广防己致大鼠慢性肾小管-间质损伤的实验研究Ⅱ

目的:接前报继续观察广防己提取物诱导大鼠慢性肾损害作用,进一步了解不同剂量的广防己提取物(RAFE)可否引起慢性肾小管-间质损伤。方法:分别用广防己醇提取物25.0,120.0,200.0 mg.kg^-1.d^-1和马兜铃总酸10.0 mg.kg^-1.d^-1给大鼠间断(连续2周,停药1周)灌胃给药22周后,停药4周;分别于给药第17,22,26周留取血、尿和肾组织标本,检测相关肾功能指标;并取肾脏进行形态组织学观察,于给药第17,22,26周对肾组织进行Masson染色,并与马兜铃总酸进行比较。结果:RAFE作用肾组织形态学病变:小、中、大剂量和总酸组主要表现为肾小管功能损害———慢性间质纤维化,这些病理表现与马兜铃总酸所致肾损害极为相似。结论:RAFE小、中、大剂量灌胃给药13周以上可致大鼠慢性肾小管-间质纤维化,其肾功能和肾组织形态表现上与马兜铃总酸所致肾损伤相似,结果提示马兜铃酸是RAFE主要毒性成分。     

广防己提取物致大鼠慢性肾间质纤维化的机制研究

目的：探讨广防己提取物（RAFE）所致的大鼠慢性肾间质纤维化的作用机制。 方法：用广防己提取物（200 mg·kg^-1·d^-1）和马兜铃酸（AA,10.0 mg·kg^-1·d^-1）给予大鼠间断灌胃22周,造成大鼠慢性间质纤维化模型,通过免疫组化方法观察肾小管上皮细胞转分化标志性蛋白角蛋白(CK)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)以及致纤维化因子-转化生长因子（TGF-β₁）在大鼠肾小管间质的表达。 结果：经图像分析, RAFE和AA组肾小管上皮细胞CK较对照组表达减弱,而α-SMA在肾小管上皮细胞及肾间质细胞呈弱阳性表达、Vimentin表达较对照组明显增多；同时RAFE和AA组大鼠肾小管TGF-β₁表达较对照组明显增多,各项指标统计学均有显著性差异。 结论：RAFE参与了肾小管上皮细胞转分化,促进了大鼠慢性肾小管上皮纤维化的发生,其中TGF-β₁对肾小管上皮细胞转分化起到重要作用。RAFE所致大鼠慢性肾小管上皮细胞转分化机制与AA作用相似。     

防己与广防己的鉴别

防己的来源复杂、品种多.因此就其中主要品种防己与广防己的来源、功效、主要成分、鉴别等方面进行了论述.由于国家食品药品监督管理局已通知取消广防己药用标准,所以今后在应用防己时北必须要注意鉴别.通过防己与广防己的生药对比,提出其性状、显微、理化及薄层色谱等鉴别方法.     

广防己毒性的初步研究

目的:研究常用中药广防己的急、慢性毒性,为临床安全使用提供依据,并探讨炮制和复方配伍减毒的可能性。方法:采用经典和常规的急、慢性毒性实验方法,观察广防己70％乙醇提取物对肝、肾、膀胱功能的影响。结果:广防己LD_(50)的95％平均可信限为258.8±20.33g/kg。生化指标与病理切片结果基本一致,未见广防己对肝的实质性损伤;血尿素氮在灌胃给药1周后,黄连炮制组略有下降(P<0.05),灌胃给药2周后复方组也略有下降(P<0.05);血肌酐(Cr)未见升高;病理切片见高、中剂量组有间质纤维化、肾小管上皮细胞坏死、肾小管破损、肾小球硬化等毒性反应,且停药2周仍未见修复,但低剂量组、炮制组、复方组在停药2周后的病理检查标本中均未见肾损害的现象。结论:在中医辨证论治理论指导下按《中国药典》规定的广防己剂量来应用是安全的。     

广防己提取物在大鼠体内的毒代动力学及组织分布研究

目的建立检测广防己提取物中的马兜铃酸-I(AA-I)和马兜铃内酰胺-I(AL-I)的HPLC方法,观察毒性剂量下广防己提取物中 AA-I 及其代谢物AL-I在大鼠体内的变化规律.方法广防己提取物单次灌胃125、62.5、12.5mg/kg,按规定时间采集大鼠血浆、胆汁、尿、粪便及组织样品,HPLC法测定样品中AA-I和AL-I的浓度.同时监测大鼠肝、肾功能及肝、肾的组织形态学变化.结果毒性剂量下的广防己提取物的代谢符合非线性代谢动力学特征,属血管外给药二室开放模型.大、中剂量组的主要代谢参数如下t1/2α分别为1.03h、0.45h,t1/2β分别为6.10h、6.54h,CL分别为3.02、1.41ml/min·kg, AUC分别为33.10、35.22 min/μgoml,Tpeak分别为0.62、1.35h,V/F分别为16.09、11.26.AA-I和AL-I在大鼠体内特异分布并蓄积.广防己提取物对大鼠肾脏的损害呈剂量依赖性.结论毒性剂量下的广防己提取物在大鼠体内的代谢符合非线性代谢动力学特征,大鼠肾损害的程度与肾脏中AL-I浓度的相关性较好.     

