缺血预处理经抑制p53表达减轻缺血再灌后大鼠海马神经元损伤

目的：观察缺血预处理能否对大鼠缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡起拮抗作用，并探讨p53基因在其中的作用。 方法： 复制全脑缺血再灌注及缺血预处理模型，利用HE染色，流式细胞仪，RT-PCR和免疫组化方法检测海马CA1区锥体细胞形态学变化、神经元凋亡百分率及p53基因表达。 结果：缺血预处理（IPC）组的神经元存活数目［(217±9)/0.72 mm²］明显高于单纯缺血再灌注（IR）组［(29±5)/0.72 mm²］，P＜0.01；IPC组的凋亡百分率(2.07%±0.21%)显著低于IR组(4.26%±0.08%), P＜0.01; IPC组p53基因表达显著弱于IR组。 结论： 缺血预处理可通过抑制p53基因表达，从而抑制大鼠海马神经元凋亡，对缺血神经元起保护作用。     

氯化血红素预处理对全脑缺血/再灌注大鼠海马神经元的保护作用

目的 研究氯化血红素对大鼠全脑缺血/再灌注后海马神经元的保护作用。方法 84只雄性Wistar大鼠采用4血管闭塞法制造大鼠全脑缺血模型,观察不同剂量氯化血红素对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响,并应用流式细胞仪检测海马神经元凋亡率。结果 氯化血红素预处理组与缺血/再灌组相比海马神经元凋亡率下降,海马CA1区锥体细胞组织学分级明显降低,神经元密度明显升高(p<0.05)。而氯化血红素治疗组与缺血/再灌组相比无统计学意义(p>0.05)。结论 氯化血红素预处理对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体神经元具有明显的保护作用。     

CGRP和NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马p53蛋白表达的影响

为了探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马p53蛋白表达的影响,用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,应用免疫组化和显微图像分析方法检测脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区p53蛋白的表达。结果如下:假手术组海马CA1区未见p53阳性细胞,而脑缺血再灌注组阳性细胞明显增多。分别注射CGRP或NGF后海马CA1区p53阳性细胞平均灰度值均明显高于缺血再灌注组(P<0.05),二者联合应用时平均灰度值较单独应用高(P<0.05)。以上结果提示:CGRP和NGF下调缺血神经元p53蛋白的表达,二者合用作用更强,可能对缺血神经元的恢复有促进作用。     

高血糖加重全脑缺血再灌注后缺血不敏感区神经元损伤

目的:探讨高血糖条件下脑缺血再灌注损伤加重的机制.方法:通过双侧颈总动脉结扎及放血法制备大鼠全脑缺血/再灌注模型,采用组织病理学、组织化学显色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记(TUNEL)染色,对比观察注射性高血糖和糖尿病性高血糖大鼠神经元变性以及凋亡.结果:缺血敏感区额叶皮质和海马CA1区可见,各实验组在缺血15 min,再灌注1、3、6h各时间点变性和凋亡神经元数量均多于假手术组(P＜0.01).但高血糖组、糖尿病组在缺血15 min,再灌注1、3、6h各时间点,变性和凋亡神经元的数目与正常血糖组接近.在缺血耐受区扣带皮质和海马CA3区,高血糖组和糖尿病组在缺血15 min,再灌注1、3、6h各时间点,变性和凋亡神经元的数目多于正常血糖组(P＜0.05).在糖尿病组和高血糖组之间,各时间点变性和凋亡神经元数量无差异.结论:不论是急性高血糖还是糖尿病性高血糖,均可加重暂时性全脑缺血再灌注所引起的神经元损伤,特别是在高血糖条件下,大鼠脑缺血不敏感区扣带皮质和海马CA3区变性及凋亡神经元增加.     

Genistein后处理介导eNOS激活及其对缺血后神经元的保护作用

 目的 研究Genistein后处理 (Genistein Postconditioning, GPC) 对脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用,及其对eNOS磷酸化水平的影响,从而揭示GPC神经保护作用可能的分子机制。方法 建立大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,采用Western Blot技术检测大鼠海马CA1区eNOS、p-eNOS的表达;NeuN染色和TUNEL技术分别观察海马CA1区神经元的存活和凋亡样损伤。结果 1. Western Blot结果显示,与I/R组相比GPC后再灌注30min和3d p-eNOS水平显著升高,而eNOS蛋白表达在各个时间点没有明显变化。2. 激光扫描共聚焦显微镜技术结果显示,GPC组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加,而凋亡样损伤的神经元显著减少;3. NOS抑制剂L-NAME不但有效降低p-eNOS水平,而且可显著减弱GPC诱导的神经保护作用。结论 Genistein后处理可抑制大鼠海马CA1区神经元凋亡,其机制可能与p-eNOS表达上调有关。     

