肝郁脾虚证肝纤维化大鼠模型研究

目的建立肝郁脾虚证肝纤维化动物模型，为中医药辨证论治肝纤维化提供研究平台。方法采用四氯化碳皮下注射附加夹尾刺激、饥饱失常等制备肝郁脾虚证肝纤维化大鼠模型，根据症状表现记分判断证候的符合率，检测全血粘度、红细胞聚集指数、纤维蛋白原含量等指标确定瘀血程度；肝组织病理学检查判断肝损害状况和纤维化程度；用疏肝健脾活血方加味四逆散进行反证性治疗。结果肝郁脾虚证大鼠证候表现的符合率达82．5％；各组大鼠的全血粘度、红细胞聚集指数、纤维蛋白原含量都有不同程度的升高；治疗组大鼠证候表现、瘀血指标、肝组织损害及纤维化程度有显著改善。结论采用四氯化碳注射附加夹尾刺激、饥饱失常等中医因素可制备出符合率高而典型的肝郁脾虚证肝纤维化动物模型；加味四逆散反证性治疗有；明显疗效，提示证候模型的成功。     

实验室检查对酒精性肝纤维化中医证候特点分布影响研究

本项研究在前期酒精性肝纤维化中医证候特点的研究基础上,采用临床流行病学的原则和方法,明确诊断标准和排除标准,较全面地收集酒精性肝纤维化患者可能影响中医证候特点分布的实验室检查指标,对酒精性肝纤维化临床中医证候特点与实验室检查指标的关系进行探讨。     

肝气郁结证大鼠模型的建立及评价

目的运用慢性束缚应激结合孤养法建立肝气郁结证大鼠模型,通过行为学、宏观表征、客观指标及药物反证进行评价。方法 30只大鼠随机等分为3组：空白对照组、肝郁证模型组和柴胡疏肝散组。观察各组大鼠外部表征及体重变化,进行开野、蔗糖水实验,ELISA法检测血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质醇（CORT）,以柴胡疏肝散进行反证。结果模型组大鼠表现为低落倦怠、兴趣减退、毛发枯乱、便溏、体重增加缓慢;水平运动、垂直运动得分明显下降,粪便粒数增多;蔗糖水偏好程度下降;血浆ACTH、CORT含量升高;而柴胡疏肝散有显著的治疗作用。结论本实验用慢性束缚应激结合孤养法成功建立了肝气郁结证大鼠模型。     

免疫球蛋白J链与慢性乙肝中医证候肝纤维化相关性研究初探

对慢性乙肝中医证候蛋白质组学规律的探索研究中,发现慢性乙肝五种中医证型患者与正常人比较,存在多个蛋白质表达差异,其中,免疫球蛋白J链（IG-J）与慢性乙肝患者肝纤维化改变有较强的相关性。探讨免疫球蛋白J链作为肝纤维化标志物的可能性,为临床乙肝纤维化的无创伤性诊断提供了新的思路。为中医临床辨识慢性乙肝中医证候纤维化反应状况提供可供参考的客观化指标,最终为进一步探讨慢性乙肝中医证候本质提供科学依据。     

大鼠酒精性肝纤维化模型的构建

目的：探索简便、经济的大鼠酒精性肝纤维化造模方法。方法：33只大鼠随机分为2组。模型组予酒精灌胃，于实验的第4、12、24周末分批采血，以测定生化指标，后行放血法处死。将取出的肝脏进行常规切片、HE染色及Masson三色胶原染色后行病理学观察。正常对照组以等量饮用水代替酒精灌胃，于实验第24周末处死，处理同模型组。结果：于实验第24周时观察到了除酒精性肝硬化外酒精性肝病的各种病理表现，并且随着酒精刺激时间的延长肝纤维化程度逐渐加重。结论：应用酒精灌胃法可成功复制大鼠酒精性肝纤维化模型，该方法简便、经济。     

