用CL法和微量MPO法观察人参皂甙对人PMN吞噬杀菌…

采用化学发光（ＣＬ）法和髓过氧化物酶（ＭＰＯ）微量测定法检测了人参茎叶皂甙对人多形核白细胞（ＰＭＮ）吞噬金黄色葡萄球菌的影响。实验结果表明，人参茎叶皂甙作用过的ＰＭＮ－ＣＬ反应（ＣＬ３０和Ｐｅａｋ）和ＭＰＯ释放水平均增强，对ＣＬ３０与ＣＦＵ、ＭＰＯ与ＣＦＵ行直线相关分析均呈密切相关（ｒ＝０．９５８，ｐ＜０．００１；ｒ＝０．８７５，ｐ＜０．０１）。本实验提示，ＰＭＮ－ＣＬ法和ＭＰＯ微量测定法是研究药     

几种中药提取成分对人PMN吞噬杀菌功能的影响

用人参茎叶皂甙、黄芪多糖、云芝胞内多糖、猪苓多糖及阿魏酸钠预先处理分离的人ＰＭＮ，测定ＰＭＮ吞噬杀伤金黄色葡萄球菌时的ＣＬ值（３０分种积分值和峰值，ＣＬ３０及Ｐｅａｋ）和ＭＰＯ水平。结果表明，人参茎叶皂甙、黄芪多糖、云芝胞内多糖和猪苓多糖在一定浓度范围内对人ＰＭＮ的ＣＬ和ＭＰＯ水平均有明显增强作用（Ｐ＜０．０１），而阿魏酸钠则抑制ＰＭＮ的ＣＬ和ＭＰＯ水平（Ｐ＜０．０１）。这表明人参茎叶皂甙、云芝胞内多糖、猪苓多糖和黄芪多糖均能增强人ＰＭＮ的吞噬杀菌能力，阿魏酸钠则抑制人ＰＭＮ的吞噬杀菌能力。     

人参皂甙Rb1对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和NO分泌的影响

目的:研究人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1)对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和一氧化氮(NO)分泌的影响。方法:分离制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液;MTT法检测不同终浓度的人参皂甙Rb1对巨噬细胞的毒性;流式细胞术检测Rb1对巨噬细胞吞噬直径1μm微球的影响;用Griess试剂盒检测Rb1对巨噬细胞NO量的影响;使用流式液相蛋白定量检测技术Cytometric Bead Array(CBA)检测Rb1对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果:终浓度为5、10、20μmol/L的Rb1对巨噬细胞的吞噬功能具有促进作用,明显抑制LPS诱导的吞噬作用(P<0.05);Rb1能抑制巨噬细胞NO的产生(P<0.01);Rb1能够调节LPS诱导的细胞因子的产生。结论:Rb1对巨噬细胞可能具有双向调节作用,通过抑制LPS信号的转导,调节巨噬细胞因子的分泌,抑制其活化,使NO减少;对于未活化的巨噬细胞,可能通过上调其吞噬功能,增强固有免疫系统来抵御病原体侵入。     

人参皂甙对冷束缚应激大鼠内分泌腺结构和功能的影响

应用放射免疫法测定血清激素值和透射电镜观察相应内分泌腺细胞超微结构变化,研究人参皂甙对冷束缚应激大鼠内分泌腺结构和功能的影响。实验组经腹腔注射入参皂甙,每天100mm/kg体重,连续5天,第6天冷束缚应激3小时后处死。实验结果表明,人参皂甙对冷束缚应激大鼠,具有抑制垂体-肾上腺轴的功能活动,促进生长激素大量分泌,增强机体的非特异抵抗力。     

抗MPO抗体的ELISA检测和应用

本文应用Ｍａｔｈｅｓｏｎ方法从人白细胞中提取髓过氧化物酶ＭＰＯ，建立ＥＬＩＳＡ法检测６３份血清标本中抗ＭＰＯ抗体，同时与间接免疫荧光法（ＩＩＦ）作比较，结果是：１９例结节性多动脉炎（ＰＡＮ）患者中６例抗ＭＰＯ抗体阳性（３２％），较ＩＩＦ法阳性率提高（１９例中１例），而２２例正常人及２２例其他肾脏病患者血清均为阴性。提示ＥＬＩＳＡ法既可从分子水平鉴定系统性血管炎致病的特异性抗体，又是系统性血管炎敏感的诊断方法。     

