重组人TRAIL蛋白联合顺铂对人卵巢癌细胞生长及凋亡的影响

背景与目的：研究发现肿瘤坏死因子的相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)可以增强化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究旨在探讨TRAIL与顺铂联合应用对体外培养的卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3生长凋亡的影响及可能的诱导机制。方法：利用MTT法和流式细胞仪检测在顺铂和重组人TRAIL蛋白共同作用下,SKOV3和OVCAR3细胞的增殖抑制效应及细胞凋亡程度;并应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测药物处理后TRAIL死亡受体DR4、DR5的mRNA表达水平;同时用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测DR4、DR5的蛋白表达水平。结果：SKOV3和OVCAR3细胞均对TRAIL蛋白敏感,随着TRAIL蛋白浓度的升高,细胞的生长抑制率可达64%;而TRAIL与顺铂联合用药对两种细胞的抑制率均达到92%以上,对细胞的增殖抑制呈现高效协同作用,与单独用药组比较差异有统计学意义(P<0.05);TRAIL和顺铂联合组两种细胞凋亡率分别为(31.50±0.79)%和(36.60±1.31)%,显著高于单独用药组;RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示,SKOV3和OVCAR3细胞在TRAIL与顺铂联合用药后,死亡受体DR4、DR5表达水平均显著上调。结论：在体外,TRAIL与化疗药物顺铂联用能明显抑制卵巢癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。TRAIL能明显增强顺铂对卵巢癌细胞的敏感性,其诱导机制可能与死亡受体DR4、DR5表达水平上调有关。     

树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫反应

目的 研究卵巢癌患者外周血树突状细胞(DC)在体外能否诱导出抗卵巢癌免疫反应。方法 自卵巢癌患者外周血中分离出DC;以人卵巢癌细胞系SKOV3细胞肿瘤抗原粗提物激活DC;以粒/巨噬细胞集落刺激因子及白介素—4联合刺激DC;DC诱导自体混合T淋巴细胞增殖、分化为细胞毒性T细胞(CTL);检测CTL对SKOV3细胞、CAOV3细胞、HepG2细胞及HOS—8603细胞的细胞毒作用。结果 卵巢癌患者DC体外能够诱导自体混合T淋巴细胞增殖、分化为CTL,CTL对SKOV3细胞及CAOV3细胞均有较强杀伤力(89％±12％及62％±9％),而对HepG2细胞和HOS—8603细胞仅有微弱杀伤力(12％±4％和10％±5％)。结论 卵巢癌患者外周血DC在体外能够诱导高效而特异抗卵巢癌免疫。     

1α,25-二羟基维生素D3对人卵巢癌细胞株表皮生长因子受体的调节

目的:研究1α,25-二羟基维生素D3(1,25VD3)对人卵巢癌细胞株表皮生长因子受体(EGFR)表达的调节作用.方法:用1,25VD3 或其类似物EB1089处理人卵巢癌细胞株OVCAR3、2008和CAOV3,应用Western blot、Northern Blot和mRNA稳定性分析等方法检测EGFR表达的变化.结果:1,25VD3或EB1089作用后三种人卵巢癌细胞中EGFR的蛋白和mRNA表达水平均下降.用1,25VD3 和放线菌素D、RNA酶抑制剂处理OVCAR3细胞后,Northern blotting分析结果显示,1,25VD3 作用4h后没有改变EGFR mRNA的半衰期.结论:1,25VD3在mRNA转录水平下调人卵巢癌细胞株EGFR的表达.     

卵巢癌细胞系BRCA1蛋白表达的雌激素调控

目的：观察不同浓度雌激素对卵巢癌细胞系乳腺癌／卵巢癌易感基因（BRCAI）蛋白表达的影响。方法：采用免疫组化及计算机图象分析方法，检测体外不同浓度（10－9mol／L~10－6mol／L．）的17－β雌二醇（F2）对卵巢癌OVCAR3和SKOV3细胞系BRCA1蛋白表达的影响。结果：OVCAB3和SKOV3细胞在E2的作用下，BRCA1的表达明显增加，且呈现正性剂量效应关系。结论：雌激素能够诱导卵巢癌OVCAB3和SKOV3细胞系BRCA1蛋白的表达，可通过该方法探索治疗卵巢癌的新途径。     

阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 :研究丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase,MAPK/ERK)通路抑制剂PD98059对卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞增殖及侵袭能力的影响,初步探讨阻断MAPK/ERK信号转导通路以治疗卵巢癌的可能性。方法:体外培养人上皮性卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,然后用不同浓度的PD98059处理细胞不同时间。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测2种细胞的增殖活性。蛋白质印迹法检测PD98059对2种细胞中磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)蛋白表达的影响。Transwell小室法检测PD98059作用后SKOV3和OVCAR3细胞侵袭能力的变化。结果:PD98059在一定浓度范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3的增殖,其作用具有时间及浓度依赖性(P值均<0.05)。PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调p-ERK1/2蛋白的表达(P<0.05),从而使得ERK1/2信号转导途径失活。同时,PD98059在一定浓度范围内能抑制2种卵巢癌细胞的侵袭能力(P值均<0.05)。结论:PD98059可能通过阻断ERK1/2信号通路,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力。     

抗IGF-ⅠR抗体联合顺铂对卵巢癌细胞及其移植瘤的抑制作用

目的：察抗胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（insulin-like growth factor-Ⅰ receptor,IGF-ⅠR）单克隆抗体4F2联合顺铂对卵巢癌细胞及其移植瘤的生长抑制作用。方法：Western blotting检测4种卵巢癌细胞（CAOV3、ES2、SKOV3和Hey细胞）中IGF-ⅠR的表达;流式细胞术检测抗IGF-ⅠR单抗4F2与各卵巢癌细胞系的结合特异性;Western blotting检测4F2对SKOV3和 CAOV3细胞内IGF-ⅠR磷酸化水平的影响,CCK-8检测4F2、顺铂单用或联用对卵巢癌细胞的生长抑制作用;建立卵巢癌SKOV3、CAOV3细胞裸鼠移植瘤模型,观察4F2、顺铂单用或联合治疗对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果：IGF-ⅠR在4种卵巢癌细胞中的表达水平由高到低为SKOV3、CAOV3、ES2,Hey细胞不表达, 4F2与SKOV3、CAOV3、ES2细胞均能特异性结合,并且4F2能够抑制IGF-ⅠR的酪氨酸磷酸化。联合组顺铂为0.2 μg/ml时细胞生长抑制率即显著高于4F2单抗组[SKOV3：（47.4±3.1）% vs (5.3±0.6）%;t=3.126,P=0.007。CAOV3：（51.6±2.3）% vs (8.2±1.8）%;t=3.516,P=0.009]及顺铂组[SKOV3：（47.4±3.1）% vs (30.5±4.1）%;t=2.933, P=0.027。CAOV3：（51.6±2.3）% vs (28.9±2.3）%;t=3.226,P=0.034];在体内,联合组对卵巢癌种植瘤小鼠肿瘤的抑制率亦显著高于4F2单抗组[SKOV3：（87.3±3.1）% vs (41.6±4.9）%;t=2.29, P=0.004 3。CAOV3：（86.6±3.5）% vs (42.1±7.7）%;t=3.02,P=0.009 1]及顺铂组[SKOV3：(87.3±3.1)% vs (28.9±5.5)%; t=2.56, P=0.008 7。CAOV3：（86.6±3.5）% vs (32.7±4.1）%;t=2.91,P=0.007 3]。结论：4F2单抗特异性结合IGF-ⅠR阳性卵巢癌细胞,联合顺铂能够协同抑制卵巢癌细胞及其移植瘤的生长。     

LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达及与顺铂化疗敏感性的关系

目的:观察长链非编码RNA（LncRNA） ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达水平,探究其与顺铂化疗敏感性的关系。方法:选取2017年01月至2019年01月本院收治的64例卵巢癌患者,卵巢摘除手术中采集卵巢癌组织,另收集因卵巢囊肿需作手术切除但已证实无瘤细胞的正常卵巢组织标本,采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测卵巢癌及正常卵巢组织、顺铂（DDP）耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP、卵巢癌细胞（OVCAR5、OVCAR8、SKOV3）及永生化卵巢上皮细胞（IOSE29、IOSE80）中LncRNA ITGA9-AS1表达水平。采用慢病毒介导LncRNA ITGA9-AS1转染并筛选稳定细胞株,MTT法检测过表达LncRNA ITGA9-AS1对SKOV3、SKOV3/DDP增殖的影响及对不同浓度（0、1、2、4、8、16 mg/L）DDP的敏感性。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中LncRNA ITGA9-AS1表达水平降低（P＜0.05）。与IOSE29、IOSE80细胞比较,OVCAR5、OVCAR8、SKOV3及SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）;与SKOV3细胞比较,SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）。与空白对照组及慢病毒对照组比较,慢病毒过表达组SKOV3、SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平升高（P＜0.05）,增殖率降低（P＜0.05）,细胞存活率呈DDP浓度依赖降低（P＜0.05）。结论:LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌组织及癌细胞中低表达,过表达LncRNA ITGA9-AS1可增加卵巢癌SKOV3及卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的顺铂化疗敏感性。     

