膀胱镜活检组织CD44表达研究

目的探讨膀胱镜活检组织CD44蛋白表达与膀胱肿瘤恶性程度及转移的关系.方法应用流式细胞仪和免疫荧光技术对35例膀胱移行细胞癌、17例良性病变和12例正常膀胱粘膜组织进行CD44蛋白表达检测.结果发现膀胱移行细胞癌病灶CD44表达明显高于良性病变和正常粘膜,具有显著差异(P＜0.01);CD44表达在浸润性膀胱癌明显高于浅表性膀胱癌,有显著差异(P＜0.05),癌前病变即开始出现高表达趋势.结论CD44与肿瘤的浸润和转移密切相关.膀胱镜活检组织中CD44蛋白含量的测定在膀胱移行细胞癌的早期诊断、转移潜能预测和术前决策方面有很大临床价值.     

CIK细胞对 MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CYtokine-induced kill cells,CIK)对MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其作用机制.方法应用(TdT-mediated dUTP nick end labeling)TUNEL法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫细胞化学法测定Bcl-2、Bax的阳性表达率,深入研究CIK细胞对MGC-803胃癌细胞株凋亡相关基因蛋白表达的影响.结果TUNEL法检测对照组成不染或均匀淡蓝色,实验组凋亡细胞缩小,核或核周成深蓝色.CIK实验组5～14小时凋亡率上调,14～24小时凋亡率下降.CIK实验组凋亡率与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).免疫细胞化学结果表明:Bcl-2蛋白随作用时间延长表达均下降,Bax蛋白表达上调,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论CIK细胞对MGC-803胃癌细胞早期诱导凋亡,晚期诱导肿瘤细胞坏死.其作用机制之一可能是通过上调Bax,下调Bcl-2的蛋白表达实现的.     

CD44v6在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其对卵巢癌细胞株侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨CD44v6(CD44 variant domain 6,CD44v6)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭和迁移能力的影响.方法:收集东莞市人民医院妇产科2002年至2010年间手术切除的卵巢上皮性肿瘤标本185例,采用RT-PCR和EnVision-免疫组化染色技术检测卵巢上皮性肿瘤组织中CD44v6的表达.构建CD44v6表达质粒转染SKOV3细胞,分别加入不同浓度anti-CD44v6中和抗体,应用Transwell小室实验检测各组SKOV3细胞侵袭和迁移能力的变化.结果:CD44v6 mRNA和蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达高于卵巢良性上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织(P＜0.05).CD44v6的表达与卵巢上皮性癌的病理组织学分级、预后相关(P＜0.05).体外实验显示,上调CD44v6的表达可以促进SKOV3细胞的迁移能力,而加入anti-CD44v6中和抗体后,可消除CD44v6对SKOV3细胞迁移的促进作用.结论:CD44v6表达上调参与卵巢上皮性肿瘤的发生、发展.     

CD44v6和C-myc在膀胱移行细胞癌中的表达与临床意义

目的　探讨CD4 4v6和C myc在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组化法检测 5 0例膀胱移行细胞癌标本中CD4 4v6和C myc的表达情况、并与膀胱癌的病理分级及随访结果相比较。 结果　 2 8例CD4 4 v6表达阳性 ,阳性率 5 6 % ,且膀胱癌分化越好 ,CD4 4v6表达率越高 ,临床预后亦较好 ,这与其它肿瘤具有很大区别。 36例C myc表达阳性 ,阳性率 72 % ,膀胱癌分化越差 ,表达率越高 ,临床预后也较差。结论　CD4 4v6和C myc表达可以作为监测膀胱移行细胞癌恶性程度及预后的重要指标。     

