二烯丙基二硫化物对HL-60白血病细胞株VEGF表达及分泌的影响

为了研究二烯丙基二硫化物（diallyl disulfide，DADS）对白血病HL-60细胞株VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白分泌的作用，并从影响VEGF生成的角度探讨DADS的抗白血病机制，应用ELISA法检测药物作用前后白血病HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量；RT-PCR法检测药物作用前后白血病HL-60细胞VEGF mRNA的相对含量。结果表明：HL-60细胞中均有VEGF mRNA的表达和VEGF蛋白的分泌；与空白对照相比，DADS3个浓度组（0，625，1，25，2，5μg／ml）作用HL-60细胞48小时和72小时均能下调HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌（P〈0.01）。3个浓度组间差异显著（P〈0．01），其下调HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌效果与浓度相关（r〉0.9，P〈0．01）。结论：DADS可能通过抑制VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌发挥抗白血病效应。     

MMP-2和MMP-9在急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

本研究探讨急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者骨髓细胞中基质金属蛋白酶-2和-9（MMP-2,MMP-9）的表达及临床意义。采用半定量RT-PCR方法检测初治、复发B-ALL患者和正常对照骨髓中单个核细胞MMP-2,MMP-9mRNA的表达。采用明胶酶谱检测B-ALL患者和正常对照骨髓单个核细胞孵育上清中MMP-2,MMP-9的酶活性。结果表明,初治、复发组B—ALL患者中MMP-2表达率明显高于正常对照组（P〈0．05）;MMP-9表达率明显低于正常对照组（P〈0．05）。髓外浸润组患者MMP-2和MMP-9表达率均明显高于无髓外浸润组（P〈0．05）,而MMP-2／MMP-9（＋）组髓外浸润发生率明显高于MMP-2／MMP-9（-）组。高危组B—ALL患者MMP-9表达率明显高于标危组,而两组间MMP-2表达率无显著性差异（P〉0．05）。结论：B-ALL患者白血病细胞可以产生MMP-2,MMP-9,可能参与了B-ALL的髓外浸润,MMP-9表达可能提示预后不良。     

Survivin在白血病细胞中的表达及GM-CSF对其影响的研究

本研究旨在探讨凋亡存活蛋白survivin在白血病的原代细胞和白血病细胞系中的表达情况，并观察粒-巨噬细胞细胞集落刺激因子（GM-CSF）对其的影响。用RT-PCR方法检测37例白血病患者、10例正常成人骨髓和3种白血病细胞系（K562、HL-60、U937）中survivin的表达。以HL-60细胞为对象，加入合适浓度的GM-CSF，用RT-PCR和Western blot分别检测加药前后surivin mRNA和蛋白水平的变化。结果显示：37例白血病患者中有25例表达survivin，阳性率为67．6％，其中急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞中survivin mRNA表达阳性率为73．3％，高于急性髓系白血病（AML），但均高于正常对照组（20．0％）（P〈0．05）。3种细胞系K562、HL-60和U937全部表达survivin。合适浓度的GM-CSF作用2天后，HL-60细胞中survivin的表达明显升高，其中mRNA水平升高了26％，蛋白水平升高了49％。结论：suvivin在白血病的原代细胞和细胞系中均有较高表达，而GM-CSF能显著提高HL-60细胞中survivin的水平。     

人髓性白血病细胞VEGF及其受体的检测

目的 建立人髓性白血病细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体KDR和Flt-1在基因转录和蛋白质水平上的检测方法,为临床判断白血病患者的预后提供技术支持。方法 用RT-PCR测定K562和HL-602种白血病细胞VEGF及其受体mRNA表达,免疫组织化学染色法检测VEGF及其受体蛋白表达;ELISA法检测细胞上清液中VEGF的分泌水平。结果 2种髓系白血病细胞均检测到VEGF的基因转录和蛋白表达。HL-60细胞同时表达Fh-1和KDR2种受体,而K562细胞仅有受体Flt-1的表达,未见受体KDR的mRNA和蛋白表达。细胞培养上清液中检出VEGF的高分泌。结论 VEGF及其受体在髓性白血病细胞表达增高,但不同细胞系VEGF受体表达有差异。VEGF及其受体在白血病的发生、发展中可能起重要作用。     

