PTTG基因沉默对人胰腺癌细胞PANC-1细胞增殖的影响

目的研究PTTG基因沉默对胰腺癌细胞增殖的影响。方法利用阳离子脂质体进行基因沉默实验,将PANC-1细胞分为三组(①.未转染PANC-1细胞、②.转染阴性对照siRNA、③转染siRNA-PTTG),MTT比色法和3 H–胸腺嘧啶核苷(3 H-TdR)掺入法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期。结果 24h、48h、72h和96h组③吸光度明显低于与组②和组①,差异具有统计学意义(P<0.05);组③3 H-TdR掺入率明显低于组②和组①,差异具有统计学意义(P<0.01),细胞DNA合成抑制率为37.87%;组③G0/G1期细胞百分率显著增加,S期显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 siRNA-PTTG转染后PANC-1细胞增殖显著抑制,细胞周期阻抑在G0/G1期,DNA合成降低。     

Mcl-1和Bax基因在2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征细胞凋亡中的调控作用

本研究探讨bcl-2基因家族成员调控2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（MDS）细胞凋亡的机制。用2一ME预处理MUTZ—1细胞,荧光比色法检测凋亡信号蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因-髓细胞白血病基因-1（mcl-1）和bcl-2相关X蛋白（bax）mRNA的表达。结果表明：与对照组相比,2-ME增强MUTZ-1细胞内caspase-3活性,并呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）;随着2-ME浓度的增加,细胞内mcl—1mRNA表达下降（P〈0．05）,且mcl-1mRNA表达量与相应时间点caspase-3活性呈负相关（r=-0．992,P〈0．01）,而baxmRNA表达没有明显变化（P〉0．05）。结论：2-ME可能通过下调mcl-1表达和增强caspase-3活性的途径来调控MDs细胞凋亡。     

小干扰RNA抑制PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的研究P1TG基因沉默对胰腺癌细胞侵袭力的影响,探讨其与胰腺癌细胞侵袭性的关系及调控机制。方法阳离子脂质体转染PITG siRNA对PANC-1中的PITG基因进行干扰;利用RT-PCR和Western blot技术检测其基因沉默效应;通过Transwell小室法测定PANC-1细胞侵袭能力的改变。结果转染PTTG siRNA后,PANC-1细胞中PTTG的mRNA转录和蛋白表达受抑,显著低于未经处理的PANC-1细胞（P〈0．01）。利用PITGsiRNA对PITG进行RNA干扰后,PANC-1细胞的侵袭能力下降。结论设计的PITGsiRNA能有效抑制体外培养PANC-1细胞中PTIG的mRNA转录和蛋白表达水平,实现其基因沉默效应。P1TG与人胰腺癌的侵袭能力密切相关,其表达水平下降导致细胞侵袭能力降低。     

维生素K2诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究维生素K2（VK2）诱导人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制，采用流式细胞术Annexin—V^FITC／PI双染分析细胞凋亡率和PI染色分析细胞周期的改变。用RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达，用发光比色法检测caspase-3活性。研究结果显示：细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长逐渐增高并呈明显的时间浓度依赖性（P〈0．05），且随着药物浓度的增加和作用时间的延长S期和G2期细胞逐渐减少（P〈0．05），G0／G1期细胞逐渐增多（P〈0．01），细胞被阻滞在G0／G1期，并且在G0／G1期前出现明显的亚G1峰，即凋亡峰；抗凋亡基因bcl-2、survivin的表达随着VK2浓度的增高明显下调（P〈0．05），而促凋亡基因bax表达无明显变化（P〉0．05）；caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论：VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MUTZ-1细胞发生凋亡，同时抗凋亡基因bcl-2、survivin在细胞凋亡过程中也起重要作用。     

尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制影响的研究

为了研究尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制的影响，采用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA凋亡带，用细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果表明，实验组自培养8小时起琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA梯形凋亡带。Bcl-2蛋白表达在各实验组随培养时间延长逐渐下降，而Bax蛋白的表达则逐渐增加，Bcl-2／Bax比值逐渐下降，8小时就与对照组出现差异（P〈0.05）。结论：尼莫地平及阿糖胞苷均能促进HL-60细胞凋亡，诱导其凋亡的机制与下调bcl-2及上调bax基因的蛋白表达有关。尼莫地平能加强阿糖胞苷促进HL-60细胞凋亡，其机制与协同下调bcl-2的表达有关。     

