痛必定注射液对坐骨神经结扎慢性损伤模型大鼠脊髓背根神经节NR2B含量的影响

目的：观察痛必定注射液对大鼠脊髓背根神经节（DRG）细胞N-甲基-D-天门冬氨酸2B亚型受体（NR2B）含量的影响,以探讨其外周镇痛的机理。方法：将40只Wister大鼠分为A（正常组）、B（假手术组）、C（模型组）组、D（模型＋痛必定组）4组各10只,采用坐骨神经结扎慢性损伤动物模型,通过免疫组化技术观察痛必定注射液对于DRG细胞内NR2B含量的影响。结果：A、B组NR2B含量比较,差异无显著性意义（P〉0.05）;C组NR2B含量较A、B组明显升高（P〈0.05）;D组NR2B含量较C组明显降低（P〈0.05）,与A、B组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）。结论：痛必定注射液的外周镇痛作用可能是通过抑制NR2B的合成或释放而实现的,由此可推断NR2B与＂不通则痛＂的病机相关。     

痛必定注射液对慢性结扎损伤模型大鼠脊髓背角c-fos和P物质的影响

目的痛必定注射液是具有良好镇痛效果的中成药,拟通过本实验研究了其镇痛机理。方法采用免疫组化的方法,研究痛必定注射液对CCI(慢性结扎损伤)模型大鼠脊髓背角c-fos基因表达和P物质含量的影响。结果痛必定注射液能明显降低CCI大鼠脊髓背角c-fos基因和P物质含量。结论该实验证实了痛必定注射液对CCI大鼠具有很好的镇痛作用,减少脊髓背角神经元对传入的伤害性刺激的反应,可能是其发挥镇痛作用的途径之一。     

痛必定注射液镇痛机理研究

目的研究痛必定镇痛作用起效和维持时间,以及是否作用在阿片受体上。方法观察痛必定对慢性结扎损伤模型大鼠的镇痛作用能否被纳洛酮阻断以及作用维持的时间。结果痛必定的镇痛作用不能被纳洛酮阻断,其作用30min起效,维持4～6h。结论痛必定有很好的镇痛效果,且不作用在阿片类受体上。     

电针对坐骨神经慢性缩窄损伤大鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的:通过观察坐骨神经慢性缩窄损伤(CCI)大鼠脊髓相应节段N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的变化和电针干预对其的影响,探讨电针干预神经病理性痛的脊髓机制。方法:清洁级雄性SD大鼠,随机分为3组,每组20只。假手术组仅分离坐骨神经,但不进行结扎;模型组采用CCI法制备神经病理性痛模型;电针组于CCI术后11¹7d应用韩氏穴位神经刺激仪进行电针干预,针灸美容针刺入大鼠损伤侧"委中"穴与"环跳"穴,刺激时间30min,1次/d。免疫组化法测定大鼠脊髓NMDA受体2B亚基(NR 2B)的表达;Western blot法测定大鼠脊髓NMDA受体1亚基(NR 1)和NR 2B蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应法测定大鼠脊髓NR 1mRNA和NR 2BmRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组脊髓NR 1蛋白及其mRNA表达量均升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,电针组脊髓NR 1蛋白及其mRNA表达均被逆转(均P<0.05)。各组脊髓NR 2B蛋白及其mRNA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针减轻大鼠神经病理性痛的机制之一,可能与有效地下调脊髓NR 1的功能有关。     

痛必定对CCI大鼠镇痛作用和脊髓背角c-fos表达的影响

目的:观察痛必定对CCI模型大鼠痛阈的影响,并探讨其镇痛作用机理。方法:测定用药前后CCI大鼠压痛阈值的变化,采用免疫组织化学方法研究痛必定粉针对CCI大鼠脊髓背角c-fos基因表达的影响。结果:痛必定粉针可明显提高CCI模型大鼠的疼痛阈值(P<0.05),抑制由疼痛所引起的脊髓背角c-fos表达增强的效应(P<0.05)。结论:痛必定粉针对CCI模型大鼠具有明确的镇痛作用,减少脊髓背角神经元对传入的伤害性刺激的反应,可能是其发挥镇痛作用的途径之一。     

