全反式维甲酸对胰腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的 建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过体内实验观察全反式维甲酸(ATRA)对胰腺癌的治疗作用.方法 将人胰腺癌细胞株SW1990和Bx-PC3细胞接种于裸鼠皮下,建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,予ATRA 40 mg/kg每日口服,或4 mmol/L ATRA每次0.1 mL隔日瘤内注射.观察瘤体质量和体积变化,TUNEL法观察ATRA干预后移植瘤组织内的细胞凋亡情况,免疫组化法检测caspase-3的表达.结果 成功建立两种人胰腺癌细胞株的移植瘤模型;口服和瘤内注射ATRA后,抑瘤率在Bx-PC3移植瘤分别为64.24%和55.78%,在SW1990移植瘤分别为44.03%和49.13%;TUNEL法和电镜观察证实,ATRA诱导后移植瘤内出现细胞凋亡;免疫组化显示,caspase-3表达增加.结论 ATRA口服或瘤内注射均能抑制胰腺癌移植瘤的生长,活化胰腺癌细胞内caspase-3,促进细胞凋亡.     

人胰腺癌荷瘤裸鼠异位模型建立

目的:用人体胰腺癌细胞株,建立人胰腺癌荷瘤裸鼠异位模型。方法:裸鼠在SPF洁净环境下饲养,将4×106人胰腺癌细胞株SW1990肿瘤细胞悬液0.2 ml注射于裸鼠背部皮下,建立肿瘤模型。结果:肿瘤细胞移植成功率为90%(54/60),生长迅速,移植瘤灰白色,质硬。组织学检查符合胰腺低分化腺癌。结论:异位裸鼠人胰腺癌移植瘤模型易复制,时间短,成功率高,为胰腺癌体内研究提供了理想的动物模型。     

三氧化二砷对胰腺癌 BXPC-3 细胞移植瘤的体内抑制作用

目的 探讨三氧化二砷在体内对胰腺癌 BXPC-3 细胞移植瘤的抑制作用,并探讨其初步机制。方法 建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为4组：模型组,低剂量、高剂量 (2.5、5.0 mg/kg) 三氧化二砷组和吉西他滨组,各组 ip 给药,作用2周后,检测实验前后裸鼠体质量变化,观察药物对肿瘤生长的影响,免疫组化检测肿瘤细胞增殖因子 ki-67 的表达,TUNEL 法检测移植瘤组织的细胞凋亡。结果 给药2周后,各组裸鼠体质量变化差异不显著,三氧化二砷和吉西他滨均可抑制裸鼠移植瘤的体积和质量,且三氧化二砷 (5 mg/kg) 组作用较强;免疫组化结果显示三氧化二砷可明显降低细胞增殖因子 ki-67 的阳性表达;TUNEL 检测表明三氧化二砷可明显诱导移植瘤肿瘤细胞凋亡。结论 三氧化二砷可抑制胰腺癌 BXPC-3 细胞在裸鼠体内的生长;作用机制可能为抑制肿瘤细胞增殖及促进肿瘤细胞凋亡。     

雷公藤甲素对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的：观察雷公藤甲素对人胰腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用,探讨其作用的分子机制。方法：选择健康BALB/c裸鼠于右后肢皮肤移植人胰腺癌SW1990细胞,建立裸鼠荷瘤模型,将建模成功的裸鼠分为模型组、吉西他滨组和雷公藤甲素组,每组10只,另选10只健康裸鼠作为对照组。测量各组SW1990胰腺癌荷瘤裸鼠体质量,取肿瘤组织称质量,计算肿瘤抑制率;采用免疫组织化学法检测各组裸鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况;采用Western blotting法检测各组裸鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3表达水平。结果：与吉西他滨组比较,雷公藤甲素组SW1990胰腺癌的肿瘤抑制率明显升高（P<0.05）。HE染色观察,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺癌肿瘤细胞增殖受到抑制。免疫组织化学检测,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺组织中Bcl-2表达水平和Bcl-2/Bax比值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺组织中Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：雷公藤甲素能抑制裸鼠肿瘤组织的生长,其机制可能与抑制胰腺肿瘤组织中Bcl-2的激活、促进Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比值、促使Caspase-9和Caspase-3激活及诱导胰腺癌移植瘤细胞凋亡有关。     