缺血预处理诱导脑缺血再灌注损伤后Bcl-2及Bcl-xl表达

目的 探讨调亡抑制基因Bcl-2及Bcl-xl在缺血预处理（IPC）对海马CA1区神经元细胞保护中的作用。方法 利用大鼠四血管阻断及再通建立前脑缺再缺血灌注损伤模型,采用尼氏染色光镜观察、流式细胞术、免疫组织化学等技术,观察缺血预处理海马CA1区神经元病理组织学改变、细胞凋亡面分率有Bcl-2及Bcl-xl蛋白表达的情况。结果 1、大鼠前脑缺血再灌注引起海马CA1区部分神经元发生调亡。2、IPC可明显地减少缺血再灌注损伤后调亡的神经元数目,产生细胞保护作用。3、IPC可诱导缺血再灌注损伤早期缺血敏感神经元中Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达。结论 抑制神经元调亡发生可能IPC对缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一。     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau磷酸化影响

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法应用免疫组织化学SABC法、Western Blotting和图像分析方法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达、以及CGRP对缺血神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。结果缺血再灌注大鼠海马CA1区tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau表达水平明显增高,CGRP治疗后tau蛋白磷酸化水平和总tau表达水平明显低于缺血再灌注组(P<0.05)。结论CGRP明显减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化程度和总tau表达水平,可能对缺血神经元起保护作用。     

异丙酚对大鼠脑缺血再灌注海马细胞周期因子变化及神经元凋亡的影响

目的： 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马神经元细胞周期蛋白1（cyclin D1）和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（cyclin-dependent kinase 4,CDK4）的表达与神经元凋亡的关系及异丙酚的脑保护作用。方法: 采用大脑中动脉内栓线阻断法（middle cerebral artery obstruction,MCAO）造成局灶性脑缺血再灌注模型。用免疫印迹法（Western blotting）观察cyclin D1和CDK4蛋白的表达;采用流式细胞仪检测海马神经元凋亡。再灌注48 h时进行大鼠神经功能缺陷比较。结果: （1）异丙酚可以改善大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺陷（P＜0.01）;（2）与假手术组比较,脑缺血再灌注48 h后缺血侧海马神经元cyclin D1、CDK4表达明显升高、凋亡细胞数明显增多（P＜0.01）。与缺血再灌注组比较,异丙酚组海马神经元cyclin D1、CDK4的表达和凋亡率明显降低（P＜0.05）。结论: 脑缺血再灌注后缺血侧海马cyclin D1、CDK4表达增强,这可能是介导脑缺血再灌注后神经元凋亡的机制之一;异丙酚可下调神经元cyclin D1、CDK4的表达,抑制神经元凋亡,减轻缺血再灌注对大鼠海马神经元的损伤。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB表达的上调作用

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化的CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、W estern B loting和图像分析方法检测大鼠海马CA1区CREB和磷酸化CREB表达。结果假手术组海马CA1区CREB有明显表达,缺血再灌注组CA1区表达较假手术组减少,NGF组CA1区的CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。假手术组海马CA1区p-CREB表达很少,缺血再灌注组p-CREB表达多于假手术组,NGF组p-CREB表达多于缺血再灌注组(P<0.05)。结论NGF上调海马CREB和p-CREB的表达,对缺血神经元起保护作用,CREB和p-CREB参与NGF对缺血神经元的保护作用机制。     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和磷酸化CREB(p- CREB)表达的影响。方法:制作局灶性脑缺血再灌注模型实验组并给予CGRP,应用免疫组织化学、Western印迹和图像分析方法检测大鼠海马CA1区CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组CA1区CREB表达较假手术组减少,CGRP组CA1区的CREB表达高于缺血再灌注组。缺血再灌注组CA1区p-CREB表达高于假手术组,CGRP组p-CREB表达多于缺血再灌注组。结论:CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和p-CREB的表达,CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的。     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织P53蛋白表达的调节作用

目的　研究降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织P53蛋白表达的影 响,探讨降钙素基因相关肽对脑组织缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法　用线栓法制备大鼠大脑中动 脉阻塞(MCAO)模型,应用免疫组化和显微图像分析方法检测大鼠脑缺血再灌注后脑组织P53蛋白的表达。 结果　假手术组海马和顶叶内未见P53阳性细胞,脑缺血再灌注组阳性细胞明显增多,注射CGRP后P53阳 性细胞平均灰度值明显高于缺血再灌注组(P<0.01)。结论　CGRP下调缺血神经元P53蛋白的表达,可能 对缺血神经元的恢复有促进作用。     

