肺炎克雷伯杆菌质粒介导喹诺酮耐药基因qnr的研究

目的 了解质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在肺炎克雷伯杆菌中的流行情况并探讨其相关耐药机制.方法 纸片法和E-test法检测肺炎克雷伯杆菌对抗菌药物的敏感性;多重PCR方法检测菌株中qnr的携带情况;接合实验证实qnr的可转移性;肠道细菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)分型检测qnr阳性菌株的同源性;变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测qnr阳性菌株染色体旋转酶GyrA和拓扑异构酶ParC变异位点.结果 2006年首都医科大学附属北京朝阳医院临床分离的160株肺炎克雷伯杆菌中检出48株qnr阳性菌株,分别为1株qnrA阳性菌,21株qnrB阳性菌,22株qnrS阳性菌,4株同时携带qnrB和qnrS.25株qnrB阳性菌和7株qnrS阳性菌接合实验成功.同源性分析未发现qnr基因在院内有暴发流行.检测到GyrA亚基存在4种氨基酸突变类型,ParC亚基存在2种氨基酸突变类型.结论 本研究分离的肺炎克雷伯杆菌中qnrB和qnrS为流行亚型.qnr基因在不同菌株中可水平转移,与编码GyrA和ParC氨基酸位点突变同时存在时可导致高水平耐药.     

广州地区阴沟肠杆菌Qnr基因流行调查

目的了解阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS基因流行情况。方法以PCR法对62株环丙沙星耐药的阴沟肠杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因检测,并结合试验了解喹诺酮耐药的可转移性。结果 62株阴沟肠杆菌中,qnrA基因阳性30株（48.6%）,qnrB基因阳性41株（66.1%）,qnrS基因阳性7株（11.3%）,qnrA基因和qnrB基因同时阳性16株,qnrA基因和qnrS基因同时阳性1株,qnrB基因和qnrS基因同时阳性2株。结论广州地区阴沟肠杆菌存在qnr基因,应加强qnr基因监测。     

大肠埃希氏菌的qnrB基因检测与耐药机制研究

目的探索本地区医院大肠埃希氏菌喹诺酮耐药基因的分布及耐药机制。方法采用PCR扩增与测序、基因初步定位、质粒接合转移实验等方法确定喹诺酮耐药的大肠埃希氏菌qnr的基因类型,以分析研究有关的耐药特点与机制。结果各大肠埃希氏菌株中仅qnrB基因阳性,qnrA、qnrS、qnrC、qnrD、qepA、aac(6’)-Ib-cr基因均阴性;并且qnrB基因包括qnrB2、qnrB5、qnrB9、qnrB16、qnrB18、qnrB19和qnrB31等位基因;在这些qnrB等位基因中,qnrB31与qnrB16、qnrB2与qnrB9同源性较高;各qnrB等位基因分别位于约21.0 kb至28.0 kb长的质粒上。结论在本地区医院存在不同的qnrB等位基因流行;实验菌株的喹诺酮耐药与qnrB等位基因结构中LexA-蛋白结合位点共有序列缺失有关。     

阴沟肠杆菌临床分离株中qnr基因的流行现状及耐药性检测

目的了解阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS的流行现状及耐药性检测。方法 PCR法对57株环丙沙星耐药的阴沟肠杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因检测,并用琼脂稀释法对11种抗菌药物的耐药性测定。结果 57株阴沟肠杆菌中阴沟肠杆菌对5种喹诺酮类药物的耐药率高达89.5%～100%,对氨苄西林、四环素、头孢曲松、头孢美唑、庆大霉素、亚胺培南的耐药率分别为100%、64.9%、87.7%、93%、49.1%和100%。qnrA基因阳性19株(33.3%),qnrB基因阳性15株(26.3%),qnrS基因阳性2株(3.5%),qnrA基因和qnrB基因同时阳性8株,qnrA基因和qnrS基因同时阳性1株,qnrB基因和qnrS基因同时阳性1株。结论我院阴沟肠杆菌临床分离株中存在qnr基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,应加强对该类基因的监测及临床用药监管。     

Evaluate of qnr Genes in Enterobacter cloacae isolates and resistance

目的 了解阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS的流行现状及耐药性检测.方法 PCR法对57株环丙沙星耐药的阴沟肠杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因检测,并用琼脂稀释法对11种抗菌药物的耐药性测定.结果 57株阴沟肠杆菌中阴沟肠杆菌对5种喹诺酮类药物的耐药率高达89.5％ ～ 100％,对氨苄西林、四环素、头孢曲松、头孢美唑、庆大霉素、亚胺培南的耐药率分别为100％、64.9％、87.7％、93％、49.1％和100％.qnrA基因阳性19株(33.3％),qnrB基因阳性15株(26.3％),qnrS基因阳性2株(3.5％),qnrA基因和qnrB基因同时阳性8株,qnrA基因和qnrS基因同时阳性1株,qnrB基因和qnrS基因同时阳性1株.结论 我院阴沟肠杆菌临床分离株中存在qnr基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,应加强对该类基因的监测及临床用药监管.     

