阿扑吗啡阻抗6-羟基多巴胺毁损纹状体的实验研究

 目的 探讨阿扑吗啡是否对6-羟基多巴胺毁损纹状体帕金森病鼠模型有神经保护作用.方法 6-羟基多巴胺毁损大鼠左侧纹状体,在毁损前15 min阿扑吗啡(10mg/kg,皮下注射),连续注射11 d.毁损2周后,分别进行行为学(苯丙胺引起的旋转数目)和神经化学(高压液相测定纹状体多巴胺及代谢物含量)的研究.结果 阿扑吗啡能降低苯丙胺引起的向损伤侧旋转的数目.而且,显著减低多巴胺的损耗使其恢复到正常,并使DOPAC/DA比率恢复到正常.结论 在6-羟基多巴胺毁损纹状体模型中,阿扑吗啡不仅改善运动功能,而且,恢复纹状体的多巴胺含量.     

乌鸡黑色素对6-OH-DA诱导帕金森病大鼠模型的神经保护作用

目的 探讨乌鸡黑色素对于6-羟多巴胺(6-OH-DA)单侧损毁纹状体诱导的帕金森病模型大鼠的神经保护作用及其机制.方法 将60只SD大鼠造模成功后,随机分为对照组、6-OH-DA诱导的帕金森病单纯模型组和治疗组,治疗组分别按6 mg/kg或20 mg/kg乌鸡黑色素灌胃给药,1次/d,共3w.然后比较各组中脑黑质多巴胺能神经元的数目、纹状体酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经纤维的数量、阿朴吗啡诱导的旋转行为以及大鼠自主运动情况的差异.结果 6 mg/kg和20 mg/kg乌鸡黑色素灌胃给药能显著减少6-OH-DA所导致的中脑黑质多巴胺能神经元的死亡,减少纹状体TH阳性神经纤维的丢失,并有效改善阿朴吗啡诱导的旋转行为.结论 乌鸡黑色素能缓解6-OH-DA诱导的中脑黑质多巴胺能神经元的损伤,对于帕金森病有潜在的治疗作用.     

6-羟基多巴胺诱发帕金森病大鼠模型的制作和评价

目的 向大鼠中脑黑质区注入6-羟基多巴胺(6-OHDA)建立帕金森病(PD)大鼠模型,并从行为学(ethology)及组织病理、生化角度对该模型进行评价.方法 将6-OHDA立体定向微量注入大鼠右侧中脑黑质(SN)区,观察阿朴吗啡(APO)诱发的大鼠旋转行为及黑质细胞形态学变化,测定脑组织液中儿茶酚胺类物质含量及黑质酪氨酸羟化酶的免疫活性.结果 120只大鼠中经APO诱导后有67只(占55.8%)持续转向健侧(旋转圈数＞7r/min),帕金森病大鼠模型复制成功.PD鼠注射侧黑质区多巴胺能神经元数量较对侧明显减少,体积缩小,结构欠清晰.注射侧脑组织液中多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、5-羟色胺(5-HT)含量均低于对侧,注射侧黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性细胞较健侧明显减少.连续观察10个月,PD模型大鼠的异常旋转行为无自发性恢复.结论 用6-OHDA选择性损毁大鼠黑质多巴胺能神经元,可造成与PD患者相似的基本病理变化,建立起可靠而稳定的PD大鼠模型.     

Mdivi-1对帕金森病大鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用研究

目的 研究线粒体分裂引发帕金森病（Parkinson’s disease,PD）大鼠模型中多巴胺能神经元损伤作用及线粒体分裂抑制剂1（mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1）对神经元损伤的保护作用机制。方法 将大鼠随机分成对照组(生理盐水组)、模型组、美多巴组和Mdivi-1组,采用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)注射大鼠单侧纹状体的方法建立PD动物模型,利用阿朴吗啡（apomorphine,APO）引起的大鼠旋转实验和转棒实验来观察行为学变化。利用免疫组化方法评估酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylasez,TH）在中脑黑质中阳性细胞比例以及纹状体中TH阳性纤维数量,采用ELISA法检测大鼠黑质和纹状体中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、一氧化氮（nitric oxide,NO）及一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的含量。结果与对照组相比,PD模型组大鼠在APO诱发第3周和6周后旋转圈数均显著增加,同时转棒上停留时间均显著缩短;大脑黑质TH阳性细胞数和纹状体中TH阳性纤维数目显著减少;组织内SOD、GSH Px、CAT的活性显著降低,而NOS 活性显著升高,MDA和NO含量升高,而GSH含量则降低。美多巴及Mdivi-1处理3周和6周后均可显著改善PD大鼠的相关行为学症状,并增加黑质TH阳性细胞数和纹状体中TH阳性纤维数目,同时增加组织内SOD,GSH-Px,CAT,GSH含量,降低NOS 活性,减少MDA和NO含量。结论 Mdivi-1对6-OHDA诱导PD大鼠的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化能力有关。     