槐定碱对骨癌痛大鼠脊髓NR2B mRNA和nNOS mRNA表达的影响

目的观察槐定碱对骨癌痛大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚型NR2B mRNA和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)mRNA表达的影响,探讨其抗癌痛的作用机制。方法将W256癌细胞注入40只SD雌性大鼠骨髓腔复制骨癌痛模型后随机分为槐定碱治疗组(腹腔注射槐定碱25 mg/kg)及模型对照组,另取10只大鼠骨髓腔注入生理盐水,治疗前后分别测量大鼠热痛阈和机械痛阈;采用逆转录PCR(RT-PCR)检测大鼠脊髓NR2B mRNA和nNOS mRNA的表达。结果槐定碱能够明显提高W256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠热痛阈和机械痛阈,明显下调骨癌痛大鼠脊髓组织NR2B mRNA和nNOS mRNA的表达。结论槐定碱抗骨癌痛作用可能与下调脊髓与痛觉过敏密切相关的NMDAR-nNOS/NO-cGMP信号转导通路有关。     

腕踝针对坐骨神经痛大鼠脊髓背角谷氨酸及N-甲基-D-天冬氨酸受体磷酸化蛋白表达的影响

目的:观察腕踝针"下4"-"下5"-"下6"穴对坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠脊髓背角谷氨酸(Glu)及其N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基1(NMDAR1)磷酸化蛋白表达的影响,探讨腕踝针改善坐骨神经痛的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、腕踝针组,每组12只。采用结扎并剪断坐骨神经中的腓总神经和胫神经、保留腓肠神经的方法制备SNI大鼠模型。腕踝针组于SNI后5～14 d予右侧"下4"-"下5"-"下6"穴腕踝针治疗,每天1次,每次4 h,连续10 d。采用von-Frey测痛仪记录大鼠机械痛阈值变化,丙酮记录冷异常性疼痛行为学变化;采用核磁共振氢谱、酶联免疫吸附法检测脊髓背角Glu的含量;采用免疫组织化学法检测右侧脊髓背角谷氨酸受体NMDAR1磷酸化蛋白的水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠机械痛阈值显著下降(P<0.01),冷刺激缩足持续时间明显增加(P<0.01),脊髓背角Glu含量及NMDAR1磷酸化蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,腕踝针组大鼠机械痛阈值显著提高(P<0.01),冷刺激缩足持续时...     

逍遥散对慢性应激损伤大鼠NR受体亚型表达的影响

目的:本研究用逍遥散和糖皮质激素受体(GR)阻滞剂干预慢性应激损伤大鼠,观察其海马区NR受体亚型表达情况。方法:以逍遥散(5.265g/kg)和GR受体阻滞剂RU-38486(12.5g/kg)为干预药物,应用慢性不可预知应激对大鼠进行为期3周的造模,在造模的同时给予实验药物,3周后停止刺激,于第22天处死大鼠取材。采用荧光免疫组织化学法,测定各组大鼠海马区NR表达。结果:GR受体阻滞剂RU-38486与中药复方逍遥散可显著下调慢性应激损伤大鼠海马区NR阳性表达。结论:逍遥散可以通过促进慢性应激损伤大鼠海马区NR表达下调,从而达到部分恢复慢性应激大鼠下丘脑—垂体—肾上腺(HPA)轴负反馈功能的作用,起到缓解诸应激症状的疗效。     