康莱特联合光动力治疗胰腺癌及其机制的实验研究

目的通过研究胰腺癌的细胞凋亡和细胞增殖,探讨康莱特注射液与光动力疗法（PDT）联用对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的实验治疗的机制。方法通过把人胰腺癌细胞SW1990的组织块移植至裸鼠皮下而制备皮下移植瘤模型。60只胰腺癌模型随机分为6组：A组（荷瘤对照组,不予任何治疗）;B组（1．25g／kg康莱特,照射前1d开始注射,连续10d）;C组（2．5g／k康莱特,照射前1d开始注射,连续10d）;D组（Photosan2mg／kg,腹腔内注射,48h后予激光照射）;E组（B＋D组）;F组（C＋D组）。每组10只。14d后,处死裸鼠,分别测量瘤体的大小及瘤重。通过免疫组化方法检测细胞凋亡和细胞增殖指数。结果康莱特注射液和光动力联用,对人胰腺癌SW1990的生长有很强的抑制作用,抑瘤率和细胞凋亡率高于单用疗法。细胞增殖指数则明显低于单用疗法。结论康莱特与光动力联用可诱导细胞凋亡,治疗效果明显优于单用疗法。     

人胰腺癌裸小鼠胰腺原位移植模型的建立

目的建立人胰腺癌高转移裸小鼠胰腺原位移植模型.方法将人胰腺癌细胞株SW1990分别接种于裸鼠皮下和裸鼠胰腺,比较两组移植瘤的生长和侵袭转移情况.结果胰腺癌皮下移植模型与胰腺原位移植模型的体内成瘤率、生长率和形态学上均无显著不同,但前者呈局限性生长,后者的9周转移率为93.8%,其中淋巴结转移、腹膜播散和肝转移发生率各占93.3%、73.3%和53.3%,且肝肿瘤结节CEA阳性,AFP阴性.结论胰腺癌细胞SW1990的胰腺原位移植模型明显优于皮下移植模型,为一较理想的"拟人”胰腺癌转移模型.     

重组凋亡素对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的影响

目的 观察凋亡素(VP3)基因真核表达质粒对人卵巢癌裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用.方法 建立人卵巢癌(COC1)细胞裸鼠异种移植瘤模型.实验裸鼠分为四组:高剂量实验组(pcDNA-VP3质粒DNA,瘤内注射,100μg/只);低剂量实验组(pcDNA-VP3质粒DNA,瘤内注射,50μg/只);空载体对照组[pcDNA3.1(+)质粒DNA,瘤内注射,100μg/只];脂质体对照组(脂质体,瘤内注射,0.2mL/只).每3d测量皮下移植瘤长、宽径,按标准公式V=L×W2X0.52计算移植瘤体积.12天后处死裸鼠,称取瘤重.使用TUNEL法观察凋亡素对皮下移植瘤细胞凋亡程度的影响.结果 pcDNA9·vP3高剂量组和低剂量组卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑制.高剂量组和低剂量组肿瘤生长抑制率分别为76%和52%;瘤重抑制率分别为71.9%和49.5%(P<0.05).TUNEL实验结果表明凋亡素在体内以凋亡方式诱导肿瘤细胞死亡.结论 重组凋亡素基因真核表达质粒具有抑制人卵巢癌裸鼠异种移植瘤生长作用.凋亡素在瘤组织中以诱导凋亡方式抑制卵巢癌裸鼠异种移植瘤生长.     

