类细菌样念珠菌变异株对普通抗细菌药物敏感性观察

目的 了解念珠菌发生类细菌样变异前后对普通抗细菌药物的敏感性是否发生了改变.方法 采用常规MH药敏试验方法,观察ATCC10231白色念珠菌标准菌株和其自发变异后得到的类细菌样念珠菌变异株,9002.9白色念珠菌标准菌株及其经抗真菌药物诱导形成的类细菌样念珠菌变异株,临床分离的类细菌样念珠菌变异株及变异株返祖后得到的念珠菌株,共11株菌对普通抗细菌药物头孢哌酮/舒巴坦、头孢西丁、亚胺培南、环丙沙星、红霉素、万古霉素、庆大霉素、氯霉素、四环素的敏感性.结果 两株白色念珠菌标准菌株、临床分离类细菌样变异株返祖后的念珠菌株对普通抗细菌药物无抑菌圈;而不同条件下得到的类细菌样念珠菌变异株则对以上普通抗细菌药物有一定的敏感性.结论 白色念珠菌发生类细菌样变异后,对普通抗细菌药物的敏感性发生了改变,变异前对普通抗细菌药物不敏感,但发生类细菌样变异后对普通抗菌药物均有一定的敏感性,其抗菌谱与普通细菌基本一致.     

念珠菌类细菌样变异株生物学性状及遗传学特征研究

目的 了解念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状的改变情况,并通过其遗传学特征研究从分子水平揭示这种变异发生的机理。方法实验室研究中,利用不同的营养条件及生长环境、不同的唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌株进行诱导使其变异; 临床研究中,从抗真菌治疗效果不佳患者的阴道分泌物、痰液、胸腔积液、胃液等标本中分离念珠菌变异株,并对以上变异株的形态特点、核结构、生化反应、耐药性、菌体组分、遗传学特征等进行研究。结果 菌体形态:念珠菌极易发生类细菌样变异,变异株菌体可呈G⁺球菌状、G⁺杆菌状、G⁺长丝状、G^-球菌状、G^-杆菌状等; 核结构:电镜透射扫描证实念珠菌变异株失去真核细胞固有的核结构而呈原核生物样改变; 生化反应:在所观察的20项生化试验中有 5项不同; 药敏试验:念珠菌发生变异后对原本敏感的抗真菌药物完全耐药,而对原本耐药的普通抗细菌药物敏感,且耐药谱与普通细菌耐药谱相同; 菌体组分改变:经质谱仪鉴定念珠菌变异株和变异菌返祖株菌体组分有明显不同; 真菌最保守基因表达:采取PCR技术对变异株进行真核生物最保守基因16S sRNA检测发现,念珠菌发生类细菌样变异后仍表达真核生物保守基因,由此可证明具有原核细胞生物学特性的念珠菌类细菌样变异株是源于具有真核细胞的念珠菌。结论 念珠菌极易发生类细菌样变异,变异株各种生物学特性与原核生物酷似。电镜观察具有明确亲缘关系的念珠菌标准菌株、念珠菌类细菌样变异株、变异菌返祖株在核物质存在形式上确有质的改变,此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。     

类细菌样念珠菌变异株真菌保守基因检测

目的 揭示念珠菌类细菌样变异株的分子基础及其相应的生物学特性的分子基础.方法 采用常规PCR方法,对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、两株不同来源的白色念珠菌标准菌株及源自于这两株念珠菌标准菌株的类细菌样念珠菌变异株进行真菌最保守18S rRNA基因的检测.结果 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌无真菌基因表达;两株念珠菌标准菌株真菌基因为强表达;源自于念珠菌标准菌株的类细菌样念珠菌变异株真菌基因呈极弱表达.结论 念珠菌发生类细菌样变后,虽然生物学性状呈类细菌样改变,但仍部分表达真菌最保守基因.此结果也进一步证实了具有原核生物特性的类细菌样念珠菌变异株是源自于具有真核细胞特性的念珠菌.     