脑出血周围组织细胞凋亡与bcl-2及bax蛋白表达的关系

目的：探讨脑出血灶周围组织中bcl-2，bax蛋白表达和细胞凋亡的关系。方法：SD大鼠70只。随机分为两组（实验组和对照组）。实验组采用胶原酶诱导大脑尾状核脑出血模型，分别于术后第6h、12h、24h、48h、72h、7d、14d，7个时相点（每个时相点5只）处死大鼠，运用TUNEL法、免疫组化SP技术，检测血肿周围脑组织中细胞凋亡及bcl-2．bax蛋白表达。结果：实验组细胞凋亡、bcl-2，bax蛋白表达与对照组有非常显著性差异（P〈0．01）．高峰期分别为脑出血术后第6h、48h。bcl-2蛋白表达与凋亡阳性细胞数呈负相关（r=-0．7628，P〈0．05），bax蛋白表达与凋亡阳性细胞呈正相关（r=0.8438，P〈0．01）。结论：脑出血灶周围脑组织中存在细胞凋亡，bcl-2，bax蛋白对凋亡具有调控作用。     

维生素K2对骨髓增生异常综合征细胞株MDS-JSN04生长抑制作用及其机理研究

为了探讨维生素K2（VK2）对骨髓增生异常综合征细胞株MDS-JSN04生长的抑制作用及其作用机制,采用细胞形态学方法观察VK2处理后细胞形态的改变;应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测VK2对细胞生长的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡、细胞周期变化和髓系分化抗原CD11b、CD13的表达情况;RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达;用发光比色法检测caspase-3活性.结果表明：VK2作用细胞株72小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征;细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增高,经统计学处理与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）;S期和G2期细胞随着药物浓度的增加而逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多,与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）,细胞被阻滞在G0/G1期,而且在G0/G1期前出现明显的亚G1期细胞即凋亡峰;抗凋亡基因bcl-2、survivin表达随着VK2浓度的增高而明显下调（（P＜0.05）,而促凋亡基因bax表达无明显变化（（P＞0.05）,caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强.结论：VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MDS-JSN04细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因bcl-2和survivin也参与了凋亡调控过程.     

高糖介导入牙周膜细胞凋亡中bcl-2、bax的作用及机制（英文）

背景：高糖环境下人牙周膜细胞会发生凋亡,其中bcl-2,bax是否启动？如何发挥作用？此方面尚未见有文献报道。目的：应用不同浓度葡萄糖影响人牙周膜细胞,观察细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的变化。方法：原代培养并鉴定人牙周膜细胞,取5-8代细胞用于实验。采用5.5 mmol/L葡萄糖（生理对照组）和25 mmol/L葡萄糖（高糖组）作用细胞24 h和48 h;以Hoechst 33258免疫荧光染色观察人牙周膜细胞凋亡;以Real-time PCR检测bcl-2、bax表达。结果与结论：25 mmol/L葡萄糖促进人牙周膜细胞凋亡,bcl-2、bax表达显著高于对照组（P〈0.05）;bcl-2/bax比值显著低于对照组（P〈0.05）。结果说明高糖可增加人牙周膜细胞凋亡,Bcl-2家族发挥了重要作用。     

卵巢黏液性肿瘤中bcl-2和bax的表达及其意义

目的检测bcl-2和bax在卵巢黏液性肿瘤中的表达,分析卵巢黏液性肿瘤发生发展过程中凋亡调控相关基因的作用。方法应用免疫组化SABC法,检测bcl-2、bax在55例原发性卵巢黏液性肿瘤中的表达。结果 Bcl-2在良性、交界性和恶性组中的阳性表达率分别为10%、46.67%和85%;良性与交界性、交界性与恶性比较均具有统计学差异（P〈0.05）,良性与恶性比较有显著统计学差异（P〈0.01）。bax在三组中阳性表达率分别为80%、60%和10%;交界性与恶性、良性与恶性间比较有显著统计学差异（P〈0.01）。Bcl-2/bax比率在良性、交界性和恶性组平均值分别为0.24±0.42、0.85±1.56、15.46±19.58;交界性与恶性、良性与恶性间比较均有统计学差异（P〈0.05）。bcl-2和bax表达呈负相关（r=-0.208,P〈0.01）。结论在卵巢黏液性肿瘤的良恶性演变过程中存在凋亡调控的紊乱,其中线粒体途径可能为诱导凋亡紊乱的主要通路。交界性卵巢黏液性囊腺瘤患者检测到bax的缺如提示有潜在恶变的可能;bcl-2的表达异常在卵巢黏液性肿瘤的良恶性演变过程中是一连续性事件。Bcl-2/bax比率可能与卵巢黏液性肿瘤的良恶性程度密切相关。     

