SALL4基因在恶性血液病中的研究

SALL4与造血系统恶性肿瘤的发生有密切关系.深入研究SALL4基因及蛋白的功能,将有助于阐明白血病的发病机制,为治疗白血病提供新靶点.     

SALL4基因在人恶性肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤是当今严重威胁人类健康的一类疾病,其发病机制复杂,由人体中各种致癌因子相互作用引起。人类婆罗双树样基因（SALL4）是一种新发现的基因,因具有C2H2锌指结构的蛋白转录因子,在胚胎干细胞功能方面起重要作用。研究发现,该基因突变常导致恶性肿瘤的发生。本文就SALL4在恶性肿瘤发生发展中的分子机制及其对恶性肿瘤的诊断与治疗的作用等方面进行综述。     

SALL4对白血病HL-60细胞放射敏感性影响研究

目的 探讨下调SALL4对白血病细胞放射敏感性影响,为提高白血病患者放射敏感性提供新思路。方法 人急性髓系白血病细胞株HL-60感染shRNA SALL4和shRNA control慢病毒记为Lv-shSALL4组和Lv-shNC组,用RT-PCR和蛋白印迹法检测细胞中SALL4水平,同时取感染后的细胞给予8Gy剂量照射处理记为Lv-shSALL4＋放射组、Lv-shNC＋放射组,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平。取Lv-shSALL4组和Lv-shNC组细胞,给予0、2、4、6、8Gy照射,细胞克隆形成实验测定放射增敏比。结果 Lv-shSALL4组细胞中SALL4水平低于Lv-shNC组(P<0.05)。细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高,与Lv-shNC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Lv-shSALL4＋放射组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高(P<0.05)。Lv-shSALL4组细胞放射增敏比为1.323。结论 下调SALL4增加白血病细胞放射敏感性,抑制白血病细胞增殖并诱导凋亡。     

HER-2 RNA干扰对乳腺癌细胞及其种植肿瘤化疗敏感性的影响

目的: 观察RNA干扰（RNAi）下调HER2受体后乳腺癌细胞及其移植肿瘤对化疗药物表柔比星（epirubicin,EPI）敏感性的变化。方法: 构建能够表达HER2 siRNA 的质粒载体HER2shRNApU6,转染HER2 阳性的乳腺癌细胞SKBR3, RTPCR 与Western blotting 检测SKBR3细胞HER2 mRNA 与蛋白的表达。受转染细胞与不同浓度的化疗药物表柔比星共培养,MTT法检测细胞增殖活性及药物IC50;构建裸鼠乳腺癌模型,观察经HER2shRNApU6治疗后,肿瘤对化疗的敏感性。结果: SKBR3 细胞转染HER2shRNApU6后,HER2 mRNA及蛋白表达出现明显下调,细胞增殖活性出现明显下降（P<0.05）,治疗组肿瘤细胞对表柔比星的化疗敏感性IC50为0.25 μg/μl,而阴性对照及空白对照分别为3.46 μg/μl和3.69 μg/μl。裸鼠移植肿瘤模型中,治疗组肿瘤重量明显低于空白对照和阴性对照\[（2.17±0.58） vs (3.13±0.38)、（3.21±0.89）g\]。结论: 〗HER2的RNA干扰显著抑制乳腺癌SKBR3细胞mRNA和蛋白表达,从而明显提高肿瘤细胞及其种植瘤对表柔比星的敏感性。     

HER-2 RNA干扰对乳腺癌细胞及其种植肿瘤化疗敏感性的影响

目的:观察RNA干扰(RNAi)下调HER-2受体后乳腺癌细胞及其移植肿瘤对化疗药物表柔比星(epirubicin,EPI)敏感性的变化.方法:构建能够表达HER-2 siRNA 的质粒载体HER-2shRNApU6,转染HER-2 阳性的乳腺癌细胞SKBR-3, RT-PCR 与Western blotting 检测SKBR-3细胞HER-2 mRNA 与蛋白的表达.受转染细胞与不同浓度的化疗药物表柔比星共培养,MTT法检测细胞增殖活性及药物IC50;构建裸鼠乳腺癌模型,观察经HER-2shRNApU6治疗后,肿瘤对化疗的敏感性. 结果:SKBR-3 细胞转染HER-2shRNApU6后,HER-2 mRNA及蛋白表达出现明显下调,细胞增殖活性出现明显下降(P<0.05),治疗组肿瘤细胞对表柔比星的化疗敏感性IC50为0.25 μg/μl,而阴性对照及空白对照分别为3.46 μg/μl和3.69 μg/μl.裸鼠移植肿瘤模型中,治疗组肿瘤重量明显低于空白对照和阴性对照[(2.17±0.58) vs (3.13±0.38)、(3.21±0.89)g].结论:HER-2的RNA干扰显著抑制乳腺癌SKBR-3细胞mRNA和蛋白表达,从而明显提高肿瘤细胞及其种植瘤对表柔比星的敏感性.     