变异念珠菌常见菌落和菌体形态

目的 研究白色念珠菌变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 用唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌进行实验室诱导得到不同的变异株;不同培养环境下获得白色念珠菌自发变异株.从抗真菌药物治疗效果不佳的临床念珠菌感染患者标本中分离培养的念珠菌变异株.将以上变异株进行培养,革兰染色,镜下观察菌体形态.结果 氟康唑诱导变异株菌落呈黏液状,革兰染色为阳性长杆状;伊曲康唑诱导的变异株菌落呈水滴状,革兰染色为阴性球杆状;酮康唑诱导的变异株菌落呈灰白色,革兰染色为阳性葡萄状;白色念珠菌自发变异株和临床分离念珠菌变异株菌落多产红色、黄色等色素形态为革兰阳性球菌状、革兰阴性杆状,也可呈白色毛绒状、淡粉色粉末样菌落,革兰染色为阳性念珠菌.结论 常用抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体可发生类细菌样改变,因此,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.     

念珠菌类细菌样变异株基因特征初步研究

目的在对念珠菌发生变异后其形态、结构等生物学性状研究的基础上,进一步探讨念珠菌类细菌样变异株基因特征。方法在低温、营养缺乏条件下诱导白色念珠菌标准菌株使其变异;用不同浓度梯度的氟康唑等临床常用抗真菌药物诱导白色念珠菌标准菌株变异。采用煮沸法制备真菌基因模板,采用细菌保守基因16SRNA序列引物和真菌保守基因18SRNA序列引物分别扩增16SRNA和18SRNA序列,琼脂糖凝胶电泳,观察并记录结果。同时将细菌保守基因16S RNA扩增片段进行测序,所得序列进行BLAST比对分析。结果念珠菌类细菌样变异株16SRNA序列均扩增阳性,而白色念珠菌标准株未出现相应的扩增条带。念珠菌类细菌样变异株18SRNA序列扩增除2号菌株有微弱的条带外,其余变异株均未扩增出目的条带,而白色念珠菌标准株则出现相应的扩增条带,表明念珠菌类细菌样变异株基因组中18S RNA序列所占比例不多或是因多次传代遗失。念珠菌类细菌样变异株16SRNA扩增片段经纯化后进行DNA序列测定,BLAST进行比对分析,发现念珠菌类细菌样变异株序列与数据库中细菌序列有较高的相似性。结论念珠菌类细菌样变异株基因组含有细菌保守基因及少量真菌保守基因,具有原核生物学性状的念珠菌类细菌样变异株是源于真核生物的念珠菌。此研究在生物进化特别是在原核细胞与真核细胞的进化联系上有非常重要的意义。     

218株临床分离酵母样真菌的分类及分布调查分析

目的 通过调查酵母样真菌的分类及分布,了解武汉市第十一医院患者酵母样真菌的带菌状况和感染特点,为临床一线对预防和控制感染提供科学依据.方法 对从武汉市第十一医院625份临床标本中分离的218株酵母样真菌进行培养及鉴定分类.严格按照卫生部<全国临床检验操作规程>进行操作,并采用APⅠ CandⅠda鉴定系统进行鉴定与分类.结果 酵母样真菌218株中白色念珠菌占首位,共检出96株,阳性检出率为44.04%,占第2、3位的依次为热带念珠菌和星形念珠菌,而其后其他酵母样真菌按检出率从高到低排列依次为光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌以及假热带念珠菌等.结论 由于抗生素、激素、免疫抑制剂的使用,造成患者免疫系统严重受损.临床对长期大量使用抗生素或免疫功能低下等危重病患者要特别注意预防和监测真菌感染,以利于及时治疗.     

196株念珠菌的分离和耐药性分析

目的　了解我院念珠菌感染和耐药情况。方法　对临床标本分离的念珠菌 ,用VITEK32鉴定仪鉴定 ,对分离株进行 10种常用抗真菌药物体外敏感性检测。结果　 196株念珠菌以白色念珠菌的检出率居首位。 196株念珠菌对 10种抗真菌药物出现不同程度的耐药。结论　广谱抗生素、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用 ,增加了真菌的感染机会 ,应加强真菌的耐药性监测 ,以指导临床合理使用抗生素。     