胰腺癌中CLDN-7的表达及临床意义

目的： 探讨紧密连接蛋白claudin-7 （CLDN-7）在胰腺癌中的表达情况,以及其与患者临床病理特征和预后的相关性。方法： 应用Oncomine、GEPIA和GEO数据库综合分析CLDN-7 mRNA在胰腺癌中的表达水平,应用Kaplan-Meier Plotter数据库分析胰腺癌中CLDN-7的表达水平与生存预后的关系;选取兰州大学第二医院普外科2015年至2018年手术切除的44例胰腺癌患者的癌组织及31例癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法检测CLDN-7蛋白的表达水平,并分析其与临床病理特征以及预后的关系;GO分析和KEGG通路富集分析 CLDN-7可能参与的信号通路及发挥的主要功能,并且在TCGA和GEPIA数据库中进行验证。 结果： 数据库及收取的临床样本分析均显示,CLDN-7在胰腺癌组织中显著高表达, 其高表达与胰腺癌患者临床预后有关联,并且CLDN-7的表达水平是影响胰腺癌患者术后总体生存时间的独立因素（均P<0.05）;GO分析和KEGG通路富集分析证实,CLDN-7参与胰腺癌患者DNA损伤修复、糖代谢等;TCGA和GEPIA数据库验证显示,胰腺癌中CLDN-7的表达与DNA损伤修复相关基因POLD4、SMUG1、NTHL1 及糖代谢的相关基因 ALDOA、TALDO1、PGLS 的表达呈现出明显的正相关性（均P<0.01）。 结论： CLDN-7在胰腺癌中高表达且标志着更差的临床预后,并与胰腺癌的DNA损伤修复及肿瘤内糖代谢相关。     

1α，25-二羟基维生素D3对人卵巢癌细胞株表皮生长因子受体的调节

目的：研究1α,25-二羟基维生素D3（1,25VD3）对人卵巢癌细胞株表皮生长因子受体（EGFR）表达的调节作用。方法：用1,25VD3或其类似物EB1089处理人卵巢癌细胞株OVCAK3、2008和CAOV3,应用Westernblot、NorthernBlot和mRNA稳定性分析等方法检测EGFR表达的变化。结果：1,25VD3或EB1089作用后三种人卵巢癌细胞中EGFR的蛋白和mRNA表达水平均下降。用1,25VD3和放线菌素D、RNA酶抑制剂处理OVCAR3细胞后,Northernblotting分析结果显示,1,25VD3作用4h后没有改变EGFRmRNA的半衰期。结论：1,25VD3在mRNA转录水平下调人卵巢癌细胞株EGFR的表达。     

二甲双胍对卵巢癌细胞的抗肿瘤作用

目的 探讨二甲双胍对卵巢癌细胞增殖、周期、凋亡和迁移的影响及其作用机制。方法 选取卵巢癌A2780、CAOV3、SKOV3细胞为研究对象,MTT和克隆形成实验检测二甲双胍对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell实验检测二甲双胍对细胞迁移能力的影响,流式细胞术检测二甲双胍对细胞周期和凋亡的影响,Western blot法检测二甲双胍对细胞AMPK磷酸化、mTOR磷酸化、CXCR4和Wnt/β-catenin蛋白表达的影响。结果 随着二甲双胍浓度增加和作用时间延长,卵巢癌细胞存活率明显下降。A2780、CAOV3及SKOV3细胞48 h的IC50分别为16.36、36.65和43.44 mmol/L。与对照组相比,二甲双胍处理后,细胞克隆形成能力和迁移能力被明显抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率增加。随着二甲双胍浓度增加,磷酸化AMPK蛋白表达逐渐增加,磷酸化mTOR、CXCR4、Dvl3、β-catenin、CyclinD1、CDK1蛋白表达逐渐降低。结论 二甲双胍对卵巢癌细胞具有抗肿瘤作用,其机制可能与激活AMPK抑制CXCR4介导的Wnt/β-catenin信号通路有...     

