磷酸化蛋白表达降低有关，PKC信号通路对Cx43表达具有调控作用。     

蛋白激酶C在缺碘子代大鼠神经细胞的表达

目的　研究蛋白激酶C(PKC)在缺碘甲状腺激素不足所致海马神经细胞凋亡的表达和学习记忆低下可能的机制。方法　复制碘缺乏海马子代大鼠 ,用免疫组化方法检测海马神经细胞凋亡 ,PKC表达 ,并计数。结果　缺碘子代大鼠较对照组海马神经细胞凋亡明显增多 ,PKC表达明显减少 ,分别为 (18 18± 2 99)、(2 4 0± 1 17) ,(0 0 37± 0 0 0 9)、(0 2 7± 0 0 16 )。结论　缺碘甲状腺素不足所致海马神经细胞PKC减少 ,可能与海马神经细胞凋亡增加 ,学习记忆低下有关     

蛋白激酶C对小儿心衰作用的研究进展

蛋白激酶C家族作为第二信使在多条信号通路中发挥着重要作用,具有广泛的生物学效应.与细胞增殖、分化、凋亡、心肌肥大、心室重塑等有着密切联系.近几年国外有关蛋白激酶C与心血管疾病的相关报道日见增多,有关蛋白激酶C的研究越发受到人们的关注.该文就蛋白激酶C在心血管系统的研究进展作以介绍.     

In vitro vs in vivo Pb effects on brain protein kinase C activity

Alteration of normal protein kinase C (PKC) function by environmental Pb exposure during neurodevelopment is hypothesized to be an important mechanism of toxicity underlying neurologic impairment. Previous studies have reported widely varying effects of Pb on PKC, possibly in part because of differences in in vitro and in vivo models used in those studies. Therefore, we tested the hypothesis that, with comparable tissue Pb levels, the effects of in vitro Pb exposure on brain PKC are the same as the effects caused by in vivo Pb exposure of intact animals. For chronic in vivo Pb exposure, female Long-Evans rats were exposed to Pb or vehicle from postnatal days 1 to 34-36 (n=10/treatment). For in vitro Pb exposure, homogenate of the frontal cortex region was exposed directly to Pb in an amount comparable to that accumulated in brain during chronic in vivo Pb exposure. Brain Pb levels were measured using ultraclean techniques and inductively coupled plasma mass spectrometry. PKC activity was subsequently determined in cytosolic and membrane subcellular fractions in the frontal cortex, hippocampus, and remaining brain regions. Results indicate that brain Pb levels following in vivo Pb exposure were increased approximately 20-fold above those of nonexposed animals (vehicle group [Pb] approximately 130ng Pb/g dry wt.). However, in vivo Pb exposure did not measurably alter brain PKC activity in the regions tested. In contrast, in vitro Pb exposure significantly increased PKC activity by approximately 20% in the frontal cortex homogenate membrane subcellular fraction. These results indicate that Pb added in vitro caused more dramatic effects than those produced by a comparable amount of Pb in the tissue from in vivo exposure. While the mechanisms underlying these outcomes are not clear, they suggest that in vitro models might not accurately reflect effects of chronic low-level in vivo Pb exposure.     

巨细胞病毒感染对小鼠海马的PKC表达与Ca~(2+)浓度的影响

目的:观察鼠巨细胞病毒感染对小鼠海马的PKC蛋白表达及细胞内Ca2+浓度的影响。方法:将BALB/C乳鼠随机分为对照组和病毒组,感染70天后应用免疫组化技术和荧光分光光度计分别检测两组仔鼠海马的PKC蛋白和Ca2+的表达量。结果:病毒组仔鼠海马的PKC蛋白表达量明显下降,Ca2+浓度明显增高,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:巨细胞病毒感染引起小鼠海马PKC蛋白表达量与Ca2+浓度的改变可能是导致其神经系统功能紊乱的机制之一。     

葡多酚对小鼠肝细胞蛋白激酶C和增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察葡多酚(GPC)对小鼠肝细胞蛋白激酶C(PKC)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法每日给小鼠经口灌胃不同剂量的GPC,30天后取肝组织,用MTT法测各组小鼠肝细胞的增殖活性水平,免疫组化的方法检测各组PKC和PCNA的表达。结果高剂量GPC组PKC和PCNA阳性表达率分别为47.62%和82.76%,阴性对照组则分别为6.42%和32.62%,经χ2检验,差异有显著性(P<0.05)。各组肝细胞的PKC和PCNA阳性表达率随GPC剂量的增高而增高。结论葡多酚可促进小鼠肝细胞PKC的表达,提高肝细胞增殖活性。     