神经节苷脂对脑缺血再灌注大鼠海马CREB表达的影响

目的探讨单唾液酸神经节苷脂(GM1)对脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法 72只SD大鼠随机分为:假手术组(Sham,8只)、神经节苷脂治疗组(GM1,32只)、缺血再灌注组(I/R,32只)。GM1治疗组和I/R组依据缺血后再灌注的不同时间点再细分为6h、12h,24h、3d,共4个小组。应用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠海马CREB蛋白的表达。结果免疫组织化学方法检测时发现,缺血处理后,CREB表达水平迅速增高,在6h时最高,之后持续激活,至12h时开始降低,与假手术组相比,CREB阳性产物的平均光密度值(MOD)显著升高(P0.01);与相同时间点的缺血组比较,GM1治疗组的CREB蛋白阳性表达水平明显升高(P0.01)。Western blot方法也得到了相同的结论。结论 GM1对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用可能与上调CREB蛋白的表达相关。     

黄芪注射液腹腔注射脑缺血再灌注模型大鼠海马组织神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达*

背景：有研究表明黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡。 目的：观察黄芪注射液腹腔注射脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。 方法：采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注大鼠模型,建模后给予质量浓度2,4,6,8和10 mL/kg的黄芪注射液腹腔注射,并设立假手术组。分别采用原位末端标记法染色和蛋白免疫印迹方法检测各组大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达。 结果与结论：模型组大鼠海马神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达明显增多(P < 0.05);与模型组相比,黄芪注射液4,6,8,10 mL/kg组海马神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达明显减少(P < 0.05);与黄芪注射液4 mL/kg组比,黄芪注射液6,8,10 mL/kg 组神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达减少(P < 0.05),且呈剂量依赖性。结果证实,黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达。关键词：黄芪注射液;脑缺血再灌注;不同剂量;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3;细胞凋亡;中医药;组织构建 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.20.031     

大豆异黄酮对脑缺血/再灌注诱导的线粒体损伤和脑细胞凋亡的影响

 目的:研究大豆异黄酮（SI）对全脑缺血/再灌注大鼠脑组织线粒体超微结构、细胞凋亡和细胞色素C（Cyt-C）、caspase-3及caspase-9表达的影响,探讨大豆异黄酮对脑缺血/再灌注损伤的作用及机制。方法: 60只健康成年SD 大鼠随机分为假手术组（sham）、缺血再灌注组（I/R）和大豆异黄酮预处理组（SI）。SI组给予SI 120 mg·kg-1·d-1连续灌胃21 d,其余2组用等体积生理盐水灌胃,每天1次,第22天I/R组和SI组行手术阻断三血管制备全脑缺血/再灌注模型。缺血1 h,再灌1 h后处死,取大脑皮层,光镜观察脑细胞形态学变化,透射电镜观察线粒体超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR法和免疫组织化学法测定脑组织中Cyt-C、caspase-9及caspase-3的表达。结果: I/R组线粒体膜崩解、嵴消失,脑细胞大量凋亡。与I/R组相比,大豆异黄酮预处理能明显改善线粒体超微结构的损伤,减少脑细胞凋亡率（P<0.01）。I/R组Cyt-C、caspase-9和caspase-3 mRNA的表达和蛋白的含量高于sham 组（P<0.01）,与I/R组相比,SI组Cyt-C、 caspase-9及caspase-3 mRNA 和蛋白的表达显著降低（P<0.01）。结论: 大豆异黄酮可能通过稳定线粒体结构,减少线粒体释放Cyt-C,降低caspase-9和caspase-3的表达,抑制细胞凋亡,从而减轻脑缺血/再灌注损伤。     

人参皂苷Rb1对大鼠脑缺血再灌注损伤中NAIP表达的影响

目的:观察人参皂苷Rb1对神经元凋亡抑制蛋白(neuronal apoptosis inhibitory protein,NAIP)在脑缺血再灌注损伤中表达的影响,探讨人参皂苷Rb1对缺血性脑病的防治机制.方法:线栓法阻断大鼠大脑中动脉2 h,再灌注3 h～5 d制备脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法标记NAIP阳性细胞,观察人参皂苷Rb1对NAIP阳性细胞数的影响.结果:缺血再灌注后,缺血半暗带内的NAIP阳性细胞表达增加,海马CA 1区等部位的NAIP阳性细胞数量也明显增加,而缺血中心区无NAIP阳性细胞的表达.实验对照组中NAIP阳性细胞数量随再灌注时间延长逐渐升高,12 h达到高峰,至5 d时NAIP阳性细胞数量表达低于正常水平.实验用药组中NAIP阳性细胞数量在2 d时达到高峰,且其高峰值明显高于实验对照组中的高峰值,后随再灌注时间的延长而逐渐下降,至5 d时仍处于较高水平.结论:脑缺血再灌注后,NAIP表达增加是脑组织对损伤的一种保护性反应,其对缺血区周围的神经细胞的保护作用更为明显.NAIP在脑组织中的表达具有一定的时间规律性,并且人参皂苷Rb1可能通过上调NAIP的表达发挥对受损脑组织的保护作用.