RhD阴性患者输注DEL型血液的安全性研究

目的探讨RhD阴性患者输注DEL型血液的安全性。方法采用间接抗人球蛋白法及热吸收放散方法对RhD阴性献血者血液进行DEL型检测,并采用DNA测序方法分析DEL型献血者的RHD基因序列,回顾性分析接受DEL型血液RhD阴性患者体内抗-D产生情况。结果经吸收放散方法确认的13例DEL阳性的献血者均携带RHD1227A等位基因,12例接受DEL型血液的RhD阴性患者体内抗-D水平均无变化,1例患者体内抗-D水平由8升高到32。结论DEL型血液引起抗-D同种免疫反应的可能性较低,但DEL型血液仍具有一定的免疫原性,对于体内已存在抗-D抗体的患者应避免输注DEL型血液。     

DEL型个体抗体筛选的调查分析

目的探讨DEL型个体是否对D抗原产生体液免疫应答。方法对经间接抗球蛋白试验确认为Rh(D)阴性的1030名献血者和89名孕妇做抗体筛选,对抗体筛选为阳性的献血者用10个O型谱细胞和筛选特异细胞做抗体鉴定。对产生抗-D的Rh(D)阴性献血者和孕妇用DEL特异性引物鉴定检测DEL型;对117名Rh(D)阴性献血者以吸收放散试验检测DEL型,对DEL阳性的献血者做抗体筛选。结果10名献血者和5名孕妇产生抗-D,他们的DEL基因分型均为阴性;117名Rh(D)阴性献血者DEL吸收放散试验检测阳性24名,并且抗-D阴性。结论在产生抗-D的个体中未检出DEL型,在DEL型的个体亦未检出抗-D。     

RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL型红细胞短期内引起高效价抗-D的同种免疫研究

目的 通过对1例RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞后诱发同种抗-D免疫的研究分析,探讨RhD阴性患者输注DEL型策略。方法 采用血清学方法进行ABO及Rh系统血型抗原检测、不规则抗体筛查及鉴定,高分辨熔解曲线和基因测序分析检测DEL型的RHD基因分型。结果 受血者为O型,RhD阴性。供血者为RHD 1227G>A突变的“亚洲型”DEL,R h表型为Ccee。受血者输血后抗体筛查阳性,并鉴定为抗D和抗C,抗D效价512,抗C效价128。结论 RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞会引起抗-D同种免疫。因此对于RhD阴性献血者应加强DEL型的筛查,必要时可以增加RHD基因检测以保障输血安全。     

DAT阳性的DEL血型鉴定及其家系分析

目的:对1例DEL血型合并直接抗人球蛋白试验阳性患者进行血型鉴定并分析其遗传规律。方法:采用常规血清学试剂对先证者及其家系成员RhD血型进行血清学分析,使用PCR-SSP方法对RHD基因10个外显子及侧翼序列进行扩增、测序并分析其杂合性。对先证者家系进行调查并分析DEL血型遗传规律。结果:先证者DAT强阳性,RHD基因9外显子存在1227GA等位基因(RHD~*DEL1),其母亲为RHD~*DEL1携带者。RHD合子型鉴定为RHD~+/RHD~-,提示该个体单倍型为CD~(1227A)e/Cde。结论:先证者为DEL型(RHD~*DEL1)。     

山东汉族RhD阴性个体基因多态性研究

目的研究山东汉族人群RhD阴性个体RhD基因多态性。方法采用标准血清学方法和抗球蛋白实验筛选Rh阴性个体;对Rh阴性个体再用吸收放散实验确定DEL型。运用多重聚合酶链反应（PCR）方法分析RhD阴性个体基因存在情况。结果67例Rh阴性个体中DEL型16例,占Rh阴性个体的23．88％,其6个RhD基因特异性的第3、4、5、6、7、9外显子全部存在;剩下51例Rh阴性个体中1例缺失第5外显子,其余50例6个外显子全部缺失。结论山东汉族人群RhD阴性个体中存在一定比例的DEL型,且所有DEL样本均具有完整的RhD基因,在排除DEL型后的RhD阴性个体可能携带RhD基因,但其比例较低。     

