TJU103对小鼠同种异基因造血干细胞移植模型GVHD的预防作用

目的探讨TJU103对小鼠同种异基因造血干细胞移植模型移植物抗宿主病(GVHD)是否起预防作用。方法(1)用单向混合淋巴细胞培养方法检测TJU103对T淋巴细胞增殖的影响;(2)以BALB/c(H-2d)、CB6F1(H-2d/b)分别作为完全异基因移植和半相合基因移植的受鼠,给予9.0Gy全身照射后4h,单纯照射组经尾静脉注射0.3mlD-Hank's液,不进行细胞移植;对照组经尾静脉注射C57BL/6小鼠混合细胞悬液(4.5×106骨髓细胞 3.0×107脾细胞),但不进行其他治疗处理;实验组经尾静脉注射C57BL/6小鼠混合细胞悬液(4.5×106骨髓细胞 3.0×107脾细胞) TJU103(终浓度25μg/ml),此后腹腔注射TJU10350μg/d,共7d,然后观察其造血恢复、植入及GVHD的情况。结果(1)TJU103可以显著抑制T细胞活化增殖,其抑制作用呈剂量依赖性,在25μg/ml浓度时,可以抑制83%细胞增殖。(2)由于没有给予GVHD防治措施,对照组受鼠GVHD的发生率和死亡率分别为10/10和10/10;而完全异基因移植实验组小鼠GVHD发生率仅为2/10,30d生存率增加至8/10(P<0.01),中位生存期延长至30d以上(P<0.01);半相合基因移植实验组小鼠GVHD发生率为1/10,30d生存率增加至9/10(P<0.01),中位生存期延长至30d以上(P<0.01)。结论TJU103不仅可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,而且可显著降低小鼠同种异基因造血干细胞移植模型GVHD的发生率。     

自体与异基因外周血干细胞移植早期造血重建的初步研究

OBJECTIVE: To investigate the ratio and amount of CD34+ cells and their subsets in mobilized peripheral blood (MPB) and leukapheresis products in patients receiving autologous peripheral blood stem cell transplantation (auto-PBSCT) and in allo-PBSCT donors, and clarify the role of CD34+ cells in post-transplantation hematopoietic reconstitution. METHOD: Sixteen patients receiving auto-PBSCT and 24 allo-PBSCT donors were studied for CD34+ and CD34+CD38- cell ratios in the 115 MPB and their leukapheresis product samples by way of flow cytometry, and the time of hematopoietic recovery was observed in the two groups. RESULTS: The CD34+ cell ratio in the MPB samples and leukapheresis products was significantly lower in the donors than in auto-PBSCT patients (P<0.05), but CD34+CD38- cell ratio showed no obvious difference between the two groups. The amount of mononuclear cells (MNCs) received by allo-PBSCT patients was much more than that received by auto-PBSCT patients (P<0.01). Similar average times for post-transplant neutrophils recovery to over 0.5x10(9)/L and platelets to over 2 x 10(10)/L (P>0.05) were observed between the groups, and in both of them, the recovery was related to the amount of MNCs, CD34+ and CD34+/CD38- cell infusion. CONCLUSION: Irrespective of auto-PBSCT or allo-PBSCT, the number of CD34+ and CD34+CD38-cells infused after the transplantation is the key factor to influence the course of hemopoietic reconstitution.     

人HLA半相合混合脐血在SCID小鼠移植的实验研究

目的：探讨不同供者来源脐血混合移植的可行性和植入特性。方法：分别将两份人HLA半相合混合脐血或单份脐血输入经亚致量照射后的严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠，观察两组脐血在SCID小鼠体内的植入状况及多系造血重建特性。结果：混合脐血和单份脐血移植均可在受鼠体内植入，形成供－受混合嵌合体，并能重建多系造血，存活率和植入率无统计学意义（P＞0．05）。用多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸（PCR－SSO）探针检测人HLA－DQB1基因发现，HLA半相合混合脐血移植可有1份或2份脐血植入，其中造血祖细胞含量和体外克隆形成能力高者，更易于植入，造血重建特性与单一脐血移植比较无统计学意义。结论：HLA半相合人混合脐血可同时在SCID小鼠体内植入，形成来自供－受三者的多嵌合状态，并能重建造血及免疫功能。     

经胎鼠腹腔途径进行人脐血造血干 细胞宫内移植的实验

【目的】探讨经胎鼠的腹腔途径用人脐血造血干细胞进行宫内移植后出现的并发症及移植情况,建立人脐血造血干细胞鼠宫内移植的动物模型,为临床某些遗传性疾病的宫内治疗及脐血的应用研究提供理论基础。【方法】将人脐血单个核细胞注入胎龄15～17d胎鼠的腹腔内,并设阴性及空白对照组,观察手术并发症及妊娠结局,待出生后1个月及2个月,分别用流式细胞仪和免疫组化检测移植情况。【结果】小鼠外周血中检测到逐渐增加的人CD     