p21在乳腺癌化疗中对表柔比星的增敏性及其作用机制的研究

背景与目的:p21是一种重要的细胞周期负性调控因子,目前对其在乳腺癌化疗过程中的作用尚不明确.本课题旨在观察将p21基因转染乳腺癌细胞后,对表柔比星敏感性的改变,以探讨新的表柔比星耐药可能的机制.方法:构建表达载体pEGFP-p21,采用脂质体转染法转入乳腺癌细胞株MCF-7中,筛选稳定表达p21的克隆;应用实时荧光定量PCR法检测转染组细胞中p21 mRNA的表达,流式细胞术和Hoechst33342荧光染色法分析细胞周期分布和凋亡变化;应用MTT法检测p21基因转染前后MCF-7细胞对表柔比星敏感性的变化,实时荧光定量PCR法(real-time fluorogent quantitative PCR,RFQ-PCR)观察survivin mRNA水平的变化.结果:pEGFP-p21载体转染MCF-7细胞后,MCF-7细胞中p21 mRNA的表达量明显增高,是空白对照组的155倍;转染后的细胞被阻滞于G0/G1期,但实验组与空白对照组相比,凋亡率改变的差异无统计学意义(P>0.05);表柔比星与p21基因转染联合作用时,p21可促进表柔比星对MCF-7细胞的杀伤作用,且细胞的抑制随作用时间的增加而增强,同时伴有survivin mRNA表达的降低,与表柔比星单独作用相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论:p21基因能增强MCF-7细胞对表柔比星的敏感性,其作用可能是通过使细胞周期发生G0/G1期阻滞及下调survivin的表达来实现的.     

siRNA沉默c-FLIP基因表达与表柔比星联合应用对MCF-7细胞凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术沉默c-FLIP基因表达联合应用表柔比星对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法 体外化学合成c-FLIP序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),转染MCF-7细胞,应用Western blot方法检测c-FLIP蛋白的抑制水平、检测Caspase-8的表达差异;应用流式细胞术检测细胞凋亡的变化及表柔比星与c-FLIP-siRNA联合应用对细胞凋亡的影响。结果 c-FLIP-siRNA能有效地抑制c-FLIP蛋白的表达(P＜0.05),促进细胞的凋亡(P＜0.05)。c-FLIP-siRNA和表柔比星联合应用较单用表柔比星能明显促进MCF-7细胞的凋亡(P＜0.05)。结论 c-FLIP-siRNA能够促进MCF-7细胞的凋亡,并且能够增强表柔比星的抗肿瘤作用。     

MEK抑制剂增加乳腺癌细胞MCF-7对表柔比星的敏感性

背景与目的: 化疗是目前乳腺癌治疗的重要手段之一,通过抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤功效.有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号传导通路作鼢用于核内转录因子,与细胞增殖和凋亡关系密切.因此MAPK信号传导通路在化疗中所起的作用日益受到人们的重视,期望抑制此通路能改善化疗药物的疗效,从而低毒高效的治疗肿瘤.本研究通过检测表柔比星与MEK抑制剂PD98059对人乳腺癌细胞细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)活性的影响(MEK、ERK分别是MAPK{~号传导通路中的环节),探讨MEK抑制剂PD98059在表柔比星抗人乳腺癌细胞中的作用.方法: 应用表柔比星与MEK抑制剂(PD98059)处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞,应用Western印迹法检测MEK2和p-ERK表达情况,应用MTT法检测细胞增殖状态.结果: 表柔比星处理细胞后,MCF-7的ERK蛋白活性上升,加用MEK抑制剂PD98059,细胞对表柔比星的敏感性增加.结论: MAPK信号传导通路在表柔比星杀伤敏感细胞的过程中被激活,联合应用MAPK信号传导通路抑制剂可以增加表柔比星敏感性.     