山东汉族RhD阴性个体基因多态性研究

目的研究山东汉族人群RhD阴性个体RhD基因多态性。方法采用标准血清学方法和抗球蛋白实验筛选Rh阴性个体;对Rh阴性个体再用吸收放散实验确定DEL型。运用多重聚合酶链反应(PCR)方法分析RhD阴性个体基因存在情况。结果67例Rh阴性个体中DEL型16例,占Rh阴性个体的23.88%,其6个RhD基因特异性的第3、4、5、6、7、9外显子全部存在;剩下51例Rh阴性个体中1例缺失第5外显子,其余50例6个外显子全部缺失。结论山东汉族人群RhD阴性个体中存在一定比例的DEL型,且所有DEL样本均具有完整的RhD基因,在排除DEL型后的RhD阴性个体可能携带RhD基因,但其比例较低。     

汉族DEL型孕妇可免去抗-D产前检查

目的鉴于占我国汉族Rh(D)阴性人群约25%的DEL型红细胞具有基本完整的D抗原表位,临床观察汉族DEL型孕妇妊娠Rh(D)阳性胎儿是否产生同种免疫反应。方法跟踪观察和测定207名有妊娠史的Rh(D)阴性孕妇产前和产后血清抗-D,根据RhCcEe表型和PCR检测RHD1227A等位基因鉴别DEL型和真实Rh(D)阴性表型。结果 207名Rh(D)阴性孕妇中,DEL型个体46名(22.2%)均未检测到血清抗-D,即使5名个体有2次或以上生育史,亦未见同种免疫反应。161名真实Rh(D)阴性个体中检出40例抗-D阳性(24.8%);80名有生育史的真实Rh(D)阴性孕妇中30例抗-D阳性(37.5%);20名有2次或以上生育史的真实Rh(D)阴性孕妇中12例存在抗-D(60.0%)。结论 DEL型孕妇妊娠Rh(D)阳性胎儿发生抗-D同种免疫反应的可能很小,我国Rh(D)汉族阴性孕妇中的DEL个体可免去定期的产前抗-D检测,以及免去预防性Rh免疫球蛋白的使用。     

RhD阴性初筛样本的血清学和基因分型结果

目的了解初筛RhD阴性血液样本的血清学和基因分型检测结果。方法对107例初筛为RhD阴性血液样本,用间接抗人球蛋白试验(IAT)检测弱D型,用吸收放散试验检测DEL型。对3例弱D型、28例吸收放散试验阳性和35例吸收放散试验阴性的标本进行基因分型检测。结果 107例初筛为RhD阴性的样本用血清学方法检出3例弱D型(2.8%);吸收放散试验检测出阳性30例(28.0%),阴性74例(69.2%)。基因分型结果表明,3例弱D型中2例为RhD阳性,1例为弱D15型;对74例吸收放散试验阴性标本中的35例进行了基因分型,其中RhD阴性28例(80.0%),RhD-CE(2-9)-D型5例(14.3%),DEL 1227A型2例(5.7%);RhD DEL型基因分型检测结果表明,28例吸收放散阳性标本中DEL 1227A型19例(67.9%),未能分型5例(17.9%),未出现条带4例(14.3%)。用RhD阴性鉴定基因分型检测试剂盒对4例未现条带者进行基因分型,结果为弱D15型1例,RhD阴性2例,RhD阳性1例;初筛RhD阴性样本中,血清学检出率为69.2%,基因分型检出率为57.3%,差异无统计学意义(χ2=1.78,P>0.05)。结论初筛为RhD阴性样本中RhD基因存在多态性,DEL 1227A型是DEL型的主要等位基因。     

RhD阴性受血者输注DEL型血液诱发抗-D1例

目的 通过血型血清学试验和分子生物学技术鉴定出1例RhD阴性受血者输注DEL型血液后诱发抗-D产生.方法 采用血型血清学方法进行血型抗原及抗体检测,PCR-SSP法进行RhD基因分型检测.结果 受血者ABO血型为A型,Rh分型为ccdee,直抗阴性.受血者随机输注的3位供者均为DEL RhD1227A纯合型,且受血者输...     