康莱特注射液对癌症痛大鼠痛行为和肿瘤生长的影响

目的利用癌症痛动物模型,研究和评价康莱特注射液治疗癌症疼痛的疗效。方法根据Medhurst方法,建立大鼠乳腺癌骨痛模型。实验分康莱特组、塞来昔布组、吗啡组、生理盐水组和假手术组。从造模第8天开始给药,每日2次,连用10d。康莱特组,腹腔注射10mL/kg;塞来昔布组,30mg/kg灌胃;生理盐水组和假手术组,腹腔注射NS10mL/kg。吗啡组在造模第17天,单次腹腔注射3mg/kg。在末次给药后测量各组大鼠的痛相关行为,包括触诱发痛(大鼠足底皮肤对2gvonFrey纤毛刺激的缩足反应敏感性增强)和机械性痛觉过敏(两侧后肢负重差异)。并将大鼠后肢进行X线摄片,影像学评估肿瘤诱导的骨破坏。结果造模第17天,康莱特组、塞来昔布组、吗啡组和生理盐水组大鼠左侧足底皮肤对2gvonFrey纤毛刺激的缩足反应百分率分别为53.3%±20.7%、46.7%±20.7%、13.3%±16.3%和90%±16.7%,与生理盐水组比较,康莱特组缩足反应百分率明显下降(P<0.01);两后肢负重差异值康莱特组、塞来昔布组、吗啡组和生理盐水组大鼠分别为(48.6±28.52)g、(42.95±29.45)g、(25.81±16.99)g和(78.01±19.08)g。与生理盐水组比较,康莱特组两后肢负重差异明显变小(P<0.01)。胫骨X光照片显示,生理盐水组和吗啡组骨质破坏严重,放射学评分范围4-5;康莱特组和塞来昔布组,骨破坏程度较轻,放射学评分下降;假手术组大鼠胫骨未见放射性改变(评分均为0)。结论康莱特注射液在大鼠乳腺癌骨痛模型上有效,能减轻癌性骨痛模型大鼠痛行为,同时骨破坏程度减轻,肿瘤生长受抑。     

督脉电针对急性脊髓损伤大鼠脊髓损伤区NR2B表达的影响

目的:观察督脉电针"大椎""命门"对急性脊髓损伤(SCI)大鼠脊髓损伤区N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)亚基NR2B表达的影响,探讨督脉电针促进急性SCI脊髓前角神经修复的分子机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组及药物组,每组24只。采用脊髓打击器打击复制急性SCI模型。电针组于造模成功后电针大鼠"大椎""命门"穴,每次治疗30min,共治疗3次。药物组先予尾静脉注射甲基强的松龙(MP)30mg/kg冲击治疗,然后予5.4mg·kg~(-1)·h-1 MP维持,共24h。采用BBB行为学评分观察大鼠造模前及造模后6、24、48h运动功能的变化。采用实时荧光定量PCR法检测脊髓损伤区NR2B mRNA表达水平,采用蛋白免疫印迹法和免疫荧光技术检测脊髓损伤区NR2B蛋白表达水平。结果:与同时段假手术组相比,模型组BBB行为学评分于造模后6、24、48h均显著降低(P0.001)。与同时段模型组相比,电针组和药物组的BBB评分于造模后各时点均未见明显改变(P0.05)。与假手术组相比,模型组脊髓损伤区病理学改变明显,NR2B阳性神经元数量显著增加(P0.001),NR2BmRNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。与模型组相比,电针组和药物组脊髓损伤区病理学改变明显减轻,NR2B阳性神经元数量显著减少(P0.001),NR2BmRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05)。电针组与药物组比较,各指标变化的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:督脉电针"大椎""命门"穴可能通过抑制脊髓损伤区NR2B的表达,从而促进脊髓前角损伤神经的修复。     

孤啡肽及其前体mRNA在神经痛大鼠脊髓背角神经元中表达的变化

孤啡肽是新近发现的一种 1 7肽 ,为阿片受体家族中一个新成员“孤儿受体”的内源性配基。孤啡肽在痛觉调制中的作用与内阿片肽明显不同 ,其在脊髓水平痛觉调制过程中起着重要作用。神经痛是临床上常见的一种慢性痛。本实验目的是探讨慢性限制性损伤大鼠模型上 (ＣＣＩ)孤啡肽及其前体ｍＲＮＡ在神经痛大鼠脊髓背角表达的变化。大鼠左侧后肢坐骨神经结扎 ,右侧假手术 ,通过光热刺激大鼠后肢脚掌测量抬脚潜伏期 (ＰＷＬ) ,ＣＣＩ模型 3天后手术侧ＰＷＬ明显低于对侧 ,提示痛敏的出现 ,痛敏持续不超过 30天。结果表明ＣＣＩ模型后第 4天或 7天 …     