乳腺癌不同剂量表柔比星联合辅助化疗的疗效分析

目的：比较不同剂量表柔比星方案辅助化疗治疗乳腺癌的近期疗效及不良反应。方法：选取2005-01-01-2008-06-30大连医科大学附属第二医院采用含表柔比星方案辅助化疗的309例Ⅰ~Ⅲ期乳腺癌患者,分为表柔比星大剂量（100mg/m2）组和小剂量（75mg/m2）组,回顾性分析比较两组间1、3、5年无病生存率（disease-free survival,DFS）、总生存率（overall survival,OS）及不良反应,并采用Cox回归分析预后影响因素。Log-rank法比较两组生存差异,并分层分析筛选出从大剂量中获益的人群。结果：大剂量组与小剂量组1年DFS分别为95.05%和96.15%,3年DFS分别为84.16%和80.77%,5年DFS分别为77.23%和74.52%;1年OS分别为97.03%和98.08%,3年OS分别为93.07%和90.87%,5年OS分别为87.13%和83.17%。大剂量组疗效略高于小剂量组,但两组DFS（P=0.543）及OS（P=0.396）差异无统计学意义。Cox风险比例模型分析再次验证化疗方案中表柔比星的剂量不是影响DFS及OS的重要因素。分层分析结果显示,ER/PR阴性表达（P=0.026）及三阴性乳腺癌（P=0.044）患者大剂量组平均DFS高于小剂量组,差异有统计学意义。大剂量组的胃肠道毒性（P=0.042）及血液毒性（P=0.010）均较小剂量组大,差异有统计学意义。结论：表柔比星大、小不同剂量组之间近期疗效差异无统计学意义;仅ER和PR表达阴性及三阴性乳腺癌的患者能从大剂量表柔比星辅助化疗中获益。大剂量组化疗胃肠道毒性和血液毒性明显大于小剂量组。     

应用大剂量表柔比星CEF方案行乳腺癌辅助化疗的毒副反应和临床耐受性

目的评价大剂量表柔比星(EPI)CEF方案[环磷酰胺(CTX) EPI 5-氟尿嘧啶(5-Fu)方案]在乳腺癌辅助化疗中的毒副反应和耐受性。方法将98例Ⅰ～Ⅲa期原发性乳腺癌患者随机分为大剂量EPI化疗组(CEF-100组)和常规剂量EPI化疗组(CEF-60组),CEF-100组和CEF- 60组分别给予:EPI 100和60 mg/m2,行CEF方案术后辅助化疗。21 d为1个周期,共6个周期。化疗期间给予相应的骨髓支持、保肝和止吐治疗。结果化疗各周期中,CEF-100组与CEF-60组白细胞数和中性粒细胞绝对值差异无统计学意义(均P>0.05),但CEF-100组由于白细胞减少引起的发热发生率高于CEF-60组(P<0.05)。CEF-100组比CEF-60组消化道毒副反应(恶心呕吐、口腔炎)和肝功能异常的发生率高,程度重(均P<0.05),但经对症处理均可缓解。两组均未出现严重的髓外毒副反应及心脏毒性,均未发生治疗相关死亡。结论原发性乳腺癌患者对大剂量EPI CEF方案治疗耐受性良好,远期疗效尚有待进一步随访观察。     

索拉非尼联合表阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用

[目的]探讨索拉非尼联合表阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。[方法]绘制MCF-7细胞生长曲线并在第14d检测其体外克隆形成率;MTT法测定72h时索拉非尼及表阿霉素单用与联用对MCF-7细胞的增殖抑制率。[结果]细胞生长曲线显示MCF-7细胞第1-4d生长速度较快,第4d后生长速度减慢,第10d后生长趋于停滞;第14dMCF-7细胞的克隆形成率为37.2%。在72h时间点,索拉非尼及表阿霉素单药对MCF-7均有抑制作用,两药联合则为协同或相加作用。[结论]索拉非尼和表阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞增殖有抑制作用,联合用药表现出协同或相加作用。     

青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7/TAM细胞的抑制作用

[目的]探讨青蒿琥酯抑制耐三苯氧胺人乳腺癌细胞MCF-7/TAM的增殖及其机制。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析法、流式细胞术、免疫细胞化学法技术检测青蒿琥酯作用于MCF-7/TAM细胞后的抑制率、凋亡率、细胞周期及Bcl-2表达变化。[结果]青蒿琥酯对MCF-7/TAM细胞有明显的抑制作用,呈浓度和时间依赖性。作用48h后能诱导细胞凋亡,细胞周期被阻滞于G1、G2期（P〈0.05）。青蒿琥酯处理组Bcl-2表达减弱（P〈0.01）。[结论]青蒿琥酯可抑制MCF-7/TAM细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