环氧化酶-2RNA干扰对肺癌A549细胞凋亡及caspase家族的影响

目的观察环氧化酶-2（COX-2）RNA干扰对肺癌细胞凋亡的影响,以及对凋亡调控蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-3的调控作用。方法构建COX-2特异性干扰质粒,并转染至肺癌A549细胞株中,AnnexinV-FITC／PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测caspase-8、caspase-9、caspase-3的活性。结果成功构建COX-2特异性干扰质粒并转染至肺癌A549细胞株中,获得抑制COX-2表达的肺癌细胞模型;干扰COX-2的A549细胞凋亡率[（24．3±2．46）％]较未干扰组[（6．52±0．13）％]明显升高（P〈0．01）。干扰COX-2的肺癌细胞．4549caspase．8蛋白表达（0．86±0．09）较未干扰组（0．12±0．01）明显升高（P〈0．01）,caspase-3蛋白表达（0．94±0．09）较未干扰组（0．16±0．02）明显升高（P〈0．01）,caspase-9蛋白表达（1．12±0．11）较未干扰组（0．13±0．01）明显升高（P〈0．01）。结论干扰COX-2可以促进肺癌A549细胞的凋亡,并且活化caspase-8及caspase-9,从而活化caspase-3。     

APRIL siRNA对 SW480裸鼠移植瘤的影响

目的：探讨增殖诱导配体（APRIL）基因在 SW480裸鼠移植瘤中的作用。方法建立人结直肠癌（CRC）裸鼠移植瘤模型并随机分为3组,瘤块内分别注射 APRIL siRNA、空载体和 PBS液。RT-PCR和免疫组织化学法（IHC）检测 A-PRIL水平和蛋白表达,人基质金属蛋白酶抑制因子-3（IHC检测TIMP-3）,多配体蛋白聚糖-1（Syndecan-1,又名CD138）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达。结果①注射PBS组裸鼠移植瘤瘤块质量（2.15±0.30 g）明显高于注射 APRIL siRNA组（0.95±0.15 g,P＜0.05）,与注射空载体组（2.20±0.25 g）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。②注射 PBS组裸鼠 APRIL mRNA／18S rRNA比值（2.48±0.25）明显高于注射 APRIL siRNA组（0.39±0.15,P＜0.05）,与注射空载体组（2.51±0.30）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。③注射 APRIL siRNA 明显抑制 SW480细胞侵袭转移,3组 TIMP-3 Allred得分为7.70±0.35,1.10±0.16和1.15±0.12;Syndecan-1蛋白分别为7.80±0.30,1.05±0.20和1.10±0.22;MMP-9蛋白分别为1.20±0.10,8.00±0.25和8.20±0.20。结论 APRIL与人结直肠癌细胞 SW480的生长和转移有密切关系。     

