骨髓间充质干细胞自体移植提高猪皮肤创面修复质量的初步研究

目的　探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)局部移植对提高猪皮肤烫伤创面组织修复质量的作用 ,为临床皮肤损伤后功能性修复提供新的治疗方法。方法　抽取 6只小型香猪的骨髓 ,经体外培养并纯化MSCs,应用 5 溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记技术进行标记。猪背部皮肤中线两侧各制备 6个面积为 2 5 4cm2 的深Ⅱ0 烫伤创面 ,将已标记的MSCs( 2× 10 6)以注射方式回植到提供骨髓猪的创面下 ,将创面随机分为 6组 ,即空白对照组、MSCs治疗组、MSCs 碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)治疗组、bFGF治疗组、MSCs 表皮细胞生长因子 (EGF)治疗组以及EGF治疗组。分别于伤后 7、14、2 1、4 2d采用大体观察、常规组织学检查、免疫组织化学及免疫荧光化学染色动态观察创面愈合情况。结果　实验猪皮肤烫伤后 7d开始 ,各组创面逐渐缩小 ,伤后 2 1d ,大部分创面愈合。虽然不同时间点各治疗组创面面积缩小率差异无显著意义 ,但以MSCs bFGF治疗组最为明显 ,伤后第 14天和 2 1天创面缩小的面积比其他 5组大 15 %～ 2 0 %。半定量评价结果显示MSCs bFGF治疗组肉芽组织中血管密度较大 ,为 ,而其他组别仅为 ～ 。再上皮化的新生表皮在MSCs bFGF治疗组较其余 5组厚 ,并有上皮角形成。半定量分析可见神经纤维在MSCs bFGF治疗组较其他 5     

四种修复头皮电烧伤颅骨外露创面的手术方法评价

目的:对修复头皮电烧伤颅骨外露创面的四种手术方法进行评价。方法:1994年4月-2004年12月,分别采用板障层皮片移植术、肉芽创面皮片移植术、局部头皮瓣+皮片移植术和头皮扩张术等四种术式,修复27例头皮电烧伤颅骨外露创面。结果:所移植的皮片除板障层移植皮片成活率约为90%外,其余皮片均100%成活:3个皮瓣和15个扩张皮瓣均成活,伤口一期愈合,无任何并发症发生,随访显示毛发生长良好,外形满意。结论:四种修复头皮电烧伤颅骨外露创面的手术方法具有各自的适应证与优缺点,其中头皮扩张术是较为理想的方法,其它三种术式在特定条件下也具有临床应用价值。     

以纤维结合蛋白为底物培养人表皮细胞及临床试用

为探索效果更佳的表皮细胞培养与移植的方法,我们建立了以纤维结合蛋白(FN)为底物的培养人表皮细胞的模式。对FN浓度及表皮细胞接种量的影响进行了研究。结果 表明此培养系统具有效果佳、简便易行等优点,值得临床试用。报告4例用此法培养的表皮细胞膜片行自体烧伤创面回植,其中有2例膜片存活并生长成复层鳞状表皮。     

人表皮细胞培养及同种移植方法的研究

目的：为解决大面积烧伤及其它创伤性皮肤缺损创面覆盖问题，我们对人表皮细胞培养法及同种移植进行了研究。方法：采用细胞悬液培养及组织块培养方法对人表皮细胞进行了培养并对其临床同种移植进行了探讨。结果：组织块培养法皮片形成率为５４．１７％，细胞悬液培养法皮片成活率为４９．０５％，皮片形成率虽然不够理想，但我们的细胞悬液培养法皮片成活率比以前的方法大大提高。临床同种移植皮片共５２片，成活２３片。随访最长者达１５个月，皮片仍存活且无排异现象。结论：两种表皮细胞培养法简便、可行，提高了皮片形成率。表皮细胞皮片同种移植组织能在体内继续生存     

