培养细胞的免疫细胞化学操作体会

对培养的细胞进行免疫细胞化学反应 ,可以在培养皿内直接进行 ,亦可经树脂包埋后 ,在半薄切片上进行。本实验应用上述二种方法 ,对培养的大鼠内耳血管纹的组织细胞进行了免疫细胞化学显示。组织细胞处理 :1 )平皿培养和盖玻片上培养的大鼠内耳血管纹处组织细胞 ,经Bouin固定液固定 4h,0 .0 1 Mol/L PBS浸洗 ,0 .1 %的 Triton x- 1 0 0处理 2 0 min;2 )平皿培养的细胞经酶处理 ,离心收集 ,2 %戊二醛固定液固定 4h,经丙酮脱水与锇酸固定( - 2 0℃ )、树脂包埋、半薄切片。免疫细胞化学反应 :上述处理的细胞或切片进行免疫细胞化学反应 ,其…     

大鼠海马神经细胞花生凝集素和ConA受体细胞化学技术

本实验应用 PNAg和 ConAg细胞化学技术 ,对大鼠海马神经细胞膜上的相应受体进行凝集素细胞化学反应。材料与方法 :雄性 SD大鼠 4只 ,体重2 5 0～ 30 0 g。动物经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后 ,进行心脏灌注固定 (固定液为 4%多聚甲醛 0 .1 M PB( p H7.3)。动物静置于 4℃ ,3hr后取出大脑 ,用上述固定液后固定 3hr。取具有海马的脑组织 ,用梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片。PNAg和 Con Ag的制备 :1 )枸橼酸还原法配制 7nm胶体金 ;2 )胶体金分别与 PNA和 Con A稀释液按一定比例结合 ;3)超速离心 ,4℃ ,36 0 0 0 /rpm45分钟 ;4)收…     

骨骼肌m-ATPase染色改良法

我们在实验中发现 ,用常规的钙钴法很少能保存骨骼肌中 ATP酶的活性 ,且 ATP酶对固定非常敏度 ;而使用未固定的材料骨骼肌中常出现人工假象。固定液的张力很重要 ,而蔗糖是把张力提高到足够水平的最适当添加物。我们将原 ATP酶钙钴法作了如下改进 :1.固定 :将新鲜骨骼肌组织用双面刀片切成约 1 mm厚的薄片 ,入固定液中固定1 0 min,4℃。固定液配制 :多聚甲醛 4g;二甲砷酸钠 3.0 8g;氯化钙 0 .75 g;蔗糖 1 1 .5 g;双蒸水加至 1 0 0 ml,调节 p H值为 7.2。2 .OCT包埋 ,- 2 0℃恒冷箱切片( 8μm) ,室温下自然干燥 30 min。3.切片预处理 1…     

大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元——免疫组织化学法研究

应用 ABC免疫组织化学技术对大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元进行了研究 ,发现大鼠心脏心房后壁神经节内存在着胆碱乙酰转移酶 ( Ch AT)免疫阳性神经元。材料与方法 ,成年大鼠 1 0只 ,雌雄不限 ,体重 1 5 0克左右 ,0 .4%戊巴比妥纳腹腔麻醉 ,经左心室 0 .9%Nacl灌洗 ,4%多聚甲醛 30 0 ml( p H7.2磷酸缓冲液 ) ,灌注固定。取心房后壁 ,后固定1 2 hr,常规石蜡包埋 ,切片厚 5 μm,切片脱蜡至水 ,用 SABC法免疫组织化学反应 :切片于 3% H2 O2 1 0 min,D· W洗 3次× 2 min,0 .0 1 M枸橼酸缓冲液 ( p H6 .0 )微波修复( 1 0 0℃ )…     

内耳石蜡切片制作的改进

内耳石蜡切片是组织胚胎学极其重要的教学标本,标本制作的质量,直接影响教学效果。本文通过对内耳组织的脱钙、固定、包埋方向、摊片等传统制作时技术环节的改进,确保切片结构完整,层次分明,无断裂破碎现象。     

