线粒体与脊髓小脑性共济失调3型

脊髓小脑性共济失调3型/马查多-约瑟夫疾病(SCA3/MJD)被人们所熟知已有近20年,但它的确切发病机制不明确,对这类慢性神经系统退行性疾病,目前,尚无有效的治疗策略.越来越多的证据表明,线粒体功能改变与脊髓小脑共济失调3型/马查多-约瑟夫疾病的发生、发展密切相关.笔者就这方面的研究进展进行综述.     

SCA3/MJD与SPG4的弥散加权成像对比研究

目的：探讨弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI) 在遗传性脊髓小脑型共济失调3 型/ 马 查多- 约瑟夫病(hereditary spinocerebellar ataxia 3 and the Machado Joseph disease,SCA3/MJD) 及遗传性痉挛性 截瘫4 型(hereditary spastic paraplegia 4,SPG4) 的诊断及鉴别诊断中的价值。方法：对13 例SPG4 患者,30 例 SCA3/MJD 及27 名年龄匹配的健康志愿者进行DWI 检查,经数据后处理获得了表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC) 值。将以上数据分组进行对比研究。结果：SCA3/MJD 起病患者的ADC 值在中央前回、内囊 后肢、大脑脚、桥脑、小脑皮层及小脑白质区域较正常对照组升高。SCA3/MJD 未起病患者的ADC 值仅在小脑 齿状核位置较正常对照组增高。SCA3/MJD 起病患者仅在小脑皮层较SCA3/MJD 未起病患者ADC 值明显升高; SCA3/MJD 起病患者的ADC 值在内囊后肢、小脑皮层、小脑白质及桥脑较SPG4 患者明显增高。在中央前回, SPG4 患者的ADC 值较正常对照组明显增高。结论：DWI 对于SCA3/MJD 与SPG4 的鉴别诊断有一定的应用前景。     

1H-MRS对SCA3/MJD的诊断价值及与临床病程的关系

目的：探讨氢质子波谱(proton magnetic resonance spectroscopy,1H-MRS)在脊髓小脑型共济失调3型/马查 多–约瑟夫病(hereditary spinocerebellar ataxias 3 and Machado-Joseph,SCA3/MJD)诊断中的价值,同时探讨其与临床病程 评分之间的联系。方法：SCA3/MJD起病患者、SCA3/MJD未起病患者及年龄匹配健康志愿者进行1H-MRS检查,经 数据后处理获得N–乙酰天门冬氨酸(N-acetylaspartate,NAA),肌酸(creatine,Cr),胆碱(choline-containing compounds, Cho),肌醇(myo-inositol,mI)值及NAA/Cr,Cho/Cr,mI/Cr比值。将以上数据进行对比研究;同时对于SCA3/MJD起 病患者进行国际协作共济失调评估量表(International Cooperative Ataxia Rating Scale,ICARS)及共济失调等级量表(Scale for the Assessment and Rating of Ataxia,SARA)评估,计算NAA/Cr,Cho/Cr,mI/Cr比值与临床评分之间的相关性。 结果：SCA3/MJD起病患者在桥脑及齿状核的NAA/Cr值较正常对照组明显减低。SCA3/MJD起病患者小脑齿状核 NAA/Cr值与ICARS评分有明显相关性。结论：SCA3/MJD的病变主要位于小脑及脑干,ICARS评分与小脑病变的程度 有相关性,能较好地反映临床表现的轻重程度。1H-MRS 对于SCA3/MJD 的诊断有一定的应用前景。     

Hsp22保护SCA3/MJD转基因果蝇神经的机制

目的:探索Hsp22保护SCA3/MJD转基因果蝇神经的机制.方法:利用GAL4-UAS系统,使Hsp22在SCA3/MJD转基因果蝇模型的神经系统中表达.观察果蝇的羽化率,Western blot检查线粒体复合物Ⅰ亚基NDUFS3的蛋白水平.结果:Hsp22诱导不能羽化的elav-GAL4/UAS系统启动的SCA3/MJD转基因果蝇部分羽化,线粒体复合物Ⅰ亚基NDUFS3蛋白表达升高.结论:Hsp22可能通过改善线粒体功能对SCA3/MJD转基因果蝇神经起保护作用.     