人胰腺癌裸小鼠胰腺原位移植模型的建立

目的：建立人胰腺癌高转移裸小鼠胰腺原位移植模型。方法：将人胰腺癌细胞株SW1990分别接种于裸鼠皮下和裸鼠胰腺,比较两组移植瘤的生长和侵袭转移情况。结果：胰腺癌皮下移植模型与胰腺原位移植模型的体内成瘤率、生长率和形态学上均无显著不同,但前者呈局限性生长,后者的9周转移率为93．8％,其中淋巴结转移、腹膜播散和肝转移发生率各占93．3％、73．3％和53．3％,且肝肿瘤结节CEA阳性,AFP阴性。结论：胰腺癌细胞SW1990的胰腺原位移植模型明显优于皮下移植模型,为一较理想的“拟人”胰腺癌转移模型。     

过氧化物酶增殖物活化受体γ活化对胰腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在诱导胰腺癌细胞凋亡中的调节作用。方法胰腺癌细胞系SW1990经10μmol/L PPARγ配体15-脱氧-前列腺素J2(15d-PGJ2)、20μmol/L维甲酸受体α(RXRα)配体9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)及其两者联合作用培养48 h后,应用电子显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪研究细胞凋亡比例的变化。30只雌性裸鼠皮下接种1×107个SW1990细胞,2周后待肿瘤可触及时,将其随机分为对照组和治疗组(予罗格列酮)。11周后处死裸鼠并取下移植瘤,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的生物素缺口末端标记法(TUNEL)评估移植瘤中凋亡细胞的情况,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2凋亡相关基因家族成员bcl-2、bcl-xl、bak、bax以及凋亡抑制基因Survivin的表达。结果电子显微镜结果显示15d-PGJ2、9-cis-RA及其两者联合作用均可导致SW1990细胞发生形态学变化。可见细胞核和胞质内容物密集皱缩,核内染色质凝集成块并边集,形成1个或数个沿核膜的月芽小体。在联合应用组中还可观察到凋亡小体的存在。流式细胞术检测提示对照组凋亡比率为0.95%,15d-PGJ2、9-cis-RA及其联合应用可引起SW1990细胞凋亡比率增加,15d-PGJ2组为8.05%,9-cis-RA组为8.36%,联合作用组为6.86%。TUNEL染色显示治疗组移植瘤组织中凋亡指数(AI)为15.25±4.57,明显高于对照组的6.25±2.62(P<0.05)。RT-PCR揭示在SW1990移植瘤中,促凋亡基因bak、bax表达上调,抗凋亡基因bcl-xl、Suvivin下调,抗凋亡基因bcl-2几乎不表达。结论PPARγ的活化可诱导SW1990胰腺癌细胞凋亡。其机制可能是通过上调促凋亡基因bak、bax及下调抗凋亡基因bcl-xl、Suvivin表达而实现的。     

裂果薯皂苷Ⅰ抗人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤的作用机制研究

目的：探讨裂果薯皂苷Ⅰ(SSPHI)对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤模型,成瘤裸鼠随机分为模型组、吉西他滨（GEM）组、SSPHI低剂量组（SSPHI-L）组、SSPHI中剂量（SSPHI-M）组和SSPHI高剂量（SSPHI-H）组,连续给药15 d后取瘤组织,测量肿瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;苏木精-伊红（HE）染色法观察人胰腺癌移植瘤组织病理形态变化,TUNEL染色观察肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学染色法测定裸鼠移植瘤Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达。结果：与模型组相比,SSPHI低、中、高剂量组和GEM组移植瘤体积和瘤重均降低,细胞凋亡率升高（P<0.01）,移植瘤组织Caspase-9、Caspase-3和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.01）。结论：SSPHI可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长,其作用机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3表达,诱导移植瘤细胞凋亡有关。     

重楼皂苷Ⅶ对裸鼠胰腺癌的治疗作用及机制研究

[目的]观察重楼皂苷Ⅶ对裸鼠胰腺癌的治疗作用及其机制.[方法]以人胰腺癌细胞AsPC-1皮下注射裸鼠构建胰腺癌移植瘤模型.将胰腺癌移植瘤裸鼠随机分为5组,即对照组,重楼皂苷Ⅶ低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶组,对应给药治疗.给药结束后,测量移植瘤体积、质量;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL...     