石蜡包埋全喉大切片的制备及特殊染色

我们参考王德田等[1] 的方法 ,采用石蜡包埋、普通轮转式切片机 ,制成全喉大切片 ,并对其进行特殊染色。得到较好的效果。一、材料与方法1 把尸检切取的全喉和手术切除的喉癌标本根据需要在水平、冠状和矢状三个方向切开 ,选用 5 4%的甲醛固定。2 取材时应用刀锋锐利的解剖用刀 ,对已有钙化的甲状软骨用 5 %的硝酸水溶液进行脱钙 ,限 72ｈ为宜 ,脱钙后流水充分冲洗去除脱钙液。3 切片过程 :( 1)制片 :将切取的全喉组织放在适当有盖容器内依次进行脱水、透明和浸蜡。 75 %、85 %乙醇各脱水12ｈ ;95 %乙醇和 2次无水乙醇各脱水 12ｈ ;3次二…     

甲基丙烯酸羟乙酯塑料包埋切片技术在小鼠胎脑组织学分析中的应用

目的 探索塑料包埋切片法在小鼠胎脑组织学分析中的应用。 方法 取胚胎期13.5d（E13.5）小鼠,4% 多聚甲醛4℃固定过夜,分离胎鼠头部,甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)塑料包埋组织并切片;对切片进行HE 染色。 结果 与石蜡包埋相比,采用HEMA塑料包埋的方法进行胎鼠脑组织学分析,形态结构保存较完整、HE染色效果较清晰。 结论 利用塑料包埋技术进行小鼠胎脑组织学分析,优于石蜡包埋方法。     

地高辛标记的cRNA探针在胰岛素mRNA原位分子杂交中的应用

采用雄性成年Wistar大鼠胰腺,用地高辛标记的cRNA探针进行原位分子杂交,以检测胰岛B细胞的胰岛素基因表达产物mRNA;同时用免疫组织化学PAP法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞,进行原位比较。1.标本制备:大鼠经4%多聚甲醛灌流固定,取胰尾,入Bouin液固定20h,常规石蜡包埋,切片厚6μm,裱在用铬矾明胶处理的载片上。2.探针标记:用RNA标记试剂盒(Boehringer Mannheim     

改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

家鼠类肾上腺嗜铬细胞简易染色法

一、染色方法 :( 1 )固定小家鼠肾上腺髓质于下列固定液中 2 4hr:即 3%重铬酸钾水溶液 1 0 ml,1 0 %福尔马林 2 0 ml,蒸馏水2 0 ml。 ( 2 )移浸入 3%重铬酸钾水溶液 48hr。( 3)水洗 2 4hr。 ( 4 )石蜡包埋、切片。 ( 5 )切片脱蜡至蒸馏水。 ( 6 )常规苏木素染液 1 5 min、水洗。 ( 7) 1 %盐酸酒精分化适度、水洗1 5 min。 ( 8)各级酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果 :肾上腺髓质嗜铬细胞颗粒呈现棕黄色 ,细胞核呈蓝色。二、注意事项 :( 1 )动物选择家鼠类 ,组织力求新鲜。 ( 2 )固定液临用前配制。 ( 3)组织铬化过程需每日更换新液…     

复合配方脱钙液处理兔股骨髁标本

背景：兔骨缺损修复模型被广泛应用于骨替代材料的研究中,在实验过程中经常需要对兔股骨髁标本进行脱钙制作病理切片,但普遍存在脱钙困难的问题。 目的：尝试应用一种复合脱钙液实现软骨覆盖兔股骨髁有效脱钙。 方法：取兔股骨髁标本12个,分为2组,分别用自制复合脱钙液和普通甲酸脱钙液进行常温条件下的脱钙处理,复合脱钙液的组成比例如下：盐酸8 mL,甲酸10 mL,醋酸5 mL,中性甲醛固定液100 mL。在经过1周的常规脱钙过程之后,进行标准化的脱水、包埋、切片和染色程序。统计切片的完整率,观察苏木精-伊红染色后切片的质量和细微结构,并对两种脱钙液的经济性进行比较。 结果与结论：复合脱钙液组的切片完整率显著高于甲酸组,差异有显著性意义(74% vs18%,P < 0.05)。复合脱钙液组的切片着色优良,背景清亮,微观结构清晰,细微结构保存完整,不同组织染色对比鲜明。该复合脱钙液的应用成本较常用的甲酸脱钙液降低65%。提示自制复合脱钙液可有效解决兔骨缺损修复模型实验中的脱钙困难问题,且复合脱钙液配置简便,成本低。     

