N-乙酰半胱氨酸通过阻断Nrf2/Keap1通路抑制H2O2处理的佐剂性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞增殖

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对低浓度过氧化氢(H2 O2)处理的佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(AA-FLS)增殖的影响及机制.方法 SD大鼠分为正常对照组和模型组(均为10只),模型组采用足趾皮下注射Freund完全佐剂造模,28 d后处死大鼠.硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛(MDA)含量、羟胺法...     

黄芪甲苷Ⅳ通过激活Nrf-2/HO-1信号通路抑制氧化应激介导的人SY5Y细胞凋亡

目的 探讨黄芪甲苷Ⅳ(AST4)对H₂O₂诱导的人SY5Y细胞氧化应激损伤以及细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养SY5Y细胞,用H₂O₂诱导建立氧化应激模型,分为PBS组、 H₂O₂模型组和ASTⅣ组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡。取各组细胞的上清液,比色法测定丙二醛(MAD)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量。免疫荧光细胞化学染色法检测裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)和核因子E2相关因子(Nrf-2)的表达和分布。Western blot法检测细胞凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)和c-caspase,以及氧化应激信号通路Nrf-2在胞质内和细胞核内的表达及下游蛋白血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白水平。结果 AST4对处于氧化应激损伤状态下的SY5Y细胞具有保护作用,能够减少MAD含量,增加GSH和SOD的含量。AST4增...     

芬戈莫德(FTY720)通过激活Nrf2/HO-1通路促进大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复

目的 研究芬戈莫德(FTY720/fingolimod)对脑缺血再灌注损伤的治疗作用并探索其保护机制.方法 60只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤(MCAO/R)模型组及FTY720组.MCAO/R组和FTY720组用Longa缝合法建立MCAO/R模型.采用改良神经功能损伤评分法评估大鼠神经功能;HE染色观...     

抗氧化应激转录因子-Nrf2的研究进展

细胞毒物、致癌物以及亲电子试剂在外界环境中无处不在,这些物质及其代谢产物直接或间接干扰DNA、蛋白质和脂质等生物大分子的生理功能,参与各种疾病包括肿瘤、老化、哮喘、急性肺损伤、动脉粥样硬化、神经退行性疾病和自身免疫病等疾病的病理生理过程,时刻威胁人类健康。为了对抗各种外来物质的攻击,细胞在进化过程中逐渐获得了对抗这些毒性物质的防御能力。其中一个对抗氧化应激最重要的细胞防御机制是由核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)所介导的,Nrf2通过与胞浆蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein 1,Keap1)以及抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)相互作用,启动下游编码抗氧化蛋白和II相解毒酶的基因表达,发挥细胞保护作用。     

尿石素A(urolithin A)通过激活Nrf2通路和自噬抑制高脂诱导的肝细胞炎症反应及氧化应激

目的 研究尿石素A(UA)对高脂诱导的肝细胞炎症以及脂肪堆积的作用及机制.方法 采用核因子E2相关因子2(Nrf2)短发夹RNA (shRNA)慢病毒感染,建立稳定敲减Nrf2的L02肝细胞系.空载体对照细胞及敲低Nrf2的L02细胞给予游离脂肪酸(FFA)建立高脂细胞模型、BODIPY493/503染色检测细胞内脂肪...     

三白草酮通过调控海马Nrf2/HO-1表达减少酒精戒断大鼠抑郁样行为

目的：探讨三白草酮(sauchinone,Sau)对酒精戒断大鼠抑郁样行为可能的影响及其机制。方法：取成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为正常对照组、酒精戒断模型组、低剂量Sau治疗组和高剂量Sau治疗组,每组8只。正常对照组腹腔注射等体积生理盐水,其余3组每日1次腹腔注射酒精3 g/kg,连续28 d,然后戒断3 d诱导酒精戒断模型。在戒断期间,Sau低、高剂量治疗组分别每日1次腹腔注射5和25 mg/kg Sau,连续3 d。末次给药30 min后通过蔗糖偏好实验、悬尾实验(tail suspension test,TST)和强迫游泳实验(forced swimming test,FST)检测大鼠行为学变化;采用商品化试剂盒测定海马组织中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;Western blot检测海马核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related fac...     