携带HGF基因的脐带血干细胞异种移植促进烧伤创面修复的实验研究

目的 探讨携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒（Ad- HGF）修饰的脐血干细胞局部异种移植对烧伤创面愈合的作用.方法 用密度梯度离心法检测体外分离培养人脐血干细胞,并以感染复数（MOI= 100）体外转染Ad- HGF.将24只Wistar大鼠分为脐血干细胞治疗组（A组,n=8）,Ad- HGF修饰脐血干细胞治疗组（B组,n=8）,空白对照组（C组,n=8）.建立大鼠深Ⅱ度烧伤模型,根据不同组别将细胞悬液及生理盐水于创面下多点注射,伤后3、5、7、14、21 d观察创面收缩率并采集创面标本,行HE染色以及创面组织羟脯氨酸的测定.结果 伤后7、14、21 d,B组创口收缩率高于与其他2组,差异有统计学意义意义（P＜0.05）;HE染色显示,3、5 d各组HE染色差异无统计学意义,7 d可见B组表皮化明显;21 d B组再生表皮明显厚于其它各组,并可见较多的新生血管和皮肤附属器生成.伤后5 d B组羟脯氨酸升高明显,与其他2组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;14 d羟脯氨酸含量降低,与其他2组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 Ad-HGF修饰脐血干细胞异体移植可显著提高烧伤创面愈合速度和质量,为烧伤创面修复提供了新的策略.     

自体皮肤组织培养的实验研究

本研究应用不同来源皮肤组织进行表皮细胞培养获得成功，其结果证明：应用组织块培养成功率高，接种后２４小时后细胞开始生长，２－３周表皮细胞融合连片，表皮细胞层达５－６层，可用于临床，同时还发现，应用胶原做底层，表皮细胞生长快，融合连片快，在表皮细胞生长的同时成纤维细胞也生长，且生长速度快，阻碍表皮细胞的生长，用０．２５％胰蛋白酶与０．１％ＥＤＴＡ２：１混合液去除成纤维细胞效果较好，是细胞培养获得成功的     

人表皮细胞培养中Langerhans细胞变化的研究

研究表明表皮Langerhans细胞(Lcs)是一种重要的抗原递呈细胞,其参与同种皮肤排斥反应。如消除移植物内Lcs,可延长异体皮肤存活。本研究系利用ATPase染色,抗人HLA-Dr抗原单克隆抗体间接免疫萤光及免疫酶标(ABC)染色,观察了人表皮细胞(Ecs)培养中Lcs的密度及形态变化。并通过混合表皮细胞淋巴细胞培养反应(MEcLR),检查了培养前后Ecs的免疫刺激能力。发现在Ecs培养过程中,存于Ecs内的Lcs培养3天即显著减少同时明显变形;7天后Lcs减少达90％以上;培养14天或更长时间Ecs内Lcs基本消失。在培养新生的Ecs内自始未发现Lcs。培养7天后的Ecs及新生Ecs在MEcLR 中失去刺激异体淋巴细胞转化的能力。这些结果表明通过Ec体外培养可以消除Ecs内携带Ⅰ级抗原的Lcs,提示本培养系统培养的同种人Ecs如用于异体移植,其存活的时间可能延长。     

Burn wound closure with cultured autologous keratinocytes and fibroblasts attached to a collagen-glycosaminoglycan substrate

Improved survival of patients with extensive burn injuries requires the development of better techniques for timely and permanent closure of the full-thickness wound. We developed procedures for establishing confluent, stratified layers of cultured, autologous keratinocytes on the surface of a modified collagen-glycosaminoglycan membrane that contains autologous fibroblasts. We transferred the composite grafts onto limited areas of excised full-thickness burn wounds of four patients with extensive burn injuries. Our results indicate that this composite graft material has acceptable "take," with formation of a basement membrane within 9 days of graft placement. Use of this technique for major wound coverage may offer a significant advance in the care of extensively burned patients and also may be useful for providing skin for reconstructive surgery.     