“脊髓康”对大鼠脊髓损伤区Nogo-A表达的影响

目的：观察中药“脊髓康”对大鼠脊髓急性损伤后脊髓组织Nogo-A表达的影响。方法：选用162只SD大鼠,随机分成假手术组、模型组、强的松组、脊髓康高剂量组、脊髓康中剂量组、脊髓康低剂量组,每组27只,分别于干预后3天、7天、14天处死大鼠,以免疫组化、Western Blot及荧光定量PCR检测大鼠脊髓组织中Nogo-A的表达量。结果：脊髓损伤各组在损伤后3天时Nogo-A蛋白和mRNA表达较低,7天后迅速上升达到高峰,至14天逐渐下降。与模型组比较,脊髓康中剂量组和强的松组在损伤后3天、7天、14天时,Nogo-A蛋白和mRNA表达差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：中药“脊髓康”能有效抑制大鼠脊髓损伤区Nogo-A表达,有利于脊髓损伤修复。     

黄芪注射液预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤脊髓ICAM-1表达的影响

目的:探讨黄芪注射液对脊髓缺血再灌注损伤的保护治疗作用及其机制.方法:采用肾下腹主动脉阻断法,建立脊髓缺血再灌注模型.缺血组阻断腹主动脉30min后开放灌注.黄芪注射液治疗组静注黄芪注射12ml/kg30min后阻断腹主动脉.阻断腹主动脉30min后开放再灌注.术后进行神经功能评分,观察脊髓标本的病理改变,免疫组化染色ICAM-1表达.结果:神经功能评分治疗组在各时间点明显高于模型组(P<0.05),组织病理学变化各时间点明显好于模型组,ICAM-1免疫阳性血管数较模型组减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论:1.黄芪注射液可显著改善大鼠脊髓缺血再灌注引起的后肢神经功能障碍和组织病理学改变,表明黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤有明显的保护作用.2.黄芪注射液降低大鼠脊髓缺血再灌注后缺血脊髓ICAM-1的表达,可能为黄芪注射液保护脊髓缺血再灌注损伤的机制之一. 进行神经功能评分,观察脊髓标本的病理改变,免疫组化染色ICAM-1表达.结果:神经功能评分治疗组在各时间点明显高于模型组(P<0.05),组织病理学变化各时间点明显好于模型组,ICAM-1免疫阳性血管数较模型组减少,差异有统计学意义(P<0.05 .结论:1.黄芪注射液可显著改善大鼠脊髓缺血再灌注引起的后肢神经功能障碍和组织病理学改变,表明黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤有明显的保护作用.2.黄芪注射液降低大鼠脊髓缺血再灌注后缺血脊髓ICAM-1的表达,可能为黄芪注射液保护脊髓缺血再灌注损伤的机制之一.     

电针对脊髓损伤大鼠早期bax mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨电针对脊髓损伤后 bax mRNA 及蛋白表达的影响。方法成年雄性 SD 大鼠,随机分为模型组、电针治疗组、甲基强的松龙治疗组及假手术组。采用改良的 Allen’s 锤击法致大鼠 T_(10)脊髓损伤,应用原位杂交和免疫组织化学方法及图像定量分析法观察脊髓损伤早期 bax mRNA 和蛋白的表达。结果假手术组有中等量的 bax mRNA 及蛋白表达。模型组脊髓损伤后6h 及24h bax mRNA 及蛋白表达均增高,电针治疗组 bax mRNA 及蛋白表达均低于模型组,与甲基强的松龙组比较差异无显著性。结论电针可下调bax mRNA 及蛋白的表达,从而抑制细胞凋亡,保护神经细胞。     

陇中消肿止痛合剂对脊髓损伤后大鼠脊髓中水通道蛋白4表达的影响

目的 探索陇中消肿止痛合剂对脊髓损伤后大鼠脊髓中水通道蛋白4(AQP-4)的表达情况及其作用机制。方法 选取成年雄性清洁级SD大鼠175只，按照Allen’s法建立脊髓损伤大鼠模型。造模成功后将其随机分为7组，分别为对照组、假损伤组、模型组、七叶皂苷钠组及陇中消肿止痛合剂高、中、低剂量组（简称陇中高、中、低剂量组），每组各25只。采取灌胃给药的方式，根据巴索、比蒂和布雷斯纳汉运动评级（BBB）法评分标准，每隔3天观察评分并记录，总计观察15天。在上述7组随机分别选取SD大鼠15只，提取损伤脊髓样本，分别采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot）及免疫组织化学染色检测AQP-4蛋白及基因表达，并进行统计分析。结果模型组大鼠BBB评分各时间段均低于对照组和假损伤组（P<0.05）；第3、6、9、12、15天于七叶皂苷钠组及陇中高、中、低剂量组BBB评分均高于模型组（P<0.05）；第6、9、12、15天陇中高剂量组BBB评分高于七叶皂苷钠组及陇中低剂量组（P<0.05,P<0.01）；且第15天陇中低剂量组BBB评分低于七叶...     