帕金森病模型大鼠脑D2受体与血流灌注的对比研究

目的 对偏侧帕金森病（ＰＤ）模型大鼠脑多巴胺（ＤＡ）Ｄ２受体改变与脑血流灌注进行对比研究。方法 立体定位脑黑质、腹侧被盖区、以６－羟基多巴胺定向损毁制作偏侧ＰＤ大白鼠模型，通过阿朴吗啡诱发其向健侧旋转的转数筛选模型，并用高效液相－电化学检测器（ＨＰＬＣ－ＥＣＤ）检测ＰＤ模型及对照组大鼠脑纹状体ＤＡ含量；彩用＾１２５Ｉ－左旋－３－碘－２－羟基－６－甲氧基－Ｎ（１－乙基－２－吡咯烷）甲基）苯酰胺（ＩＢ     

运动干预通过减缓纹状体多巴胺丢失改善帕金森病模型大鼠行为功能的研究

目的:探讨跑台运动干预对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型大鼠行为功能、纹状体多巴胺(dopamine,DA)含量的影响。方法:健康雄性SD大鼠,随机分为假手术安静组(Control组)、假手术运动组(Control+Ex组)、6-OHDA安静组(PD组)、6-OHDA运动组(PD+Ex组)。依据实验设计要求,PD和PD+Ex组右脑内侧前脑束(MFB)注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)建立偏侧PD大鼠模型,假手术组于相同位点注射等量生理盐水。在造模后的第7天颈部皮下注射阿朴吗啡(APO)进行旋转行为测试,评价PD模型的可靠性,不符合PD模型标准的大鼠剔除。运动组术后1周开始进行跑台训练,运动方案为11 m/min,30 min/day,5 days/week,共4周。采用旷场试验评价PD模型大鼠的自主活动能力;微透析-高效液相色谱电化学联用技术检测纹状体DA浓度;免疫组织化学检测纹状体酪氨酸羟化酶(TH)阳性纤维的表达。结果:PD和PD+Ex组移动距离较Control组显著降低(P<0.01);PD+Ex组第3、4周移动距离较PD组显著增加(P<0.01)。PD和PD+Ex组纹状体DA含量较Control组显著降低(P<0.01);但PD+Ex组第3、4周纹状体DA浓度较PD组显著升高(P<0.01)。结论:PD模型大鼠总移动距离与纹状体DA浓度之间存在高度正相关,且二者均随6-OHDA药物及运动干预持续时间延长出现"时序性"变化特征。运动干预通过减缓纹状体DA丢失改善PD模型大鼠自主行为功能,推测其机制可能与运动的神经保护作用减轻了6-OHDA神经毒素对DA能神经元的毒性损伤、促进其存活有关。     

运动干预通过纹状体MSNs结构可塑性改善PD模型大鼠行为功能

目的:通过观察运动干预对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠行为功能、纹状体中等棘状神经元(MSNs)树突棘密度及α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(a-amino-3-hydroxy-5-methy1-4-isoxa-zolep-propionate,AMPA)受体亚基表达的影响,揭示运动改善PD行为功能障碍的相关机制。方法 :选用清洁级雄性SD大鼠,饲养1周后随机分为假手术安静组(Control组)、假手术运动组(Control+Ex组)、帕金森安静组(PD组)、帕金森运动组(PD+Ex组),每组14只。采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)于内侧前脑束单点注射的方法建立PD大鼠模型,假手术组给予同等剂量生理盐水。术后24h对运动组大鼠进行4周运动干预,运动方案为11 m/min,30 min/day,5 days/week。大鼠在造模后第7、14和28天颈部皮下注射阿朴吗啡(APO)进行旋转行为测试评价模型可靠性,并结合圆桶试验评价PD大鼠行为功能。采用高尔基染色技术观察纹状体MSNs树突棘密度,免疫组织化学技术观察纹状体Glu R1和Glu R2表达变化。结果:第14天和第28天APO诱导的旋转行为能力检测结果:PD运动组旋转次数较PD组显著减少(P<0.05)。圆桶试验结果:在侧前肢接触壁次数PD组(15.35±5.21%)较假手术安静组(49.82±8.41%)和PD运动组(26.24±6.96%)显著降低(P<0.01),且PD运动组较PD组显著增加(P<0.05)。高尔基染色结果:PD运动组大鼠纹状体MSNs树突棘密度较PD组明显增加(P<0.05)。免疫组化结果:PD运动组大鼠纹状体Glu R2表达较PD组显著增加(P<0.01)。结论:纹状体MSNs形态结构重塑可能是运动改善PD大鼠行为功能障碍的重要途径之一。运动调节纹状体AMPA亚基表达可能介导了这一过程。     