水飞蓟素联合阿霉素对耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转耐药作用

[目的]探讨水飞蓟素联合阿霉素对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM耐药性的影响.[方法]采用MTT法测定单用阿霉素及其联合水飞蓟素对MCF-7/S、MCF-7/ADM细胞增殖抑制率(IR),计算耐药倍数和逆转倍数.[结果]阿霉素作用MCF-7/S的IC50值(2.89±0.35 μg/ml)明显小于MCF-7/ADM(56.85±2.12μg/ml),耐药倍数为27.6倍;阿霉素联合水飞蓟素作用MCF-7/ADM的IC50值(9.07±0.56μg/ml)明显小于单独使用阿霉素(59.52±2.38μg/ml),逆转耐药倍数为6.6倍.[结论]人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素具有明确耐药性,水飞蓟素能够明显逆转MCF-7/ADM对阿霉素的耐药性.     

Ani-survivin DNAzymes Inhibit Cell Proliferation and Migration in Breast Cancer Cell Line MCF-7

Survivin, a new member of the inhibitor of apoptosis protein (IAP) family, both inhibits apoptosis andregulates the cell cycle. It is overexpressed in breast tumor tissues. In this study, we designed two survivinspecific DNAzymes (DRz1 and DRz2) targeting survivin mRNA. The results showed that DRz1 could decreasethe expression of survivin by nearly 60%. Furthermore, DRz1 significantly inhibited cell proliferation, inducedapoptosis and inhibited migration in MCF-7 cells. In addition, down-regulation of survivin expression wasassociated with increased caspase-3 and -9 activities in MCF-7 cells after 24 h transfection. In our experiments,the efficacy of DRz1 to influence survivin levels and associated effects were better than DRz2. Survivin-DRz1might have anti-tumorigenic activity and may potentially provide the basis for a novel therapeutic interventionin breast cancer treatment.     

Apogossypolone对乳腺癌MCF-7细胞株放射增敏的体外实验研究

[目的]探讨Apogossypolone(ApoG2)对乳腺癌MCF-7细胞株的放射增敏作用及其作用机制。[方法]①MTT法检测ApoG2单药对MCF-7细胞的抑制率,确立细胞半数抑制浓度(IC50)。②根据MTT结果选取低浓度(相似文献   

HPV16E7基因沉默对宫颈癌细胞系CaSki细胞增殖的影响

[目的]探讨脂质体转染HPVl6E7siRNA对人宫颈癌CaSki细胞增殖的影响。[方法]人工合成抑制HPVl6E7基因的siRNA片段,通过脂质体转染到CaSki细胞内,显微镜下观察其形态学变化;流式细胞术检测各组细胞周期变化;RT-PCR检测HPVl6E7mRNA的表达;Westernblot检测HPVl6E7蛋白表达。[结果]转染siRNA后的CaSki细胞,细胞增殖受到显著抑制．HPVl6E7mRNA表达显著下降,HPVl6E7蛋白水平显著下降。[结论]应用RNA干扰靶向抑制HPVl6E7基因可以显著抑制CaSki细胞增殖。     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

Objective: To study the reversal effect of neferine on adriamycin (ADM) resistant human breast cancer cell line MCF-7/ADM. Methods: The cytotoxic effect of Nef or ADM was determined by 3-[4, 5-dimethylthiazol-2.-yl], 5-diphenyl tetraxolium bromid (MTT) assay. Apoptosis and the expression of P-glycoprotein (P-gp) were detected by flow cytometry (FCM). The intracellular ADM concentration was measured by HPLC. Results: Nef at 1, 5, 10 mol/L decreased the IC₅₀ of ADM to MCF-7/ADM from 11.63 g/mL to 4.59, 2.44, 0.27 g/mL respectively. MCF-7/ADM could resist the apoptosis induced by ADM while Nef (1-10 mol/L) could augment ADR-mediated apoptosis. Nef (10 mol/L) increased the accumulation of ADM up to 2.88 fold in MCF-7/ADM but not in sensitive cells MCF-7/S and reduced the expression of P-gp in MCF-7/ADM cells. Conclusion: Nef can circumvent multidrug resistance (MDR) of MCF-7/ADM cells and the mechanism was associated with the increase of intracellular accumulation of ADM and the reduced expression of P-gp in MCF-7/ADM cells.     

