TRPM8基因表达在前列腺癌中的意义

目的 检测TRPM8基因在前列腺癌及前列腺癌旁组织中的表达,探讨TRPM8基因与前列腺癌及前列腺癌旁组织的临床意义.方法 运用实时荧光定量PCR方法检测35例前列腺癌病理组织以及42例前列腺癌旁组织的TRPM8的基因表达水平.结果 TRPM8在前列腺癌组织中表达值为(7.732±0.512),在45例前列腺癌旁组织中表达值为(6.623±0.503),前列腺癌中TgPM表达值高于前列腺癌旁组织,差异有显著性(P<0.05).结论 前列腺癌组织中TRPM基因高表达值有助于前列腺癌的诊断.     

同源盒基因CDX2mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义

[摘要] 目的 探讨同源盒基因CDX2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测CDX2 mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析。 结果 胃癌组中CDX2 mRNA的阳性表达率为37.9%（22/58）,癌旁组为63.8%（37/58）,正常对照组不表达,组间比较差异有显著性（P<0.05）;CDX2 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率差异有显著性（P<0.05）。结论 CDX2 mRNA在癌旁和胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间有密切的联系,提示CDX2 mRNA的高表达可能与胃癌的发生有关。 [关键词] CDX2 实时荧光定量PCR 胃癌     

转录因子E2F-1 mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义

目的:探讨转录因子E2F-1 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测E2F-1 mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系.临床病理特征进行分析.结果:胃癌组中E2F-1 mRNA的阳性表达率为72.4%(42/58),癌旁组为50.0%(29/58),正常对照组为27.9%(12/43),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);E2F-1 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无统计学意义(P>0.05).结论:E2F-1 mRNA在胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间没有必然联系,提示E2F-1 tuRNA的高表达可能与胃癌的发生有关.     

Klotho基因在高浓度Mg2+致骨密度降低大鼠中的表达

组大鼠的骨密度显著降低,血钙浓度明显升高;高镁食物导致大鼠肾脏组织中Klotho基因表达下调.结论 高镁食物导致大鼠股骨密度下降,且Klotho基因的下调及其对相关信号通路的影响可能是其分子机制之一.     

大肠癌Ets-1基因mRNA定量表达研究

目的：探讨原癌基因Ets-1的表达与大肠癌生物学行为的关系。方法：应用实时荧光定量PCR技术分别检测30例大肠癌组织及切端组织中Ets-1 mRNA转录水平。结果：全部大肠癌组织中可见Ets-1的阳性表达。大肠癌组织Ets-1 mRNA转录水平明显高于切端组织（P〈0．05）。Ets-1的表达与大肠癌的淋巴结转移、浸润深度和Dukes分期明显相关，差异具有显著性（P〈0．05）。而与大肠癌的病理组织学类型和分化程度无关，差异无显著性（P〉0．05）。结论：Ets-1在大肠癌的侵袭与转移中发挥着重要作用。检测Ets-1的表达可作为判断大肠癌浸润、转移的良好参考指标。并可为将来大肠癌的诊断、分期和治疗开辟一个新的方向。     

端粒酶逆转录酶mRNA在胃癌中的表达及其意义

目的研究人类端粒酶逆转录酶(hTERT)在胃癌组织中的表达及其在胃癌发生发展中的作用.方法应用实时荧光定量PCR技术检测22例胃癌组织及癌旁正常黏膜组织中hTERT mRNA的表达水平,分析其与肿瘤恶性程度的关系.结果胃癌组织hTERT mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(P＜0.01),但不同胃癌TNM分期、组织分化程度之间的hTERT mRNA表达水平差别均无显著性意义(均P＞0.05).结论在胃癌组织中hTERT mRNA表达明显高于正常组织,可作为胃癌诊断的特异性指标之一.     

HER-2 mRNA值在前列腺癌中的表达和意义

目的 以实时荧光定量PCR技术研究BPH与PCa组织标本以及前列腺癌细胞株LNCaP、PC-3中HER-2 mRNA值的表达,探讨HER-2在前列腺癌诊断的特异性意义.方法 通过实时荧光定量PCK对23例PCa、37例BPH、31例前列腺癌LNCaP细胞株、22例前列腺癌PC-3细胞株和3例正常前列腺组织HER-2 mRNA的表达,比较其mRNA值定量的差异.结果 Pca、LNCaP和PC-3样品HER-2 mRNA表达值与BPH及NT组织差异有显著性(P<0.05).结论 实时荧光PT-PCR定量检测HER-2 mRNA为前列腺癌的诊断、治疗、预后监测等提供了更为可靠的辅助指标.     