四氯化碳皮下注射构建大鼠肝纤维化模型的研究

目的 构建大鼠肝纤维化模型，观察纤维化的病理进程。方法轮替给大鼠四肢内侧皮下注射四氯化碳植物油混合液．按0．3ml／100g体重的剂量，每周注射两次。分别于初次注射后1、4、8周解剖大鼠，观察肝脏外观．肝组织切片行Van-Gieson(V-G)染色观察纤维增生情况。结果 随注射时间的增加肝脏外观先后出现了出血、坏死、增生、纤维化的特征。V-G染色证实肝脏纤维增生逐渐增多，8周时肝纤维化已形成。结论 四氯化碳皮下注射构建肝纤维化模型具有以下优点：(1)造模易于成功，大鼠死亡率小；(2)肝纤维化程度比较理想；(3)肝纤维化的进展与注射的时间长度直接相关，易于控制纤维化的程度，有利于进一步的研究。     

肝气郁结证证候量表的初步研究

目的初步编制中医肝气郁结证证候量表。方法通过对80例肝气郁结证受试者的测量(男性24例,女性56例),经相关系数法、Chronbach'sα系数法筛选出条目,男性肝气郁结证证候量表10项条目,女性肝气郁结证证候量表14项条目。结果各条目采用主成分因子分析法分析:男性肝气郁结证证候量表可提取2个因子,量表和因子的重测信度系数为0.749～0.814;Spearman-Brown分半信度为0.790～0.866;Chronbach'sα信度为0.806～0.848。女性量表可提取3个因子,量表和因子的重测信度系数为0.848～0.935;Spearman-Brown分半信度为0.683～0.934;Chronbach'sα信度为0.759～0.877。结论肝气郁结证证候量表具有良好的效度和信度,为肝气郁结证的研究提供了一个标准化的工具和方法。     

CCl4皮下注射制备大鼠肝纤维化模型的研究

目的:研究CCl4皮下注射制备大鼠肝纤维化模型的血清纤维化指标变化以及病理组织学改变,为临床实验研究提供参考.方法:SD大鼠予50% CCl4植物油混悬液皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,每周2次,共计12周,分别于给药3、6、9、12周末随机取10只大鼠,从对照组大鼠中取2只行病理、血液肝纤维化4项检查,观察大鼠生存率、血清学HA、PCⅢ、C-Ⅳ及LN水平变化和肝组织病理学变化情况.结果:造模时间与肝纤维化进程的关系及分级情况,随着造模时间的延长,肝细胞变性、坏死,逐渐形成纤维间隔,肝小叶结构紊乱,最终形成假小叶.给药3周S0期4只,S1期5只,S2期1只;给药6周S0期2只,S1期1只,S2期5只,S3期2只;给药9周S1期1只,S2期3只,S3期4只,S4期2只;给药12周S2期1只,S3期2只,S4期7只.肝纤维化进程(分级)与血清学关系,随着肝纤维化加重,HA、PCⅢ、C-Ⅳ及LN水平随肝纤维化加重呈上升趋势.HA、LN组间两两比较显示,对照组S1期、S2期与S3、S4期可区分(P<0.05);PCⅢ、C-Ⅳ组间两两比较显示,对照组S1期、S2期、S3期与S4期可区分(P<0.01).结论:大鼠CCl4油溶液皮下注射可以成功建立大鼠不同级别肝纤维化模型,是一种较为理想的实验性肝纤维化模型制备方法,值得在临床和实验研究中推广使用.     

抗纤饮对肝纤维化大鼠模型的治疗作用

目的观察抗纤饮（KXY）治疗四氯化碳纤维化大鼠模型的疗效。方法80只大鼠被随机分为4组，每组20只，A、B、C组为肝纤维化模型组，其中A组在模型制成后立即处死，B组采用抗纤饮治疗3mo，C组为自然转归组，不作任何治疗，D组为正常对照组。分别比较模型组、自然转归组、治疗组和正常对照组大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）的含量，并观察其组织学改变的差别．结果治疗组血清ALT、AST、PCⅢ、HA均显著低于模型组（P〈0．05）及自然转归组。病理学提示，治疗组肝细胞损伤、肝脏脂肪变性与纤维组织形成较少。结论抗纤饮在抗纤维化治疗中有确切疗效。     