雌激素对PD模型大鼠黑质纹状体通路的保护作用及其机制探讨

目的研究雌激素（Estrogen）对6-羟基多巴（6-OHDA）制备的去卵巢（OVX）帕金森病（PD）模型大鼠黑质纹状体通路的保护作用及其可能机制。方法应用6-OHDA两点注射单侧损毁内侧前脑束（MFB）制备OVXPD模型大鼠,侧脑室给予17-β雌二醇（17-βestradiol,1μg/5μl）,观察大鼠旋转行为、黑质酪氨酸羟化酶（TH）基因表达、黑质铁染色阳性细胞数量和纹状体内多巴胺（DA）及其代谢产物含量的变化。结果雌激素用药组可明显减少阿朴吗啡诱导的PD模型大鼠单侧旋转行为（P〈0.01）。在损毁侧黑质,雌激素用药组TH基因的表达较PD模型组明显增加（P〈0.01）;纹状体DA及其代谢产物亦较PD模型组显著升高（P〈0.01）。黑质铁染色阳性细胞数量较PD模型组明显减少（P〈0.01）。结论雌激素对PD模型大鼠黑质DA能神经元有明显的保护作用,其作用机制可能与降低铁负载有关。     

多巴胺转运蛋白PET成像在建立帕金森病大鼠模型中的作用

目的研究多巴胺转运蛋白(11C-β-CYF)PET成像技术在判别帕金森病(PD)大鼠模型中的作用.材料和方法22只成功的PD大鼠模型分别进行11C-β-CFT PET显像,ROI方法测量模型大鼠两侧纹状体/小脑比值并进行统计分析,比较两侧有无显著性差异.正常与模型大鼠分别进行TH免疫组化染色.结果模型大鼠毁损侧纹状体放射性明显下降(P=0.000).同时模型大鼠TH染色黑质处阳性神经元数量减少.结论PET多巴胺转运蛋白成像可结合行为学观察作为证实模型成功的检验方法之一,为基础研究及临床诊断PD提供了一种分子成像工具.     

TH基因修饰的永生化神经干细胞移植对帕金森病大鼠行为和多巴胺代谢的影响

 目的 评价脑内移植酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)基因修饰的温度敏感型永生化神经干细胞(immortalized neural stem cells, iNSCs)的生物学稳定性和安全性,探讨TH基因表达对帕金森病(Parkinson's disease, PD)大鼠旋转行为和多巴胺代谢的影响. 方法 6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD模型大鼠73只,随机分为3组.治疗组(36只,TG)脑内纹状体移植体外转染稳定表达TH基因的iNSCs株(RMN-TH),对照组(27只,CG)同部位植入未转染TH基因的RMN细胞株,余10只为模型组(MG).分别比较细胞移植后不同时间点实验大鼠肿瘤发生、排斥反应和阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为、免疫组织化学染色观察TH表达;高效液相色谱电化学方法检测多巴胺(dopamine, DA)及其代谢产物3、4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)水平. 结果移植细胞在受体大鼠纹状体内存活均超过6个月,并广泛迁移、稳定表达TH,而未诱发肿瘤和排斥反应.RMN-TH TG组的APO诱导旋转行为得到明显改善,移植后第8周与CG组、MG组比较,旋转圈数分别下降64.17%和61.54%(P＜0.01);TG组大鼠移植侧纹状体内TH表达显著高于健侧(P=0.0029)、CG组移植侧和MG组(P=0.0031).TG组纹状体DA及其代谢产物水平明显高于CG组和MG组(P=0.0027).与MG组比较,CG组大鼠旋转行为、TH表达,以及DA,DOPAC和HVA水平均无统计学差异.结论 TH基因修饰的iNSCs细胞株RMN-TH可以在PD大鼠纹状体内长时间安全存活并稳定表达TH,显著增加内源性DA及其代谢产物水平,有效改善模型大鼠PD症状.     