生长激素基因在西藏小型猪不同生长阶段和不同组织器官中的表达

目的对西藏小型猪生长激素基因在不同脏器和不同年龄阶段的表达水平进行测定。方法采用Real-time PCR的方法,以GAPDH为内参,定量分析0岁(1日龄)、0.1岁(36日龄)、0.25岁(90日龄)、0.5岁(180日龄)、1岁(360日龄)、2岁(720日龄)、3岁(1080日龄)的西藏小型猪的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤组织中生长激素基因mRNA表达水平,并且进行比较分析。结果生长激素基因在各个年龄阶段的西藏小型猪的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤中均有表达。在不同脏器的表达中,生长激素基因在0岁、0.5岁时皮肤中的表达量最高,肌肉组织中的表达量最低。在0.25岁、1岁时肺组织中表达量最高,在0.1岁、3岁时肝脏表达量最高;在不同年龄阶段的表达中,生长激素基因在0.1岁时表达达到峰值。结论西藏小型猪的生长激素基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

非小细胞肺癌患者Hyal1基因的mRNA表达及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者肺癌组织和癌旁组织中Hyal1基因的mRNA表达及其临床意义。方法取40例原发性非小细胞肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织样本,采用实时定量PCR方法分析Hyal1mRNA在新鲜组织样本中的表达水平。结果非小细胞肺癌患者的癌组织Hyal1基因的mRNA表达与性别、年龄、组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期无明显相关（P〉0.05）。40例样本中18例（45%）癌组织的Hyal1基因的mRNA的表达量升高,22例（55%）癌组织的表达量降低。结论Hyal1基因在肺癌组织中的表达的异常下调可能与非小细胞肺癌的发生机制有关。     

干燥综合征抗原B基因在大鼠早期心肌缺血组织中的表达及其意义

目的 探讨干燥综合征抗原B基因(SSB)在早期心肌缺血组织中的表达及其意义.方法 健康SD大鼠随机分为手术组、假手术组和正常对照组,并将手术组心肌标本按缺血区和非缺血区又分为手术缺血组和手术非缺血组,手术组和假手术组老鼠根据设定的时间段又分为0 min、15 min、30 min、60 min和120 min 5个亚组,通过实时荧光定量PCR测定每个样本的目的 基因的表达水平(mRNA),同时以大鼠β-actin 基因片段作为内参对照以消除样本误差.结果 SSB基因表达在急性心肌缺血早期呈下调趋势,缺血120 min组SSB mRNA表达降低,与0 min组及正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),其它组间SSB mRNA表达差异无统计学意义(P0.05).结论 SSB基因可能参与早期缺血心肌的病理生理的调节过程.     

野生型人LPL及联合突变体原核表达载体构建及抗体制备

目的构建野生型人脂蛋白脂酶(LPL)和联合突变体的pET28a( )原核表达载体,蛋白纯化后制备突变型多克隆抗体。方法采用RT-PCR技术从人肾周脂肪组织中获得野生型LPLcDNA,酶切和测序鉴定后插入原核表达载体pET28a( ),通过两次定点诱变得到pET28a( )-Asn291Ser和Lys312inC联合突变LPL,酶切和测序鉴定后分别转染大肠杆菌BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE电泳分析;镍柱亲和层析纯化,Western blotting鉴定;将纯化后的突变型LPL蛋白免疫新西兰大白兔,Western blotting检测血清突变型多克隆抗体滴度。结果经酶切和测序鉴定,所构建的野生型LPL及联合突变LPL的基因片段正确;两种重组质粒转染大肠杆菌BL21后,均呈高效表达;SDS-PAGE电泳分析及Western blotting鉴定表明,诱导纯化后的蛋白为目的蛋白;兔抗突变型LPL的多克隆抗体滴度达1∶100000。结论成功构建pET28a( )-野生型LPL及pET28a( )-Asn291Ser和Lys312inC联合突变LPL,同时利用获得的高纯度蛋白制备了高效价突变型LPL多克隆抗体,为进一步进行野生型LPL和突变型LPL蛋白的体内试验奠定了基础。     

