H2O2诱导PC12细胞凋亡中MicroRNA表达及bcl-w调控机制

[目的]构建体外H2O2诱导PC12细胞模拟神经细胞凋亡模型[1],研究microRNA(miRNA或微小RNA)在凋亡中表达和bcl-W调控机制,从microRNA角度探讨颅脑损伤后(如缺血再灌注损伤、脑挫伤)凋亡的机制.[方法]体外H2O2诱导PC12细胞凋亡模型,用基因芯片技术筛选变化显著的microRNA,并对其实验验证后,根据现有microRNA数据库提供的靶标的预测分析结果,搜寻其相关的靶标,通过检测细胞凋亡、Western blot、实时荧光定量PCR技术来验证相关microRNA的作用靶点.[结果]成功构建了体外模拟体内神经细胞凋亡模型,通过基因芯片技术筛选出6个显著下调microRNA[2],其中mi-422a与bcl-w蛋白表达量呈负相关.[结论]通过miR-422a可以调控bcl-w蛋白的表达,且存在负性相关关系.通过调节mi-422a的表达可调控bcl-W蛋白的表达量,证实bcl-w上的基因位点有mi-422a的作用位点存在.     

缺氧复合梭曼中毒PC12细胞中［Ca2+］、cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PK Ⅱ的变化

目的 观察缺氧复合梭曼中毒的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞内游离钙的浓度［Ca∧2 ］、cAMP、钙调蛋白（CaM）和钙调蛋白Ⅱ（Ca∧2 /CaM-PK Ⅱ）的变化。方法 采用放免技术,从细胞水平进一步观察缺氧复合梭曼中毒对PC12细胞的毒性、细胞内［Ca∧2 ］变化、cAMP、CaM和Ca∧2 /CaM-PK Ⅱ的变化。结果 缺氧中毒组PC12细胞cAMP、CaM含量在中毒后24h明显高于单纯中毒组、缺氧对照组和正常对照组;缺氧中毒组PC12细胞Ca∧2 /CaM-PK Ⅱ活性在中毒后24h明显低于单纯中毒组、缺氧对照组和正常对照组。结论 ［Ca∧2 ］、cAMP、CaM和Ca∧2 /CaM-PK Ⅱ在缺氧复合梭曼中毒PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

多巴胺诱导PC12细胞凋亡的机制

目的　探讨多巴胺 (DA)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞株 (PC12 )细胞凋亡的机制。　方法　采用 PC12细胞为模型 ,以 0 .45 mmol/ L的 DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测 PC12细胞的亚二倍体峰 ,按 Griess法测定 NO代谢产物 NO2 -的浓度 ,用 Ac- DEVD- AMC为酶作用底物 ,在荧光分光光度计下检测 CPP32活力。　结果　 DA处理组的凋亡率为 5 4.49%± 1.6 0 % ,与阴性对照组 (1.6 1%± 0 .18% )比较差异有显著性 (P<0 .0 1) ;NO2 -浓度的升高和 CPP32活化程度与阴性对照组比较差异亦有显著性 (P<0 .0 1)。　结论　 CPP32的激活是 DA诱导 PC12细胞凋亡的重要通路 ,而合成增多的 NO可能是 DA激活 CPP32的信号传递分子。     

荔枝核皂苷对正常PC12细胞的毒性及其抑制Aβ细胞毒性的有效浓度测定

目的：测定荔枝核皂苷（LSS）对正常PC12细胞最大安全药物浓度,评价其体外细胞毒性,并测定其抑制Aβ25-35诱导PC12损伤的有效浓度。方法：CCK8法测定PC12细胞活性;6级毒性分类法评价荔枝核皂苷的细胞毒性;LOGIT法计算Aβ25-35抑制PC12细胞活性的半抑制浓度（IC50）。结果：15mg.L^-1及其以上浓度荔枝核皂苷组OD值与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,PC12细胞相对增殖百分率（RGR）〈75%,细胞毒性在2级以上;7.5mg.L^-1及其以下浓度荔枝核皂苷组OD值与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,RGR〉75%,细胞毒性在0～1级之间。Aβ25-35抑制PC12细胞活性的IC50为23.74μmol.L^-1;0.94～7.50mg.L^-1荔枝核皂苷预处理组OD值较Aβ25-35组明显升高（P〈0.05）,OD值依次为7.50mg.L^-1〉3.75 mg.L^-1〉1.88 mg.L^-1〉0.94 mg.L^-1 LSS预处理组。结论：小于或等于7.5mg.L^-1荔枝核皂苷对体外培养的PC12细胞无毒性,即LSS的最大安全浓度为7.5mg.L^-1;荔枝核皂苷抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的有效浓度为0.94～7.50mg.L^-1。在此终浓度范围内,研究荔枝核皂苷抑制Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的作用及机制安全可靠。     