As2O3影响慢性粒细胞白血病细胞VEGF,MMP-2 mRNA表达的实验研究

目的研究As2O3对慢性粒细胞白血病（CML）骨髓单个核细胞，血管内皮生长因子（VEGF），基质金属蛋白酶2（MMP-2）mRNA及培养上清VEGF蛋白表达的影响作用，从而对白血病的发病机制及As2O3的作用机制进行探讨。方法用RT—PCR技术检测20例CML患者与5例正常人骨髓细胞MMP-2，VEGFmRNA的表达。用ELISA方法检测20例CML患者骨髓单个核细胞经As2O3作用前、后培养上清液VEGF水平的变化，用RT—PCR法检测VEGF，MMP-2mRNA表达阳性患者骨髓单个核细胞mRNA含量的变化。结果CML患者VEGF，MMP-2mRNA水平明显高于正常对照者，5×10^-6mol／L As2O3可明显下调CML患者骨髓单个核细胞培养上清VEGF蛋白的表达（P〈0．05）；As2O3对骨髓单个核细胞VEGF，MMP-2mRNA的表达有下调作用，并为剂量依赖性。结论CML中VEGF与MMP-2mRNA表达异常增高。As2O3下调白血病细胞VEGF，MMP-2的表达可能是其抗白血病作用的机制之一。     

基质金属蛋白酶9在急性髓系白血病患者中的表达意义及其与血管内皮生长因子相关性的研究

基质金属蛋白酶9(MMP-9)是研究肿瘤浸润转移的热点,因其能降解细胞外基质成分中的Ⅳ型胶原而被认为在实体瘤的侵袭、转移过程中发挥了重要作用.MMP-9在造血系统尤其是恶性血液病中作用的报道日渐增多,而且与血管内皮生长因子(VEGF)关系密切,它们有可能协同参与了白血病的髓外浸润.但在急性髓系白血病(AML)中的研究国内鲜见报道,我们通过检测AML患者骨髓单个核细胞的MMP-9与VEGF的表达情况,探讨AML患者VEGF与MMP-9的相互关系,分析其与临床病理的关系和对预后的影响.     

白血病患者骨髓中CTGF、CYR61、VEGF-C、VEGFR-2mRNA、蛋白的表达及其临床相关性研究

本研究旨在探讨白血病患者骨髓单个核细胞中结缔组织生长因子（CTGF）、富含半胱氨酸蛋白61（CYR61）、血管内皮生长因子-c（VEGF—C）和血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）mRNA及蛋白的表达水平以及它们在白血病发生、发展、浸润转移中的作用和临床意义。初发白血病100例患者,26例完全缓解后急性白血病患者,30例对照者纳入本研究。收集骨髓单个核细胞,应用realtimePCR和Westernblot分别检测白血病患者及对照者CTGF、CYR61、VEGF-C、VEGFR-2mRNA及蛋白的表达水平。结果表明,急性白血病患者骨髓中上述4种因子mRNA、蛋白水平明显高于对照组（P〈0．05）。急性白血病缓解后只有CTGFmRNA表达与对照组比较有差异（P〈0．05）,且CTGFmRNA表达在急性白血病不同骨髓增生中有统计学意义（P〈0．05）。CTGF蛋白表达在白血病不同染色体核型组有差异（P〈0．05）,CYR61和VEGF—C蛋白表达在急性白血病不同程度骨髓增生组中比较差异有统计学意义（P〈0．05）。CML组CTGF、CYR61、VEGF—CmRNA和蛋白表达高于对照组（P〈0．05）,CLL组CTGF和CYR61蛋白表达水平高于对照组。在性别、髓外浸润等因素分组比较中,上述4种因子mRNA和蛋白表达水平比较均无差异有统计学意义（P〉0．05）。在相关性分析中,白血病患者上述4种因子mRNA表达水平与骨髓原始细胞计数呈正相关（P〈0．05）,CTGF、CYR61、VEGF—C蛋白表达水平与其呈正相关（P〈0．05）。除了VEGFR-2与骨髓原始细胞计数无相关性外,这些因子的mRNA及蛋白表达水平与骨髓原始细胞计数呈正相关。结论：CYR61、CTGF、VEGF-C和VEGFR-2mRNA和蛋白表达在急慢性白血病中都有作用。在急性白血病（AML／ALL）中上述4种因子高表达,在CML中除了VEGFR-2外其他因子也高表达,多数因子的表达与骨髓原始细胞计数呈正相关。联合阻断这些相关的血管性因子可能对白血病靶向治疗有重要作用。     