FasL基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞药物敏感性的上调效应

目的:探讨FasL基因转染对肿瘤细胞化疗敏感性的调节效应,方法:LjpofectAMINE介导建立FasL基因修饰的乳腺癌细胞系MCF-7(?)FL,MTT法检测化疗药物对转染细胞的杀伤效应,半定量RT-PCR分析化疗药物作用前后转染细胞Fas mRNA表达水平变化,结果:经C418筛选,RT-PCR和免疫组化鉴定,建立FasL稳定表达MCF-7/FL,ADM在0.625～2.5μg′ml之间.MTX在3～6μg′ml.CDDP在1.25～10μg ml间对MCF-7FL的杀伤效应均明显高于MCF-7和转染空载体的MCF-7Vt而F(ab’)_2-APO-LMcAb可部分抑制这—增强效应,半定量RT-PCR显示上述化疗药物作用后MCF-7/FL Fas mRN水平表达显著增强,结论:外源FasL基因导入可上调肿瘤细胞对多种化疗药物的敏感性,其机制可能与化疗药物上调Fas表达从而增强瘤细胞FasL-Fas凋亡通路效应有关     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

目的研究甲基莲心碱逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性;PI 染色流式细胞计数测定细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞 P-gp 的表达;HPLC 检测细胞内药物浓度。结果 Nef(1、5、10μmol·L~(-1))对人乳腺癌细胞(MCF-7/S)和耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7/ADM)无显著毒性作用。阿霉素(ADM)对敏感株 MCF-7/S 的 IC_(50)为0.13μg·mL~(-1)而对 MDR 细胞株 MCF-7/ADM 的 IC_(50)为11.63μg·mL~(-1),MCF-7/ADM 细胞较MCF-7/S 细胞对 ADM 耐药88倍,1、5、10μmol·L~(-1) Nef 能使 ADM 对 MCF-7/ADM 细胞的 IC_(50)从11.63μg·mL~(-1)依次下降至4.59、2.44、0.27μg·mL~(-1)。MCF-7/ADM 细胞对 ADM 具有凋亡抗性,Nef(1、5、10μmol·L~(-1))能克服 MCF-7/ADM 细胞对 ADM 的凋亡抗性。MCF-7/ADM 细胞较 MCF-7/S 细胞高表达 P-gp,Nef(10μmol·L~(-1))处理24h 后,MCF-7/ADM 细胞 P-gp 表达明显下降。ADM 作用3h 后,MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度比 MCF-7/S 细胞少2.8倍,Nef(10μmol·L~(-1))可使 MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度增加3.2倍,但并不增加 MCF-7/S 细胞内 ADM 的浓度。结论 Nef 具有逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞 MDR 的作用,其作用机理与促进 MDR 细胞内 ADM 积累和下调 MDR 细胞 P-pg 表达有关。     

RSK4对乳腺癌细胞增殖侵袭黏附相关基因表达水平的影响

[目的]探讨核糖体S6蛋白激酶4(ribosomal protein S6 kinase 4 gene,RSK4)基因对乳腺癌细胞Ki-67、cyclinD1、CXCR4、HIF-1 α、E-cadherin基因转录影响.[方法]分别构建RSK4干扰载体、过表达载体转染至乳腺癌MCF-7细胞及MDA-MB-231细胞中,RT-PCR比较实验组和对照组Ki-67、cyclinD1、CXCR4、HIF-1α及E-cadherin mRNA表达水平.[结果]干扰组CXCR4、HIF-1α、cyclinD1及Ki-67mRNA的转录水平分别为2.238±0.0711、1.672 ±0.0833、1.540±0.0115、1.390±0.0902,与空白对照组、阴性对照组相比均升高,但Ecadherin mRNA的转录水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).过表达组Ki-67、cyclinD1、CXCR4和HIF-1α转录水平分别是0.603±0.0066、0.460±0.0155、0.424±0.0198、0.205±0.0082,与空白对照组、阴性对照组相比均降低,而E-cadherin mRNA转录水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论] RSK4基因表达影响乳腺癌细胞增殖黏附相关基因Ki-67、cyclinD1、CXCR4、HIF-1α和E-cadherin mRNA转录水平.