流式细胞术检测弱表达D抗原的探讨

曾有报道采用流式细胞术定量分析红细胞膜D抗原密度(D antigen density),为此提出采用敏感的流式细胞术常规检测D抗原弱阳性表型,本研究旨在探讨其可行性。2010年至2011年间采用盐水法、间接抗人球蛋白试验(IAT)和吸收放散试验检测到6例D抗原弱阳性表型和7例DEL型样本,通过RHD基因定型、合子型分析和RHD基因序列测定,鉴定3例为弱D15型,3例为部分DVⅠ-Ⅲ型,7例为DEL型且均携带RHD1227A等位基因。取正常RhD阴性2例和正常Rh(D)阳性样本2例作对照,采用流式细胞术分别检测上述弱D15型、部分DVⅠ-Ⅲ型和DEL型,观察其平均荧光强度。结果表明,流式细胞术检测弱D15和部分D型DVⅠ样本的平均荧光强度与Rh(D)阴性对照有显著性差异(P<0.05),可判读为D抗原阳性;7例DEL红细胞样本的平均荧光强度与Rh(D)阴性对照均无显著性差异(P>0.05),检测结果均可判读为阴性,其中包括1例DEL,其红细胞样本的吸收放散检测结果为强阳性,即使IAT检测的结果也显示为"±",合子型分析显示为RHD+/RHD+纯合子,流式检测亦为阴性。结论:流式细胞术检测D抗原的敏感度与IAT相近,低于吸收放散试验;用于检测弱D或部分D型不如IAT简便实用,用于检测DEL型其敏感度不够。     

长春地区RhD（-）基因型分析

目的研究长春地区献血者RhD（-）基因型。方法 60名经间接抗人球方法确认的RhD阴性血样用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）检测弱D15、DVI Ⅲ型、RHD-CE（2-9）-D和1227DEL的等位基因。结果经间接抗人球蛋白试验检出RhD（-）血液样本60例,通过PCR-SSP对这60例RhD（-）血液标本进行基因分型,检出DVIⅢ型1例、弱D15型5例1、227DEL 7例、RHD-CE（2-9）-D 9例和RHD基因缺失38例。其中1227DEL约占11.67%,长春与上海、新疆、日本等地区的1227DEL血液所占阴性血液的比率没有显著差异（P〉0.05）;RHD-CE（2-9）-D约占15%,与国内RHD-CE（2-9）-D所占阴性血液的比率没有显著差异（P〉0.05）;RHD基因完全缺失约占63.33%与云南等地区其所占阴性血液比率亦没有显著差异（P〉0.05）。结论 PCR-SSP方法是一种检测弱D、部分D和DEL表型的有效方法。间接抗人球蛋白实验和PCR-SSP方法结合检测弱D15、DVIⅢ型、RHD-CE（2-9）-D和1227DEL血型,有助于避免RhD血型的假阴性。     