长链非编码RNA LINC01268对急性髓系白血病细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨长链非编码RNA LINC01268对急性髓系白血病（AML）细胞凋亡的影响及其相关机制。方法：采用q RT-PCR检测AML患者外周血样本及AML细胞系HL-60、KG-1中LINC01268和miR-217的表达水平;将HL-60细胞分为pc DNA3.1-NC、pc DNA3.1-LINC01268、si-NC、si-LINC01268、miR-NC、miR-217 mimics、si-LINC01268+inhibitorNC和si-LINC01268+miR-217 inhibitor共8组。采用q RT-PCR检测转染后细胞中LINC01268和miR-217 mRNA的表达;双荧光素酶报告实验检测LINC01268与miR-217的靶向关系;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡;Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白p21、Bcl-2、Bax、caspase-3及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。结果：LINC01268在AML患者外周血样本、AML细胞系HL-60和KG-1中表达量均明显升高（P<0.05）,miR-...     

初治白血病患者april mRNA的表达研究

本研究旨在检测27例确诊白血病患者april mRNA的表达水平,为april分子靶向治疗在白血病中的应用提供理论基础。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者april mRNA的相对表达水平,分析其在各型白血病中的表达变化。结果表明：急性白血病（AL）患者april mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）;急性髓系白血病（AML）患者april mRNA的表达高于正常对照组,其差异有统计学意义（p〈0.05）,且april mRNA的表达水平与外周血白细胞计数（WBC≥20.0×109/L）呈正相关（p〈0.05）,与患者的髓外侵犯及CD34表达无明显相关性（p〉0.05）。除外急性早幼粒细胞白血病（APL）病例,april mRNA的表达水平与AML患者的化疗敏感性呈负相关（p〈0.05）。急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性髓系白血病（CML）患者april mRNA的表达与正常对照组相比,差异无统计学意义（p〉0.05）。结论：AML患者存在着april mRNA的过表达。AML细胞产生的APRIL蛋白可能在AML细胞的异常增殖及化疗耐药中起着重要作用。     

神经毡蛋白-1在急性髓系白血病细胞中的表达和作用

本研究旨在探索神经毡蛋白(neuropilin-1,NRP-1)和NRP-2在髓系白血病细胞中的表达及抑制NRP-1基因表达后对白血病细胞生长和迁移的影响.采用RT-PCR观察NRP-1和NRP-2 mRNA在24例急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(MNC)及7种髓系白血病细胞系中的表达;以小干扰RNA(siRNA)干扰NRP-1基因在HEL细胞的表达,用MTT和细胞迁移试验观察细胞增殖、迁移的变化.结果显示NRP-1在24例AML患者骨髓MNC中表达,其阳性率为100%,显著高于正常对照组67%(p=0.03).79%AML患者表达NRP-2,67%正常人表达NRP-2,两者无明显差异(p=0.6).NRP-1的表达与AML患者骨髓、外周血原始细胞比例呈正相关(r=0.5,r=0.4,p＜0.05).NRP-1和NRP-2 mRNA分别在6/7和3/7种髓系白血病细胞系表达.用siRNA转染HEL细胞24小时后NRP-1 mRNA和蛋白表达水平明显降低,当有VEGF165作用时,对照组细胞增殖明显增加,而干扰组无变化(MTT值对照组vs干扰组0.6±0.01 vs 0.49±0.02,p＜0.001).转染24小时后干扰组细胞迁移显著降低,其迁移细胞数干扰组vs对照组为500±17 vs 123±7(p＜0.001).结论NRP-1在AML患者骨髓MNC中表达增高,并在髓系白血病细胞的增殖和迁移中起重要作用.     