人参皂甙对老龄大鼠大脑皮质AChE老龄性改变的影响

目的观察大鼠大脑皮质乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性纤维的老龄性改变,探讨人参皂甙对其影响。方法24只雌性Wis青tar大鼠随机分为青年组、老龄组及给予人参皂甙的给药组。对各组大鼠大脑皮质进行AChE酶细胞化学染色,图像分析各组大鼠大脑皮质神经纤维AChE含量及AChE纤维的配布情况。结果老龄组大鼠大脑皮质神经纤维AChE平均光密度值较年组明显减少(p<0.01),AChE纤维面积百分比例下降,人参皂甙组大鼠大脑皮质神经纤维AChE平均光密度值较老龄组明显增加(p<0.01),纤维面积百分比例上升。结论人参皂甙可增加老龄大鼠大脑皮质纤维中AChE平均光密度值,促进纤维侧枝出芽和纤维网的生长及重建。     

人参皂甙对睡眠剥夺大鼠学习记忆和活动性的影响

目的:探讨人参皂甙(ginsenosides,GS)对睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)大鼠学习记忆和活动性的影响。方法:用小平台水环境法建立SD模型。选用Sprague-Dawley大鼠,根据SD时间的不同(0～96h),随机分为5组,每组又分为实验组(E)和对照组(C),实验组给予GS,观察各组大鼠SD前后“Y”迷宫、跳台和旷场实验中的行为变化。结果:①“Y”迷宫实验:24h、48h、72h和96h的正确反应率,E显著高于C(P<0.05),48h、72h和96h的触电时间,E显著低于C(P<0.05),72h差别最为明显(P<0.01);②跳台实验:48h、72h和96h的第一次触电潜伏期,E显著高于C(P<0.05),触电时间,E显著低于C(P<0.05),72h和96h的触电次数,E显著低于C(P<0.05),72h的差别最为显著(P<0.01)。③旷场实验:72h和96h的中央格停留时间,E显著低于C(P<0.05);48h和72h的水平活动得分和垂直活动得分,E显著高于C(P<0.05),72h差别最为明显(P<0.01)。结论:GS对SD造成的大鼠学习记忆和活动性的损害有明显保护作用。在一定SD时间内,这种保护作用随SD时间的延长而增强。     

人参皂甙对内毒素致血管内皮细胞表达TF和PAI-1的影响

目的:研究人参皂甙对内毒素脂多糖(LPS)致血管内皮细胞组织因子(TF)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)表达的影响,探讨人参皂甙对心血管疾病的保健及防治机制。方法:用酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC);ELISA方法检测HUVEC条件培养液PAI-1蛋白量;用一步凝固法检测HUVECTF活性;Northernblot检测HUVECTF和PAI-1的mRNA表达。结果:LPS能使HUVECPAI-1蛋白和TF活性及其mRNA表达显著增强,人参皂甙则明显抑制LPS对HUVEC的这种作用。结论:通过拮抗LPS致HUVECTF和PAI-1的表达,人参皂甙可维持血管内皮功能稳定,而发挥其心血管疾病的保健与防治作用。     

磷脂酶A_2活性对大鼠多形核白细胞化学发光的影响

利用腹腔注射酪蛋白，激活腹腔内磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２），收集腹腔内增多的多形核白细胞（ＰＭＮ），测定细胞化学发光（ＣＬ）。结果发现，１％酪蛋白３０ｍｌ注射大鼠腹腔１５ｈ后，腹腔ＰＭＮ显著增多，ＰＬＡ２浓度和活性明显增加，由ＰＭＡ诱发的ＰＭＮ－ＣＬ明显减低；而加热灭活后同量的酪蛋白不能导致上述变化。进一步还发现，ＰＬＡ２激动剂Ａ２３１８７和抑制剂溴己酮、氯喹在体外可促进和抑制外周血ＰＭＮ－ＣＬ。上述结果提示，ＰＬＡ２活性对ＰＭＮ－ＣＬ有显著的调节作用。     