临床分离鉴定435株念珠菌及药敏结果分析

目的：了解我院念珠菌感染和耐药情况。方法：对临床标本分离的念珠菌用VITEK-32鉴定仪鉴定，对分离株进行抗菌药物体外敏感性检澍。结果：435株念珠菌以白色念珠菌检出率居首位。435株念珠菌对4种抗真菌药物出现不同程度的耐药。结论：广谱抗生素、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用，增加了真菌的感染机会，应加强真菌的耐药性监测，以指导临床合理使用抗生素。     

贵阳地区慢性呼吸道感染125株病原性真菌的生物学与基因分析

目的探讨贵阳地区引起慢性呼吸道感染的常见病原性真菌种类及其分布。方法采集104例慢性支气管炎与慢性肺炎患者的下呼吸道分泌物标本,接种CHROM培养基25℃培养48~72 h。对分离的真菌进行常规形态或/和生化反应以及ITS序列和25S rDNAⅠ型内含子序列的检测与鉴定。结果共分离真菌125株,含酵母菌99株(79.2%)和霉菌26株(20.8%),其中白色念珠菌60株。取42株酵母菌和霉菌作ITS鉴定,与生物学鉴定的符合率为81%。19株白色念珠菌经25S rDNAⅠ型内含子鉴定,分别为基因A型9株(47.4%)、B型6株(31.6%)、C型4株(21.0%)。结论贵阳地区慢性呼吸道感染常见真菌为酵母菌,主要是白色念珠菌基因A型。检测ITS序列和25S rDNAⅠ型内含子序列,有助于真菌感染的快速基因诊断和提高菌种鉴定的准确率。     

187株真菌的鉴定及耐药情况分析

目的 了解本院真菌的感染及耐药现状,为临床合理用药提供依据.方法 对2005年1月至2007年6月本院门诊和住院患者标本中分离出的187株真菌进行鉴定,并用9种抗真菌药物做药敏试验,其结果结合临床综合分析.结果 痰液标本真菌检出率最高,达92%,患者年龄大部分为60岁以上老人.共分离出白色念珠菌145株,占77.5%;热带念珠菌12株,占6.4%;光滑念珠菌10株,占5.3%.对两性霉素B、咪康唑的药物敏感性较高,耐药率较高的是氟康唑、氟胞嘧啶.结论 临床标本中真菌分离以白色念珠菌为主,长期应用广谱抗生素及机体免疫力低下是患者感染真菌的主要原因,真菌药敏试验可为临床合理用药提供依据.     

100株念珠菌对6种抗真菌药物的敏感性

近年来随着广谱抗菌药物、皮质类固醇激素和免疫抑制剂的应用以及介入性医疗手段的使用增多,念珠菌引起的深部感染有明显增加趋势.针对念珠菌感染或预防感染而使用抗真菌药物的结果又导致耐药性念珠菌的产生1,尤其对于念珠菌感染病人抗真菌治疗效果不甚理想时,进行念珠菌分离鉴定及药敏测定往往非常重要.为此,我们对分离自临床标本的100株念珠菌进行了菌种鉴定及对6种抗真菌药物的敏感性测定,现将结果报告如下. 1 材料与方法 1．1 菌株来源 为1999年1月～1999年9月从临床送检标本(血液及骨髓7株、痰液及咽拭子61株、粪便2株、尿液17株、…     

198例酵母样真菌感染及其耐药性分析

目的了解院内患者的真菌感染情况,对其耐药性进行分析,以指导临床合理用药。方法用念珠菌显色平板进行初步鉴定,再使用ID32C和ATB FUNGUS3分别进行鉴定和药敏试验,在全自动鉴定与药敏测试仪（ATB ExPression）上读板。结果送栓1045例标本,检出酵母样真菌198株,院内感染真菌分离率为18．9％（198／1045）。其中白色念珠菌140株,热带念珠菌25株,清酒念珠菌13株,光滑念珠菌8株,克柔念珠菌4株,其他念珠菌8株,分别占检出真菌的70．7％、12．6％、6．6％、4．0％、2．0％、4．0％。结论以白色念珠菌感染为主,热带念珠菌和清酒念珠菌其次,3种念珠菌占总分离真菌的89．9％（178／198）。5种抗真菌药物的耐药率以5－氟胞嘧啶和两性霉素B较低,氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑较高。     