重组人表皮生长因子治疗Ⅱ度烧伤创面的临床评价

目的观察重组人表皮生长因子（rhEGF）治疗Ⅱ度烧伤创面的作用。方法对68例Ⅱ度烧伤患者采用同一患者两处深度相同、部位相应的创面进行自身对照,随机分为观察组与对照组。对照组创面行常规基础治疗,观察组在基础治疗的基础上应用rhEGF进行治疗。对两组的愈合时间及细菌检出率进行比较分析。结果观察组创面愈合时间较对照组缩短,浅Ⅱ度烧伤创面观察组愈合时间为（9.3±1.2）天,对照组为（13.1±3.5）天;深Ⅱ度烧伤创面中观察组愈合时间为（15.1±3.0）天,对照组为（20.7±2.2）天;差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 rhFGF能够有效促进浅、深Ⅱ度创面的愈合。     

生长素治疗小儿烧伤的临床价值

目的　探讨生长素对小儿烧伤创面愈合、感染的发生率、住院日数以及预后的作用。方法　随机选择烧伤面积大于 2 5 % ,Ⅲ°烧伤面积大于 10 %的重度烧伤患儿 2 4例 ,将其随机分为两组 ,重组人生长激素组(rhGHgroup)每日上午 9时肌注rhGH 0 3U/kg,共治疗 8天 ,对照组 (controlgroup)不给rhGH治疗 ,只给抗生素进行抗感染治疗 ,记录两组植皮区和供皮区创面愈合时间以及住院日数 ,计算烧伤后第 2 8天全身创面愈合率。结果　rhGH组精神状态和食欲情况优于对照组 ,植皮区和供皮区创面愈合时间、住院日数等均少于对照组。结论　烧伤后早期使用rhGH有利于改善全身状况 ,促进创面愈合 ,减少并发症     

纳米银敷料联合表皮生长因子凝胶制剂对深Ⅱ度烧伤创面溶痂及愈合的影响

目的 分析纳米银敷料联合表皮生长因子凝胶制剂在深Ⅱ度烧伤创面治疗中的应用效果。 方法 按随机数字表法将156例深Ⅱ度烧伤病人分为观察组与对照组,各78例。观察组病人清创后给予纳米银敷料联合表皮生长因子凝胶制剂治疗,对照组病人清创后给予表皮生长因子凝胶制剂治疗。换药时观察创面情况。比较2组病人治疗前、治疗后1周创面视觉模拟评分（VAS）、治疗1周、2周、3周、4周创面溶痂率、细菌培养阳性率及完全溶痂时间、创面愈合时间,治疗前、治疗2周通过免疫组织化学法测定基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-2表达,并记录治疗前后相关不良反应发生情况。 结果 观察组治疗4 d创面痂皮变软,6 d大部分痂壳脱落,8 d创面痂皮基本溶解;对照组治疗4 d创面干痂形成,6 d创面干燥,部分坏死组织呈黄黑色,但尚未脱落,8 d干痂逐渐软化,10 d干痂逐渐脱落,基底肉芽组织生长。治疗后2组VAS评分明显低于治疗前（P < 0.01）,且观察组明显低于对照组（P < 0.01）。观察组治疗1周、2周创面溶痂率均明显高于对照组（P < 0.01）。观察组完全溶痂时间、创面愈合时间均明显短于对照组（P < 0.01）。观察组创面细菌阳性率为11.54%,低于对照组的24.36%（P < 0.05）。与治疗前比较,治疗2周2组病人MMP-1、MMP-2表达水平均明显下降,且观察组均明显低于对照组（P < 0.01）。 结论 纳米银敷料联合表皮生长因子凝胶制剂治疗深Ⅱ度烧伤创面溶痂率高,创面愈合时间较短,其机制可能与抑制创面MMP-1、MMP-2表达相关。     

负压封闭引流治疗大面积烧伤创面的观察

目的:观察大面积烧伤患者治疗中使用负压封闭引流技术的临床疗效.方法:回顾性总结2008年1月至2011年6月采用VSD治疗的6例大面积烧伤并感染的患者的临床资料.结果:6例治疗后创面均有新鲜的肉芽组织生长,经再次手术植皮后,创面均愈合良好.结论:VSD结合植皮在大面积烧伤中有较好的临床效果.     