人参皂甙Rh_2对耐药乳腺癌细胞P-糖蛋白和基质金属蛋白酶及其诱导物表达的影响

目的观察人参皂甙Rh2对人乳腺癌MCF7/Adr细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、基质金属蛋白酶诱导物(extracel-lular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinases1,MMP1)、MMP2、MMP9表达的影响。方法采用MTT比色法检测药物对MCF7/Adr细胞的毒性作用;流式细胞仪测定细胞内阿霉素(adriamycin,ADM)的荧光强度;Real time RT-PCR和Western blot检测细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9mRNA和蛋白水平的变化。结果 ADM组与对照组相比,ADM能上调细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9蛋白表达;人参皂甙Rh2能抑制ADM对细胞P-gp、EMMPRIN、MMP1、MMP2和MMP9蛋白和mRNA水平的上调作用。结论人参皂甙Rh2可以有效逆转乳腺癌细胞耐药细胞系MCF7/ADM的耐药性。     

A Panel Set for Epitope Analysis of Myeloperoxidase (MPO)-Specific Antineutrophil Cytoplasmic Antibody MPO-ANCA Using Recombinant Hexamer Histidine-Tagged MPO Deletion Mutants

A major target protein of antineutrophil cytoplasmic antibody with a perinuclear staining pattern (P-ANCA) has been identified as myeloperoxidase (MPO). Recombinant deletion mutants of MPO, eight fragments of the heavy-chain subunit, and two fragments of the light chain subunit were expressed in E. coli using a pQE expression vector. The recombinant hexamer histidine-tagged fragments were partially purified as the denatured proteins on a Ni²⁺-charged nitrirotriacetic acid column. The recombinant fragments were reacted with a rabbit polyclonal antibody to human MPO in Western blotting. In addition, the reactivities of the proteins with MPO-ANCA-positive sera of four patients with renal diseases were examined by Western blotting. The profile of the reactivity showed that different sera recognized different sets of fragments of the heavy chain, whereas no serum reacted with the fragments of the light chain. These results indicate that the sera of patients with MPO-ANCA-positive diseases showed varied reactivities with the different fragments. Furthermore, an ELISA system using a set of the fragments completely purified by Sephacryl S-200HR column chromatography was established. The panel set is useful for subclassification of MPO-ANCA-related diseases.     

人粒细胞吞噬功能与活性氧的关系研究 Ⅰ.化学发光法测定粒细胞吞噬功能

用化学发光法检测粒细胞吞噬功能具有灵敏、准确、快速和用样品量少等优点。在加入 luminol 增强发光后,用发光仪监测,灵敏度可以达到用液闪计数器测量的同等水平(粒细胞悬液浓度10~5/ml 或更低些),测定样品体积可降到1ml 左右,而且其突出的优点是可以在生理温度(37℃)下恒温测定,操作方便,不必作避光处理,既可应用于粒细胞吞噬功能的机理研究,也可应用于临床监测,对烧伤病人粒细胞吞噬功能的化学发光测定所得初步结果,显示了这一方法的应用潜力。     

绿脓杆菌外毒素A对人PMN功能的影响

为了证明绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）对人中性粒细胞（ＰＭＮ）的破坏以及对ｐＭＮ功能的影响，本文报道用不同剂量的ｐＥＡ和作用时间作用于ＰＭＮ，并用抗ｐＥＡ抗体进行中和保护，分别测定完存的ＰＭＮ数目、超氧（Ｏ２－）水平、特殊颗粒（ＳＧ）数目、胞内杀菌力（ＩＣＢＡ）和吞噬百分数。结果表明，ＰＥＡ４０～１００μｇ／ｍｌ作用１～３ｈ，使ＰＭＮ数目、Ｏ２－水平、ＳＧ数目和ＩＣＢＡ测值明显下降，作用２ｈ以后使其吞噬百分数也明显下降；抗ｐＥＡ抗体能阻止上述指标测值的下降（ｐ＜０．０５）。上述结果证实：ＰＥＡ是造成ＰＭＮ杀菌力和完存ＰＭＮ数目下降的直接原因。     