塑料不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡法对骨组织切片的比较

骨组织内含有大量的钙盐和无机盐,如不脱钙切片,常给骨组织切片和染色造成非常大的困难,直接影响实验结果。作者根据研究的需要,对塑料包埋不脱钙、石蜡包埋、明胶浸泡３种方法切片及染色进行比较,以便找出一种最佳切片方法。１　材料与方法１－１　塑料包埋组　所用材料是我所研究生课题实验材料。新西兰大耳白兔１０只,体重２－２～２－５ｋｇ,♀、♂不限。取双侧尺桡骨１－５ｃｍ保留周围少量肌肉。１０％中性福尔马林固定。梯度乙醇脱水。甲液：甲基丙稀酸甲酯（ＭＭＡ）７５ｍｌ,邻苯二甲酸二丁酯（ＤＢＰ）２５ｍｌ。乙液：Ｍ…     

显示尼氏体方法的尝试

选用Bouin固定液固定新鲜脊髓,石蜡包埋切片,采用普通的苏木素一伊红染色,清晰地显示了神经细胞胞浆内的嗜碱性物质一尼氏体,而且较特染简单、经济、不易退色.1材料与方法取狗新鲜脊髓颈膨大固定于Bouin液24小时.(1)苦味酸75份(饱和),甲醛25份,冰醋酸5份(用前临时配制);(2)常规脱水包埋;(3)石蜡切片5μm; (4)HE染色;(5)中性树胶封片.2结果尼氏体呈兰色粒状和块状,清晰可见,背景呈浅红色(附图).     

应用端粒酶原位杂交技术检测大肠癌端粒酶活性

笔者利用国产端粒酶原位杂交检测试剂盒在大肠癌组织的石蜡切片中检测端粒酶活性 ,获得满意结果。现将应用该方法的体会简要介绍如下。1　材料与方法1.1　观察对象　手术切除的新鲜大肠癌组织 2 0例 ,对离体组织立即液氮冷冻 ,- 80℃冰箱保存。标本分为 2份 ,1份在做 5 μｍ厚连续冷冻切片 ;另 1份经 10 %中性福尔马林或4 %多聚甲醛固定 ,石蜡包埋 ,做 5 μｍ厚石蜡切片。1.2　试剂　 (1)端粒酶原位杂交检测试剂盒为武汉博士德公司产品 ,购自天津ＴＢＤ公司 ,编号ＭＫ115 9。端粒酶逆转录成分 (ＴＥＲＴ )来源于人基因ＴＥＲＴ ＮＭ 0 0 32 …     

免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会

金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质 ,使其与抗体相吸引 ,从而将抗体标记。我们在使用免疫胶体金标记超薄切片抗原的实验中深深地体会到 ,要提高标记阳性的成功率 ,某些因素将在实验中起到很重要的作用。1、材料和方法1 .1材料　 2 0例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为 Ig A肾病的肾活检组织的环氧树脂包埋块。1 .2方法　取肾活检组织 ,经 0 .0 5 %戊二醛 ,1 %多聚甲醛 (二甲砷酸钠缓冲液配制 )固定 3- 4 h,1 % Os O4后固定 2 h,梯度丙酮脱水 ,Epon81 2包埋 ,6 0℃聚合 1 2 h,制备超薄切片 ( 5 0 - 70 nm) ,粘贴于带有 formar膜的…     