MJD1基因真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

目的：分别构建野生型MJD1以及CAG三核苷酸重复扩展突变型MJD1的真核表达载体;明确ataxin-3的多聚谷氨酰胺扩展突变是否可导致细胞核内蛋白聚合体形成。方法：分别以pAS2-1-MJD20Q和pAS2-1-MJD68Q为模板,通过PCR扩展野生型MJD1以及CAG三核苷酸重复扩展突变型MJD1的编码序列。PCR产物经Bam HI和Hind III双酶切后连入pcDNA3.1-Myc-His(-)B,通过酶切以及DNA测序鉴定重组质粒pcDNA3.1-Myc-His(-)B-MJD20Q和pcDNA3.1-Myc-His(-)B-MJD68Q。重组质粒转染SH-SY5Y细胞,通过Western印迹验证ataxin-3的表达,应用激光共聚焦显微镜观察转染细胞的核内蛋白聚合体形成情况。结果：酶切和DNA测序证实目的基因已被克隆入pcDNA3.1-Myc-His(-)B;其在转染细胞中的表达亦经Western印迹得以验证;SH-SY5Y细胞转染pcDNA3.1-Myc-His(-)B-MJD68Q后可见核内蛋白聚合体形成,而转染pcDNA3.1-Myc-His(-)B-MJD20Q后未见核内蛋白聚合体形成。结论：成功构建了MJD1的真核表达质粒;ataxin-3的多聚谷氨酰胺扩展突变可导致细胞核内蛋白聚合体形成。     

脊髓小脑性共济失调3型/Machado-Joseph 病ICARS与SARA评分相关因素分析

目的:探讨国际协作共济失调评估量表(ICARS)与共济失调等级量表(SARA)评估脊髓小脑性共济失调3型/ Machado-Joseph 病患者的相关因素.方法:应用ICARS与SARA对126例基因检测明确诊断为脊髓小脑性共济失调3型患者进行评估,分析ICARS评分、SARA评分与发病年龄、病程、CAG重复次数的相关...     

维生素K2对SCA3/MJD转基因果蝇的神经保护作用研究

目的：探讨维生素K2对SCA3/MJD的神经保护作用.方法：构建Gmr-GAL4/UAS系统和Nrv2-GAL4/UAS系统两种不同表达部位的SCA3/MJD转基因果蝇模型.并分别用1.00,0.10和0.01 mM的维生素K2干预.结果：0.10 mM的维生素K2明显抑制了SCA3/MJD转基因果蝇眼睛视网膜光感受神经元变性,降低果蝇翅膀异常率,改善果蝇运动能力,0.01 mM的维生素K2作用较0.10 mM的弱,1.00 mM的维生素K2反而加重SCA3/MJD转基因果蝇眼睛视网膜光感受神经元变性,增加果蝇翅膀异常率,降低果蝇运动能力.结论：维生素K2对SCA3/MJD转基因果蝇的神经保护作用与维生素K2剂量有关,过低作用弱,而过高损伤神经元.     

云南地区汉族脊髓小脑共济失调3型SCA3/MJD患者的临床特点及遗传学研究

目的通过对云南地区临床诊断为脊髓小脑共济失调的家系进行SCA3基因检测,探讨汉族人群遗传性脊髓小脑共济失调3型(spinocerebellar ataxia type 3,SCA3)患者临床特点与遗传学特征。方法对4个家系26例脊髓小脑共济失调患者进行神经系统检查和家系谱调查,应用聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳和基因测序等技术进行SCA3基因内CAG三核苷酸重复序列,并对异常等位基因片段进行DNA测序。结果临床表现以共济失调和构音障碍为主,其次表现为锥体束征、眼部症状等,认知功能障碍较少见。检出4个家系(26例患者)为SCA3,符合常染色体显性遗传特点,测序证实其异常等位基因CAG重复数目在67～82次之间。结论云南地区汉族的SCAs患者以SCA3型为主,主要表现为共济失调和构音障碍,基因检测仍是其诊断的金标准。     

马查多-约瑟夫病：从发现到最新治疗进展

马查多-约瑟夫病（MJD）又称为脊髓小脑共济失调3型（SCA3）,是常见的显性遗传性共济失调。临床表现多以共济失调为主,伴有眼球活动异常、构音障碍,以及锥体系、锥体外系和精神障碍等症状。近些年来,伴随着基因检测技术的长足进步,该病确诊数量正快速上升,但国内对该病研究报道不多。本文对MJD的疾病发现、神经遗传特征、临床特征及药物治疗进行介绍,并着重对新技术的应用作一综述。     

SCA3/MJD患者7例临床特点及基因测定分析

目的对脊髓小脑性共济失调SCA3/MJD(Machado-Joseph病)的临床特点进行分析。方法收集7例经过基因检测确诊的SCA3/MJD患者的临床资料,分析其临床特点及基因检测结果。结果 7例SCA3/MJD患者均于中青年发病,均有家族史,临床表现均有行走不稳、动作笨拙和言语含糊症状;影像学有小脑萎缩,锥体束征阳性;4例面舌肌束震颤,3例眼睑后退(突眼症),3例凝视诱发眼震,2例头晕,1例温度觉减退,1例认知障碍,1例肌阵挛发作。结论 CA3/MJD患者临床表现存在一定差异,临床除以共济失调、构音障碍及小脑萎缩为共同特征外,眼睑退缩形成的突眼、面舌肌束震颤多见,但检测SCA3相关基因的CAG重复数是确诊的唯一有效方法。     