瓦房店地区Rh阴性血DEL血清学检测

目的将Rh阴性血液与DEL型分开,指导临床更加科学合理地应用Rh阴性血液。方法应用三氯甲烷／三氯乙烯吸收放散实验对Rh阴性血液进行DEL鉴定。首先对市中心血站从2003年3月～2007年11月所采集的血液标本进行筛选,采用IgG＋IgM混合抗-D试剂进行盐水法初筛,共收集Rh阴性标本88个,然后进行弱D筛选,采用抗人球法和盐水法对88个阴性标本进行弱D测定,排除弱D后,再将其余标本进行表型测定,采用IgM抗-E、抗-e、抗-c、抗-c试剂以盐水法检测Rh分型,确定其表型,最后将确定出的非D变异型的Rh阴性血液标本用三氯甲烷／三氯乙烯作吸收放散实验,确定是否为DEL型。结果经过对血液标本的初筛,共检测出有效Rh阴性标本88个,在进行弱D的测定中,共检测出2个D变异型,其余86个标本再做DEL检测,结果DEL阳性标本37个,真正的Rh阴性标本49个,DEL阳性标本占所检测Rh阴性标本的42．05％。37个DEL阳性标本的小类测定中,CCdEe表型1个,占总数的2．70％CCdee表型1个,占2．70％;CcdEe表型3个,占8．11％;Ccdee表型7个,占18．92％ccdEe表型2个,占5．41％ccdee表型23个,占62．16％。结论近1年采集的阴性标本中,DEL阳性标本所占比例高,应引起重视,DEL检测可以更好的指导临床输血工作,保证输血安全。     

DEL cDNA序列分析及蛋白质三维结构的模建

目的 分析DEL血型的cDNA序列,模拟并分析DEL血型蛋白质三维结构.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和cDNA序列分析技术,得到DEL血型的cDNA序列并测序分析.通过同源比较模建(Homology comparative modeling)的思想,构建和分析正常阳性RHD和DEL9两种蛋白质的三维结构.结果 DEL血型个体有复杂的mRNA形式,共检测到6种形式的RhD转录子.DEL血型不存在正常的RhD mRNA.对正常RHD和与正常RHD序列相似度最高的DEL9蛋白质结构进行比较分析.结构显示DEL9蛋白属于α螺旋结构蛋白,其在膜外部分与正常RhD蛋白基本一致.结论 DEL血型可能具有正常RhD的抗原表位.     

RHD第9内含子全长序列分析

目的了解RHD第9内含子碱基变异对其正常剪切是否存在影响。方法采用PCR方法扩增和测序分析中国汉族1名正常Rh阳性个体和2名DEL(D放散型)表型个体[携带RHD(1227A)等位基因]的RHD第9内含子,并做相互比对,同时通过NCBI Basic BLAST与参考序列(GenBank BN000065)加以比对。结果在3名中国汉族个体的第9内含子中,共观察到28处碱基变异(EMBL/GenBank/DDBJ EU372940～2),其中7处变异相同,可能为中国人第9内含子的特异性碱基变异;另有1处碱基变异仅在DEL样本中检出,在正常Rh阳性个体中未发现,可能为DEL特异性。结论未发现中国汉族人DEL第9内含子存在可能影响正常拼接的碱基变异,提示DEL mRNA缺失第9外显子相应的序列的分子机制即1227A>G碱基突变造成错误拼接所致。     

单中心双表达淋巴瘤患者的临床特征及预后因素分析：基于倾向性评分匹配

目的探讨基于倾向性评分匹配(PSM)法, 分析双表达淋巴瘤(DEL)患者的临床特点、疗效及预后影响因素。方法选择2010年1月至2022年3月空军军医大学第一附属医院经病理确诊的69例DEL患者为研究对象, 纳入DEL组(n=69);选择同期于本院就诊的300例除DEL外其他类型的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者, 纳入非DEL组(n=300)。采用PSM法, 以logistic回归分析计算倾向评分, 按照1∶1例数进行匹配。采用回顾性分析方法, 收集2组患者临床资料。对2组患者临床特征的比较采用χ2检验。采用Kaplan-Meier法绘制患者总体生存(OS)和无进展生存(PFS)曲线, 采用log-rank检验比较不同类型患者的生存率。采用Cox比例风险回归模型进行单因素及多因素分析。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求。结果①PSM结果显示, DEL组与非DEL组共计成功匹配69对患者。PSM后, DEL组(n=69)与非DEL组(n=69)患者的临床特征分别比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05)。②PSM后, DEL组和非DEL组患...     