肝气郁结的证候特点与制方规律

肝司疏泄，调畅一身气机。肝气郁结则脏腑气血津液皆受其害。肝气郁结为病繁杂，变证多端，为百病之始，六郁之首。证候特点分为肝气郁结本证和肝气郁结标证两类，疏肝解郁为其治疗大法，疏肝药的选用当因肝郁所累脏腑与标证病位而异。     

舒肝健脾法治疗肝郁脾虚型抑郁症的临床研究

目的观察疏肝健脾法治疗肝郁脾虚型抑郁症的临床疗效。方法采用随机、对照、盲法原则,选取符合轻、中度抑郁症及中医肝郁脾虚型证候标准的60例患者,随机分为两组,治疗组和对照组各30例。治疗组予疏肝健脾法(口服逍遥散)治疗,对照组予西药氟西汀胶囊,疗程均为6周。结果①按中医疗效指数评估临床疗效,两组总有效率比较,治疗组明显优于对照组(P<0.01);②按HAMD评分评估临床疗效,治疗组与对照组疗效相当(P>0.05);③治疗组在食欲下降、腹胀、入睡难、口干口苦及多梦等症状的疗效上优于对照组(P<0.01或P<0.05);④应用逍遥散治疗,未见到不良反应。结论疏肝健脾法治疗肝郁脾虚型抑郁症具有较好的疗效,且无明显的毒副作用,提示中医辨证治疗抑郁症具有一定的优势。     

利用脑电非线性分析关联维数对肝气郁结证患者的研究

目的探讨肝气郁结证患者脑电非线性动力学变化规律。方法15例肝气郁结症患者和15例正常受试者按年龄、性别配对,用参数D2对安静闭眼、安静睁眼、睁眼心算3种状态下的脑电数据进行分析。结果肝气郁结证患者部分区域的D2较正常人增高,随刺激条件的增加,肝气郁结证患者与正常人大脑皮层的D2均增高,但两者之间D2差异逐渐缩小,肝气郁结证患者有认知功能的改变。结论脑电非线性分析相对客观和准确地观测到肝气郁结证患者皮层的变化,可以用来对肝气郁结证的脑机制进行研究。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证模型大鼠海马单胺氧化酶A、B表达的影响

目的：研究经前舒颗粒对经前期综合征（PMS）肝气郁证大鼠海马单胺氧化酶A/B（MAOA/B）表达水平的影响。方法：雌性未孕SD大鼠48只,随机分为3组：正常对照组、模型组、经前舒治疗组,束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验对模型进行评价,治疗组采用经前舒颗粒治疗,RT-PCR和Western blot方法分别检测各组大鼠海马MAOA/B的mRNA及蛋白的表达。结果：模型大鼠海马MAOA mRNA及蛋白表达显著升高,经前舒颗粒治疗后,MAOA mRNA和蛋白表达均显著降低,而MAOB mRNA和蛋白表达各组间没有显著性变化。结论：PMS肝气郁证大鼠海马MAOA表达出现异常,经前舒颗粒的作用机制可能是通过调节海马MAOA的表达而发挥作用。     

磷酸化肌球蛋白轻链在大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达

目的探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl4)复制大鼠肝纤维化模型的特点,以及磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC(Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的作用。方法 70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl4组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl4组(M2)。N组皮下注射花生油3 ml/kg,2次/周;M1组采用400 ml/L CCl4花生油混合液,3 ml/kg,2次/周皮下注射;M2组采用高脂饮食联合小剂量CCl4造模,其CCl4用量2 ml/kg,浓度和频次同M1组。造模后8周末、10周末分批处死,检测肝功能、血脂、光镜观察大鼠肝脏脂肪变性及肝纤维化程度。免疫组化法检测肝脏P-MLC的表达。结果与N组比较,8周和10周末,M1组血浆球蛋白(GLO)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,P-MLC的表达及肝脂肪变性,纤维化程度均升高,但白球比(A/G)下降。与M1组比较,8周末,M2组ALT、AST下降,但脂肪变性增强;10周末,M2组白蛋白(ALB)、A/G下降,而ALT、AST上升明显;8周和10周末M2组P-MLC的表达及肝纤维化程度均强于M1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高脂饮食联合小剂量CCl4皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,具有造模时间短,成功率高的优点。P-MLC的表达随着肝纤维化的进展而增加,P-MLC在非酒精性脂肪性肝纤维化中起着一定的作用。     