基于毛细管电泳片段分析的MJD/SCA3基因诊断

目的:建立并完善MJD/SCA3的基因诊断方法,研究临床表型和CAG重复次数的相关性。方法:应用毛细管电泳片段分析(STR分析)对MJD/SCA3基因内CAG重复次数进行精确分析,并采用测序予以验证。结果:王氏家系为SCA3家系,STR分析显示3例患者的CAG重复数目分别为69次、75次和68次。尽管王氏本人尚未出现临床表型,但通过基因诊断已经确认为患者,并明确其CAG重复次数。结论:毛细管电泳片段分析确实为一项简便和准确的STR分析方法,可为动态突变的遗传性疾病提供可靠的基因诊断,也可为相关疾病的临床诊断和遗传咨询提供科学可靠的实验依据。     

广西地区正常人群SCA3／MJD基因多态性研究

目的探讨广西地区汉族正常人群SCA3／MJD基因（CAG）n重复拷贝数的正常变异范围。方法应用荧光PCR及毛细管电泳片段长度分析对广西75名正常人SCA3／MJD基因（CAG）n重复拷贝数进行分析。结果广西地区SCA3／MJD基因（CAG）n在正常人群中的变异范围为13～34个拷贝,集中于13个拷贝,其等位基因频率为52．00％,杂合频率为69．33％,共17种等位基因。结论SCA3／MJD基因（CAG）n重复序列在广西正常人群中呈现多态性,SCA3／MJD基因（CAG）n重复拷贝数正常变异范围存在地区差异。     

中国人遗传性脊髓小脑型共济失调患者三核苷酸突变频率的分布

目的评价ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ／ＳＣＡ３ＣＡＧ三核苷酸扩增突变（ＣＡＧ）ｎ在中国人遗传性脊髓小脑型共济失调（ＳＣＡ）患者的分布频率。方法应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和变性聚丙烯胺凝胶电泳技术，检测分析了５０名中国人常染色体显性遗传ＳＣＡ家系（其中患者７９例）的ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ／ＳＣＡ３（ＣＡＧ）ｎ。结果在５０个ＳＣＡ家系中，１个ＳＣＡ家系有ＳＣＡ１（ＣＡＧ）ｎ突变，３个ＳＣＡ家系有ＳＣＡ２（ＣＡＧ）ｎ突变，２４个ＳＣＡ家系有ＭＪＤ／ＳＣＡ３（ＣＡＧ）ｎ突变，阳性率分别为２．０％、６．０％、４８．０％。２例ＳＣＡ１患者ＣＡＧ三核苷酸重复数为５３和６２次，而正常人为１２～３６次。７例ＳＣＡ２患者ＣＡＧ三核苷酸重复数４３～４７次，而正常人为２２～３０次。４２例ＭＪＤ／ＳＣＡ３患者ＣＡＧ三核苷酸重复数６３～７８次，而正常人为１５～３８次。另有２２个ＳＣＡ家系２８例患者，ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ／ＳＣＡ３（ＣＡＧ）ｎ突变检测在正常范围内。结论中国ＳＣＡ主要为ＭＪＤ／ＳＣＡ３型，属于非葡萄牙型ＭＪＤ；而ＳＣＡ１型、ＳＣＡ２型少见。     

parkin对AD转基因果蝇模型的神经保护作用及其作用机制的研究

目的 探讨parkin在阿尔茨海默病(AD)发病机制中的作用.方法 利用经典的GAL4/UAS系统,选用ninaEGAL4启动子,将突变位点在R406W处的Tau蛋白在果蝇复眼内选择性表达,构建ninaE-GAL4/UAS系统AD转基因果蝇模型.然后分别在敲除和不敲除线粒体分裂蛋白Drp1情况下,使parkin在AD转基因果蝇模型中表达.结果 parkin明显抑制了AD转基因果蝇模型复眼视网膜光感受神经元变性,而在Drp1被敲除后,parkin的保护作用效果明显减弱.结论 parkin对AD转基因果蝇模型具有神经保护作用,而这种神经保护作用可能需要依赖线粒体分裂蛋白Drp1的功能.     

维生素B3对PINK1B9突变转基因果蝇模型的保护作用研究

目的 探讨维生素B3对PINK1 B9突变转基因果蝇的保护作用及其可能机制.方法 选用TH-Gal4/UAS系统的PD转基因果蝇模型,按处理方式分为正常对照组、PD转基因果蝇模型组、PD转基因果蝇模型+维生素B3干预组,PD转基因果蝇模型用GAPDH2 RNAi基因干预+维生素B3干预组,进行果蝇形态学、ATP水平、果蝇的mRNA水平和蛋白印记检测.结果 适当浓度的维生素B3能部分挽救PINK1B9果蝇的飞行能力和降低翅膀异常率.并且上调了GAPDH和NDUFS3蛋白的表达,增加ATP生成的相对水平.再用GAPDH2 RNAi干预PINK1B9转基因果蝇后GAPDH和NDUFS3蛋白表达相应下降.结论 维生素B3可能通过上调GAPDH和NDUFS3水平发挥调控糖酵解和氧化磷酸化起到保护作用.