小豆蔻素调节Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路对妊娠糖尿病大鼠氧化应激损伤的影响

目的 探究小豆蔻素（CAR）调节核因子e2相关因子2/血红素加氧酶-1/核因子-κB(Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路对妊娠糖尿病（GDM）大鼠氧化应激损伤的影响。方法 实验分为对照组（Control组）、妊娠糖尿病模型组（GDM组）、低剂量CAR组（L-CAR组）、高剂量CAR组（H-CAR组）,高剂量CAR+Nrf2抑制剂Brusatol组（H-CAR+BR组）,每组12只。采用血糖仪测定大鼠空腹血糖（FBG）;胰岛素放射免疫分析试剂盒检测大鼠胰岛素（FINS）水平;试剂盒检测血清天门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）以及总抗氧化能力（T-AOC）;试剂盒测定肝脏组织谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）水平;ELISA法测定血清炎性因子-肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-6)水平;H-E染色法检测肝脏组织病理变化;western blot法检测大鼠肝脏组织Nrf2、HO-1、NF-κB p65、p-...     

阿魏酸钠通过miR-216b-3p/Nrf2通路减轻缺氧缺血胚胎大鼠氧化应激反应

目的:探究阿魏酸钠(SF)通过miR-216b-3p/Nrf2通路对缺氧缺血性脑病(HIE)胚胎大鼠大脑的干预作用以及减轻氧化应激损伤的作用机制。方法:将成年雌性SD大鼠和雄鼠,按照3∶1比例合笼获得怀孕的雌鼠。然后将孕鼠分为假手术组(sham)、缺氧缺血性脑病模型组(HIE)、SF低剂量组(HIE+SF-L)和SF高剂量组(HIE+SF-H)。通过无创止血钳夹闭子宫两侧动脉和卵巢血管法制备胚胎大鼠HIE模型。SF治疗组腹膜腔注射SF。采用HE染色观察胚胎大鼠大脑皮质的病理变化;免疫荧光观察核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、过氧化还原酶1(PRDX1)的表达情况;Western Blot检测胚胎大鼠脑组织中Nrf2和PRDX1蛋白的表达;real time RT-PCR检测miR-216b-3p的表达以及Nrf2和PRDX1的mRNA表达;WST-8法和TBA法检测脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与sham组对比,HIE组胚胎大鼠的大脑损伤加重,病理改变明显;HIE组中Nrf2蛋白表达和mRNA水平降低(P<0.05),PRDX1的蛋白水...     

槲皮素对大鼠子痫前期模型血管内皮损伤及Nrf2/ARE信号通路的影响

目的 探讨槲皮素(QU)对子痫前期(PE)模型大鼠血管内皮损伤及核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响.方法 40只雌性大鼠与可育雄性大鼠交配,妊娠第0天(E0d)孕鼠分为对照组、QU组、脂多糖(LPS)组、QU+LPS组,每组10只.LPS组、QU+LPS组E0d开始输液泵尾静脉输入...     

盐酸羟考酮激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路抑制氧化应激缓解大鼠神经病理性疼痛

目的 探讨盐酸羟考酮对脊髓损伤大鼠氧化应激的影响及神经性病理疼痛的作用。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、脊髓损伤模型组（SCI组）和盐酸羟考酮组（OHI组）,Allen’s方法建立脊髓损伤大鼠模型。于实验开始前1d及造模后1d、3d、7d、14d对各组大鼠进行BBB评分,进行热缩爪潜伏期和机械性缩爪潜伏期的测定;利用HE染色观察脊髓损伤病理变化;免疫荧光法检测活性氧ROS的表达;ELISA检测血清中SOD、MDA、GSH-PX的含量;TUNEL法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Nrf2、Keap1、HO-1的表达水平。结果 盐酸羟考酮抑制SCI大鼠病理损伤,缓解神经病理性疼痛,抑制ROS的释放,抑制MDA的分泌,促进SOD、GSH-PX的释放,上调Nrf2、HO-1的表达,下调Keap1的表达。结论 盐酸羟考酮通过激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路抑制氧化应激,缓解SCI大鼠神经病理性头痛,降低病理损伤。     

苹果多酚通过调控Keap1/Nrf2通路减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的：探讨苹果多酚(AP)调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)通路对脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法：按照随机数字表法将SD大鼠分为对照(control)组、模型(model)组、低剂量(25 mg/kg)AP组(AP-L组)、高剂量(100 mg/kg)AP组(AP-H组)、地塞米松(DEX)组和AP-H+ML385(Nrf2抑制剂)组,每组12只。各组大鼠根据分组给药,每天腹腔注射给药1次,持续给药14天,control组、model组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。末次给药1 h后,除control组外,其它组大鼠均向气管内注射LPS以构建ALI模型,control组大鼠的气管内注射等体积的生理盐水,造模24 h后,收集大鼠肺泡灌洗液、血清及双侧肺组织用于实验。检测肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞数;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;HE染色观察大鼠肺组织病理损伤情况;检测大鼠肺组织湿重/干重比;试剂盒检测大鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化...     