肝郁证雌雄大鼠神经-内分泌变化的比较

目的比较肝郁证模型雌、雄大鼠的神经-内分泌变化以探讨肝郁证现代内涵的性别差异。方法大鼠适应性喂养1周后,雄鼠与动情周期稳定的雌鼠分别随机分为正常组和模型组(每组各10只),模型组采用慢性束缚应激法复制肝郁证模型,连续28 d。实验29~30 d处杀取材,测定各组大鼠神经-内分泌相关指标:单胺类递质,血浆5-羟色胺(5-HT)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE);肾上腺皮质轴(HPA),下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮/肾上腺酮(CORT);性腺轴(HPG),下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)、血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、雌二醇(E2);甲状腺轴(HPT),下丘脑促甲状腺激素释放激素(TRH)、血清促甲状腺激素(TSH)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)。结果与正常组雄鼠比较,模型组雄鼠血浆5-HT、NE及E明显升高(P<0.01);下丘脑CRH与血清CORT显著升高(P<0.05),血清ACTH无明显变化(P>0.05);血清FSH、LH、T显著降低(P<0.05,P<0.01),PRL、E2显著升高(P<0.05,P<0.01);TSH显著升高(P<0.05),T3、T4显著降低(P<0.05),下丘脑TRH无明显变化(P>0.05)。与正常组雌鼠比较,模型组雌鼠血浆E显著升高(P<0.05),5-HT、NE显著降低(P<0.05,P<0.01);下丘脑CRH与血清ACTH、CORT显著升高(P<0.01);下丘脑GnRH和血清FSH、LH、PRL、T及E2均显著升高(P<0.01);下丘脑TRH与血清T3、T4显著升高(P<0.01),TSH显著降低(P<0.01)。表明肝郁模型雌、雄大鼠均存在HPA轴的亢进,雌性还存在外周单胺类递质的代谢紊乱,HPT轴和HPG轴功能的亢进;雄性存在交感神经功能亢进,HPT轴和HPG轴功能的抑制。结论慢性束缚法肝郁证模型雌、雄大鼠均存在神经-内分泌功能的异常,但两者各有特点,推测中医肝郁证的现代病生理学内涵因性别而有所差异。     

灵芪蠲肝液抗四氯化碳实验性大鼠肝纤维化的研究

目的研究灵芪蠲肝液对大鼠肝纤维化的防治作用。方法选用雄性Wistar大鼠，随机分为，正常对照、模型组、灵芪蠲肝液3个剂量组，肝苏颗粒阳性对照组。肝纤维化模型用40％的四氯化碳油液3mL／kg皮下注射，每周2次，连续10周。实验开始时，正常对照组除外，其余各组大鼠均皮下注射40％的四氯化碳油液3mL／kg，4周后各用药组开始给药，10周后麻醉大鼠，心脏取血，测定肝功能、血清一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和肝纤维化指标透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CⅣ）；取肝制备10％肝匀浆，测定其中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和羟脯氨酸（HYP）水平，并取肝组织做病理检查。结果大鼠肝纤维化损伤时，ALT、AST活性及血清NO、HA、LN、PCⅢ、CⅣ和MDA含量及肝匀浆MDA、HYP明显增加。而ALB、SOD明显降低，与正常对照组比较差异有显著性（P〈0．05），与模型组比较灵芪蠲肝液可降低ALT、AST活性及血清NO、HA、LN、PCⅢ、CIV和MDA含量及肝匀浆MDA、HYP水平。而提高ALB、SOD含量，差异均有显著性（P〈0．05）。病理检查发现灵芪蠲肝液能减轻肝脂肪变性，减少纤维组织的增生。结论灵芪蠲肝液对四氯化碳实验性大鼠肝纤维化具有防治作用。     