杆状病毒介导的DNMT1 siRNA对人胰腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察介导DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因RNA干扰(RNAi)的杆状病毒载体(Bac-si-DNMT1-D)对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及毒性反应。方法:建立人胰腺癌SW1990细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为4组:空载体组、生理盐水组、低浓度病毒组及高浓度病毒组进行实验。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测DNMT1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测DNMT1、Bax和Bcl-2蛋白的表达;病理学及血清学检测裸鼠心、肝、肾功能变化。结果:病毒组肿瘤生长较对照组明显被抑制(P<0.05),凋亡指数显著高于两对照组(P<0.01)。病毒组的DNMT1 mRNA表达量显著低于两对照组(P<0.05)。病毒组DNMT1及Bcl-2蛋白表达低于两对照组,但Bax蛋白表达高于两对照组(P<0.01)。各组间裸鼠心、肝及肾未见异常。结论:杆状病毒介导的DNMT1 siRNA载体可以有效降低人胰腺癌裸鼠移植瘤内DNMT1基因表达,抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,且对裸鼠无明显毒性作用。     

3-methyladenine抑制自噬诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡

【目的】 探讨3-methyladenine(3-MA)对人胰腺癌SW1990细胞增殖?迁移及失巢凋亡的影响作用及其机制?【方法】 以胰腺癌细胞SW1990及永生化胰腺导管上皮细胞H6C7为研究对象,设3-MA处理组及PBS对照组,采用软琼脂克隆培养法及Poly-HEMA悬浮培养法筛选抵抗失巢凋亡的细胞?Annexin V-FITC/PI双染和TUNEL试剂盒法检测细胞凋亡;免疫荧光法及透射电镜检测细胞自噬;CCK-8法检测细胞增殖; Transwell小室检测细胞迁移能力?【结果】永生化胰腺导管上皮细胞H6C7处理组及对照组均无集落形成,胰腺癌细胞SW1990处理组形成(2.3 ± 2.63)个集落,对照组形成(9 ± 3)个,与H6C7 相比,SW1990具有较强的抵抗失巢凋亡的能力 (P < 0.05)?3-MA可抑制胰腺癌SW1990细胞自噬(P < 0.05)并抑制其增殖及迁移能力(P < 0.01)且诱导失巢凋亡(P < 0.01)?【结论】 3-MA可诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡,其机制可能与细胞自噬受抑有关?     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对人肺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

目的 探讨选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对人肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其机制。方法 建立人肺癌A549细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后20只裸鼠随机分为4组：对照组、NS398低剂量（1.5mg/kg）组、NS398中剂量（3.0mg/kg）组和NS398高剂量（4.5mg/kg）组。各组均采用腹腔注射给药,每周3次,共4周。给药期间每隔7日测量肿瘤体积。最后一次给药次日,处死裸鼠完整剥取肿瘤,测量肿瘤重量并计算抑瘤率。TUNEL法检测各组移植瘤标本细胞凋亡情况,免疫印迹法检测survivin、XIAP和cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果 NS398各剂量组肺癌移植瘤生长速度均慢于对照组,各剂量组肿瘤重量显著低于对照组（P<0.01,P=0.000）,呈剂量依赖性。各剂量组的抑瘤率分别为30.18%、46.50%和53.87%。TUNEL法结果显示,与对照组比较,NS398各剂量组凋亡指数均显著增加（P<0.01,P=0.000）,并呈剂量依赖性。免疫印迹法结果显示,与对照组比较,NS398各剂量组survivin和XIAP蛋白表达量均显著减少,cleaved caspase-3蛋白表达量均显著增加（P=0.000）,也呈明显剂量依赖性。结论 NS398能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,并诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与下调survivin和XIAP蛋白表达,上调cleaved caspase-3蛋白表达有关。     

胞嘧啶脱氨酸基因治疗人胰腺癌的实验研究

探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因用于人胰腺癌基因疗法的可行性。方法将含癌胚抗原启动子的重组腺病毒感染人胰腺癌ＳＷ１９９０细胞和Ｃａｐａｎ－２细胞以及人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＣＤ基因在细胞中的表达,以ＭＴＴ法比较细胞对５－氟胞嘧（５－ＦＣ）的敏感性差异。建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察ＣＤ基因的原位治疗效应及安全性。结果腺病毒介     