趋化因子受体及配体在卵巢癌细胞迁移中的作用

背景与目的:研究表明许多肿瘤细胞表达趋化因子受体,与肿瘤细胞的迁移与转移有密切关系。本研究拟探讨趋化因子受体CXCR4[chemokine(C.X.C)receptor4]及配体CXCL12[chemokine(C.X.Cmotif)ligand12]在上皮性卵巢癌细胞中的表达及在肿瘤细胞迁移中的作用。方法:采用RT鄄PCR和Westernblot检测15例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞株CAOV3、血管内皮细胞株HUVEC和10例正常卵巢组织中CXCR4的表达以及卵巢癌患者腹膜后淋巴结组织和输卵管平滑肌组织中CXCL12的表达。ELISA检测15例上皮性卵巢癌患者腹水中趋化因子CXCL12的含量。以Boyden小室检测重组人CXCL12、上皮性卵巢癌癌性腹水对CAOV3和HUVEC细胞的趋化活性的影响。结果:(1)在上皮性卵巢癌组织、CAOV3及HUVEC细胞中,CXCR4在mRNA及蛋白水平的相对表达量分别为2.30±1.12、1.89±1.20、1.68±1.11及1.35±0.14、1.86±0.34、1.96±0.23,正常卵巢组织在mRNA及蛋白水平均未检测到CXCR4表达;(2)卵巢癌癌性腹水定量检查结果显示,CXCL12含量为632～9326pg/ml(中位数为6237pg/ml)。卵巢癌患者腹膜后淋巴结组织中,CXCL12mRNA表达量的平均值为1.14±0.87,卵巢癌患者输卵管平滑肌组织未检测出CXCL12表达;(3)重组人CXCL12可诱导CAOV3及HUVEC细胞的迁移,其趋化指数分别为3.     

卵巢癌细胞和脐血树突状细胞融合瘤苗抗肿瘤免疫效应的初步研究

目的：将脐血来源的树突状细胞（DC）与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞相融合，获得SKOV3/DC融合细胞，分析其生物学特性及体外诱导抗卵巢癌肿瘤免疫的能力.方法：1）将用PKH26红色荧光染料标记脐血来源的DC后，聚乙二醇法（PEG）融合DC与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞，流式细胞仪分选融合细胞.2）应用细胞培养技术、流式细胞术及光学显微镜检测SKOV3/DC的生长特性和形态学特征 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察融合细胞体外刺激混合淋巴细胞反应的能力及诱导特异性肿瘤免疫的能力.结果：1）DC和SKOV3按10∶1比例融合，融合率约为8.5%.融合细胞可在体外缓慢增殖，CA125抗原及CD1a、CD80、CD86、HLA-DR、MHC-Ⅰ分子表达阳性.2）SKOV3/DC在体外能有效的激发混合淋巴细胞增殖反应，可明显激活细胞毒性T淋巴细胞（CTL），对卵巢癌细胞株SKOV3有特异性杀伤效应.结论：利用PEG法制备的SKOV3/DC融合细胞兼具两种亲本细胞的部分特性，在体外能够诱导特异性抗肿瘤免疫.本研究将SKOV3/DC作为肿瘤疫苗，为其在卵巢癌主动免疫治疗研究中的进一步应用打下了基础.     

siRNA沉默结肠癌转移相关基因1表达对人类卵巢癌细胞株侵袭转移的影响

目的 检测结肠癌转移相关基因1（MACC1）在卵巢癌细胞株中的表达,并探讨用siRNA技术抑制其表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响.方法 应用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）及Western blot法检测OVCAR3、ES-2、SKOV3、HO-8910卵巢癌细胞株中MACC1的表达,合成MACC1特异性siRNA并转染OVCAR3细胞,利用RT-qPCR筛选并鉴定MACC 1基因有效沉默后,应用体外黏附实验、Transwell迁移及侵袭实验、体外血管拟态实验检测MACC1基因沉默后OVCAR3细胞的体外黏附、迁移、侵袭及血管生成能力的变化.结果 OVCAR3细胞较其他卵巢癌细胞株高表达MACC1.MACC1基因沉默后,OVCAR3细胞的体外黏附能力受到不同程度的抑制;Transwell迁移实验中,MACC1 siRNA干扰的OVCAR3细胞（干扰组）转入底层膜的细胞数为（245.5±12.8）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（500.3±16.5）、（496.3±13.1）个,均P＜0.05]; Transwell侵袭实验中,干扰组转入底层膜的细胞数为（185.3±14.1）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（405.7±9.1）、（416.3±11.5）个,均P＜0.05];体外血管拟态显示干扰组细胞多呈散在分布,连接减少,形成的完整结构少.结论 利用siRNA技术抑制MACC1基因表达可有效抑制卵巢癌OVCAR3细胞的体外转移和侵袭能力,MACC1有望成为卵巢癌治疗的靶基因.     