281株临床分离念珠菌的药敏结果分析

目的 对临床送检标本分离鉴定出的念珠菌进行细菌构成及药敏结果分析,促进临床合理使用抗真菌药物.方法 对2009年1月至2010年12月临床送检标本进行 5种常用抗真菌药(5-氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B)的体外敏感性检测及耐药分析.结果 281株念珠菌中白色念珠菌184株,占65.5%,其次是光滑念珠菌50株(17.8%),热带念珠菌19株(6.8%).结论 该院患者念珠菌感染以白色念珠菌为主,药敏结果显示两性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、氟康唑、伊曲康唑敏感性高,对送检标本及时进行真菌培养和药敏试验,可及时、合理地使用抗真菌药物,减少多重耐药和深部真菌感染的发生.     

60株酵母样真菌的药敏试验分析

目的 对从老年病房中分离的60株酵母样真菌进行药敏分析，以指导临床用药。方法 用法国生物梅里埃公司全自动细菌分析鉴定仪进行真菌的分类鉴定．再用E试验药敏试条进行药敏试验。结果 共分离60株酵母样真菌，其中自念珠菌33株。占55％，热带念珠菌14株，占23．3％，其他还有光滑念珠菌，副热带念珠菌，近平滑念珠菌，无名念珠菌，克柔念珠菌，季也蒙念珠菌，皱落念珠菌和奥默毕赤酵母菌共10种酵母样真菌。其结果显示，60株酵母样真菌对两性霉素B均敏感，对氟康唑、酮康唑及伊曲康唑均有耐药株。结论 本试验结果表明，两性霉素B、5－氟胞嘧啶对深部真菌感染仍有效，而氟康唑和伊曲康唑治疗深部真菌感染疗程长，有一定的不良反应。而老年人肝、肾功能较差，应加强治疗过程的监测，避免不良反应。     

临床分离鉴定念珠菌及耐药性1110株分析

如何选用合适的抗真菌药是当前临床医生和微生物鉴定工作者面临的一大问题。为此对2006-01-01~2006-12-31我院分离的1 110株真菌鉴定及药敏试验结果进行分析如下。1临床资料1.1一般资料取自我院住院及门诊患者送检的痰、尿液、分泌物、血液、粪便、胸腹水等标本1 110株。1.2鉴定方法将各种临床标本接种于沙保罗培养基,35℃孵育,培养阳性者菌落经革兰氏染色确认为酵母样菌后,采用珠海H em a微生物鉴定/药敏分析系统进行鉴定和药敏试验。2结果1 110株念珠菌在各类标本中的分布及菌种构成见表1,耐药率见表2。表1 1 110株念珠菌在各类标本中的…     

酵母样真菌的鉴定及耐药分析

目的：探讨本地区医院感染酵母样真菌的种类、样本分布，及各菌种对常用药物敏感程度。方法：真菌培养采用常规方法，酵母样真菌鉴定卡进行鉴定，用ATB Fungus药敏板测定对六种抗真菌药物的耐药性。结果：分离出233株酵母样真菌中，白色念珠菌占66．1％，热带念珠菌占18．0%；对唑类抗真菌药物耐药率相对高，克柔念珠菌对两性霉素敏感，对另几种抗真菌药物显示较高的耐药性。结论：非白色念珠菌的检出率有所增加；临床应根据实验室提供的药敏结果合理使用抗真菌药物。     

医院内感染的病原菌分布及耐药性分析

目的了解医院内感染病原菌的种类及其在各科室的分布并做细菌耐药性分析研究,为临床提供可靠而科学的治疗依据。方法429份标本中,共分离出123株病原茼,使用法国生物一梅里埃公司生产的ATB—new细菌鉴定及药敏分析系统及配套的鉴定和药敏板对分离的细菌进行鉴定及药敏试验。结果共分离出126株病原菌,院内各科感染发生率以重症监护室（ICU）最高,为42．9％,呼吸内科26．9％、消化内科5．6％、骨外科7．9％、神经内科4．0％、普外科7．1％,传染病房5．6％。主要致病菌检出率从高到低依次为：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌、不动杆菌和金黄色葡萄球菌。结论医院内感染的细菌主要为革兰氏阴性菌,其中大肠埃希菌和铜绿假单胞菌是主要感染菌群,表皮葡萄球菌和真菌的感染率逐渐增高;要重视医院内感染的监测,控制医院内感染的发生率,合理使用抗生素,减少细菌耐药性。开展医院内感染病原茼对常用广谱抗生素的耐药性监测,对指导临床合理用药、延缓细菌耐药性产生有重要意义。     