E-钙黏附素在大鼠肝纤维化模型中的表达及意义

目的探讨大鼠实验性肝纤维化形成过程中E-钙黏附素的表达及其变化,为临床肝纤维化及肝硬化的诊断和治疗提供借鉴。方法取SD大鼠60只,其中40只按皮下注射四氯化碳每周2次,每次2 ml/kg的方法造成肝纤维化模型,另外20只皮下注射相同容量生理盐水作为正常对照组。根据造模的不同时间及肝组织的病理改变,20只造模7周后的SD大鼠设为肝纤维化组,20只造模12周后的SD大鼠设为肝硬化组。最后收集所有标本按肝纤维化0~Ⅳ期分为5组。采用免疫组织化学方法以及RT-PCR法检测肝组织中E-钙黏附素的表达及分布。结果肝纤维化0期标本仅见少量E-钙黏附素表达。与0期相比,Ⅲ期及Ⅳ期E-钙黏附素表达均增强,尤以Ⅳ期最为显著（P＆lt;0.05或P＆lt;0.01）。结论肝纤维化肝组织中E-钙黏附素的表达增强。表达量与肝纤维化程度一致。E-钙黏附素与肝纤维化的发生发展密切相关。     

大鼠酒精性肝纤维化复合模型的建立

目的:采用复合因素制备大鼠酒精性肝纤维化模型。方法:Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、酒精性肝纤维化模型组和微量CCl4处理组。酒精性肝纤维化模型组大鼠予以喂食酒精、玉米油、吡唑,结合微量CCl4腹腔注射造模。微量CCl4处理组仅予以微量CCl4腹腔注射。观察各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyltransferase,γ-GT)水平和肝组织病理学的变化。结果:造模第12周,成功建立大鼠酒精性肝纤维化模型。在造模期间,肝脏组织病理学依次表现为酒精性脂肪肝、肝炎、肝纤维化。酒精性肝纤维化模型组大鼠肝/体比值,血清ALT、AST及γ-GT水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义。结论:酒精灌胃结合微量CCl4腹腔注射制备酒精性肝纤维化动物模型,具有模型稳定、成功率高的特点,并可提供不同阶段酒精性肝病的实验模型。     

肝纤维化大鼠部分肝切除后不同时间点肝细胞再生与胶原表达

目的研究肝纤维化大鼠部分肝切除(PH)后不同时间点肝细胞再生与胶原纤维表达。方法雄性SD大鼠84只分为对照组和肝纤维化组,每组42只,分别在PH后12 h、1 d、3 d、5 d、7 d和14 d取材,苏木精伊红(HE)染色、Masson染色,观测肝再生指数、肝细胞核分裂相和肝组织胶原表达。结果(1)肝再生指数:对照组术后1~5 d迅速升高达峰值,并维持至14 d;肝纤维化组术后1~3 d迅速升高,5~7 d缓慢递增至峰值,术后14 d又略有下降;(2)肝细胞核分裂相:对照组肝细胞核分裂相先增多后减少,术后缓慢增加,术后1 d迅速升高,于术后3 d最高,此后逐步下降。肝纤维化组肝细胞核分裂相较少,肝部分切除后稍有增多,术后3 d最多,而后略有减少并维持到术后14 d;(3)肝组织胶原表达:对照组术后胶原表达缓慢增加,14 d到达峰值;肝纤维化组胶原纤维术后12 h~5 d维持高表达,在术后1 d达峰值,术后5 d迅速下降,14 d降至最低。肝纤维化组各时间点胶原表达均高于对照组(P<0.05)。结论肝纤维化大鼠肝部分切除后,术后1~7 d肝再生达到高峰,肝细胞再生能力较正常大鼠差,胶原表达术后各时间点均高于正常大鼠。