电针对大鼠脊髓损伤后Slit2表达的影响

目的:探讨电针治疗对大鼠脊髓损伤后S lit2表达的影响。方法:大鼠随机分为空白组、模型组、药物组、电针组,用改良A llen’s打击法制成脊髓损伤模型,分别于损伤后6h、1d、7d取损伤局部脊髓组织,提取总RNA,经RT-PCR反应,测定损伤后脊髓组织内S lit2mRNA的表达。结果:脊髓损伤后,电针组和药物组均能显著升高脊髓损伤6h、1d、7d后脊髓组织中S lit2 mRNA的表达。与模型组相比较,药物组和电针组S lit2 mRNA表达均升高,并都有显著性差异(P<0.05);药物组与电针组相比较,电针组S lit2 mRNA表达略高于药物组,但无显著性差(P>0.05)。结论:电针治疗对大鼠脊髓损伤后S lit-2 mRNA表达具有明显的促进作用,可能对轴突的正确导向性生长发挥重要作用。     

p-ERK p-CREB在姜黄素抗大鼠神经病理性痛中的作用

目的:观察姜黄素对神经病理性痛大鼠痛行为及脊髓背角的p-ERK、p-CREB表达的影响。方法:采用大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型。雄性SD大鼠108只,随机分为实验对照(Con)组、假手术(Sham组)、溶剂对照(SC)组、姜黄素(Cur30、Cur100、Cur300)组。姜黄素组行CCI术,每组每天分别腹腔注射姜黄素30、100、300mg/kg,持续14天。各组于术前2天和术后1、3、5、7、10、14天测定机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL)。在术后3、7、14天处死大鼠(n=6),分别制备大鼠L4-5脊髓的石蜡标本,用免疫组织化学方法测定p-ERK、p-CREB在脊髓背角神经元的动态变化。结果:Con组大鼠MWT和TWL呈进行性下降,在术后3天降至最低(MWT为15.3±3,TWL为4.6±1.0),术侧脊髓背角浅层p-ERK、p-CREB阳性神经元明显增多;Cur组大鼠在术后MWT和TWL亦进行性下降,在术后3天降至最低(Cur100组的MWT为22.6±4,TWL为5.6±1.1),与Con组相比,每组每个时间点的MWL、TWL均明显升高(P<0.01);术侧的脊髓背角浅层p-ERK、p-CREB阳性神经元的表达下降,每组每个时间点表达均低于Con组(P<0.01)。结论:在本实验中,姜黄素能减轻神经病理性痛,其机制可能与降低p-ERK、p-CREB阳性神经元的表达有关。     

透明质酸酶对慢性压迫性神经损伤模型中神经源性疼痛的作用研究

目的:研究透明质酸酶对坐骨神经的疏松结扎(CCI)模型神经源性疼痛的作用,初步探讨临床通过相关穴位点注射透明质酸酶治疗慢性疼痛的机制。方法:采用CCI模型,记录损伤神经异位自发放电和热痛刺激的敏感程度。结果:用透明质酸酶作用于术后7d大鼠的损伤处并进行坐骨神经自发放电的测量,发现在测量的12只模型中,有8只模型的自发放电得到了有效的抑制,这8只的平均抑制率为50.9%±12.4%。在热刺激行为学实验中,损伤局部持续注射透明质酸酶溶液的CCI大鼠在术后3d、6d和14d的热刺激敏感度明显低于局部注射生理盐水的对照组CCI大鼠。通过CCI大鼠损伤坐骨神经组织切片观察,发现神经纤维排列混乱,纤维间存在空泡状间隙,并且在间隙周围分布着染成深色的多糖链;而经过透明质酸酶作用后CCI损伤坐骨神经切片观察,空泡状空隙与深色多糖链沉淀消失,神经排布较处理前更加规则。结论:细胞外基质与神经生理功能密切相关,透明质酸酶能够有效降低CCI模型的异位自发放电;临床穴位注射透明质酸酶改变穴位点聚集的细胞外基质,从而起到镇痛作用。