滋阴补肾丸对广防己减毒作用的初步研究

目的通过研究滋阴补肾丸对广防己中马兜铃酸A含量的影响，探讨广防己的解毒问题。方法广防己与滋阴补肾丸共煎后，采用RP-HPLC法测定马兜铃酸A的吸收值，观测其含量的变化情况。结果加入滋阴补肾丸后，广防己中马兜铃酸A的含量明显降低。结论滋阴补肾丸可显著降低广防己中马兜铃酸A的含量。     

中药广防己中马兜铃酸的含量测定研究

本文研究了应用薄层层析和紫外分光光度法测定广防己中马兜铃酸的含量,并从广防己中分离了马兜铃酸,经纯化精制成对照品,做了薄层分离效果、点样浓度、回收率试验。此法操作方便、结果准确、重现性好。     

广防己中马兜铃酸Ⅰ的提取工艺优选及真菌发酵对其含量的影响

目的:优化广防己中马兜铃酸Ⅰ的提取工艺,并探讨真菌发酵降低毒性作用的可能性。方法:采用L9(34)正交设计,以提取时间、溶剂倍数、甲醇浓度、提取次数4个因素为考察指标,直接加热回流法提取,采用高效液相色谱法(HPLC)测定广防己及其两种药用真菌(F1菌和F2菌)发酵品溶液中马兜铃酸Ⅰ的含量,流动相为乙腈-1%冰醋酸水溶液(51:49),流速为1.0mL/min,检测波长315nm,柱温30℃。结果:最佳制备工艺为粉末40目,加10倍量60%甲醇直接加热回流提取一次1h;与广防己药材相比,两种发酵品GF1和GF2中马兜铃酸Ⅰ的含量均明显下降,下降率分别为68.67%和52.67%,且有新的色谱峰出现。结论:该工艺马兜铃酸Ⅰ提取率高,稳定性好,提示真菌发酵可能对广防己的减毒具有一定的意义。     

广防己肾毒性实验研究

目的：观察广防己水煎液的急性毒性和慢性肾毒性。方法：急性毒性实验：一次给予大剂量广防己水煎液后,观察小鼠的毒性反应和死亡数,用寇氏法计算LD50;慢性肾毒性实验：分别给正常大鼠灌服大、中、小三个剂量广防己水煎液,60天后测定血肌酐（Scr）、尿β2-微球蛋白（β2-MG）、尿碱性磷酸酶（AKP）、尿溶菌酶（Lys）以了解肾脏受损情况。结果：与空白对照组比较,中、小剂量组上述指标无显著差异,大剂量组尿AKP显著升高（P〈0．05）。结论：广防己毒性较小,按药典规定量长期服用不会造成肾损害,较大剂量则对肾脏有轻微影响。     

保元强肾Ⅱ号胶囊对慢性肾功能衰竭肾小管间质损伤的临床研究

目的:探讨中药保元强肾Ⅱ号胶囊对慢性肾功能衰竭(CRF)的疗效及机理。方法:60例CRF患者随机分为保元强肾Ⅱ号胶囊加洛汀新组(治疗组,30例)及必需氨基酸加洛汀新组(对照组,30例),观察肾功能及肾小管标志蛋白的改变。结果:治疗组显效率及总有效率分别为633%及933%;对照组分别为300%及567%,治疗组疗效明显优于对照组(P<001);治疗组治疗后BUN、SCr及CCr均较治前明显改善,尿视黄醇结合蛋白、尿β2微球蛋白及尿N乙酰氨基葡萄糖苷酶均比治疗前显著降低,TammHorfau蛋白比治疗前显著增高(P<001或P<005)。结论:保元强肾Ⅱ号胶囊对肾小管间质损伤有明显的改善作用,从而改善肾功能,提高疗效。     

广防己及其混伪品的薄层色谱鉴别

采用薄层色谱法对广防己及其混伪品进行定性鉴别。方法简便，结果明显、可靠。     

粉防己及其替代广防己的安全性质疑

国家食品药品监督管理局决定，以粉防己替代广防己，但有三点值得注意：1)粉防己中硝基菲类物质的分布特征；2)马兜铃酸Ⅰ以外的其他马兜铃酸类及其衍生物的毒性特性；3)粉防己急性毒性大而快，是否与粉防己与硝基菲类物质叠加的毒性有关。为科学评价粉防己及其替代广防己的安全性提供实验依据。     