Rh血型DEL表型的研究进展

DEL是一种特殊的RhD变异体,常规的间接抗人球蛋白试验检测结果 为阴性,但通过吸收放散试验仍能检测出红细胞表面微量的D抗原.近年来研究表明DEL具有多种等位基因,并能表达部分或完整的D抗原表位.虽然红细胞表面D抗原表位密度很低,远小于正常RhD阳性红细胞,但是依然存在产生同种异体免疫的风险,因此DEL的检测对临床Rh阴性输血具有重要的指导意义.本文就DEL表型的研究进展予以综述.     

Rh血型DEL表型的研究进展

DEL是一种特殊的RhD变异体,常规的间接抗人球蛋白试验检测结果 为阴性,但通过吸收放散试验仍能检测出红细胞表面微量的D抗原.近年来研究表明DEL具有多种等位基因,并能表达部分或完整的D抗原表位.虽然红细胞表面D抗原表位密度很低,远小于正常RhD阳性红细胞,但是依然存在产生同种异体免疫的风险,因此DEL的检测对临床Rh阴性输血具有重要的指导意义.本文就DEL表型的研究进展予以综述.     

浙江汉族DEL表型基因分型方法的建立

为了快速鉴定DEL表型，建立浙江汉族DEL表型的基因分型方法，根据RHD1227A等位基因序列设计等位基因特异性．聚合酶链反应（allele specific-polymerase chain reaction，AS-PCR），用于DEL表型的基因分型。用已知RHD1227A多态性的样本和已知DEL表型的样本评价基因分型方法的灵敏度和特异性。结果表明：在50例RHD1227A阳性和50例RHD1227A阴性的Rh阴性样本中基因分型方法的灵敏度和特异性都是100％；在33例DEL阳性样本和89例DEL阴性的样本中，基因分型方法的灵敏度为100％，有2例样本血清学结果为阴性而基因分型结果为阳性，重新用血清学方法和序列分析方法复核这2例样本，发现2例都是血清学漏检，因而基因分型方法的特异性是100％。结论：设计的基因分型方法可以有效地鉴定浙江汉族Rh阴性人群中的DEE表型。     

亚洲型DEL母亲产生抗-c致新生儿溶血病的母子输血救治

目的 探讨1例亚洲型DEL母亲产生抗-c引起的新生儿溶血病的母子输血救治方案。方法 盐水试管法鉴定母子ABO血型、Rh表型;经典抗人球蛋白法进行母亲RhD阴性确认、RhD吸收放散试验;经典抗人球蛋白法、抗人球蛋白卡式法和凝聚胺法进行母亲意外抗体筛查及鉴定、抗体效价检测、交叉配血试验;新生儿溶血3项试验使用抗人球蛋白卡式法;RHD基因分型采用商品化RHD阴性鉴定基因检测试剂盒(PCR-SSP法)进行产妇RHD基因分型。结果 产妇Rh血清学表型CCee, DEL基因检测结果RHD~*1227A,产生抗-c;患儿Rh血清学表型DCcEe,直抗阳性,红细胞放散阳性,结合母亲孕产史、患儿临床表现和血液检查结果,诊断为抗-c引起的新生儿溶血病。结论 亚洲型DEL母亲产生抗-c并引起新生儿溶血病的患儿选择Rh表型DCCee红细胞输注,母亲选择Rh表型CCee冰冻解冻去甘油红细胞输注,输血有效。     

云南地区RhD阴性个体RHD基因研究

目的了解云南人群Rh阴性的RHD基因结构特点、多态性和遗传规律。方法采用常规盐水法和抗球蛋白法筛选Rh阴性样本,通过吸收放散试验确定其中的DEL,采用PCR-SSP技术分析外显子存在情况。结果92名Rh阴性个体中19例(20.65%)为DEL,其中2例(10.53%)部分缺失,17例(89.47%)存在完整的RHD基因;其余73例中65例(89.04%)完全缺失RHD基因,8例(10.96%)缺失部分RHD基因;19例DEL样本中有17例、对照组30例Rh阳性样本均检测到10个外显子。结论云南Rh阴性人群存在一定比例的DEL;云南群体RHD基因外显子具有多态性。