人参皂苷Rg1调节Nrf2/ARE信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1(GRg1)调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件（ARE）信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）的作用。方法 将雌性孕SD大鼠随机分为正常组（Normal组）、ICP模型组（Model组）、低剂量GRg1组（GRg1-L组,20 mg/kg GRg1）、高剂量GRg1组（GRg1-H组,40 mg/kg GRg1）、高剂量GRg1+Nrf2抑制剂全反式维甲酸（ATRA）组（GRg1-H+ATRA组,40 mg/kg GRg1+10 mg/kg ATRA）,每组12只。采用苯甲酸雌二醇、黄体酮联合注射的方式建立大鼠ICP模型。给药结束后ELISA法检测大鼠血清总胆红素（TBIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）和总胆汁酸（TBA）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-1β(IL-1β)及肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平。HE染色观察大鼠肝切片的病理学变化。免疫印迹法检测大鼠肝组织Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达。结果 与Normal...     

基于Nrf2/ARE信号通路探讨辛伐他汀减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的作用

目的:探讨辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及其对核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的调控机制.方法:SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、实验组、阳性对照药地塞米松干预组(DXMS),每组10只,实验组、DXMS组分别腹腔注射1 ml辛伐他汀溶液(5 m...     

MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

 目的:研究肌原纤维形成调节因子1 (MR-1)是否通过抑制蛋白激酶R样内质网激酶 (PERK)/核因子E2相关因子2（Nrf2）途径减轻缺氧/复氧 (H/R)诱导的心肌细胞凋亡。方法:在原代培养的乳大鼠心肌细胞H/R模型上,采用Annexin V/PI双标法检测心肌细胞的凋亡率;以Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、磷酸化PERK、Nrf2、活化转录因子4 (ATF4)、C/EBP同源蛋白 (CHOP)、Bcl-2和Bax的蛋白水平,研究过表达或敲低对于H/R致心肌细胞凋亡的影响及其与PERK/Nrf2途径活化的关系。结果:H/R引起心肌细胞凋亡;过表达MR-1减轻H/R引起的细胞凋亡 (P<0.01),下调CHOP表达 (P<0.05),引起Bcl-2/Bax值升高 (P<0.01),并抑制H/R诱导的PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4表达 (P<0.01)。敲低MR-1加重H/R引起的细胞凋亡 (P<0.01)、CHOP表达上调 (P<0.05)和Bcl-2/Bax值下降 (P<0.01),并加重H/R诱导的PERK磷酸化 (P<0.05)、Nrf2核转位和ATF4表达 (P<0.01)。结论:MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨lncRNA H19对支原体感染肺炎小鼠肺组织的影响北大核心CSCD

目的:基于核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路探讨lncRNA H19对支原体感染肺炎(MPP)小鼠肺组织的影响。方法:将60只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为对照组、MP组、si-NC组和si-H19组。si-NC组、si-H19组鼻腔分别滴入阴性对照siRNA、lncRNA H19 siRNA。除对照组外,其余组鼻腔滴入MP菌液构建MPP模型,对照组滴入等量培养基。1次/d,连续3 d。同时构建支原体感染A549细胞模型,将A549细胞分为对照组、MP组、si-NC组、si-H19组、pcDNA-NC组和pcDNA-H19组。各组分别转染对应的RNA及质粒。除对照组外,其余组使用MP菌液感染A549细胞。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变;qRT-PCR检测肺组织和细胞中lncRNA H19 mRNA的表达;ELISA检测肺组织和细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量;免疫组化染色观察小鼠肺组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达;细胞单克隆形成、MTT法及Annexin V-FITC/PI染色检测细胞增殖、凋亡能力;Western blot检测肺组织和细胞中Nrf2、HO-1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达。结果:支原体感染肺炎小鼠实验中:与对照组相比,MP组、si-NC组双肺塌陷呈灰白色,镜下肺泡大量增生,内有充血及炎症细胞浸润;lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、MMP-9、Nrf2、HO-1蛋白水平升高,CyclinD1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);敲减lncRNA H19后,si-H19组情况较MP组肺部损伤有所改善,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、MMP-9蛋白水平降低,CyclinD1、Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05)。同时支原体感染A549实验与支原体感染小鼠肺组织实验结果一致。与对照组相比,MP组细胞增殖能力降低,凋亡能力提高,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Nrf2、HO-1蛋白水平升高,CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05);敲减lncRNA H19后,si-H19组细胞增殖能力提高,凋亡能力降低,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平降低,CyclinD1、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05);过表达lncRNA H19后,pcDNA-H19组细胞增殖能力降低,凋亡能力提高,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平升高,CyclinD1、Nrf2、HO-1蛋白水平降低(P<0.05)。结论:lncRNA H19在支原体感染肺炎小鼠肺组织中表达上调,敲降lncRNA H19能够减轻小鼠肺部炎症反应,促进细胞增殖并抑制其凋亡,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