不同配伍药物拮抗广防己肾毒性的实验研究

目的：观察广防己分别与大黄、川芎、桂枝、茯苓、黄芪配伍后肾毒性的改变情况。方法：广防己分别与上述5味中药配伍，灌服大鼠60d后，测定血肌酐（Scr）、尿β2-微球蛋白（β2-MG）、尿碱性磷酸酶（AKP）、尿溶茵酶（Lys），并观察肾脏病理，与灌服广防己组大鼠进行比较。结果：与单味广防己组比较，配伍桂枝组和配伍黄芪组尿AKP有显著降低（P〈0．05），各配伍组组织病理学检查均无异常。结论：各配伍药物均可减轻其副作用，以桂枝、黄芪最为明显。     

不同配伍药物拮抗广防己肾毒性的实验研究

目的：观察广防已分别与大黄、川芎、桂枝、茯苓、黄芪配伍后肾毒性的改变情况。方法：广防已分别与上述5味中药配伍,灌服大鼠60d后,测定血肌酐(Scr)、尿β_2-微球蛋白(β_2-MG)、尿碱性磷酸酶(AKP)、尿溶茵酶(Lys),并观察肾脏病理,与灌服广防已组大鼠进行比较。结果：与单味广防已组比较,配伍桂枝组和配伍黄芪组尿AKP有显著降低(P＜0.05),各配伍组组织病理学检查均无异常。结论：各配伍药物均可减轻其副作用,以桂枝、黄芪最为明显。     

长期服用青木香或冠心苏合丸对大鼠肝、肾功能的影响

目的:评价青木香的毒性,为临床合理用药提供实验依据。方法:长期给予不同组大鼠2.5 g.kg^-1的青木香、2.5 g.kg^-1的冠心苏合丸(含青木香)和2.5 g.kg^-1的冠心苏合丸(不含青木香),检测各组大鼠的凝血酶原时间(PT)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(Crea)和尿素氮(BUN)等指标,并对肾脏、肝脏、胃和膀胱进行病理学检查。结果:青木香和冠心苏合丸(含青木香)组PT,ALT,AST,ALB,ALP,Crea和BUN等指标均发生显著性改变,病理检查发现肝、肾均有坏死现象,胃和膀胱均发生癌变。结论:青木香和冠心苏合丸(含青木香)具有强烈的毒性,均能损害大鼠的肾脏和肝脏,并引起胃和膀胱的肿瘤。     

粉防己伪品异叶马兜铃的生药鉴别

对粉防己的伪品异叶马兜铃的性状、显微及理化等生药特征进行了对比鉴别     

青木香和冠心苏合胶囊中马兜铃酸A的药动学研究

目的研究青木香及复方制剂冠心苏合胶囊中马兜铃酸A在小鼠体内的药动学特点及小鼠在ig给予含相同量马兜铃酸A的青木香和冠心苏合胶囊后,马兜铃酸A的吸收、分布规律的差异。方法采用RP-HPLC法测定血浆中马兜铃酸A的量。色谱条件色谱柱为DiamonsilTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(72∶27∶1),体积流量为1.0mL/min,检测波长为315nm,柱温为20℃。结果药动学实验结果显示小鼠分别ig给予青木香和冠心苏合胶囊(相当于2.5mg/kg马兜铃酸A)后,其体内的药动学房室模型均符合一室模型,青木香中马兜铃酸A主要药动学参数t1/2ka、t1/2ke,tmax、AUC、Cmax分别为5.103min、43.63min、17.89min、80.45(μg·min)/mL、0.9168μg/mL;冠心苏合胶囊中相应的参数分别为5.294min、43.50min、18.32min、33.08(μg·min)/mL、0.3818μg/mL。结论小鼠给予含马兜铃酸A相同剂量的青木香和冠心苏合胶囊后,冠心苏合胶囊中马兜铃酸A的Cmax明显低于青木香中的Cmax,说明复方配伍作用可减少马兜铃酸A的吸收。     

冠心苏合丸中土木香替代青木香的比较药动学研究

目的比较冠心苏合丸系列组方(含青木香的冠心苏合丸、含土木香的冠心苏合丸及不含木香的冠心苏合丸)灌胃比格犬后,其有效成分肉桂酸药动学过程的差异。方法建立高效液相色谱法测定健康比格犬血浆中肉桂酸的方法;采集比格犬灌服冠心苏合丸系列组方后0～8 h的血浆,测定血药浓度;用DAS2.1软件模拟房室模型并计算药动学参数。结果含肉桂酸的血浆样品在0.031 25～32 mg/L与峰面积的线性关系良好(r=0.999 96);最低检测限为31.25μg/L;提取回收率在90%以上;日内精密度与日间精密度均小于5%。含青木香、含土木香以及不含木香的3种冠心苏合丸中有效成分肉桂酸在犬体内均符合一级吸收双室模型;含土木香冠心苏合丸以及不含木香冠心苏合丸组的肉桂酸峰浓度和药时曲线下面积有大于含青木香冠心苏合丸组的趋势,但三者之间无显著性差异。结论比格犬灌服冠心苏合丸系列组方后,血浆中有效成分肉桂酸的药动学过程大体一致,原方中的青木香被土木香替换或者去掉青木香,对该药主要有效成分肉桂酸的药动学过程无明显影响。