吉西他滨对膀胱癌细胞系增殖、细胞周期、凋亡的影响

背景与目的：吉西他滨（gemcitabine，GEM）单药或与顺铂合用在晚期膀胱癌治疗中显示了较高的反应率，已成为晚期膀胱癌化疗的一线药物，然而其在膀胱癌效应机制方面的研究却不多见。本研究探讨占西他滨体外对人膀胱移行上皮癌细胞系增殖、细胞凋亡以及p53、Bax、Bcl-2和Caspase3基因表达的影响。方法：体外培养膀胱移行细胞癌细胞系BIU-87、5637、T24、EJ细胞，用MTT法检测吉西他滨对各类癌细胞生长抑制的影响，用流式细胞技术（碘化丙啶）检测吉西他滨对癌细胞周期影响，流式细胞仪Annexin—V法测定细胞凋亡率，流式免疫荧光检测用药前后p53、Bax、Bcl-2、和Caspase3基因表达变化。结果：吉西他滨对体外培养的膀胱移行细胞癌细胞系均有抑制作用，具有时间和浓度依赖性，低分化肿瘤和倍增时间短的细胞系对吉西他滨敏感性高。吉西他滨1μg/ml作用5637和EJ细胞24h，导致细胞G1期83．94％与85．46％的阻滞；作用于5637细胞12、24和48h，凋亡率分别为4．8％、11．7％及23．3％。免疫荧光显示p53、Bcl-2表达没有显著性变化，而Bax、Caspase3却随吉西他滨作用时间延长表达升高。结论：吉西他滨对膀胱移行细胞癌具有抑制作用，细胞分化低、倍增时间短的癌细胞系对吉西他滨更敏感。吉西他滨阻滞细胞于G1，诱导Bax表达上调可能是产生膀胱癌细胞凋亡的原因之一。     

膀胱移行细胞癌尿脱落细胞CD44v6 mRNA表达的临床意义

目的 探讨膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞CD44v6mRNA的表达及其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测膀胱移行细胞癌37例,所有患者行经尿道膀胱肿瘤电切术或膀胱部分切除术;20例泌尿科非肿瘤患者以及10例健康志愿者尿脱落细胞CD44v6mRNA的表达设为对照组。结果 术前37例膀胱移行细胞癌中有29例尿脱落细胞CD44v6mRNA表达阳性,阳性率为78．4％,术后2周37例膀胱移行细胞癌尿脱落细胞CD44v6mRNA表达均为阴性;20例泌尿科非肿瘤患者以及10例健康志愿者尿脱落细胞CD44v6mRNA表达均为阴性。结论 尿脱落细胞CD44v6mRNA的表达阳性可以作为膀胱移行细胞癌的证据之一,有助于膀胱移行细胞癌的筛选和术后随访。     

Ezrin、CD44在膀胱移行细胞癌的表达与意义

目的：探讨ezrin、CD44在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达与意义。方法：采用免疫组织化学检测60例膀胱移行细胞癌与14例正常膀胱组织中ezrin、CD44的蛋白表达。结果：ezrin、CD44在膀胱移行细胞癌组织中的蛋白表达明显高于正常膀胱组织（P〈0.05）,ezrin、CD44的蛋白表达与膀胱移行细胞癌组织的病理分级、临床分期密切相关,ezrin、CD44蛋白表达的阳性表达随着膀胱肿瘤病理分级、临床分期的增高而增高（P〈0.05）。ezrin、CD44的蛋白表达在膀胱移形细胞癌中有相关性。结论：ezrin、CD44在BTCC发生、发展过程中起重要作用。Ezrin、CD44在膀胱移形细胞癌的发生、进展中可能有协同性。ezrin可作为诊断、判断预后、指导治疗、随访检测的指标。     