Nrf2/HO-1在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤中的作用

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧化酶-1 (HO-1)在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤过程中的表达变化及意义。 方法采用随机数字表法将45只成年雄性SD大鼠分为3组：假手术组(Sham组)、模型组(Control组)、远隔缺血后处理组(RIPost组),每组15只。Control组大鼠建立窒息性心肺复苏脑损伤模型,RIPost组大鼠在自主循环恢复后行肢体远隔缺血后处理。在自主循环恢复后24 h分别采用苏木精-伊红染色、酶联免疫吸附试验检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE),观察脑组织的损伤情况;Western Blotting、免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR检测脑组织Nrf2、HO-1蛋白及其mRNA表达情况。 结果与Sham组相比,Control组呈急性缺血性改变,海马区神经元有明显的损伤,血清NSE含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),而RIPost组病理学改变轻于Control组,血清NSE含量也较Control组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);Control组、RIPost组的Nrf2核蛋白和HO-1蛋白表达均高于Sham组,且RIPost组HO-1蛋白表达显著高于Control组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。实时荧光定量PCR显示Control组及RIPost组Nrf2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);RIPost组HO-1 mRNA的表达较Control组升高更显著,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论远隔缺血后处理可减轻大鼠心肺复苏脑损伤,其作用机制可能与上调大鼠Nrf2 /HO-1通路有关。     

白皮杉醇通过激活Nrf2/HO-1通路减轻糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应

目的 探讨白皮杉醇对糖尿病大鼠视网膜的影响及机制.方法 雄性SD大鼠30只,按60 mg/kg腹腔一次性注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病模型.模型诱导成功后,糖尿病大鼠随机分成三组:糖尿病组、白皮杉醇组(200 mg/kg)及二甲双胍组(75 mg/kg,阳性对照)灌胃治疗,另取10只正...     

白芍总苷调控Nrf-2/HO-1信号通路对支气管哮喘小鼠气道重塑的影响

目的：探究白芍总苷（TGP）对支气管哮喘模型小鼠气道重塑的影响及潜在机制。方法：将50只小鼠随机分为对照组（Control组）、模型组（OVA组）、TGP低剂量组（TGP-L,460 mg/kg）、TGP高剂量组（TGP-H,920 mg/kg）、TGP+ML385组（TGP 920 mg/kg+ML385 30 mg/kg）,每组10只。采用卵清白蛋白（OVA）致敏和激发两个阶段建立哮喘小鼠模型。在每次激发前1 h,TGP各剂量组灌胃相应剂量的TGP混悬液,TGP+ML385组给予30 mg/kg的ML385和920 mg/kg的TGP灌胃,连续给药8周,实验过程中观察各组小鼠的行为学变化,最后一次激发24 h后收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,ELISA检测BALF中TGF-β1、半胱氨酰白三烯1(CysLT1)、半胱氨酰白三烯受体1(CysLTR1)水平;检测肺匀浆中总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性;HE和AB-PAS染色观察肺组织病理学变化;RT-qPCR检测肺组织TGF-β1、基质金属蛋白酶9(...     

葛花总黄酮通过调控Keap1-Nrf2/HO-1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨葛花总黄酮(total flavonoids of Pueraria lobate,TFF)对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响及机制.方法 雄性SD大鼠60只,利用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型.糖尿病大鼠随机分成三组:糖尿病组(DM)、TFF组(200 mg/kg)及二甲双胍组(Met,75 mg/kg,阳性对照)灌胃治疗,另取15只正常大鼠作为对照组(CON).12周后,检测各组大鼠血糖、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;HE染色检测大鼠RGC数量,免疫组织化学染色及Western blot检测大鼠视网膜ECH相关蛋白1(ECH-associated protein 1,Keap1)、核因子NF-E2相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor-2,Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达.结果 与CON组相比,DM组血糖、MDA含量、Keap1及Nrf2表达明显增加,SOD活性及HO-1表达明显下降.而经过12周治疗后上述表现均有明显改善.结论 TFF通过降低血糖,增强大鼠视网膜的抗氧化能力,保护糖尿病状态下的RGC损伤,与调控Keap1-Nrf2/HO-1信号通路有关.