负压伤口疗法联合十四味连黄烧伤软膏用于烧伤植皮术前创面床的临床效果

[ 摘要 ] 目的 观察负压伤口疗法（NPWT）联合十四味连黄烧伤软膏在烧伤植皮创面床术前准备中的临床疗效。 方法 2016年3月—2019年8月,笔者单位收治符合入选标准的深度烧伤创面的患者107例,根据不同的治疗方式和患者意愿分为十四味连黄烧伤软膏治疗组36例、单纯NPWT治疗组36例、联合治疗组35例。入院后患者创面均常规清洁消毒,尽量去除创面坏死组织及渗出物。十四味连黄烧伤软膏治疗组患者创面外敷十四味连黄烧伤软膏涂布单层纱布行半暴露治疗,每日或隔日换药1次,直至肉芽组织基本覆盖创面床。单纯NPWT治疗组患者采用持续式负压吸引模式,负压值为-16.6kPa,持续负压治疗13～15天。联合治疗组患者创面外敷十四味连黄烧伤软膏涂布单层纱布后联合持续式负压吸引,治疗9～10天。单纯NPWT治疗组及联合治疗组患者在治疗过程中出现负压引流堵塞情况则及时更换负压材料。于清创前和治疗后分别进行创面分泌物细菌学培养,统计细菌清除情况;记录3组患者植皮创面床术前准备时间、更换负压材料次数或者换药次数。之后3组患者均行植皮手术,记录3组患者创面移植皮片成活率及创面完全愈合时间。对数据行χ2检验、方差分析。 结果 联合治疗组患者植皮创面床术前准备时间、创面完全愈合时间分别为(9.7±1.2)、（23.1±1.8）d,均明显短于单纯NPWT组的（13.9±1.1）、（27.8±2.0）d和十四味连黄烧伤软膏组的（21.3±2.4）、（37.1±3.7）d,P值均小于0.01。联合治疗组患者更换负压材料次数明显少于十四味连黄烧伤软膏组患者换药次数及单纯NPWT组患者更换负压材料次数（P值均小于0.01）。联合治疗组患者移植皮片成活率为（90.0±2.9）%,明显高于十四味连黄烧伤软膏组的（84.2±4.2）%,P <0.01,与单纯NPWT组（90.9±2.8）%比较,差异无统计学意义（P >0.05）。清创前,十四味连黄烧伤软膏组、单纯NPWT组、联合治疗组患者分别有36、36、35处创面检出细菌;治疗后,十四味连黄烧伤软膏组、单纯NPWT组、联合治疗组患者分别有18、5、5处创面检出细菌。单纯NPWT组、联合治疗组患者创面细菌清除效果明显优于十四味连黄烧伤软膏组（P值均小于0.01）,联合治疗组患者创面细菌清除效果与单纯NPWT组相近（P >0.05）。 结论 NPWT联合十四味连黄烧伤软膏可快速清除深度烧伤创面坏死组织和细菌,负压引流堵塞发生率低,缩短植皮创面床术前准备时间及创面完全愈合时间,临床疗效优于单纯NPWT或十四味连黄烧伤软膏治疗,是一种较佳的准备植皮创面床的方法。     

碱性成纤维细胞生长因子对糖尿病烧伤难愈创面修复的影响

观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对糖尿病患者烧伤难愈创面修复的影响。22例、27个糖尿病烧伤超过6周未愈合的创面,经清创后按150u/cm2创面应用外源性bFGF,每日1～2次,对照治疗前、后创面愈合情况。结果显示27个慢性难愈合创面在应用bFGF后,4周内全部愈合,总有效率达100%。提示bFGF能明显改善糖尿病烧伤难愈创面的修复环境,加速创面愈合。     

KGF在成纤维细胞促进表皮细胞增殖中的作用

目的  研究成纤维细胞产生的角质细胞生长因子（KGF）对表皮细胞增殖的影响。方法  自包皮分离培养成纤维细胞和表皮细胞,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT PCR)、酶联免疫吸附法(ELISA)、MTT法和免疫荧光等方法分别检测成纤维细胞KGF基因的转录水平、培养液中KGF的浓度、成纤维细胞培养液对表皮细胞增殖的促进作用。结果  RT-PCR结果显示,成纤维细胞中KGF转录水平显著,ELISA法可检测到成纤维细胞培养液中存在较高水平的KGF,细胞计数结果和MTT结果表明,含有KGF的成纤维细胞培养液能够促进表皮细胞增殖,保持表皮细胞的活性,免疫荧光观察到KGF与表皮细胞表面的特异性受体结合。结论  成纤维细胞能够合成和分泌较高水平的KGF,成为其促进表皮细胞增殖的重要因素。     