Caspase-3与Bcl-2蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

背景和目的:肿瘤的发生是细胞异常增生和凋亡不足的结果。以往研究认为凋亡的发生与Caspase-3和Bcl-2蛋白有密切的联系。本研究拟通过检测Caspase-3和Bcl-2蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达,探讨其在膀胱移行细胞癌发生、发展中的意义。方法:采用免疫组织化学(SP)法,对52例膀胱移行细胞癌组织和10例正常膀胱粘膜组织中的Caspase-3及Bcl-2蛋白表达情况进行检测。结果:膀胱移行细胞癌组织中的Caspase-3蛋白表达率(53.8%,28/52)明显低于正常膀胱粘膜组织(90.0%,9/10),Caspase-3的蛋白表达与膀胱移行细胞癌的病理分级有关(P<0.05),但与临床分期没有明显的联系;膀胱移行细胞癌组织中的Bcl-2蛋白表达率(51.9%,27/52)明显高于正常膀胱粘膜组织(20.0%,2/10),且Bcl-2蛋白表达情况与病理分级、临床分期均无关(P>0.05)。在正常膀胱粘膜中Caspase-3与Bcl-2的蛋白表达呈负相关(rs=-0.659,P<0.01)。结论:Caspase-3蛋白的高表达与Bcl-2蛋白的低表达在膀胱癌的发生和细胞凋亡的调控方面可能起着重要作用。     

膀胱

膀胱移行细胞癌抗凋亡因子生存素拼接变异体的表达；丝裂霉素C对人膀胱癌T24细胞Mta-1mRNA、Mta-1蛋白表达的影响及意义；PTEN和P27在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义；乙状结肠膀胱扩大术治疗神经原性低顺应性膀胱的疗效观察；女性腺性膀胱炎的临床特征和尿动力学表现；     

蟾毒灵联合阿霉素对膀胱癌T24细胞生长的影响及机制

目的:观察蟾毒灵联合阿霉素对膀胱癌T24细胞生长的影响，探讨蟾毒灵联合阿霉素抗肿瘤作用的可能机制。方法:用不同浓度的蟾毒灵和阿霉素分别作用于T24细胞，用MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，RT-PCR检测凋亡基因Bax及Bcl-2表达水平，再联合使用两组药物作用T24细胞，检测相关凋亡指标。结果:MTT 结果显示，蟾毒灵与阿霉素联合应用比单独应用阿霉素对T24细胞的增殖抑制率要明显提高，差异有统计学意义(P＜0.05)；流式细胞仪结果显示，当蟾毒灵和阿霉素联合应用T24细胞的凋亡率要明显高于单独应用两种药物，差异有统计学意义(P＜0.05)；RT-PCR结果显示，蟾毒灵联合阿霉素能明显下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达，上调促凋亡基因Bax的表达，与单独用药相比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:蟾毒灵联合阿霉素可增敏阿霉素对T24细胞的增殖抑制及诱导细胞凋亡的能力;其抗肿瘤活性的机制可能与影响凋亡基因Bax及Bcl-2的表达有关。     

选择性环氧合酶2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的作用

背景与目的:环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与膀胱癌的发生发展密切相关,因此COX-2抑制剂对于膀胱癌可能具有潜在的抗肿瘤效应.本实验旨在探讨选择性COX-2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的抑制作用.方法:用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)研究选择性COX-2抑制剂SC-58125、塞来昔布(celecoxib)和非选择性COX抑制剂吲哚美辛(indomethacin)对T24细胞增殖的影响;用流式细胞术、DNA电泳和Hoechst33258荧光染色3种方法检测SC-58125作用下T24细胞的凋亡,同时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因的变化.结果:在12.5 μmol/L至200 μmol/L的剂量范围内,SC-58125、塞来昔布及吲哚美辛均能不同程度地抑制T24细胞的增殖,以SC-58125的抑制作用最强,IC50在25 μmol/L～50 μmol/L之间;3种凋亡检测方法均观察到SC-58125作用后凋亡细胞的比例增加,其中100 μmol/L的SC-58125作用于T24细胞6 h和12 h后,流式细胞仪测得凋亡细胞的比例分别为(7.95±1.88)%和(12.5±2.42)%,较对照组增加(P＜0.05),但细胞内与凋亡相关的Bcl-2和Bax基因表达没有变化.结论:选择性COX-2抑制剂体外可抑制T24细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

下调RAGE对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡能力及周期分布的影响

目的:探究下调晚期糖基化终末产物受体(RAGE)对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡能力及周期分布的影响.方法:人膀胱癌T24细胞株培养后,通过慢病毒载体构建下调RAGE组、上调RAGE组.MTT检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡、周期分布情况,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭能力,通过细胞划痕实验检测各组细胞...     