血管内皮生长因子及其受体在急性髓系白血病动物模型中表达的动态分析

本研究旨在探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）在急性髓系白血病（AML）发生和发展中的作用。建立急性髓系白血病（AML）SCID小鼠模型,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和逆转录PCR（RT—PCR）动态检测不同时间点正常小鼠和白血病小鼠外周血清VEGF及其受体VEGFR-2mRNA表达水平的变化。结果表明：正常小鼠和白血病小鼠均表达VEGF及VEGFR-2mRNA,白血病组外周血清VEGF浓度和VEGFR-2mRNA的表达均显著高于正常组小鼠（P〈0．05）,而且随着病程的进展而逐渐升高。结论：VEGF及VEGFR-2在急性髓系白血病中存在有异常表达,对AML的发生和发展可能起一定的作用。     

急性白血病类胰蛋白酶与血管内皮生长因子的相关性研究

为了探讨类胰蛋白酶在急性白血病血管新生中的作用,应用免疫细胞化学方法检测了61例急性白血病患者白血病细胞的类胰蛋白酶及血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况,并对二者之间的关系进行了分析.结果表明：51例急性髓细胞白血病中（M13例,M215例,M320例,M45例,M58例）有15例患者的白血病细胞类胰蛋白酶表达为阳性,阳性率为29.4%,其中包括M11例,M2 7例,M3 5例,M52例.10例急性淋巴细胞白血病患者类胰蛋白酶表达均为阴性.急性髓细胞白血病患者类胰蛋白酶阳性的细胞数与其年龄、外周血白细胞数、外周血和骨髓原始细胞数以及中性粒细胞过氧化物酶之间没有相关性.急性髓细胞白血病患者中有41例VEGF表达阳性（80.4%）;急性淋巴白血病患者有3例VEGF表达阳性（30%）.急性髓细胞白血病M2亚型的患者中,类胰蛋白酶与VEGF的表达均明显增高且二者之间具有显著相关性（r=0.65,P＜0.05）.结论：类胰蛋白酶可以作为急性髓系白血病的特异性标记物,它可能参与了急性髓细胞白血病M2亚型的血管新生.     

MMP-2、VEGF在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨MMP-2和VEGF在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌发生发展的关系,本研究拟从基因和蛋白水平研究二者在卵巢癌组织中的表达情况。方法运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学染色法检测MMP-2和VEGF在正常卵巢组织、卵巢癌组织中的表达情况。结果卵巢癌组织中MMP-2和VEGFmRNA表达水平及蛋白阳性率均高于正常卵巢组织（P〈0.05）,MMP-2、VEGFmRNA表达水平及蛋白阳性表达率与卵巢癌的浸润程度、临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。结论正常卵巢组织和卵巢癌组织中MMP-2、VEGFmRNA和蛋白含量的变化是一致的;MMP-2、VEGF可能参与了卵巢癌的发生、侵袭和转移;MMP-2、VEGF定量检测可能成为卵巢肿瘤恶化的分子指标及卵巢癌治疗的分子靶标之一。     

MMP-9、TIMP-1及VEGF在大肠癌中的表达与临床病理和预后的相关性研究

目的研究MMP-9、TIMP-1及VEGF在大肠癌组织中的表达与临床病理和预后关系。方法对62例大肠癌患者的手术切除之癌组织和癌周正常组织,应用免疫组织化学方法检测其VEGF、基质金属蛋白酶(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)的表达情况,探讨这些因子表达与临床病理和预后关系。结果在62例大肠癌肿瘤组织:有29例VEGF表达阳性,阳性率46.8%;41例MMP-9表达阳性,阳性率为66.1%;39例TIMP-1表达阳性,阳性率为62.9%。这三种蛋白的表达水平与组织类型、组织分化程度、淋巴结转移和临床分期有统计学相关性(P<0.001)。MMP-9蛋白表达与五年生存率有影响(P<0.01),VEGF和TIMP-1蛋白表达对预后无影响(P>0.05)。结论大肠癌中MMP-9、TIMP-1及VEGF的表达,可能是癌肿发生、生长和浸润转移的重要因素,可作为判断肿瘤恶性程度和预后的重要指标。     