肺炎克雷伯菌新的qnrB31和qnrB32基因的特性

目的研究肺炎克雷伯菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布和特性。方法 PCR检测qnr、qepA、aac(6’)-Ib-cr基因,阳性产物进行DNA测序以确定其基因型,接合转移试验探讨质粒介导的喹诺酮类耐药基因的体外转移性,稀释法测定试验菌株的MIC,用切胶回收的方法初步定位耐药基因。结果我们在肺炎克雷伯菌KP3606株发现新的基因亚型qnrB31,GenBank登录号为HQ418999,肺炎克雷伯菌KP4047株发现新的基因亚型qnrB32,GenBank登录号为HQ704413;体外接合转移试验获得成功,各菌株和各接合子对喹诺酮类药物敏感试验有不同的结果,未检出qnrA、qnrS、qnrC、qnrD、qepA、aac(6’)-Ib-cr基因;经基因定位,qnrB31和qnrB32基因位于约23kb的质粒上。结论在喹诺酮类耐药的各种基因中,qnrB是最有可能发生变异的基因,应引起足够的重视。     

临床分离枸橼酸杆菌qnr基因型检测

目的 探讨临床分离的多重耐药枸橼酸杆菌qnr基因的存在情况.方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增各组qnr基因,对扩增产物进行基因测序和同源性比较,质粒结合试验,琼脂稀释法测定17种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC).结果 52株枸橼酸杆菌中有22株细菌检出qnr基因,其中5株菌携带qnrA基因,11株菌携带qnrB2基因,1株菌携带qnrB4基因.挑选2株qnrA基因测序与阴沟肠杆菌qnrA基因(GenBank登录号:DQ983226)的同源性为100%;3株qnrB2基因测序与弗劳地枸橼酸杆菌qnrB2基因(GenBank登录号:AB281054)的同源性均为97%,17个碱基突变,其中2个氨基酸发生改变(GenBank注册号:EF526508);1株qnrB4基因(GenBank注册号:EF543140)测序与大肠埃希菌qnrB4基因(GenBank臀录号:DQ303921)的同源性为100%.只有1株细菌qnrA基因结合试验成功.52株枸橼酸杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药率达到70%以上.结论 枸橼酸杆菌临床分离株中qnr基因检出率较高,应引起高度重视.     

铜绿假单胞菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的研究

目的了解广州地区质粒介导喹诺酮类耐药（PMQR）基因在铜绿假单胞菌中的流行状况并分析其与耐药之间的关系。方法收集2005-2007年临床分离到的212株铜绿假单胞菌,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,通过PCR检测质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD、aac（6’）-Ib-cr和qepA,并对阳性扩增产物进行DNA测序分析。结果 212株铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为10.8%（23/212）和19.3%（41/212）。qnrB、qnrS和aac（6’）-Ib-cr的阳性率分别为0.9%（2/212）、0.5%（1/212）和0.9%（2/212）,qnrA、qnrC、qnrD、qepA未检出。4株PMQR基因阳性菌株中,仅1株对左氧氟沙星表现为耐药,其余对环丙沙星和左氧氟沙星均表现为敏感。结论 2005-2007年间广州地区铜绿假单胞菌耐药现象严重,该地区铜绿假单胞菌中已携带有PMQR基因,且敏感菌株中也有该类基因存在。     

阴沟肠杆菌的耐药性及对喹诺酮类耐药基因的检测

目的研究临床分离的阴沟肠杆菌的耐药性和其对喹诺酮类抗生素耐药的分子机制。方法采用VITEK2型全自动微生物检测系统鉴定临床分离的细菌,用K—B法测定阴沟肠杆菌对25种抗生素的敏感性,用聚合酶链反应检测耐环丙沙星的阴沟肠杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因,包括qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac（6’）-Ib,并对阳性的aac（6’）-Ib结果进行测序分析。结果71株阴沟肠杆菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为46．5％和40．8％,对第一、二、三代头孢菌素类药物的耐药率在50％以上,对青霉素类药物的耐药率在70％以上,对含β－内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率在50％以上,对氨基糖苷类药物（庆大霉素、妥布霉素）的耐药率在46．5％以上,对碳青霉烯类药物的敏感性最好,对亚胺培南、美罗培南的耐药率为0。37株耐环丙沙星的阴沟肠杆菌中1株检出qnrA基因（2．7％）,4株检出qnrS基因（10．8％）,qnrB基因全阴性,qnr基因的总阳性率为13．5％。2株检出qepA基因（5．4％）。25株捡出aac（6’）－Ib基因（67．6％）,经测序证实其中5株为aac（6’）－Ib—cr（13．5％）。1株菌同时携带qnrs和aac（6’）－Ib—cr基因。质粒介导的喹诺酮类耐药基因的总携带率为29．7％。结论临床分离的耐喹诺酮类药物的阴沟肠杆菌携带qnrA、qnrS、qepA和aac（6’）-Ib—cr基因,未检出qnrB。qnr、qepA和aac（6’）－Ib—cr基因引起质粒介导的阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗生素的耐药。     

大肠埃希菌和克雷伯菌的qnr基因流行情况调查

目的了解上海部分医院大肠埃希菌和克雷伯菌qnr基因流行情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)对267株大肠埃希菌和59株克雷伯菌(其中产酸克雷伯菌4株)的qnr基因进行筛选,全自动细菌鉴定仪VITEK系统进行鉴定和最低抑菌浓度测定,并采用PCR检测qnr基因阳性菌株Ⅰ型和Ⅱ型整合酶基因。结果在267株大肠埃希菌和59株克雷伯菌中检出3株细菌携带qnr基因,其中1株为大肠埃希菌,2株为肺炎克雷伯菌。3株qnr基因阳性菌株均产超广谱内酰胺酶(ESBLs),呈多重耐药性,且Ⅰ型整合酶均阳性、Ⅱ型整合酶均阴性。结论在所收集的大肠埃希菌和克雷伯菌中检出3株细菌携带qnr基因,其阳性率并不高。3株qnr基因阳性菌株均产ESBLs,且呈多重耐药性,qnr基因存在于Ⅰ类整合子上。