circFBXL5通过靶向miR-515-5p影响膀胱癌T24细胞的恶性生物学行为及其分子机制

目的：探讨circFBXL5通过靶向miR-515-5p影响膀胱癌T24细胞的增殖、迁移、侵袭及其分子机制。方法：收集2020年4月至2020年6月间在苏州市中西医结合医院手术切除的41例膀胱癌组织及其癌旁组织,采用qPCR法检测circFBXL5、miR-515-5p的表达;双荧光素酶报告实验验证circFBXL5与miR-515-5p之间的靶向关系,体外培养人膀胱癌T24细胞,实验分为si-NC组、si-circFBXL5组、anti-miR-NC⁺si-circFBXL5组和si-circFBXL5⁺anti-miR-515-5p组;MTT法、细胞克隆形成实验、FCM、Transwell实验和WB法分别检测转染后T24细胞的增殖、细胞克隆形成、迁移、侵袭和凋亡及BAX、Bcl-2蛋白水平。结果：膀胱癌组织中circFBXL5呈高表达,miR-515-5p呈低表达(均P<0.05);circFBXL5靶向且负向调控miR-515-5p的表达;敲减circFBXL5后T24细胞的增殖抑制率、凋亡率和BAX蛋白水平均显著增高(均P<...     

小RNA干扰沉默CD147基因对膀胱癌T-24细胞生物学行为的影响

目的:探讨重组腺病毒介导的小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)沉默CD147基因表达对人膀胱癌T-24细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法:构建针对CD147基因的siRNA重组腺病毒表达载体Ad-CD147 siRNA,感染人膀胱癌T-24细胞.实验设空白对照组(Mock)、阴性对照组(Ad-siControl)和干扰组(Ad-CD147 siRNA).采用RT-PCR检测CD147和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测CD147蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖的情况,Transwell小室法和划痕实验检测对细胞侵袭和迁移能力的影响;明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的分泌情况;ELISA法检测VEGF蛋白分泌水平.结果:成功构建了Ad-CD147 siRNA腺病毒表达载体,Ad-CD147 siRNA可使T-24细胞CD147 mRNA和蛋白表达量下调＞90％(P＜0.01),细胞增殖速率下降＞40％(P＜0.01),细胞侵袭力和迁移力明显下降(P＜0.01),MMP-2和MMP-9的分泌量分别下降了68.5％和37.1％(P＜ 0.01),VEGF mRNA和蛋白表达水平分别下降了57.2％(P＜ 0.01)和56.5％(P＜0.01).结论:Ad-CD147 siRNA能有效抑制T-24细胞中CD147基因的表达,继而降低细胞增殖、迁移及侵袭能力.因此,CD147有可能成为膀胱癌基因治疗的一个新靶点.     

NDRG2通过抑制Bcl-2表达增加膀胱癌细胞对顺铂的敏感性

背景与目的：N-Myc下游调节基因2（N-Myc down stream-regulated gene 2,NDRG2）是一种新发现的抑癌基因,在细胞增殖和凋亡中发挥着重要作用,膀胱癌的化疗耐药是临床治疗失败的主要原因之一。阐明NDRG2蛋白在膀胱癌中的表达及顺铂（cisplatin,CDDP）抗性形成的机制。方法：将膀胱癌T24细胞通过CDDP浓度递增的方式连续传代,持续6个月,获得CDDP抗性T24/CR细胞株;通过质粒转染方式使得T24/CR中NDRG2过表达,采用MTT法测定细胞活力,采用凋亡和transwell侵袭实验等比较NDRG2过表达对T24细胞CDDP抗性的影响,随后用Bcl-2-siRNA瞬时转染敲低T24细胞中NDRG2的表达,并通过蛋白质印迹法（Western blot）检测两者之间的表达变化,从而了解两者之间的相关性,采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测NDRG2 mRNA的表达。结果：NDRG2的表达水平在CDDP抗性膀胱癌细胞中显著下调。外源性NDRG2过表达,增强了CDDP的敏感性并且在CDDP存在下抑制膀胱癌细胞的活力和侵袭。下调NDRG2的表达对Bcl-2的表达无明显影响,而下调Bcl-2的表达可有效解除NDRG2低表达对膀胱癌细胞活力和凋亡的影响,并恢复CDDP对膀胱癌细胞的敏感性。结论：NDRG2/Bcl-2的失衡可能是晚期膀胱癌中CDDP抗性形成的关键机制,NDRG2有望成为CDDP抗性或难治性膀胱癌治疗的新靶点。     