溶血磷脂酸对人卵巢癌细胞生长和侵袭转移能力的影响

目的：探讨溶血磷脂酸（1ysophosphatidi cacid，LPA）对卵巢癌细胞系SKOV3、3AO、CAOV3的生长和侵袭转移能力的影响。方法：LPA干预卵巢癌细胞系SKOV3、3AO、CAOV3，并观察其对细胞增殖生长的影响；Boyden小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力；ELISA方法检测LPA剌激卵巢癌细胞系CAOV3后细胞上清液中转移相关因子的表达情况。结果：LPA体外干预卵巢癌细胞系能明显促进细胞增殖生长，且存在剂量依赖性。Boyden小室体外侵袭实验结果显示，实验组3AO和CAOV3细胞的侵袭指数都高于各自的空白对照组，不同浓度组的比较差异有统计学意义，但2组细胞系之间的比较差异无统计学意义。LPA干预CAOV3后细胞上清液中细胞因子的含量随LPA的浓度变化产生相应的变化。结论：LPA体外干预卵巢癌细胞系能明显促进细胞的增殖生长，且侵袭指数和转移相关因子的表达量均会产生相应的变化，说明UH对卵巢癌的侵袭和转移可能具有重要的生物学意义。     

蛋白酶体抑制剂诱导OVCAR3卵巢癌细胞自噬的机制研究

目的:研究蛋白酶体抑制剂诱导OVCAR3卵巢癌细胞的自噬中PI3K通路的作用。方法:MG1 3 2处理OVCAR3细胞后,光镜观察自噬泡的形成。多种蛋白酶体抑制剂处理OVCAR3细胞后,Western blot检测自噬特异性蛋白LC3的变化。PI3K抑制剂(渥曼青霉素与3-MA)联合多种蛋白酶体抑制剂处理OVCAR3细胞,Western blot检测LC3的变化。采用shRNA技术下调OVCAR3细胞的Beclin 1表达,MG132处理细胞,Western blot检测LC3的变化,吖啶橙(AO)染色观察酸性自噬泡的形成。结果:MG132诱导OVCAR3卵巢癌细胞自噬泡形成,多种蛋白酶体抑制剂均可诱导OVCAR3细胞LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化增强。PI3 K抑制剂与蛋白酶体抑制剂联合应用,与单独应用蛋白酶体抑制剂相比,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化无改变。下调Beclin 1表达后,MG132诱导的LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化及酸性自噬泡的形成均无改变。结论:蛋白酶体抑制剂诱导OVCAR3卵巢癌细胞发生自噬是不依赖PI3K途径进行的。     

细胞周期蛋白D1基因对卵巢癌细胞生物学行为的影响#br#

【摘要】目的基于Oncomine数据库分析细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）基因在卵巢癌中的表达水平及沉默其表达对癌细胞生物学行为的影响。方法利用Oncomine数据库中关于卵巢癌组织中Cyclin D1基因的相关信息,分析Cyclin D1基因在不同肿瘤中的表达情况以及在卵巢癌中的表达情况。使用在线数据库Kaplan Meier Plotter分析Cyclin D1表达水平与卵巢癌预后的关系。使用qRT PCR检测各卵巢癌细胞株（SKOV3、CAOV3、A2780、ES2）及正常卵巢上皮细胞中Cyclin D1的表达。取对数生长期卵巢癌细胞SKOV3,将细胞分为空白对照组、阴性对照组（NC siRNA组）和Cyclin D1基因沉默组（Cyclin D1 siRNA组）;使用Western blotting检测各组Cyclin D1蛋白表达;分别使用MTT法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果通过挖掘分析Oncomine数据库涉及的Cyclin D1基因发现,与正常卵巢组织比较,在所有差异表达基因中,Cyclin D1基因的中位数值排名为2020,P<0001。与Cyclin D1低表达的卵巢癌患者比较,Cyclin D1高表达患者的总生存期和无瘤进展生存期均较短,差异有统计学意义（P<001）。与正常卵巢上皮细胞比较,Cyclin D1基因在各卵巢癌细胞（ES2、CAOV3、SKOV3、A2780）中的表达明显升高,差异有统计学意义（P<005）;与SKOV3细胞株比较,Cyclin D1基因在CAOV3、A2780、ES2细胞株中的表达明显降低,差异有统计学意义（P<005）。Cyclin D1 siRNA组细胞中Cyclin D1的表达量、增殖能力、迁移面积、穿过聚碳酸酯膜的癌细胞数量均明显低于空白对照组和NC siRNA组,差异有统计学意义（P<005）。结论Cyclin D1基因在卵巢癌组织中高表达,该基因可能参与卵巢癌的发生发展和转移,并与患者预后密切相关。     