高场强~1H-MRS对帕金森病大鼠模型的应用价值探讨

目的:利用高场强氢质子磁共振波谱(1H-MRS)观察帕金森病大鼠模型纹状体区的神经代谢变化,探讨高场强1H-MRS对PD大鼠模型的应用价值。方法:7只正常大鼠经6-羟基多巴胺(6-OHDA)单侧(右侧)损毁制备偏侧帕金森病模型前后应用1.5T磁共振进行波谱分析。分析造模术前后双侧纹状体区N-乙酰天门冬氨酸/肌酸(NAA/Cr)、胆碱/肌酸(Cho/Cr)比值的变化。并对黑质致密部进行黑质酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色。结果:6只大鼠造模成功。损毁侧纹状体内NAA/Cr比值明显低于对侧及造模前同侧(P<0.05),而Cho/Cr比值与对侧及造模前同侧相比无显著性差异(P>0.05)。损毁侧黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元较对侧显著减少(P<0.05)。结论:1.5T临床专用型磁共振1H-MRS可以作为帕金森病大鼠模型纹状体区细胞代谢有价值的无创性检测方法。     

Modulation of dopaminergic and glutamatergic brain function: PET studies on parkinsonian rats.

Degeneration of dopaminergic neurons of the substantia nigra pars compacta is a cardinal feature of Parkinson's disease (PD). Although uncertain, the pathology has been suggested to derive from a malfunction of the complex interaction between dopaminergic and metabotropic glutamate receptors (mGluRs). To further address this issue, we investigated the imaging profile and expression of dopamine D(2) receptors and mGluRs in a classic parkinsonian rodent model induced by the toxin 6-hydroxydopamine. METHODS: Adult male Sprague-Dawley rats (250-300 g) received a stereotaxic injection of 8 mug/2 muL of 6-hydroxydopamine (n = 6) or saline solution (n = 4) in the right medial forebrain bundle. Small-animal PET was performed on all rats 4 wk after the surgical procedure to assess dopamine transporter (DAT) status using (11)C-2beta-carbomethoxy-3beta-(4-fluorophenyl)-tropane (CFT), as well as dopamine D(2) receptor and mGluR(5) modulation using (11)C-raclopride and 2-(11)C-methyl-6-(2-phenylethynyl)-pyridine ((11)C-MPEP), respectively. Behavioral studies were also conducted 6 wk after lesioning by d-amphetamine challenge. Immunohistochemistry and Western blotting were carried out at 8 wk after lesioning to confirm dopamine fiber, neuronal loss, and level of striatal mGluR(5) expression. RESULTS: PET images showed decreased (11)C-CFT binding on the lesioned side, including the structures of the striatum, hippocampus, and cortex, compared with the contralateral intact side. Interestingly, dopamine D(2) receptors and mGluR(5) upregulation were observed in the right striatum, hippocampus, and cortex, using (11)C-raclopride and (11)C-MPEP, respectively. A negative correlation was also found between the percentage change in mGluR(5) expression and DAT function. Finally, tyrosine hydroxylase immunoreactivity confirmed both dopamine fiber loss (t test, P < 0.01) and neuronal loss (t test, P < 0.01) on the lesioned side. These changes were accompanied by a strongly enhanced mGluR(5) expression in the right striatum of the lesioned side analyzed by Western plot. CONCLUSION: These findings support the existence of compensatory mechanisms in nigrostriatal dopamine degeneration and provide new insights that help further dissect some of the pathways underlying neurodegeneration. In addition, these results reconfirm that PET is a valuable tool for multilevel receptor studies, significantly contributing to the understanding of pathogenic mechanisms and ultimately opening new avenues in the study of neuroprotective approaches toward PD.     