PIAS1通过调控Sonic hedgehog信号通路使胰腺癌细胞SW1990获得对吉西他滨的耐药性

目的:研究吉西他滨耐药性胰腺癌细胞中Sonic hedgehog(Shh)信号通路异常激活的机制?方法:通过间歇梯度倍增法筛选出对吉西他滨产生耐药性的胰腺癌细胞SW1990-GEM,荧光实时定量PCR和蛋白质印迹法检测耐药细胞中PIAS1的表达;利用RNA干扰技术构建稳定低表达PIAS1的细胞株SW1990-GEM-shPIAS1,从增殖速度?克隆形成能力及裸鼠皮下成瘤能力等方面考察PIAS1?Shh信号通路与胰腺癌耐药性的相关性?结果:耐药株SW1990-GEM中PIAS1基因表达量明显升高;PIAS1的高度表达正向激活了Shh信号通路的活性,使得细胞获得耐药能力;人为降低PIAS1的高表达后,耐药株的耐药能力同时被减弱?结论:PIAS1是使耐药株获得耐药性的关键因子,PIAS1通过正向调控Shh信号通路使其获得耐药能力?     

X射线对胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2细胞增殖及凋亡的影响

目的探究不同剂量的x射线对胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2增殖和凋亡的影响。方法取处于对数生长期的SW1990和Capan-2细胞,经不同剂量的x射线（2、4、6、8和10Gy）照射后分别培养24、48和72h.CCK培法检测细胞增殖;采用AnnexinV／PI双染的方法检测SW1990和Capan-2细胞的凋亡;Westernblotting检测细胞凋亡相关蚩白的表达变化;RT—PCR检测细胞凋亡相关蛋白的mRNA表达。结果相比正常对照组,x射线能明显抑制SW1990和Capan-2细胞的增殖,井且这种,抑制作用呈剂量依赖性。细胞凋亡率在x射线的作用下也明显增加,并呈现剂量依赖性。Westernblotting结果显示x射线能增加两种细胞中促凋亡蛋白Bax的表达。RT-PCR结果显示x射线能降低抗凋亡蛋白Bel-2mRNA表达,上凋抗凋亡蛋白Bax mRNA表达。结论x射线能抑制胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2的增殖并提高其凋亡率,呈现一定的剂量依赖性,其机制可能与诱导胰腺癌细胞凋亡有关。     

复方中药CCM-AT13抗胃癌的作用机制

目的 研究复方中药CCM-AT13对裸鼠胃癌荷瘤模型的治疗作用及机制。方法 通过建立裸鼠移植瘤模型与瘤体内局部注射药物,采用大体、组织学、亚细胞学与细胞增殖动力学指标观察CCM-AT13,5-F与华蟾素对移植瘤的治疗效果。研究CCM-AT13作用机制。结果 CCM-AT13具有较强的肿瘤细胞杀伤作用和抑制作用,抑瘤率为91.2%,抑瘤效果明显强于5-FU与华蟾素;CCM-AT13不仅可引起肿瘤组织坏死,抑制细胞增殖,还可增强局7部免疫力,促进纤维组织增生。结论 CCM-AT13具有较强的抗肿瘤效果。有较大的临床应用价值。为临床治疗胃癌提供了新的思路与方法。     

重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌荷瘤裸鼠的治疗研究

目的 探讨重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌移植模型的治疗作用.方法 裸鼠皮下接种MCF-7人乳腺癌细胞,建立人乳腺癌移植模型.用质粒PGL3-DF3-DTA,质粒PGL3-DF3和生理盐水分别给裸鼠移植瘤瘤内多点注射.观察肿瘤大小和组织形态学变化,并用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡改变.结果 重组质粒PGL3-DF3-DTA组裸鼠乳腺癌生长受到明显抑制,抑制率为50.08%,肿瘤细胞的凋亡率增加.结论 重组质粒PGL3-DF3-DTA对裸鼠人乳腺癌移植瘤的生长具有明显抑制作用,为乳腺癌基因治疗提供了新的方法.