肿瘤相关基因fgfr3mRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义

本研究旨在了解白血病细胞中fgfr3基因的表达水平及其和临床的关系。应用RT—PCR法检测4个白血病细胞系及96例白血病患者和14例对照者骨髓样本中fgfr3mRNA的表达，并分析了其与临床指标及染色体异常的相关性。96例白血病患者包括36例AML，29例ALL和31例CML。结果表明：fgfr3基因在K562和U937细胞中有表达，而在HL-60和SHI-1细胞中无表达。AL组和CML组fgfr3基因的阳性率（分别为46．15％和51．61％）与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。AML组和ALL组fgfr3基因的阳性率（分别为44．44％和48．28％）均高于对照水平，差异有统计学意义（p〈0．05）。fgfr3基因的阳性表达与外周血高白细胞计数（≥20×10^9／L）呈显著性正相关（P〈0．05）。ALL患者中fgfr3基因的表达与bcr／abl融合基因的异常呈显著正相关（r=0．151，P〈0．05）。而AL患者fgfr3基因的阳性表达与染色体预后分组无显著相关性。结论：AL和CML患者均存在fgfr3基因的过表达，提示fgfr3基因可能参与了AL和CML的发病。     

NF-κB在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其与P21,MMP-2和MMP-9表达的关系

本研究应用免疫细胞化学法检测初治急性白血病患者、缓解期患者及正常对照者骨髓细胞中NF κB ,Ras基因编码的P2 1蛋白及MMP 2和MMP 9表达阳性细胞的百分率 ,以明确核因子κB (nuclearfactor kappaB ,NF κB)在急性白血病细胞高表达的意义 ,及其与P2 1,基质金属蛋白酶 2和 9(matrixmetalloproteinase,MMP 2和MMP 9)表达间的关系。结果表明 :初治组NF κB ,P2 1及MMP 2和MMP 9的阳性率明显高于缓解组及正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,而缓解组与正常对照组间没有显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,且NF κB与P2 1蛋白 ,MMP 2和MMP 9表达均呈正相关 (r值分别为 0 .76 7,0 .72 9和 0 .80 3,P <0 .0 5 ) ,说明白血病细胞中NF κB及P2 1蛋白异常高表达。结论 :NF κB经Ras启动活化后可上调MMP 2和MMP 9在白血病细胞的表达 ,使其分解细胞外基质的能力明显升高而释放入血     

小发夹RNA对白血病K562细胞血管内皮生长因子受体Fit-1基因表达的抑制作用

本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长N子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制。采用脂质体介导的方法将构建的人flt-1基N特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用（3418抗性筛选获得阳性克隆;抽提基因组DNA,用PCR方法验证shRNA基因对K562细胞的转染;以RT—PCR和免疫印迹反应检测flt-1mRNA和蛋白表达量的变化;用Boyden小室体外侵袭实验检测白血病细胞的侵袭能力;RT～PCR方法检测白血病细胞MMP-2和MMP-9的表达。结果表明,flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入白血病细胞株K562,G418筛选2周获得阳性克隆;PCR检测证实shRNA基因整合入白血病细胞基因DNA;携有shRNA的flt-1基因能明显下调白血病细胞内flt-1基因mRNA表达水平;设计的2种不同flt-1shRNA序列能不同程度干扰flt—1基因和蛋白在细胞中的表达,两纽阳性细胞中flt-1基因表达抑制率分别为46．1％和65．4％;flt—1 shRNA转染白血病细胞系K562细胞后,MMP-2和MMP-9mRNA表达水平均较转染前明显下降;阳性细胞穿透人工重组基底膜的能力（4．3±1．2）％较对照组（12．7±1．9）％及（9．6±1．7）％明显降低（P〈0．01）。结论：VEGF受体flt-1特异性shRNA的真核表达载体能够高效转染入白血病细胞株K562,有效抑制flt-1基因的表达,并使白血病细胞体外侵袭能力减弱,MMP-2和MMP-9mRNA表达水平下降。这提示VEGF可能通过与其受体结合调控MMP-2和MMP-9的方式,参与白血病细胞的转移。