RIN1蛋白在卵巢癌细胞和组织中的表达及其临床病理意义

目的 探讨ras及rab作用因子1（RIN1）蛋白在卵巢癌细胞的表达水平及定位,并探讨其在卵巢肿瘤组织中的表达水平及临床意义。方法 采用免疫印迹（Western blotting）法检测RIN1蛋白在人正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞株OVCAR3、SKOV3和HO8910中的表达水平及定位;检测其在17例卵巢正常组织和91例卵巢肿瘤组织中的表达并分析其与卵巢癌分期和组织分化程度的关系。结果RIN1蛋白在卵巢癌细胞 OVCAR3、SKOV3和HO8910中的相对表达量（0.3641±0.0614、0.6454±0.0835和0.7925±0.1491）高于人正常卵巢上皮细胞（0.0679±0.0269）,差异有统计学意义（P＜0.05）,且主要分布于卵巢癌细胞胞浆中。RIN1蛋白在37例良性卵巢肿瘤、10例交界性卵巢肿瘤及44例恶性卵巢肿瘤组织中相对表达量分别为0.3456±0.1870、0.5587±0.2138和0.7236±0.2232,均高于其在17例卵巢正常组织中的表达水平（0.1284±0.0982）,差异有统计学意义（P＜0.01）,且RIN1蛋白的表达随卵巢病变程度的加重而升高;RIN1蛋白表达随卵巢癌手术、病理分期及组织分化程度的演进而增加。结论 RIN1蛋白在卵巢癌细胞中高表达且定位于胞浆中;RIN1蛋白高表达与卵巢癌发生发展密切相关,其可作为卵巢癌早期诊断的一个新的肿瘤标志物,并有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

紫花牡荆素对SKOV3卵巢癌干细胞样细胞FoxO3a磷酸化的影响

背景与目的：肿瘤干细胞的存在是卵巢癌高复发率和高死亡率的原因。本文研究紫花牡荆素(casticin,CAS)对SKOV3细胞系卵巢癌干细胞样细胞(ovarian cancer stem cell like cells,OCSLCs)自我更新能力的影响及其机制。方法：体外培养SKOV3细胞系细胞,干细胞培养基悬浮培养SKOV3得到和扩增卵巢癌球形成细胞,即OCSLCs。蛋白［质］印迹法(Western blot)分析FoxO3a磷酸化水平。FoxO3a特异性siRNA转染抑制FoxO3a蛋白表达,并测定肿瘤球形成率。结果：与亲本细胞相比,OCSLCs高表达磷酸化FoxO3a蛋白,具有更高的肿瘤球形成率［(3.1±0.3)% vs (34.8±6.8)%,P＜0.05］。CAS显著抑制OCSLCs肿瘤球形成能力,并降低FoxO3a磷酸化水平。FoxO3a特异性siRNA转染抑制FoxO3a蛋白表达,拮抗CAS抑制OCSLCs肿瘤球形成作用。结论：降低FoxO3a磷酸化水平参与CAS抑制SKOV3细胞系OCSLCs肿瘤球形成作用。     

重组ING4基因对卵巢癌OVCAR细胞生长抑制作用的实验研究

目的:观察ING4基因转染人卵巢癌OVCAR细胞后对细胞的生长抑制效应。方法:采用ING4的重组腺病毒载体(Ad-ING4)感染人卵巢癌细胞株OVCAR,用RT-PCR法检测ING4在OVCAR细胞中的表达;MTT法和流式细胞技术检测ING4基因表达对OVCAR细胞的生长抑制和凋亡效应;Western印迹法检测ING4对OVCAR细胞中bax、bcl-2、Ki67表达的影响。结果:在OVCAR细胞中ING4基因的表达对OVCAR细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡;Western印迹法检测结果提示卵巢癌组织中ING4基因表达下降的同时,Ki67表达下调,Bax表达上调,Bcl-2的表达下调。结论:转染ING4基因可抑制OVCAR人卵巢癌细胞的增殖,可通过改变Bax,Bcl-2等凋亡相关基因的表达诱导细胞凋亡。