促酰化蛋白诱导前脂肪细胞分化过程中DGAT、LPL、adipsin mRNA表达

目的观察促酰化蛋白（acylation stimulating protein，ASP）诱导3T3-L1前脂肪细胞的分化过程中。脂肪特异性的功能酶脂蛋白脂酶（LPI。）、二酰基甘油转酰酶（DGAT）以及脂肪细胞特异性功能蛋白adipsin表达的时序性和强度。方法以3T3-L1前脂肪细胞为实验对象，用ASP代替经典激素鸡尾酒诱导刺激中的胰岛素。诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，分别在诱导分化1、2、4、6、8d收获细胞，采用RT—PCR法检测分化过程中LPL、DGAT和adipsin的mRNA表达情况。结果在ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中。LPL、DGAT、adipsinmRNA表达逐渐升高。其中LPL mRNA表达最早，在分化1d时就有低水平的表达。分化2d时出现DGAT mRNA的表达，并随着脂肪细胞的进一步分化成熟，LPL和DGAT mRNA表达水平逐步升高，持续到分化终末期；adipsin mRNA表达出现最晚，在分化4d时才有表达，随后其表达水平急剧升高，持续到分化终末期。结论ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中。按照一定的时序性依次诱导脂肪特异性的功能酶LPL、DGAT和功能蛋白adipsin的mRNA表达，是脂肪细胞生物学功能成熟的重要物质基础，同时也是ASP诱导前脂肪细胞分化的分子机制之一。     

甲状腺良恶性病变组织中钠碘同向转运蛋白mRNA的表达变化

目的 探讨良恶性病变甲状腺组织中钠碘同向转运蛋白(NIS) mRNA的表达变化.方法 取甲状腺切除术中的新鲜组织标本,根据病理学检查结果分为结节性甲状腺肿组、甲状腺腺瘤组、甲状腺癌组和瘤周甲状腺组织对照组,采用Real-Time PCR技术测定各组甲状腺组织中NIS mRNA表达.结果 与对照组相比,结节性甲状腺肿组、甲状腺腺瘤组、甲状腺癌组甲状腺组织中NIS mRNA的相对表达量显著减少(P＜0.01).在不同病变组,甲状腺癌组NIS mRNA的相对表达量下降更为明显(P＜0.01);结节性甲状腺肿组与甲状腺腺瘤组NIS mRNA的相对表达量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 甲状腺良恶性病变均存在NIS mRNA表达的下调,且以恶性病变更为明显.提示甲状腺病变时甲状腺“碘泵”功能存在不同程度的损害.     

脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达及其基因突变SSCP分析

目的：探讨PTEN基因表达水平及其基因突变与脑胶质瘤的发生及恶性进展的关联性。方法：选取脑胶质瘤组织15例,以4例非胶质瘤脑组织为对照,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达水平,采用单链构象多态性分析法（SSCP analysis）快速筛查脑胶质瘤组织PTEN基因突变状况。结果：RT-PCR结果,脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达水平(0.063±0.006)较对照组(0.126±0.015)明显降低（P<0.05）。经单链构象多态性分析, 脑胶质瘤组织PTEN基因外显子8、9未检测到突变,但其中1例PTEN基因外显子5的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示电泳带飘移,考虑可能为杂合子突变。结论：PTEN基因低表达及基因突变可能对胶质瘤发生、发展有促进作用。     

EMMPRIN在小鼠磨牙牙胚形态发生过程中的表达

目的 研究细胞外基质金属蛋白酶诱导因子EMMPRIN(basigin/CD147)在小鼠磨牙牙胚发育各阶段的表达,探讨其可能的生物学作用。方法 选择不同胎龄(E11、E13、E14、E15、E16、E18)和出生后1 d (P1)小鼠作为实验对象。Real-Time PCR定量检测小鼠牙胚发育各阶段下颌（E11和E13）及牙胚（E14、E15、E16、E18和P1）组织中EMMPRIN mRNA表达。原位杂交和免疫荧光染色观察EMMPRIN mRNA和蛋白在牙胚组织及相应发育阶段的颌面部发育器官中的定位表达。结果 Real-Time PCR结果显示,E13胎鼠下颌标本中EMMPRIN mRNA的表达约为E11胎鼠1.6倍(P<0.01); P1小鼠牙胚组织中EMMPRIN mRNA表达约为E14胎鼠的2倍（P<0.01）;EMMPRIN mRNA表达随牙胚组织发育呈现递增趋势。原位杂交和免疫荧光染色观察显示,在E14胎鼠牙胚组织中EMMPRIN mRNA和蛋白表达定位一致,但E15、E16、E18胎鼠 EMMPRIN mRNA与蛋白表达定位有所不同;相应发育时段胎鼠下颌骨的Meckel软骨（E14）、视网膜（E15）、大脑血脑屏障（E15）及颚骨骨化中心（E16）中EMMPRIN 蛋白表达均呈现强荧光信号。结论 EMMPRIN的表达贯穿于早期牙胚发生和发育的多个阶段,但牙胚发育帽状期和钟状期阶段EMMPRIN mRNA与蛋白表达并不完全一致。EMMPRIN有可能以外分泌或旁分泌方式,通过调控上皮间质的相互作用参与牙胚发育及形态发生。     