异基因造血干细胞移植中嵌合体的STR-PCR定量检测

目的:研究异基因造血干细胞移植后供者单个核细胞、CD3+T细胞、CD15+粒细胞植入情况。方法:采集22例清髓性外周血干细胞移植患者移植前及移植后不同时间的骨髓标本,应用免疫磁珠进行CD3+T细胞、CD15+粒细胞分选,常规提取DNA,PCR扩增后,进行毛细管电泳,确定基因位点及峰面积,计算供者嵌合率。结果:22例患者均在中位时间+12d(+9d～+15d)造血恢复。骨髓单个核细胞在+7d时供者嵌合率为70%,+14d供者嵌合率均超过90%,+21d和+28d供者嵌合率均超过95%以上。CD15+粒细胞在+7d时嵌合率为40%,在+14d、+21d和+28d供者嵌合率>95%。CD3+T细胞在+7d、+14d、+21d和+28d供者嵌合率分别为65%、80%、84%和90.9%。移植后早期完全嵌合组急性GVHD发生率高于混合嵌合组。结论:在+28d3群细胞均可达到供者完全嵌合状态。定量检测对判断早期植入、预测复发,指导临床干预治疗具有重要意义。     

自体与异基因外周血干细胞移植早期造血重建的初步研究

目的探讨自体外周血干细胞移植(auto-PBSCT)患者与异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)供者的动员后外周血(MPB)及产品中CD34 细胞及其亚群所占比例、数量及其在移植后造血重建中的意义。方法应用流式细胞仪分别检测16名auto-PBSCT患者和24名allo-PBSCT供者MPB及分离产品的115份标本,比较CD34 、CD34 CD38-细胞所占比例及两组患者早期造血恢复情况。结果allo-PBSCT供者MPB及分离产品中CD34 细胞比例均明显低于auto-PBSCT患者(P<0.05);MPB及分离产品中CD34 CD38-细胞亚群含量在两组人群中无显著差异(P>0.05);allo-PBSCT患者所接受的单核细胞数明显多于auto-PBSCT患者(P<0.01);两组患者移植后中性粒细胞恢复到0.5×109/L、血小板恢复到2×1010/L的时间无显著差异(P>0.05),但均与单位体质量输入的单个核细胞、CD34 、CD34 /CD38-细胞数量相关。结论无论是auto-PBSCT 还是allo-PBSCT,回输的CD34 、CD34 CD38-细胞数量是决定造血重建速度的关键因素。     

同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型的建立及其对造血干细胞植入的影响

[目的]建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型,研究该技术对造血干细胞(HSC)归巢、植入率、移植后免疫造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)等方面的影响.[方法]用C57BL/6胎鼠及新生鼠外周血(FNPB)作供体,以单侧胫骨骨髓腔内注射(IBMI)和尾静脉注射(Ⅳ)两种途径移植经亚致死量60Coγ射线辐照预处理的BALB/c鼠.200只受鼠随机分为4组:骨髓腔内注射组(IBM组);尾静脉注射组(Ⅳ组);放疗对照组;正常对照组,每组50只.用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记FNPB在受体内的分布变化,并观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及GVHD情况.[结果]①荧光标记FNPB体内动力学显示直至输注后72 h,供体FNPB经IBMI后主要积聚于注射侧骨髓腔内,肺部滞留很少.而Ⅳ组及IBM组非注射侧骨髓中的FNPB细胞数显著少于IBM组注射侧,Ⅳ组非造血组织器官如肺部有明显供体细胞滞留.②同种异基因小鼠CBT模型中IBM组造血、免疫功能的恢复明显快于Ⅳ组,无GVHD,移植后90 d存活率达到90%,注射侧胫骨植入水平(29.53±6.64)%,较Ⅳ组有显著改善.③IBM输注侧骨髓中供体HSCs植入水平及造血重建速度明显优于非注射侧骨髓.[结论]成功建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型,并证实IBMI途径对促进HSCs植入,造血免疫功能重建,提高UCBT效果方面优于Ⅳ途径,多部位IBMI可能更有利于HSC归巢骨髓.     