小檗胺通过内质网应激通路诱导胃癌细胞A GS凋亡

目的:研究小檗胺对人胃癌细胞AGS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:应用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定细胞活力;膜联蛋白V/碘化丙啶(An-nexin V/PI)细胞凋亡法测定细胞凋亡;Western blot法测定Bcl-2、Bax、chop、GRP78和cle...     

miR-126在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-126在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系,探讨其过表达对Tca8113细胞恶性生物学行为的影响.方法:选取2016年6月至2018年6月在郑州大学第一附属医院手术治疗的62例OSCC患者的癌及癌旁组织...     

萝卜硫素通过p-mTOR/p-S6信号通路增强CD8+记忆细胞前体细胞的分化

目的：检测萝卜硫素（sulforaphane, SFN）对CD8+T细胞分化、表型及胞内因子分泌的影响并探讨其可能的调控机制。方法：在体外培养实验中,按照SFN处理的剂量分为对照(0 mmol/L)组、SFN 10 mmol/L组、SFN 20 mmol/L组。采用流式细胞术检测SFN对CD8+ T细胞分化、表型及胞内因子分泌的影响以及mTOR siRNA 对CD8+T细胞CD127 和LKRG1 表达的影响;采用qRT-PCR检测抗凋亡因子Bcl-2 和Bcl-6 的表达水平,Annexin-V/PI 双染法检测SFN对CD8+ T细胞凋亡的影响,Western blotting检测信号通路蛋白p-mTOR、p-S6 以及内参b-actin 蛋白的表达。结果：SFN促进CD8+记忆细胞前体细胞的形成、显著降低CD8+T细胞PD-1 和Tim-3 的表达水平(P<0.01)。同时,SFN处理后抗凋亡基因Bcl-2 和Bcl-6 的表达显著增加、CD8+ T细胞的凋亡受到显著抑制,p-mTOR和p-S6 蛋白表达水平也显著降低(P<0.05 或P<0.01)。此外,SFN能够增加促炎性细胞因子IL-2、IFN-g、TNF-a的分泌(P<0.05)。mTOR siRNA 能够显著增加CD127 表达及降低LKRG1 表达水平(均P<0.01)。结论：SFN 可能通过抑制pmTOR信号通路促进CD8+记忆细胞前体细胞的形成,获得更多年轻化的T细胞,为临床免疫细胞治疗提供新的思路。     

Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响研究

目的 探讨Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及对AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响.方法 采用RT-PCR及Western Blot检测胃癌组织和癌旁组织中Gab2的表达.培养人胃癌细胞株SGC-7901,分别用Gab2小干扰RNA(Gab2-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,各组细胞培养48 h.应用Western Blot检测细胞中Gab2、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达的变化,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移能力.结果 胃癌组织中Gab2的mRNA及蛋白表达水平均明显高于癌旁组织(P﹤0.01);Gab2-siRNA组Gab2蛋白表达水平明显低于对照组(P﹤0.01);siRNA-NC组细胞的存活率、凋亡率、迁移数及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);Gab2-siRNA组细胞的AKT蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05),细胞的存活率、迁移数及p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(P﹤0.01),细胞凋亡率及Bax蛋白表达明显高于对照组(P﹤0.01).结论 Gab2在胃癌组织高表达,沉默Gab2的表达能显著抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖和迁移,并通过调节Bax、Bcl-2蛋白表达促进细胞凋亡,其可能的机制与AKT信号通路的调控有关.