胰岛素样生长因子Ⅰ抑制氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的体外试验

目的：胰岛素样生长因子Ⅰ作为重要的促细胞生长因子之一，其对内皮细胞凋亡影响的报道不多。实验拟验证和探讨胰岛素样生长因子Ⅰ对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及可能机制。 方法：实验于2006—12／2007—07在华中科技大学同济医学院协和医院心血管疾病研究所完成。①实验材料及分组处理：取人新鲜脐带（产妇或家属签署知情同意书）分离培养人脐静脉内皮细胞，分为：胰岛素样生长因子Ⅰ组（1×10^-9mmol／L）、氧化型低密度脂蛋白（200mg／L）＋胰岛素样生长因子Ⅰ组（1×10^-9mmol／L）、氧化型低密度脂蛋白（200mg／L）组、正常对照组。分别在细胞培养24h后加入。②实验评估：采用四甲基偶氮唑盐法测定细胞活力；DAPI细胞核荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化及细胞凋亡率的测定；并进行内皮细胞caspase-3活性的检测。 结果：①氧化型低密度脂蛋白可明显抑制人脐静脉内皮细胞增殖，胰岛素样生长因子Ⅰ与氧化型低密度脂蛋白共同加入后，细胞增殖率明显上升（P〈0．05）。②氧化型低密度脂蛋白可诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡，而加入胰岛素样生长因子I刺激后细胞凋亡率降低（P〈0．05）。③caspase-3活性检测表明与对照组相比，氧化型低密度脂蛋白能明显上调caspase-3的表达，而胰岛素样生长因子Ⅰ＋氧化型低密度脂蛋白组caspase-3活性则降低（P〈0．05）。 结论：胰岛素样生长因子Ⅰ对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡具有抑制作用，可能与其下调caspase-3蛋白表达有关。     

发育性髋脱位早期髋臼软骨细胞凋亡与Caspase-3、Bcl-2表达的相关性研究

目的探讨发育性髋关节脱位（development dislocation of the hip,DDH）早期髋臼软骨细胞凋亡与Caspase-3、Bcl-2表达的相关性。方法选取32只4周龄新西兰大白兔,采用兔后肢屈髋伸膝位管型石膏固定制作DDH动物模型。对24只成功模型兔采用TUNEL法检测髋臼软骨细胞凋亡情况;免疫组化法检测软骨细胞中Caspase-3和Bcl-2的表达。Spearman等级相关分析法进行细胞凋亡与Caspase-3、Bcl-2表达的相关性分析。结果实验进行至8周时,显示实验侧髋臼软骨细胞凋亡率（45.23±10．42）％,高于对照侧（8．04±4.35）％,差异有统计学意义（P〈0．05）,但随着实验时间的延长,实验侧髋臼软骨细胞凋亡变化不明显;免疫组化结果显示实验侧髋臼软骨细胞Caspase-3和Bcl-2表达的平均灰度值分别为（56．73±7．85）％与（56．73±7．85）％,二者表达高于对照侧（61．45±5．47）％与（52.32±7．99）％,差异有统计学意义（P〈0．05）,但随着实验时间的延长,实验侧髋臼软骨细胞凋亡情况变化不明显。相关性分析得Caspase-3表达的灰度值与软骨细胞凋亡率呈负相关（r=-0．896,P〈0．05）,Bcl-2表达的灰度值与软骨细胞凋亡率呈正相关（r=0．939,P〈0．05）。结论凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2可能在髋臼发育不良和髋臼软骨退变中参与调控。     

铁螯合剂诱导白血病细胞凋亡中caspase-3的变化

目的探讨铁螯合剂去铁胺（DFO）对诱导白血病细胞HL-60的分子机制。方法 2003年712月用钙黄绿素（calcein）检测HL-60细胞LIP。台盼蓝活细胞拒染实验进行活细胞计数及细胞存活率测定;光镜形态学观察及流式细胞仪（FCM）等方法检测HL-60细胞凋亡;比色法检测caspase-3（基于pNA标记底物的比色法）活性。结果①不同浓度的DFO作用于HL-60细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,凋亡率增加,显示一定的时间剂量依赖性。②HL-60细胞在不同浓度的DFO作用下,caspase-3的活性逐渐升高。50、100μmol/LDFO作用于HL-60细胞24h,caspase-3酶活性升高明显,与对照组相比,有统计学意义（P〈0.001）;相关分析结果显示,HL-60细胞LIP的改变与caspase-3活性变化呈负相关系（r=-0.887,P〈0.05）。结论 DFO诱导白血病细胞凋亡的作用可能与螯合细胞内铁,降低细胞LIP,激活caspase-3,最终实施细胞凋亡密切相关。     