人脐血造血祖细胞与脐血浆依赖性的研究

人脐带血与骨髓、外周血干祖细胞生物学特性虽基本相同,但同时也存在一些不同的特性。通过造血祖细胞体外半固体培养发现3种不同来源的粒系祖细胞(CFU—GM)体外生长所需条件不同。骨髓和外周血CFU—GM培养需要外源细胞生长因子GM—CSF存在。脐血CFU—GM培养仅需要脐血浆单独存在即可获得较高的集落产率。揭示了脐血浆中存在一种脐血祖细胞依赖的成分。它不同于GM—CSF,也可能不是GM—CSF协同因子,尚待进一步探讨。此外,提出了一个脐血粒系祖细胞体外培养简便易行的培养体系。     

孕中晚期取脐血制作染色体的临床应用

目的研究染色体病的产前诊断。方法对不同原因产前咨询的278例孕妇于孕中期B超监测下采取脐血,其中68例制作染色体行核型分析。结果68例中7例为异常核型,分别为46,XY,21P+,46,XX,t(1;4)(q44;q25);47,XX,+21及4例46,X,Yq+。结论于孕中晚期采取脐血制作染色体,具有周期短、染色体形态好及成功率高等优点,可获取供临床诊断有价值的结果,对于有遗传病家族史、畸形胎儿分娩史、异常孕产史等的诊断有其特异性。     

糖蛋白130和c-kit同时激活对脐血CD34+细胞的扩增作用

目的 :探讨同时激活糖蛋白 1 30 ( gp1 30 )和 c- kit信号系统 ,对脐血长期培养启动细胞 ( LTC-IC)和混合造血细胞集落形成单位 ( CFU- Mix)的扩增作用。方法 :利用免疫磁珠法分离纯化脐血 CD 3 4细胞 ,在体外液体培养体系中 ,经可溶性白细胞介素 6受体 ( s IL- 6R)、白细胞介素 6( IL- 6)、干细胞因子 ( SCF)和白细胞介素 3( IL- 3)的不同因子及组合扩增 3w,分别用甲基纤维素法和有限稀释法测定 CFU- Mix和 LTC- IC的扩增效率。结果 :s IL- 6、IL- 6和 SCF单独都不能使 CFU- Mix得到扩增 ,而三者联合可使 CFU- Mix数目显著扩增 ,且于培养 2 w时扩增效能最佳 ,此时 CFU- Mix扩增到 2 2 .5倍 ,LTC- IC扩增到 3.5倍 ,作为对照的 SCF IL- 6 IL- 3组则仅分别扩增到 3.0和 1 .9倍。形态学分析发现 :IL- 6、s IL- 6R和 SCF协同作用下 ,产生的集落体积较大 ,并可观察到各系造血细胞集落及不同发展阶段的细胞。结论 :由 IL- 6/s IL- 6R复合物和 SCF联合激活 gp1 30和 c- kit信号系统可刺激造血干 /祖细胞发生明显扩增 ,体外扩散时间以 1～ 2周为宜。     

FQ-RT-PCR法检测脐带血中β与γ珠蛋白mRNA的水平

目的 :探讨新生儿脐带血中 β与 γ珠蛋白 m RNA水平及其意义。方法 :用实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应技术检测 2 3例新生儿脐带血和 2 5例正常对照组外周血中 β与 γ珠蛋白 m RNA水平。结果 :脐带血中 γ/ (β+γ) m RNA比值 [(4 4 .0 8±2 2 .4 1 ) % ]明显高于正常对照组 [(1 .5 5± 4 .1 4 ) % ](P <0 .0 0 1 )。脐带血中胎儿血红蛋白 (Hb F)比值 [(5 8.1 1± 7.1 9) % ]也明显高于正常对照组 [(0 .6 3± 0 .32 ) % ](P <0 .0 0 1 )。结论 :脐带血中 γ/ (β+γ) m RNA及 Hb F水平增高 ,可能说明出生时 γ珠蛋白仍未完全关闭 ,尚有部分表达     

脐血干细胞移植对缺血性脑卒中大鼠CRP、NES、NGF水平的影响

目的：探讨脐血干细胞移植对缺血性脑卒中大鼠CRP、NES、NGF水平的影响。方法：SD 雄性大鼠 75 只,体重200 ～ 250 g,来源于内蒙古大学研究动物实验中心。采用随机抽签法,分为:缺血性脑卒中模型组( 对照组) 30只干细胞移植干预组45 只(实验组),对照组大鼠给予常规治疗,实验组大鼠在常规治疗基础上进行脐血干细胞静脉注射移植治疗。观察大鼠CRP、NES、NGF水平的变化。结果：实验组CRP、NSE、NGF水平均较治疗组明显改善,组间比较,差异有统计学意义,P＜0.05。结论：脐血干细胞静脉注射移植治疗可以明显改善CRP、NSE、NGF水平,可为临床治疗缺血性脑卒中提供依据。     

剖腹产手术时新生儿脐血内麻醉药物含量的研究

用高效液相色谱法测定了28例硬膜外麻醉下剖腹产时脐血中利多卡因的含量。其结果表明硬膜外腔首次给药后胎儿娩出时间与胎儿脐血中麻醉药物含量之间有明显的正相关性,硬膜外腔用药量与脐血中麻醉药物的浓度有显著的正相关关系。提示:硬膜外给药后应尽快剖出胎儿,且给药不宜过多。     