PC12细胞缺氧培养后细胞凋亡及其机制的研究

目的　探讨PC12细胞缺氧后细胞凋亡及其发生机制。方法　采用末端标记法 ,结合流式细胞术观察PC12细胞缺氧培养不同时间点细胞凋亡现象 ,以及DNA损伤相关基因表达的改变。结果　在缺氧 0 .5h开始出现凋亡细胞 ,p5 3、p2 1wafl/cipl蛋白表达也开始增高。至缺氧 1h凋亡细胞达高峰 ,p5 3、p2 1蛋白表达亦最高 (P <0 .0 1) ,缺氧 6～ 12h ,则以坏死为主 ,以上基因的表达均减弱。结论　缺氧后PC12细胞凋亡部分是由于DNA损伤严重、损伤不能及时得到修复所致。     

黄芪有效成分对H2O2引起PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究黄芪萃取组分对H2O2引起PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法以PC12细胞为模型，用H2O2使PC12细胞氧化损伤，加入不同剂量的黄芪萃取组分(25-200μg／m1)。观察不同组分对PC12细胞氧化损伤的保护作用。结果AS，ASP，ASB，ASW和ASE对H2O2引起PC12细胞氧化损伤保护作用的最佳有效浓度分别为50，100，100，200和100μg／ml。结论不同黄芪萃取组分均对PC12细胞氧化损伤有保护作用。     

缺血再灌注损伤中PC12细胞胞质Ca2+浓度变化和NF-κB的表达

目的：建立大鼠。肾上腺嗜络细胞瘤细胞(PC12)的缺血再灌注模型，观察其在缺血再灌注损伤中细胞胞质Ca^2 浓度变化和NF-kB表达情况．方法：将传代培养的PC12细胞在特制装置中进行缺血再灌注处理，建立研究所需要的细胞模型，运用激光共聚焦显微镜检测不同处理条件下胞质的Ca^2 浓度；应用免疫细胞化学、流式细胞术对NF-kB的表达进行检测．结果：试验组与对照组相比，胞质Ca^2 浓度和NF-kB的表达均有升高，并于再灌注30min左右达到高峰(P＜0．01)、结论：细胞胞质Ca^2 和NF-kB可能在PC12细胞的缺血再灌注损伤机制中起着重要作用．     

PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究

目的：研究适宜PC12细胞的培养方法及其在神经生长因子（NGF）作用下的分化效果.方法：PC12细胞培养于F12K培养基中,传代时直接将细胞吹打下来,并用注射器吹散成单细胞悬液;PC12细胞接种于6孔培养板中,并用含NGF 50μg/L的无血清培养基进行诱导分化5d,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,Image J软件进行图像分析.结果：PC12细胞生长状态良好,且经NGF作用5d后,细胞体积显著增大,突起增多增长,细胞分化率达（72.60±3.61）％.结论：本实验中对PC12细胞培养的方法简单易行,适用于PC12细胞的培养;NGF能够诱导PC12细胞分化成神经元样细胞,可为神经退行性疾病的研究奠定基础.     

二甲基亚砜对PC12细胞形态学影响

目的观察二甲基亚砜(DMSO)对PC12细胞形态学的影响。方法不同浓度的DMSO处理PC12细胞,应用倒置相差显微镜观察细胞形态的改变。结果0.5%,1.0%DMSO处理的PC12细胞形态没有明显的改变。经2.0%,3.0%和4.0%DMSO处理后,随时间延长,PC12细胞出现凋亡改变,细胞体积缩小变圆,凋亡小体形成。结论低于1.0%的DMSO对PC12细胞生长没有明显的毒性作用,形态结构没有明显改变。     

多巴胺诱发PC12细胞凋亡的研究

研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机制 。方法：用脱氧核糖核酸标记法，借助荧光显微镜观察多巴胺对ＰＣ１２细胞凋亡的影响。     

梭曼中毒诱导PC12细胞JAKs表达

目的 研究梭曼中毒PC12细胞中JAK1、JAK2、JAK3基因mRNA和蛋白表达的变化。方法 采用半定量RT-PCR和Western blotting法检测梭曼中毒2、6、12、24h的PC12细胞的JAK1、JAK2、JAE3基因mRNA和蛋白质的表达水平，并对PCR产物进行测序。结果 梭曼中毒后2h组PC12细胞中JAK1、JAK2、JAK3 mRNA和蛋白质表达水平升高，在中毒后12h组达最高，中毒后24h组的表达量低于12h组，与对照组比较均有明显差别。RT-PCR产物直接测序证实扩增产物片断与GenBank中相应序列相同。结论 梭曼中毒增强PC12细胞中JAKs基因的表达，在梭曼中毒所致的脑损伤中可能发挥重要作用。     

miR-29a对MPP+诱导PC12细胞凋亡影响及机制

目的 研究微小RNA-29a(miR-29a)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞氧化应激和凋亡的影响以及作用机制.方法 不同浓度MPP+(0、100、300、500μmol/L)诱导PC12细胞24 h,荧光定量PCR(qPCR)检测miR-29a的表达量,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞活力.P...     