小干扰RNA抑制缺氧诱导因子1α表达对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的初步探讨在乏氧培养条件下重组腺相关病毒（rAAV）介导的靶向缺氧诱导因子1α（HIF-1α）小干扰核糖核酸（siRNA）对KYSE150人食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响。方法首先构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF-hrGFP。将rAAV-siHIF-hrGFP及rAAV-hrGFP分别转染对数生长的KYSE150细胞,在乏氧培养条件下模拟肿瘤细胞的乏氧环境进行培养,应用荧光定量聚合酶链反应（Real-TimePCR）、蛋白质印迹法（Western Blot）、3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法和Transwell侵袭实验法,观察KYSE150细胞HIF-1αmRNA和蛋白水平的表达及KYSE150细胞增殖和迁移的影响。本实验共分3组：①对照组（Wt）组;②rAAV-hrGFP组,即空载病毒组（Cv组）;③rAAV-siHIF-hrGFP组,即干扰病毒组（Si组）。结果在乏氧培养条件下,rAAV-siHIF-hrGFP能够抑制KYSE150细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达,HIF-1α蛋白测定（灰度比）：Wt组1.121±0.038、Cv组1.098±0.023、Si组0.426±0.020,与Si组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;同时能够抑制KYSE150细胞增殖和迁移,细胞增殖（A值）：Wt组1.276±0.077、Cv组1.312±0.073、Si组0.621±0.053,与Si组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;但rAAV-hrGFP对KYSE150细胞增殖、迁移及HIF-1α的表达未见有明显影响。结论在乏氧培养条件下,利用rAAV介导的siRNA技术抑制HIF-1α的表达,可有效抑制KYSE150细胞体外增殖和迁移。     

妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘组织中Caspase-3和Livin表达的相关性研究

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）胎盘中凋亡调节基因Caspase-3和Livin表达的关系。方法以30例ICP患者（ICP组）及21例正常产妇（对照组）为研究对象,应用免疫组化方法测定胎盘凋亡调节基因Caspase-3和Livin的表达水平。结果①ICP组胎盘组织中细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞Caspase-3表达分别为（32．86±6．02）％、（21．57±7．52）％、（27．29±4．89）％、（18．14±3．58）％,明显高于对照组的（14．58±3．41）％、（9．58±2．26）％、（15．00±5．39）％、（9．17±2．20）％。两组比较,差异有显著性（P〈0．05）。②ICP组胎盘组织中细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞中Livin的表达分别为（7．43±2．17）％、（4．71±1．81）％、（4．57±1．21）％、（6．71±2．73）％,明显低于对照组的（14．38±3．24）％、（10．00±3．66）％、（8．75±2．97）％、（12．29±3．59）％。两组比较,差异有显著性（P〈0．05）。③ICP组胎盘组织中合体滋养细胞、细胞滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞Caspase-3和Livin的表达均呈负相关性,相关系数分别为：-0．61、-0．58、-0．57、-0．45,P值均小于0．05。结论ICP组胎盘组织中舍体滋养细胞、细胞滋养细胞、蜕膜细胞及间质细胞Caspase-3表达增高,Livin的表达降低,各细胞中Caspase-3和Livin的表达呈负相关性。ICP组胎盘功能减退与细胞凋亡密切相关,Caspase-3和Livin基因可能是ICP胎盘细胞凋亡的重要调控基因之一。     

维生素K2干预肝癌的实验研究

目的：研究维生素K2对人肝癌细胞的凋亡诱导作用,并探讨其作用机制;研究维生素K2的干预对荷瘤裸鼠肝癌肺转移及生存期的影响。方法：用流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT—PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、bcl-2及bax的mRNA表达。建立人肝癌裸鼠原位移植模型,给予荷瘤裸鼠口服维生素K2（30mg·kg^-1·d^-1）,另设对照组,观察两组裸鼠肝癌肺转移和生存期变化。结果：100μmol·L^-1的维生素K2与细胞共育6h后细胞的凋亡率为（28．5±1．6）％,与时照组（2．8±4．8）％比较。有显著差异（P〈0．05）。caspase-3mRNA的表达随着维生素K2浓度及作用时间的增长而增强;当100μmol的维生素K2分别作用细胞24h和72h后,caspase-3mRNA的表达分别为（0．495±0．250）和（0．603±0．098）,与对照组比较（0．270±0．132）均有显著差异（P〈0．05）。人肝癌细胞中未检测到bcl-2mRNA表达。baxmRNA的表达于用药前后无变化。维生素K2干预荷瘤裸鼠后,其生存期（83．6±5．18d）较对照组（58．2±9．47d）明显延长（P〈0．05）;其肺转移灶（4．6±1．95个）较对照组（12±6．6个）明显减少（P〈0．05）。结论：维生素K2对人肝癌细胞有凋亡诱导作用,凋亡相关基因caspase-3参与了凋亡的调控;维生素K2能减少裸鼠肝癌肺转移率,能延长荷瘤裸鼠的生存期。     

Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的研究胚胎发育相关信号通路Sonichedgehog（Shh）对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响。方法试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝（MTT）比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数（PI）和凋亡指数（越）,Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化。结果cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时问依赖性。cyelopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0／G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为15．2±0．54,PI为38．3±0．23（P〈0．05）.Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为（96±4）个,而实验组穿透数为（43±5）个。结论shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力。     

重组人红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后神经细胞及其因子凋亡的影响

背景在脊髓损伤中,除了创伤造成的直接损伤外,脊髓局部还将发生一系列的继发性病理改变.有研究显示重组人红细胞生成素能抑制细胞凋亡和炎症反应,具有神经保护作用.目的通过观察大鼠脊髓损伤段神经细胞凋亡及相关因子的表达,探讨重组人红细胞生成素对脊髓损伤的保护作用.设计随机对照实验.单位华中科技大学同济医学院附属协和医院骨外科实验室和同济医学院病理科.对象实验于2003-09/2004-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨外科实验室和同济医学院病理科进行.雌性成年SD大鼠30只,随机分成4组,①空白组6只,只暴露脊髓,不损伤.②损伤组8只,脊髓损伤,不用药物.③治疗A组8只,脊髓损伤,仅用重组人红细胞生成素.④治疗B组8只,脊髓损伤,联合应用重组入红细胞生成素和β-七叶皂甙钠.方法①动物模型制作24只大鼠应用改良的Allen方法致脊髓中度损伤.②给药治疗A组于术后1,3,5,8,11d应用重组人红细胞生成素300 U/(kg·d).治疗B组应用重组人红细胞生成素剂量时间同治疗A组,β-七叶皂甙钠0.1 mg/kg,1次/d,连用11d.空白组及损伤组尾静脉推注等容量生理盐水.③神经功能判断在造模后1和12 d分别由同一个实验者进行功能评分记录.行为观察参照改良的Gale神经功能行为分析法评估,0分为严重障碍,6分为正常.斜板试验观察大鼠抓握能力决定斜板角度的大小,反映神经功能恢复情况.④组织学检查大鼠术后12 d处死.取损伤段脊髓标本切片做苏木精-伊红染色.⑤神经细胞凋亡因子bcl-2,bax,fas检测取标本做免疫组织化学染色,计数显微镜高倍视野内染色呈棕色的阳性细胞,计算阳性率.⑥凋亡神经细胞检测采用原位末端标记法计算凋亡指数(凋亡细胞核数/总细胞核数).各指标检测结果进行组内和组间比较.主要观察指标①神经功能行为学评分及斜板实验结果.②损伤段脊髓组织学观察结果.③神经细胞凋亡因子检测结果.④凋亡神经细胞检测结果.结果①神经功能行为学评分及斜板实验结果1和12 d空白组无显著差异.损伤组12 d斜板角度显著大于1 d时(P＜0.05).治疗A和B组12 d行为评分及斜板角度值均显著大于1 d时(P＜0.05),且显著大于损伤组P＜0.05).②损伤段脊髓组织学观察结果损伤组损伤段变细,脊髓内有大部分坏死和大量胶质细胞增生;治疗A,B组大多数神经组织正常,治疗B组组织结构优于A组.③神经细胞凋亡因子检测结果损伤组bax,fas凋亡阳性细胞明显多于治疗A,B组[损伤组(25.75±3.37)%和(41.37±2.83)%,治疗A组(19.87±3.56)和(26.00±3.29)%,治疗B组(12.00±2.97)和(17.50±2.20)%,P＜0.05];bcl-2显著低于治疗A,B组[(9.75±1.83)%,(14.63±2.83)%,(21.63±5.34)%,P＜0.05].④凋亡神经细胞检测结果损伤组细胞凋亡指数明显高于治疗A,B组(50.75±5.39,34.75±3.01,24.00±3.46,P＜0.05).结论细胞凋亡是脊髓损伤后神经元死亡的一种重要方式.重组人红细胞生成素能抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能具有保护作用.