黄芪,人参皂甙对肺癌浸润淋巴细胞体外抗肿瘤作用的影响

为了进一步提高肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）过继免疫治疗恶性肿瘤的效果，应用＾３Ｈ－ＴｄＲ释放法，观察了黄芪，人参皂甙对肺癌浸润淋巴细胞体外抗肿瘤作用的影响。结果表明，黄芪与人参皂甙均能显著增强ＴＩＬ细胞的体外杀伤活性，二者合用对ＴＩＬ细胞具有协同正向调节作用，是较为理想的替代细胞因子，辅助ＴＩＬ细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的天然免疫调节剂。     

大脑皮质体感Ⅰ区向丘脑中央外侧核一级投射纤维起源的研究

本文采用微电泳导入法向猫丘脑左侧中央外侧核内导入HRP液,用O-D法显示标记细胞,结果观察到在左侧皮质体感Ⅰ区第Ⅴ层内出现较多的标记细胞。这些标记细胞主要属于第Ⅴ层内的中型锥体细胞。在对侧皮质体感Ⅰ区内,未观察到HRP酶标记细胞。     

人肿瘤细胞与正常细胞内微管的PAP免疫酶细胞化学观察

我们利用兔抗微管蛋白抗体和兔抗辣根过氧化物酶(HRP)抗血清制备的HRP—抗HRP(PAP)复合物,建立了微管的PAP免疫酶细胞化学方法。应用此法观察到人食管癌ECa 109、胃癌SGC 7901,乳腺癌MCF 7和成骨肉瘤OS 732细胞间期胞质微管减少或消失,只有大量弥散分布的微管蛋白棕色反应产物,在微管组织中心(MTOC)附近十分密集,而正常成纤维细胞和胎儿胃粘膜上皮细胞间期,都有发达的胞质微管结构(CMTC)。在分裂期,这些肿瘤细胞都显示纺锤体微管,与正常细胞比较无明显差异。本研究应用PAP方法进一步证明,以前用免疫荧光细胞化学方法观察到的人肿瘤细胞间期胞质微管缺陷的特征。除去低温(4℃)或秋水仙酰胺处理后,解聚的CMTC又可恢复,表明本方法与免疫荧光染色法,同样具有很高的特异性。本工作在细胞固定及免疫反应的某些步骤上有所改进。     

枸杞子水提取物对白细胞介素6和肿瘤坏死因子产生的影响

研究了枸杞子水提取物（ＬＢｒ）对全血培养细胞白细胞介素６（ＩＬ－６）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）产生的影响。结果表明，ＬＢｒ单独不能诱导ＴＮＦ产生，ＬＢｒ０．５μｇ／ｍｌ可明显促进ＬＰＳ诱导的ＴＮＦ产生，但ＬＢｒ１０μｇ／ｍｌ则对ＬＰＳ诱导的ＴＮＦ产生无明显作用ｉＬＢｒ０．５μｙ／ｍｌ不仅可促进ＬＰＳ诱导的ＩＬ－６产生，单独亦可诱导ＩＬ－６产生，但ＬＢｒ１０μｇ／ｍｌ则对ＩＬ－６的产生无明显调节作用。     

高强度聚焦超声生物学焦域温场研究

采用热电偶探针测温系统 ,研究了运用JC A型HIFU聚焦超声肿瘤治疗系统定点辐照新鲜离体牛肝脏的生物学焦域温场分布。研究结果表明 :焦域中心温度最高 ,温升可达 74 .4± 1.5℃。在空间上 ,远离焦点温升快速下降 ,Z轴有效温升宽度 12 .4mm ,X、Y轴有效温升宽度均为 5 .4mm。X、Y、Z轴有效温升宽度与生物学焦域大小一致。光镜下 ,生物学焦域与周围正常组织分界清楚。所以 ,在空间上 ,由生物学焦域中心向外缘 ,能量递减十分陡峭 ,具有“刀”的特征。高强度聚焦超声对深部组织定位损伤在空间上是精确的、有效的、安全的。