梭曼中毒诱导PC12细胞STATs表达

目的 研究梭曼中毒PC12细胞中STATs基因mRNA和蛋白表达的变化。方法 采用半定量RT-PCR技术和Western blot法检测梭曼中毒2、6、12及24h的PC12细胞的STAT1、3、5基因mRNA和蛋白质的表达水平，并对PCR产物进行测序。结果 梭曼中毒后2h组PC12细胞中STAT1、3、5mRNA和蛋白质表达水平升高，在中毒后12h组达最高，中毒后24h组的表达量低于12h组，与对照组比较均有明显差别。RT-PCR产物直接测序证实扩增产物片断与GenBank中相应序列相同。结论 梭曼中毒增强PC12细胞中STATs基因的表达，在梭曼中毒所致的脑损伤中可能发挥重要作用。     

川芎嗪对PC12细胞抗凋亡作用的实验研究

目的　探讨川芎嗪对多巴胺诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法　用多巴胺 (DA)刺激PC12细胞使其发生细胞凋亡 ,用流式细胞仪检测PC12细胞二倍体比率表征细胞凋亡率 ,用MTT法测定细胞活性 ,用Griess法间接测定NO的浓度 ,比较分析加入不同剂量的川芎嗪后对上述指标的影响。结果　加入 0 .3 0、0 .60mmol L的DA两组的PC12细胞的凋亡率、培养上清NO含量均显著高于无DA组 (P <0 .0 5 ) ,细胞活性显著低于无DA组 (P <0 .0 5 )。加入川芎嗪后 ,细胞凋亡率、NO含量均显著低于未加入川芎嗪组 (P <0 .0 5 )、细胞活性显著高于未加入川芎嗪组 (P <0 .0 5 )。结论　川芎嗪可抑制DA引起的PC12细胞凋亡 ,此作用可能与降低NO生成有关。     

多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的 研究外源性多巴胺对多巴胺能神经元的毒性作用,方法 采用体外培养的PC12细胞为模型,以终浓度0.45mmol/L的多巴胺对细胞进行诱导。结果 在透射电镜下可见培养的PC12细胞核染色质明显固缩、断裂,原位末端标记技术显示胞核内散在分布断裂DNA片段,流式细胞仪检测到DNA周期中G0-G1期前出现明显的亚二倍体峰,琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。结论 外源性DA可诱导PC12细胞凋亡。     

星形细胞条件培养液对PC12细胞生长的影响

目的观察1、2型星形细胞(T1A,T2A)条件培养液对PC12细胞生长情况的影响,探讨T1A,T2A在神经再生过程中的作用。方法利用分离纯化的T1A和T2A制备条件培养液,观察条件培养液对PC12细胞生长情况的影响,观察PC12细胞突起生长情况,并用MTT法检测PC12细胞活力。结果对照组PC12细胞未见明显突起生长,TIA条件培养液作用组和T2A条件培养液作用组PC12细胞突起生长明显,OD值分别由0.278提高到0.512（P＜0.001）和0.566(P＜0.001)。结论T1A,T2A条件培养液对PC12细胞有刺激生长作用,说明T1A,T2A对中枢神经再生有积极作用。     

培补肝肾中药对 MPP+ 诱导 PC12 细胞凋亡的影响

培补肝肾中药由肉苁蓉、枸杞子、何首乌组成，临床实验证明其治疗帕金森病(Parkinson’s disease，PD)有一定疗效。本实验采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium，MPP^ )建立PC12细胞凋亡模型，观察培补肝肾中药对MPP^ 诱导的PC12细胞凋亡的影响。     

氯化锰致PC12细胞损伤的研究

探讨氯化锰（MnCl2）对PC12细胞的损伤作用。方法：构建MnCl2诱导的PC12细胞模型，用MTT法检测细胞存活率，用荧光分光光度法检测乳酸脱氢酶（LDH）和活性氧（ROS）生成量，用化学比色法测定细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：MnCl2诱导的PC12细胞存活率明显下降，并与诱导时间和浓度呈正相关；MnCl2使PC12细胞LDH外溢量和ROS生成量显著增加，同时细胞内MDA含量增加，SOD活性下降。结论：MnCl2可导致PC12细胞的氧化损伤。