精神分裂症模型大鼠神经调节蛋白1基因的表达分析

目的 探讨地卓西平马来酸盐( dizocilpine maleate,MK801)精神分裂症大鼠外周血淋巴细胞与中枢不同脑区神经调节蛋白1基因表达变化及中枢与外周表达的一致性.方法 30只成年雄性SD大鼠随机分为3组,实验组(按100 μl/20g体质量分别于右后侧腹腔注射0.6mg/kg剂量的MK-801,又称模型组)、对照组1(不做任何处理)和对照组2(注射等体积生理盐水),每组各10只,应用半定量RT-PCR方法测定3组外周血及中枢前额叶区Nrg1mRNA表达水平,应用免疫组织化学方法测定中枢前额叶区、齿状回区及海马区Nrg1蛋白表达水平.结果 3组大鼠中枢及外周Nrg1mRNA表达均差异有显著性(中枢F=9.141,P=0.001;外周F=8.389,P=0.001),模型组(中枢:2.08 ±0.64;外周:1.43 ±0.46)高于两对照组(对照组1:中枢1.17 ±0.42,外周0.78±0.39;对照组2:中枢1.31±0.44,外周0.79±0.37),两对照组间差异无显著性;30只大鼠自身中枢与外周Nrg1 mRNA表达量存在正相关关系(r=0.597,P=0.000);3组间前额叶区、齿状回区及海马区Nrg1蛋白表达差异有统计学意义(F值分别是:7.275,21.50,4.619;P值分别是:0.003,0.000,0.019),模型组(分别为7.71±2.55、11.67±1.83和10.18±2.08)高于两对照组(对照组1:4.89±1.06、7.53±1.14和7.10±2.52;对照组2:5.31±1.39、8.10±1.60和7.81±2.50),两对照组间差异无显著性.结论 MK801可以影响Nrg1基因表达变化,MK801精神分裂症动物模型Nrg1基因mRNA和蛋白表达水平升高,中枢与外周表达存在一致性改变.     

大鼠脑组织缺血后Ngb mRNA表达与缺血时间推断的研究

目的 探讨大鼠脑组织缺血后不同时间脑红蛋白（Ngb）mRNA表达及法医学意义。方法 建立Wistar大鼠脑组织缺血模型，应用一步法逆转录-聚合酶链式反应（one step RT-PCR）技术与计算机图像分析技术检测脑组织缺血后不同时间Ngb mRNA表达的差别。结果 脑缺血后Ngb mRNA表达迅速升高，缺血1min达高峰，缺血5min表达迅速降低，但仍高于假手术组水平，10min后随缺血时间延长表达再度逐渐增强。结论大鼠脑组织缺血后Ngb mRNA的表达呈现时相性的变化，可在法医实践中用于早期脑缺血时间的推断。     

甲状腺激素转运体MCT8在2VO大鼠脑组织中的表达

目的探讨2VO大鼠脑组织中甲状腺激素转运体MCT8在不同缺血时间点基因水平的变化规律。方法 25只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、2VO 3 d组、2VO 2周组和2VO 5周组。采用免疫荧光法观察MCT8在正常大鼠侧脑室中的表达;采用双侧颈总动脉永久性结扎术制备脑缺血模型,术后各组大鼠于实验终点采用荧光定量PCR法测定脑组织中甲状腺激素转运体MCT8 mRNA的表达水平。结果免疫荧光法观察到MCT8在正常大鼠侧脑室的血管内皮细胞膜上表达丰富;中枢甲状腺激素转运体MCT8 mRNA水平在2VO 3 d组及2VO 2周组与正常组相比较差异无统计学意义(P=0.909,P=0.694);MCT8 mRNA水平在2VO 5周组较正常组及2VO 3 d组明显增高(P=0.029,P=0.023),与2VO 2周组相比较差异无统计学意义(P=0.065)。结论中枢甲状腺激素转运体MCT8基因水平在脑缺血后呈逐渐代偿性增高趋势。     

2型糖尿病患者脂蛋白脂酶常见变异基因检测

目的：探讨脂蛋白脂酶(LPL)基因三种常见基因变异(Asp9Asn、Asn291Ser和Ser447Ter)与2型糖尿病的相关性。方法：采用PCR—RFLP方法，分析102例2型糖尿病患者(病例组)及113名健康体检者(对照组)LPL基因Asp9Asn、Asn291Ser和Ser447Ter位点多态性。结果：病例组和对照组中未发现Asp9Asn及Asn291Ser突变，病例组Ter447等位基因和Ser447Ter基因型频率均低于对照组(3．4％vs7．6％；6．9％vs15．0％)，其差异非常接近显著性水平(P=0．065和P=0．057)。结论：我国汉族人群脂蛋白脂酶基因Asp9Asn、Asn291Ser突变位点与2型糖尿病无明显关联，而S447X突变能引起有益的血脂改变，很可能与2型糖尿病发病率降低相关。