电镜制片技术在骨组织免疫组化中的应用

骨组织的电镜制片技术对组织固定与脱钙要求均远高于常规染色与免疫组化,其固定液和脱钙液与其他方法相比均有较大差别,本实验引用该方法对骨组织进行常规固定、脱钙处理,并进行骨组织免疫组化染色,取得了较理想的效果,现报道如下。1材料与方法1.1材料健康成年日本大耳白兔60只,体重2.5±0.25kg,由武汉大学动物实验中心提供,♀♂不限,根据实验要求分为实验组与对照组。一抗为鼠抗兔VEGF单克隆抗体(美国Neo Markers公司,Ab-3,JH121);二抗为超敏SP试剂盒(福州迈新公司,Kit-9701,S-P Mouse)。1.2固定液配制2%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液:…     

人内耳骨迷路的组织发生

目的 :了解人胚胎内耳骨迷路的组织发生。方法 :取因故人工流产的胚胎 42例 ,将内耳作石蜡包埋 ,连续切片 ,光镜观察。扫描电镜标本用冷冻割断法 ,观察其割断面的表面结构。结果 :胚胎第 6周蜗管周围的间充质聚集 ,7- 8周变为初软骨 ,9- 12周分化为真性软骨 (透明软骨 ) ,14周骨化开始 ,2 5周骨化完成。结论 :骨迷路的形成是以软骨内成骨的方式进行的     

慢性酒精中毒对大鼠腺垂体GH细胞的影响

本实验选用 Wistar大鼠 ,实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别喂养 3个月、6个月和 18个月时麻醉下经心脏用4%多聚甲醛行全身灌流后取脑垂体 ,Bouin液固定、石蜡包埋 ,切片厚 5 μm。用兔抗鼠 GH抗血清 (北京中山生物技术有限公司提供 ,1∶ 5 0稀释 ) ,SP系列试剂盒免疫组织化学方法染色。 40倍物镜下用测试网格分别计数免疫染色阳性细胞总数、强阳性细胞数。选择细胞轮廓完整、没有重叠的细胞 ,用目镜测微尺测量阳性细胞的最长径及最短径 ,取其中间值作为细胞的直径。结果如下 :1各对照组免疫染色阳性细胞的直径大于相应实…     

显示大脑皮质神经元的银浸改良法

本文以Lindere银浸技术为基础,在方法上进行了改进.改良后的方法,能够同时显示出大脑皮质多种神经元,并可使其胞体、突起、神经纤维以及神经元上的棘状突起显示得清晰可辨.此法特异性强,结果可靠,操作简便.便于观察大脑皮质各层神经元的形态结构、分布以及相互联系,为教学及研究提供一种简便可行的方法.1 材料和方法1.1 取材与固定 采用健康成年Wistar大鼠4只,体重200～250g断头处死,立即取出大脑皮质,固定于10%甲醛钙液或Bouin液中12～16h或者采用4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.2灌注内固定处理12h,然后取出大脑皮质,再固定于上述固定液中4h,制作厚10μm的石蜡切片或厚20μm的冰冻切片.1.2 试剂配制(1)三甲基吡啶缓冲贮存液 取三甲基吡啶6.5ml加大约450ml双蒸水制备0.lmol/L溶液,过滤后,加入足量的10%硝酸溶液,调pH至7.2然后再加入双蒸水至500ml.此液在4℃冰箱中可长期保存.(2)稀释工作缓冲液取8ml三甲基吡啶缓冲贮存液加入92ml双蒸水制备成工     

全自动密闭式组织脱水机的使用改进

全自动密闭式组织脱水机以其卓越的性能和良好的处理效果 ,特别是安全、高效 ,将逐渐被各级医院病理科广泛使用。我科自 1997年使用全自动密闭式组织脱水机以来 ,标本的处理效果明显改观 ,切片质量显著提高。一、材料与方法1.仪器和设备∶(1)进口全自动密闭式组织脱水机 ,附不锈钢脱水篮 2只 ,分别可容 15 0个包埋盒。 (2 )塑料包埋盒。2 .试剂∶(1)ＡＡＦ固定液 :70 %乙醇 85ｍｌ,冰乙酸 5ｍｌ,4 %甲醛液 10ｍｌ。 (2 ) 95 %乙醇 ,(3)无水乙醇 ,(4)硬脂酸 ,(5 ) 5 8～ 6 0℃熔点石蜡。3.处理过程∶新鲜组织取材后 ,放入写有检验号码的塑料…