新生儿脐带血弓形体抗体检测的研究

应用SPA-ELISA对405名新生儿脐带血进行弓形体抗体测定,结果121份脐带血呈阳性反应,阳性率为29.88%,其中199份进行血清与滤纸干血滴的测定,血清与血滴的符合率为100%。本次妊娠中,阳性组死胎发生率明显高于阴性组,P<0.05,有显著意义;在既往妊娠中,阳性组流产、早产发生率明显高于阴性组,P<0.01,有特别显著意义。但产妇三个年龄组间、初产妇与经产妇间、产妇各职业组间均无显著差异。     

正常足月儿脐血中G—CSF,GM—CSF含量测定

目的　探讨脐血血浆中造血生长刺激因子的含量 ,了解胎儿造血的特点 ,为临床应用脐血提供可靠的实验依据。方法　应用ELISA法对 64例正常足月儿脐血血浆中G -CSF和GM -CSF进行了测定。结果　脐血血浆中G -CSF和GM -CSF的含量分别是 :1 63.92± 81 .63pg/ml和 1 1 8.71± 74 .5 6pg/ml,与正常组比较P均 <0 .0 1。结论　脐血血浆中G -CSF和GM -CSF的含量明显高于正常成人血浆中的含量。     

黄芪对新生儿脐血淋巴细胞凋亡的影响

目的 探讨黄芪（AM）对新生儿脐血淋巴细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 随机选择30例正常足月新生儿为研究对象，收集并分离脐血单个核细胞（CBMC），体外分别经植物血凝集素（PHA）、PHA联合白细胞介素6（IL-6）、PHA联合AM刺激培养48h，采用丫啶橙-溴化乙锭（AB-EO）染色法测定细胞凋亡水平，间接免疫荧光法测定CBMC中CD38阳性和CD25阳性细胞百分率，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清液中IL-6的水平。结果 PHA＋AM刺激组细胞凋亡率明显低于单纯PHA刺激组（F=205．91，q=25．16，P〈0．001），PHA＋IL-6刺激组明显低于单纯PHA刺激组（q=24.54，P〈0．001），而PHA＋IL-6刺激组与PHA＋AM刺激组间细胞凋亡水平比较差异无显著性（q=0．62，P〉0．05）。PHA＋AM刺激组CD38阳性细胞百分率明显低于单纯PHA刺激组（F=790．12，q=48．95，P〈0．001），PHA＋IL-6刺激组也明显低于单纯PHA刺激组（q=48．42，P〈0．001），但PHA＋IL-6刺激组与PHA＋AM刺激组间比较差异无显著性（q=0．53，P〉0．05）。PHA＋AM刺激组CD25阳性细胞百分率明显高于单纯PHA刺激组（F=221．38，q=26．60，P〈0．001），PHA＋IL-6刺激组也明显高于单纯PHA刺激组（q=24．86，P〈0．001），但PHA＋IL-6刺激组与PHA＋AM刺激组间比较差异无显著性（q=1．74，P〉0．05）。PHA＋AM刺激组培养上清液中IL-6水平明显高于单纯PHA刺激组（t＇=6．50，P〈0．001）。CBMC经48h培养后，凋亡细胞百分率与培养上清液中IL-6浓度呈明显负相关（r=-0．75，P〈0．05）。结论 黄芪能明显抑制CBMC体外经PHA激活后的细胞凋亡，其机制可能与促进CBMC中胸腺细胞向T淋巴细胞分化、增强脐血淋巴细胞活化和增加IL-6产生水平等有关。     

经母腹取胎血及其脆性X检测的临床应用

本文报道在B超监护下经母腹作脐静脉穿刺取胎血33例,其中30例咨询孕妇作产前诊断,3例中孕引产。成功率为93.9％。孕龄与穿刺命中率,胎盘位置与穿刺命中率均不相关(P>0.05及P>0.05)。手术最佳时间是孕24周前后。手术并发症有胎心率变慢(或快),胎盘渗血,脐带渗血,脐血管空气栓塞等。但未发生死胎、流产、胎膜早破及感染。胎血的脆性X(fra(x))表达率较高,但脆性X并不复制。本法有可能成为fra(x)综合征的一种快速,可靠,安全,经济的产前诊断新方法。     

用多聚酶链式反应检测献血员巨细胞病毒感染

采用多聚酶链式反应，检测了７６份血库献血员的巨细胞病毒感染情况。结果显示：３９份表现阳性，阳性率为５１．３％。同时还检测了其敏感性和特异性。结果表明，可检测到的巨细胞病毒ＤＮＡ最低限为５ｆｇμｌ－１。本方法简单，快速，特异性较好，灵敏度高，可适用于临床巨细胞病毒感染的检测。