蛋白激酶抑制剂对青石棉诱导肺成纤维细胞的细胞周期调控蛋白表达的影响

目的 探讨青石棉致人胚肺成纤维细胞（ＨＥＰＦ）增殖的细胞周期变化的机制。方法 用流式细胞技术检测青石棉诱导ＨＥＰＦ的细胞周期调控蛋白表达的改变,观察酷氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的抑制剂对其表达的影响。结果 青石棉可诱导ＨＥＰＦ的Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１、Ｃｙｃｌｉｎ Ｅ、ＰＣＮＡ、Ｃｙｃｌｉｎ Ａ、Ｃｙｃｌｉｎ Ｂ１和Ｐ３４ｃｄｃ２激酶等蛋白的阳性表达率发生改变。在青石棉组,ＰＫＣ抑制剂使表达的阳性率较未加入ＰＫＣ抑制剂组明显降低,对Ｐ３４ｃｄｃ２激酶影响不大（Ｐ〉０．０５）;而ＴＰＫ抑制剂使ＰＣＮＡ表达的阳性率增高;Ｐ３４ｃｄｃ２激酶表达的阳性率降低（Ｐ〈０．０１）。结论 这几种蛋白可能均了青石棉致ＨＥＰＦ增殖,ＰＣＮＡ（和Ｐ３４ｃｄｃ２激酶）表达的改变可能与上游的ＰＫＣ（和ＴＰＫ）信号通路有关。     

蛋白激酶C信号通路对温石棉介导的肺成纤维细胞细胞周期调控蛋白表达的影响

目的 研究细胞周期调控蛋白在温石棉所致成纤维细胞（HEPF）增殖中的表达和蛋白激酶C（PKC）对细胞周期调控蛋白的影响。方法 利用体外细胞培养技术,用流式细胞仪测定温石棉介导的HEPF的细胞周期调控蛋白的表达,同时设立阳性对照（标准SiO2)、阳性对照（标准TiO2)、正常对照（未经粉尘处理的免肺泡巨噬细胞）和空白对照。结果 温石棉细胞周期蛋白（cyclin)Cyclin D1、CyclinE、增殖细胞核抗原（PCNA）和CyclinA表达阳性率分别为19．0％、22．8％、79．7％和65．1％,均较各对照组低,差异有显著性（P＜0．05）,且CyclinD1和CyclinE表达阳性率低于PCNA和CyclinA,差异有显著性（P＜0．01)而 CyclinB1和p34cdc2激酶的阳性表达率较空白对照和正常对照略高。当PKC信号通路被阻断后,PCNA在温石棉组表达的阳性率明显降低,差异有显著性（P＜0．05）,p34cdc2激酶的阳性表达率改变不明显。结论 这几种蛋白可能均参与了温石棉所致HEPF增殖,其中PCNA表达的改变可能与上游PKC信号通路有关。     

蛋白激酶C激活在高温诱导海马神经细胞凋亡中保护作用的研究

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)在高温诱导的海马神经细胞凋亡中的作用,为防治高温致脑损伤提供实验依据。方法 通过建立体外高温诱导海马神经细胞原代培养的凋亡模型,应用PKC特异性抑制剂chelerythrine chloride(CTC),观察其对细胞凋亡率及对HSP70表达的影响。结果 高温处理后,海马神经细胞凋亡率显著升高,37℃培养加CTC组与正常培养组相比,凋亡率差异具有显著性;免疫组织化学结果显示,高温作用后海马神经细胞内HSP70表达明显升高,而应用CTC后,其表达则明显下降。结论 高温和CTC均能够诱导海马神经细胞凋亡,PKC激活在高温诱导的海马神经细胞凋亡中具有重要的保护作用。     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白影响的体外实验研究

目的：进一步探索环境雌激素双酚A（BPA）影响大鼠睾丸支持细胞波形蛋白（Vimentin)的机理。方法：采用支持细胞体外原代培养，免疫组织化学以及mRNA原位杂交技术分析了BPA对支持细胞Vimentin及其基转转录，参与Vimentin降解的蛋白激酶C（PKC）表达的影响。结果：BPA使支持细胞拉长，支持细胞在体外系统中良好地表达Vimentin，BPA使其基因转录抑制，PKC在支持细胞中不表达。结论：环境雌激素BPA通过抑制基因转录而干扰Vimentin合成，从而影响支持细胞骨架的正常形成，导致细胞形态改变，PKC不直接干扰支持细胞Vimentin代谢。     

铅、苯、砷致淋巴细胞染色体损伤的体外试验

目的 探讨职业有害因素铅、砷、苯等对正常人外周血淋巴细胞染色体畸变的影响，方法 采集正常人外周血进行染毒试验，分析染色体畸变细胞率。结果 高浓度染铅与染砷，其染色体畸变类型有明显差异。结论 染色体畸变类型的改变与接毒因素及接毒浓度密切相关。