帕金森病大鼠模型尾壳核多巴胺受体活性的变化

在建立6－羟多巴胺损伤的帕金森病大鼠模型基础上，应用放射配基结合方法及Scanchard作图，测定不同时间点模型鼠及对照鼠尾壳核多巴胺D1和D2受体的受体最大结合容量（Bmax）和平衡解离常数（KD）。结果显示，模型鼠毁损侧尾壳多巴胺D2受体Bmax显著升高，KD值显著降低，在1个月模型组达到高峰。D1受体除了2周模型组Bmax轻度升高，KD值轻度降低小，与对照组比较无差异。表明帕金森病模型鼠毁损侧尾壳核存在D2受体上行调节，受体亲合力增高，D1受体活性无明显变化。     

胍丁胺对皮质酮致原代培养大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的前期证明胍丁胺作为一种新型神经递质具有抗抑郁作用，本实验通过观察胍丁胺对皮质酮致原代培养海马神经元损伤的保护作用及作用机制，探讨其抗抑郁作用的细胞分子机制。方法体外培养新生大鼠海马神经元，加入不同浓度皮质酮（50～300μmol·L^-1），采用CCK-8试剂盒比色法检测对神经元存活的影响；培养体系内加入胍丁胺，观察对神经元损伤的保护作用；加入H89（PKA特异性抑制剂）或PD98059（MEK特异性抑制剂），观察胍丁胺的神经元保护作用及可能的相关信号通路。结果皮质酮（50～300μmol·L^-1）能够浓度依赖地抑制原代培养海马神经元的存活；同时胍丁胺（5μmol·L^-1）对此损伤具有保护作用；胍丁胺的保护作用可以被H89（20μmol·L^-1）和PD98059（20μmol·L^-1）取消。结论胍丁胺具有神经元保护作用，此作用与cAMP-PKA-CREB通路和MEK-ERK-CREB通路密切相关。     

不同剂量VitC对严重烧伤延迟复苏大鼠血清cTnI的影响

目的研究不同剂量维生素c（VitC）对烧伤后延迟复苏大鼠血清肌钙蛋白I（cTnI）的影响,以了解VitC对烧伤后延迟复苏心肌的保护作用。方法40只Wistar大鼠随机分成4组：假手术组、延迟复苏组、VitC低剂量组及VitC高剂量组。复制烧伤模型30h后,检测血清cTnI、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性变化。结果使用VitC可以降低烧伤后延迟复苏大鼠血清中cTnI和MDA的含量、升高SOD活性（P〈0．01）;VitC高剂量组降低烧伤后延迟复苏大鼠血清cTnI和MDA的含量,升高SOD活性作用较VitC低剂量组明显（P〈0．05）。结论烧伤后延迟复苏时使用VitC对心肌具有保护作用,大剂量VitC的保护作用优于低剂量VitC,其保护机制可能与抗氧自由基、抑制膜脂质过氧化有关。     

1，25-（OH）2D3对糖尿病大鼠ZO-1表达的影响

目的观察糖尿病（DM）大鼠肾小球ZO-1蛋白的表达，1，25-（OH）2D3对ZO-1蛋白表达及分布的影响。方法Wistar大鼠随机分为3组：对照组、糖尿病组（DM组）、1，25-（OH）2D3组。链脲菌素（STZ）腹腔注射建立糖尿病动物模型，1，25-（OH）2D3组在糖尿病建立时即开始渗透性微量泵按3ng／100g·d皮下给予1，25-（OH）2D3，给药10周处死小鼠，检测血糖、半胱氨酸蛋白酶抑制剂（CysC）、尿红细胞、24h尿蛋白定量（24hUPE）；光镜观察肾小球细胞数，细胞外基质（ECM）聚积；Western印迹检测ZO-1蛋白的表达；免疫金荧光染色电镜观察肾小球ZO-1分布的改变。结论DM组大鼠CysC、尿红细胞、24hUPE均高于1，25-（OH）2D3组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。1，25-（OH）2D3组大鼠较DM组肾小球细胞数减少，细胞外基质聚积减轻（P〈0．05或P〈0．01）。Western印迹示1，25-（OH）2D3组和对照组肾小球ZO-1表达无显著差异，均明显高于DM组（P〈0．01）。免疫金荧光染色显示DM组肾小球ZO-1表达缺失及易位分布明显，1，25-（OH）2D3组ZO-1的表达缺失及易位分布较轻。结论1，25-（OH）2D3可减少尿蛋白的排泄，抑制肾小球细胞数及细胞外基质的增殖，增加足细胞特异蛋白ZO—1的表达，减少其易位，对肾脏有保护作用。