显色培养基在鉴定念珠菌中的应用

科玛嘉念珠菌（Candida）显色培养基是一种新型分离培养基,根据培养基对不同的酵母菌菌落呈现不同的颜色及形态差异,可以选择性分离念球菌并同时对白色、热带、和克柔念珠菌作出鉴定。为了考察法国科玛嘉念珠菌显色培养基鉴定念珠菌的实际使用情况,我室将其与生物梅里埃的API20C　AUX或ID 20 C同时进行临床念珠菌的鉴定。 1 材料和方法 1.1 标本来源:2000年1月-2001年6月,从患者尿液中分离出29株、痰液268株、脓液6株,大便标本12株、分泌物6株,共计321株真菌,其中念珠菌319株。 1.2 培养基:沙保弱培养基由浙江军区后勤部生产,显色培养基由河南郑州博赛科技有限责任公司提供的科玛嘉显     

分离自艾滋病患者白念珠菌唑类药物耐药株中Erg11基因突变研究

目的:探讨分离自艾滋病患者的白念珠菌唑类药物耐药株中Erg11基因的突变及其与唑类耐药的关系.方法:分离自艾滋病患者的100株真菌标本,经科玛嘉显色培养鉴定为白念珠菌85株,根据美国临床实验室标准化协会制订的M27-A方案的液体微量稀释法行体外药物敏感试验,共鉴定出27株唑类耐药株(耐氟康唑和/或伊曲康唑和/或伏立康唑).27株耐药株提取基因组DNA后,对其Erg11基因行PCR扩增、测序并与Genebank中敏感株进行比对分析.结果:在27株唑类耐药株中共发现25处不同点突变,其中5处引起氨基酸替换,分别为D116E、E266D、H485T、V447I和V488I,27株均发生H485T突变,7株耐药株定生E266D突变,4株耐药株发生V488I突变,其中1株同时发生E266D和V4881突变,1株发生V4471突变.结论:分离自艾滋病患者的白念珠菌唑类耐药株中Erg11基因的突变热变区和有意义突变与分离自其他宿主的唑类耐药株的突变情况基本一致;分离自艾滋病患者的白念珠菌唑类耐药株Erg11基因突变并非唯一致耐药因素.     

医院内假丝酵母菌感染的菌种构成和耐药性分析

目的 分析医院内感染假丝酵母菌菌种构成和耐药性。 方法 对临床标本分离的酵母样真菌,用VITEK-Ⅱ(生物梅里埃公司)生化鉴定仪、API20c生化鉴定试纸条和念珠菌显色琼脂以及聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)方法进行酵母样真菌菌种的鉴定,应用ATB Fungus3 进行药敏试验。 结果 96株酵母样真菌,可分为6个种,包括白色念珠菌40株 (41.7%)、热带念珠菌36株 (37.5%)、光滑念珠菌13株 (13.54%)、近平滑念珠菌5株 (5.21%)、克柔念珠菌1株 (1.04%)、挪威念珠菌 1株(1.04%)。各种假丝酵母菌对5种抗真菌药呈现不同的敏感性,对两性霉素B和5-氟胞嘧啶的敏感率为100%,而对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑则表现出一定的耐药性。 结论 基因间隔转录区分子生物学分析结合传统培养和生化方法,可有效提高假丝酵母菌鉴定的准确性。本研究结果提示医院内非白假丝酵母菌感染有增多趋势。重症监护病房(intensive care unit, ICU)是重要的假丝酵母菌来源科室。60岁以上的老龄患者是医院内真菌感染的高危人群。体外药敏试验提示部分假丝酵母菌出现了唑类药物(氟康唑和伊曲康唑)的耐药性。