重组人表皮生长因子治疗Ⅱ度烧伤创面疗效观察

目的:观察重组人表皮生长因子(rhEGF)治疗Ⅱ度烧伤创面的临床疗效。方法:对74例Ⅱ度烧伤患者采用同一患者两处深度相同、部位相应的创面进行自身对照,随机分为观察组与对照组。对照组创面行常规基础治疗,观察组在基础治疗的基础上应用rhEGF进行治疗。对两组的愈合时间及细菌检出率进行分析比较。结果:观察组创面愈合时间较对照组缩短,浅Ⅱ度烧伤创面观察组愈合时间为(9.8±2.48)天,对照组为(14.30±4.37)天;深Ⅱ度烧伤创面中观察组愈合时间为(16.74±2.58)天,对照组为(22.76±3.85)天;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:rhEGF用于Ⅱ度烧创面的治疗可以加快创面愈合速度,抑制瘢痕增生,且无毒副作用,是一种安全有效的药物,值得临床大力推广应用。     

利用表皮干细胞治疗兔角膜缘干细胞缺损

目的利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞在体外构建双层组织工程角膜,并修复兔角膜缘干细胞的缺损.方法建立兔角膜缘干细胞缺损模型,以去细胞猪角膜基质片作为支架材料,以自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞作为种子细胞,在体外构建组织工程角膜,并用来修复兔角膜缘干细胞缺损.结果利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞复合异种去角膜基质片在体外成功构建组织工程角膜;构建的组织工程角膜与正常角膜相似,具有上皮层和基质层;用组织工程角膜修复兔角膜缘干细胞缺损3个月后,损伤角膜透明度恢复良好,组织学结构基本恢复正常.结论成功构建了兔的双层组织工程眼角膜,并修复了兔角膜缘干细胞缺损.     

Treatment of rabbit corneal with skin epidermal stem cells

OBJECTIVE: To construct artificial rabbit corneas with autologous skin epidermal stem cells and allogenic stromal cells in vitro and promote healing of corneal wounds. METHODS: Skin epidermal stem cells were isolated from autologous skin samples. Keratocytes were isolated from newborn cornea biopsies. The cells were combined with acellular porcine corneal stroma scaffold to construct artificial corneas. Then the constructed artificial corneas were used to repair severe vision loss caused by complete loss of corneal epithelial stem cells. RESULTS: Cultured skin epidermal stem cells and keratocytes were in good growth conditions. Cultured artificial corneas consisted of multiplayer epithelial cells growing on stroma equivalent consisting of stromal matrix with incorporated keratocytes. The in vitro constructed artificial corneas were histologically similar to normal rabbit corneas. Three months after transplantation, the cornea wounds were healed and the rabbit cornea became transparent. CONCLUSION: The artificial corneas were constructed successfully in vitro and can be used to repair severe vision loss caused by complete loss of corneal epithelial stem cells.     

Membrane cell grafts, fresh and frozen to cover full thickness wounds in athymic nude mice

objective: To find a new way to cover full-thickness wounds. Methods: Biobrane(r), an adherent, flexible temporary wound dressing was incubated with cultured human keratinocytes. The cells adhered quickly forming "membrane-celgrafts" (MCG). Some of the grafts were frozen and after thawing viability was verified with a XTT colorimetric assay.MCGs, fresh and cryopreserved, were transplanted on full thickness wounds created on athymic nude mice. Conventional cultured epidermal grafts (CEG) and wounds without cell grafts served as control. Results: MCGs resulted in a differentiated epithelium of human phenotype and immunohistochemistry, immunofluorescence and electronmicroscopy were performed.Compared with CEG-grafted sites a reduced wound contraction was noticed and complete remodelling of the basement membrane zone was found. Conclusion: The efficiency of the easy, uncomplicated production, cryopreservation and use as well as the short culture period could lead to a new approach in the treatment of burn and chronic wounds.